冷冻瘤苗对小鼠肿瘤浸润性淋巴细胞增殖及抗肿瘤活性的影响

目的：探讨冷冻瘤苗对小鼠肿瘤浸润性淋巴细胞(TIL)增殖及体内抗肿瘤活性的影响。方法：分离TIL，一组常规培养，另一组加冷冻瘤苗进行培养，检测TIL的增殖活性。荷瘤小鼠分3组：对照组用生理盐水治疗，实验1组用常规培养TIL治疗，实验2组用冷冻瘤苗刺激培养TIL治疗，切除肿瘤送病理。结果：常规培养组TIL增殖慢，存活时间短，冷冻瘤苗刺激组TIL增殖快，存活时间长。对照组肿瘤生长迅速，无或仅少量淋巴细胞浸润，实验1组肿瘤稳定，少至中量淋巴细胞浸润，实验2组部分小鼠肿瘤缩小，中至大量淋巴细胞浸润，3组间肿瘤大小及淋巴细胞浸润程度差异有显著性(P＜0.01和P＜0．05)。结论：冷冻瘤苗可维持TIL增殖及增强在小鼠体内的抗肿瘤作用。     

葡萄球菌肠毒素A脂质体激活肿瘤浸润淋巴细胞抗肿瘤活性的实验研究

目的　研究葡萄球菌肠毒素 A(SEA)脂质体 (L- SEA)体外激活肿瘤浸润淋巴细胞 (TIL)抗肿瘤的活性。方法　从 5例原发性肝癌患者癌组织中分离培养 TIL,分别以 L- SEA、SEA和 IL- 2刺激后 ,观察 TIL 的增殖曲线 ,EL ISA法检测细胞因子的分泌 ,流式细胞仪检测细胞亚群的变化 ,MTT法检测 TIL 的肿瘤杀伤活性。结果　L- SEA、SEA及 IL- 2均能有效刺激 TIL 的增殖 ,最高增殖倍数分别为 4 2 .5、5 1、12 .5倍。除第 4 d L- SEA组 TIL 的IFN- γ水平低于游离 SEA组外 ,此两组的细胞因子分泌没有显著性差异 (P>0 .0 5 ) ,且都高于 IL- 2组。 L- SEA刺激后 ,TIL 的 CD8+细胞亚群增殖更快 ,CD4 +细胞 / CD8+细胞出现倒置。经过 L- SEA培养后的 TIL 能有效杀伤Hep G- 2肿瘤细胞。结论　 L- SEA仍然具有游离 SEA的刺激 TIL 增殖、分泌细胞因子、杀伤肿瘤细胞的活性。     

谷氨酰胺对病毒性脑炎小鼠免疫功能的影响

目的:研究谷氨酰胺(Gln)对病毒性脑炎(VE)小鼠免疫功能的影响.方法:30只Babl/c小鼠随机分为3组:正常对照组(10只)、VE组(10只)和Gln组(10只),采用颅脑内注射单纯疱疹病毒-Ⅰ的方法制造VE模型,Gln组格外添加Gln1.0 g/(kg·d)灌胃,5天后检测T淋巴细胞表型CD4 、CD8 及细胞因子TNF-α的表达.结果:VE模型诱导后VE组小鼠的CD4 淋巴细胞数和 CD4 /CD8 显著低于正常对照组(P＜0.01),CD8 淋巴细胞数和血浆TNF-α浓度显著高于正常对照组(P＜0.01);Gln组小鼠的CD4 淋巴细胞数和CD4 /CD8 显著高于VE组(P＜0.01),CD8 淋巴细胞数和血浆TNF-α浓度显著低于VE组(P＜0.01).结论:谷氨酰胺可改善病毒性脑炎小鼠的免疫功能.     

