急性淋巴细胞白血病患者化疗前后CD4~+CD25~+调节性T细胞变化及相关因素研究

目的观察急性淋巴细胞白血病(ALL)患者化疗前后外周血中CD4+CD25+调节性T细胞的变化。方法选择26例化疗后完全缓解的ALL患者进行自体对照研究,采用流式细胞术对化疗前后外周血中CD4+CD25+调节性T细胞进行检测,并采用ELISA检测血清中白细胞介素-10(IL-10)、转化生长因子-β(TGF-β)水平,另选择同期体检健康志愿者20例为对照组,进行上述检查。比较对照组与ALL患者化疗前后外周血中CD4+CD25+调节性T细胞的变化。结果 ALL患者化疗前CD4+CD25+调节性T细胞比例为(5.69±1.39)%,明显高于对照组(P<0.05)。ALL患者化疗后CD4+CD25+调节性T细胞比例明显较化疗前降低(P<0.05)。ALL患者化疗后CD4+CD25+调节性T细胞比例与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。ALL患者化疗前IL-10和TGF-β表达水平与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。ALL患者化疗后IL-10和TGF-β水平与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。相关性分析显示,26例患者化疗前IL-10、TGF-β表达水平与CD4+CD25+调节性T细胞比例均呈正相关(P<0.05)。结论 CD4+CD25+调节性T细胞水平在化疗前后具有显著差异,提示其可能与免疫抑制有关,该指标的检测有助于对ALL患者预后及治疗效果的判断。     

CD4~+CD25~+调节性T细胞及TGF-β1、IL-10在结肠癌肺转移患者外周血中的表达

目的探讨结肠癌肺转移患者外周血CD4~+CD25~+调节性T细胞和血清TGF-β1、IL-10的临床意义。方法分别应用流式细胞仪(FCM)、逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、酶联免疫吸附测定(ELISA)方法检测结肠癌肺转移患者、健康人外周血CD4~+CD25~+调节性T细胞占总CD4~+调节性T细胞的比