肿瘤干细胞样细胞RNA致敏树突状细胞治疗大鼠9L脑肿瘤

目的:利用大鼠9L肿瘤干细胞样细胞(cancer stem like cells,CSLCs)总RNA致敏树突状细胞(dendritic cells,DC)治疗9L/F344大鼠颅内胶质瘤,观察DC疫苗对脑胶质瘤的治疗作用,探讨其免疫反应的机制,为DC疫苗的临床应用提供实验基础.方法:40只颅内荷瘤F344大鼠随机分成4组,每组10只,作为实验组:(1)树突状细胞组(DC-9L):注射转染贴壁9L细胞RNA的DC组;(2)DC-9LTS组:注射转染9L肿瘤球RNA的DC组;(3)DC组:注射未经转染RNA;(4)磷酸盐缓冲液(phosphate buffered saline,PBS)组:注射100μL PBS.非荷瘤F344大鼠10只设为对照组,仅在右侧尾状核注射10 μL DMEM/F12培养基.利用大鼠9L肿瘤干细胞样细胞的总RNA致敏DC,制备DC-9LTS,采用皮下注射的方式,对9L/F344大鼠颅内胶质瘤模型进行免疫治疗,观察荷瘤大鼠生存期,同时检测血清干扰素-γ(interferon-gamma,IFN-γ)的浓度,免疫组织化学染色对各治疗组肿瘤组织CD4 、CD8淋巴细胞浸润情况进行分析.结果:各实验组大鼠的中位生存期分别为:PBS组21 d,DC组为21 d,DC-9L组为31 d,DC-9LTS组为36 d.DC-9LTS组大鼠的中位生存期与其余各组比较,差异有统计学意义(P ＜0.01);DC-9L组与DC组、PBS组比较,差异有统计学意义(P＜0.01);而DC组与PBS组之间差异无统计学意义(x2=0.071,P=0.789),DC-9LTS组的IFN-γ浓度为(157.08 ±7.25) ng/L,高于其余各组(P＜0.05),且大鼠肿瘤组织内部及瘤周组织均有大量CD8淋巴细胞浸润.DC-9L组中,在肿瘤组织内部及瘤周也可见CD8淋巴细胞浸润,DC-9LTS组CD8的平均光密度值(D)明显高于DC-9L组(P＜0.001),DC-9LTS组及DC-9L组均未见CD4淋巴细胞的表达.在DC组和PBS组中,肿瘤组织中未见CD4或CD8淋巴细胞浸润.结论:利用大鼠9L肿瘤干细胞样细胞总RNA体外致敏树突状细胞,制备树突状细胞疫苗,回输治疗9L/F344大鼠颅内胶质瘤,能明显延长荷瘤大鼠生存期,为靶向性杀伤脑肿瘤干细胞的胶质瘤免疫治疗提供了实验基础及理论依据.     

可溶性肿瘤抗原对小鼠CD_3AK细胞生物免疫功能的影响

目的:观察可溶性肿瘤抗原(STA———由S180 细胞提取)对小鼠CD3AK细胞的体外增殖、体外杀瘤活性以及体内抑瘤作用的影响。方法:采用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法),分别检测小鼠脾脏单个核细胞的体外增殖活性和杀瘤效应细胞体外杀瘤活性,并通过测定实体瘤质量来分析杀瘤效应细胞的体内抑瘤作用。结果:STA协同增强小鼠CD3 单抗诱导的小鼠脾脏单个核细胞的体外增殖活性。由STA联合小鼠CD3 单抗共同诱导的T- AK细胞,不仅在体外对S180 细胞杀瘤活性强于CD3AK细胞,且在小鼠体内抑制S180 肿瘤细胞的生长和扩散作用也强于CD3AK细胞。结论:STA能增强小鼠CD3AK细胞的体外增殖活性和杀瘤活性     

母牛分枝杆菌对实验性老年肺结核的免疫保护作用

目的:探讨母牛分枝杆菌菌苗对实验性老龄小鼠肺结核的免疫保护作用. 方法:老龄C57BL/6J小鼠30只,随机法分为3组:无免疫保护组(C组),母牛分枝杆菌菌苗预防组(M组),卡介苗(BCG)预防组(B组),分别在0 wk给予生理盐水0.1 mL,母牛分枝杆菌菌苗22.5 μg,BCG 0.1 mg皮内注射. 4 wk后将浓度为5×105/mL的H37Rv标准菌株0.2 mL经小鼠尾静脉给予攻毒. 感染6 wk后处死小鼠,流式细胞仪测定小鼠外周血T淋巴细胞亚群,观察肺脏肺泡巨噬细胞内结核分枝杆菌数及肺组织病理学分析. 结果:M组和B组的CD4 T淋巴细胞、CD4 /CD8 比值分别为(48.81±3.10, 3.84±0.37),(48.08±3.72,4.16±0.24)均较C组(38.97±3.03,3.25±0.26)显著升高(P＜0.01). 而M组CD4 /CD8 比值则低于B组(P＜0.05). M组和B组肺脏肺泡巨噬细胞内结核分枝杆菌数分别为(2.3±0.5),(2.7±0.6),较C组(5.4±0.9)显著降低(P＜0.01). 组织病理学显示M组和B组肺脏结核病变以增殖性结核结节为主,无坏死结节;C组肺脏则以淋巴细胞结节、坏死结节为主. 结论:母牛分枝杆菌菌苗可增强CD4 T淋巴细胞活性,对实验性老龄小鼠肺结核有较好的保护作用.     

树突状细胞激活效应细胞的最佳效靶比及其体外杀伤活性的研究

目的:探讨树突状细胞(DC)激活肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)和小鼠脾淋巴细胞(小鼠脾LC)的最佳效靶比并观察被有效激活的TIL和小鼠脾LC等对小鼠H22肝癌细胞的体外杀伤作用.方法:从荷瘤小鼠四肢长骨提取DC,联合应用GM-CSF、IL-4和小鼠H22肝癌细胞全细胞性抗原致敏DC,然后依据不同的激活效靶比用致敏DC体外激活TIL、小鼠脾LC,分别检测、比较被不同程度激活的TIL、小鼠脾LC以及未激活的小鼠脾LC、未激活的TIL对小鼠H22肝癌细胞的杀伤活性.结果:①当DC:靶细胞(E/T)为1:400和1:200时,所激活的TIL或小鼠脾LC的杀伤活性较弱;当E/T为1:100时,杀伤活性有较明显的提高,与前两者比较,差异有统计学意义(P＜0.05);当E/T=1:50时,杀伤活性增加,与前三者比较差异均有统计学意义(P＜0.01或P＜0.05);而当E/T=1:25、1:12.5和1:6.25时,杀伤活性与E/T=1:50时比较无明显变化(P＞0.05);②当E/T=1:50时,未经DC激活的小鼠脾LC(A组)杀伤率为(9.73±1.40)%,未经DC激活的TIL(B组)和DC激活的小鼠脾LC(C组)杀伤率分别为(50.91±2.36)%和(49.70±2.70)%,DC激活的TIL(D组)的杀伤率为(73.49±2.46)%.A组与其他组分别比较,差异均有统计学意义(P＜0.01);B组和C组比较差异无统计学意义(P＞0.05);D组与其他各组分别比较,差异均有统计学意义(P＜0.01).结论:①当E/T=1:50时,DC能很好的发挥抗原提呈作用,使小鼠脾LC和TIL得以充分激活;②充分激活的小鼠脾LC或TIL对小鼠H22肝癌细胞的体外杀伤活性较未激活的小鼠脾LC或未激活的TIL均具有明显的提高,尤以激活的TIL的杀伤活性最强.     

癌性胸水肿瘤浸润淋巴细胞的生物学特性研究

目的 :探讨癌性胸水肿瘤浸润淋巴细胞 (TIL)的生物学特性 ,以便更好地应用于临床。方法 :用低浓度白细胞介素 2 (IL - 2 )诱导培养癌性胸水TIL ,按常规法计数TIL细胞增殖量 ,采用流式细胞仪分析TIL细胞表型及MTT法检测其杀伤细胞活性。结果 :经低浓度IL - 2 (10 0IU/ml)诱导培养TIL 2 1d后 :TIL增殖倍数为2 130± 1140 ,大于 10 0 0倍占 72 %。CD3 无显著性变化 (P >0 .0 5 ) ,CD4 、CD8有显著性差异 (P <0 .0 1) ,而CD4 /CD8比值高达 3.5 3± 0 .82 ,并且在 2 1d时TIL具有较高的细胞毒性。结论 :癌性胸水TIL体外诱导培养3周时TIL具有较强的生物活性 ,此时进行胸水治疗可取得可靠的疗效。     

自体胸水上清培养肿瘤浸润性淋巴细胞生长所需白细胞介素-2的适宜剂量

目的：模拟体内环境,摸索出应用自体胸水上清培养肿瘤浸润性淋巴细胞（TIL）时所需白细胞介素-2（IL-2）的最适剂量。方法：恶性胸水中的TIL经贴壁法分离后,分成A、B、C三组,分别应用含有细胞因子IL-2、CD3单克隆抗体（OKT3）及外源凝集素（PHA）的自体胸水上清进行培养,其中A组IL-2终浓度为6000u/ml;B组IL-2首剂终浓度为6 000u/ml,其后换液时改为1000u/ml;C组IL-2终浓度为1000u/ml,比较不同剂量IL-2培养的TIL增殖速率、培养前后免疫表型变化和对自体肿瘤细胞的杀伤活性。结果：培养的第3、7、14和21 d检测发现,三组TIL均发生明显扩增,其中A、B两组间TIL的生长速度无差异,但均明显快于C组;TIL免疫表型变化和对自体肿瘤细胞杀伤活性经组间比较无显著差异。结论：TIL培养时,首剂IL-2的终浓度6000u/ml有着非常重要的意义,它有助于早期解除TIL的免疫抑制状态,使其在培养的第3 d就发生明显的活化和扩增,为自体TIL体外分离后仅作短期培养即回输胸腔,后续胸腔内注入IL-2,使其进一步生长,发挥杀瘤效应,从而为治疗恶性胸水奠定了理论基础。     

青藤碱对T淋巴细胞活化增殖的影响

[目的]观察青碱藤(SINO)对T淋巴细胞增殖和活化的影响及其细胞免疫调控机制.[方法]培养Jurkat细胞,分别加入不同浓度的SINO(终浓度分别为1、0.5、0.1 mmol/L),采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞增殖率;培养Jurkat细胞,分别设空白对照组,甲氨喋呤(MTX)阳性对照组(剂量为5 mg/L),不同浓度的SINO组(终浓度分别为1、0.5、0.1mmol/L).采用流式细胞术检测各组细胞周期.无茵分离Wistar大鼠肠系膜淋巴结淋巴细胞,以1、0.5、0.1 mmol/L SINO预培养60 min后,分别加入刀豆蛋白(ConA,终浓度为10 mg/L)或佛波醇酯(PDB,终浓度为0.20μmoL/L) 离子霉素(ionomycin,终浓度为1 mg/L)继续培养48 h,以抗大鼠CD3和CD71单抗标记后,采用流式细胞术检测各组CD3 CD71 表达情况.[结果]不同浓度SINO呈浓度依赖性抑制淋巴细胞增殖,且主要抑制Jurkats细胞G0/G1期.MTX作用于S期;ConA或PDB ionomycin刺激可显著升高CD3 CD71 表达(均P<0.01),1、0.5 mmol/LSINO可显著抑制ConA刺激下的CD3 CD71 表达(P<0.01),1 mmol/L SINO可显著抑制PDB ionomycin刺激下的CD3 CD71 表达(P<0.05).[结论]SINO可抑制T淋巴细胞活化和增殖,将细胞阻断于G0/G1期,其作用可能与下调T细胞转铁蛋白受体的表达,减少细胞对铁离子摄入有关.     

麻疹的双相移位研究进展

近年新生儿、婴儿、成人麻疹患者逐年增加,临床表现一般仍较典型,成年人麻疹患者全身中毒症状较重。麻疹抗体检测结果阳性是主要的诊断依据。麻疹发病的双相移位的机理可能是,免疫保护力不足,婴儿出生时麻疹抗体力低。孕期母传胎的麻疹抗体减弱,母经乳汁传给婴儿的抗体减弱,成人麻疹抗体水平逐年下降。预防措施是怀孕前给予育龄妇女麻疹疫苗接种,鼓励母乳喂养,麻疹疫苗计划免疫适当提前,在成人追加麻疹疫苗的免疫,加强病毒变异的研究等。     

87株幽门螺旋杆菌VacA等位基因的分析

目的以研究方法LiPA（Line Probe Assay）分析VacA等位基因的表达,了解幽门螺旋杆菌致病机理的理解。方法从三个不同城市87位进行胃镜检查患者的胃粘膜中培养出幽门螺旋杆菌,提取DNA,用LiPA方法分析VacA等位基因。结果（1）87位患者以sic（88．5％）和m2a（63．2％）分布为主,未发现s1b和s2;（2）混合菌株感染率为41．4％,远远高于西方国家,其中上海的混合感染率最高（62．5％）,与北京（41．0％）和南宁（20．8％）相比具有显著性差异,P〈0．01;（3）北京、海、南京三个不同城市s1、m等位基因亚型分布率存在差异;（4）溃疡病和非溃疡病患者m1和m2的分布率没有显著性差异。结论我国幽门螺旋杆菌多重菌株感染率较高,不同的m基因型与消化性溃疡的发生无显著性相关。     

上颌骨牙源性囊肿刮除手术的疗效观察

目的探讨对上颌骨牙源性囊肿患者进行囊肿彻底刮除手术的临床疗效。方法对我科在2010年1月～2017年9月收治的73例上颌骨牙源性囊肿患者行囊肿彻底刮除手术治疗,对患者术区肿胀消退、术后伤口感染、伤口愈合、牙龈再附着、术后复发、骨质改建、骨质修复等情况随访观察。结果 73例患者术后肿胀消退时间为1～4 d。73例患者术后均未发生伤口感染,伤口均一期愈合。所有患者牙龈再附着情况好,术后均未见复发。术后未见并发症。骨质改建效果好,骨质修复的效果因影像学资料过少,缺乏客观依据,暂不下有效结论。结论对上颌骨牙源性囊肿患者进行囊肿彻底刮除手术,术后患者的恢复情况良好,值得在临床治疗上进行推广。     

扩张兔皮肤超微结构的变化

目的：动态观察扩张兔皮肤超微结构的变化。方法：选用2--3kg新西兰大白兔64只，分为2大组，快速扩张组和常规扩张组，每组32只，每大组再分为4组，为扩张完成后即时、1周、12周、24周组。每组8只，其中4只为实验组，另4只植入扩张器不扩张作为对照组。透射电子显微镜观察各组皮肤超微结构的变化。结果：表皮扩张后经历--由扩张刺激引起的创伤至完全修复的过程。扩张后即时真皮中成纤维细胞大量增生，功能由静止转向活跃，胶原纤维碎裂成片，弹力纤维部分断裂，炎症细胞浸润；扩张后1周常规扩张组基底膜连续性基本恢复。显示成纤维细胞合成功能活跃。扩张后12周、24周，成纤维细胞趋于稳定、形态狭长，部分胶原排列紊乱，部分有似癜痕样改变。结论：扩张刺激可致兔皮肤创伤。扩张后真皮不可完全修复。     

腰椎间盘突出症再次手术的原因分析

目的解决腰椎间盘突出症手术中神经压迫。方法对1980～1998年再手术资料进行统计分析,讨论分析再手术原因,再次手术前影像学检查,观察病理变化以确定再手术方法。结果对11例随访6个月～1年,优7例(68．4％),良3例(36．8％),差1例(2．8％)。结论初次手术前详细查体和分析X线片,术中用导尿管和神经剥离探查,尽量避免髓核遗留,手术范围不宜太大,尽量减少对软组织和脊柱结构的破坏,避免形成硬膜囊与神经根粘连而致单纯形疤痕。     

芹黄素对大鼠缺血视网膜功能恢复的作用

目的观察芹黄素对大鼠缺血视网膜功能恢复的作用。方法30只Long-Evans大鼠用动脉结扎法造成视网膜缺血模型,其中治疗组20只腹腔注射芹黄素,对照组10只注射溶媒二甲基亚酚。用视觉电生理仪检查视网膜功能恢复情况。结果芹黄素治疗组视网膜功能恢复明显好于对照组(P<0.05)。结论芹黄素能促进大鼠缺血视网膜的功能恢复。     

十二指肠损伤的治疗体会

目的：提高十二指肠损伤的诊治水平，方法：回顾总结该院1999年－2001年间收治的十二指肠损伤7例临床经验。结果：合并其他腹部脏器损伤86％（6／7），单纯十二指肠损伤14％（1／7）。损伤部位以十二指肠降部为多占71％（5／7），水平部和球部各占14％（1／7），术后并发症发生率28％（2／7）、病死率14％（1／7）。结论：掌握十二指肠损伤的特点，早诊断、早手术、术中认真探查，掌握好检查指征，选择合理恰当术式，加强术后管理，可提高治愈率。     

降钙素原变化率的测定对细菌性肺炎的评估价值

目的 探讨降钙素原变化率的测定对细菌性肺炎的评估价值.方法 选取住院治疗的细菌性肺炎患者72例,根据治疗效果分为治疗有效组(有效组)47例和治疗无效组(无效组)25例,对治疗有效组和无效组中的降钙素酶原变化及影响肺炎治疗效果的危险因素进行分析.结果 有效组治疗后3天及治疗后7天的降钙素酶原显著低于无效组的患者(P＜0.05);年龄＞65岁、心功能≥3级、COPD、糖尿病、肺部双侧受累(X线示)、菌血症、感染性休克和3天内降钙素酶原变化率＜30％是影响细菌性肺炎治疗效果的危险因素;感染性休克、肺部双侧受累、3天内降钙素酶原变化率＜30％及心功能≥3级是影响细菌性肺炎治疗效果的独立危险因素.结论 测定降钙素原变化率对细菌性肺炎的疗效评估具有重要临床意义,可在临床推广应用.     

人体寄生虫学多媒体教学效果的初步评估

通过分析多媒体辅助教学方法与传统教学方法在人体寄生虫学教学中的应用,指出多媒体辅助教学对于提高教学质量效果显著,受到了绝大部分同学的赞同和欢迎.     

尿液pH值对红细胞检验影响的探讨

[目的 ]通过尿液 pH值对红细胞检验影响的观察 ,更加科学、准确地诊断血尿和血红蛋白尿。[方法 ]采用干化学分析仪检测和尿液显微镜红细胞计数 ,观察 180例正常人尿标本加入正常人血标本后 ,不同 pH值 ,不同时间内 ,观察红细胞溶解情况。 [结果 ]pH <5 .5以下时 ,随着时间的延长 ,红细胞溶解现象明显。 1h后观察有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ;2h后有非常显著性差异 (P <0 .0 1)。[结论 ]pH <5 .5时对红细胞计数影响较大 ,易致红细胞发生溶解现象 ,出现假性血红蛋白尿 ,对血尿和血红蛋白尿很难区分 ,给临床诊断造成不便 ,更易引起漏诊和误诊。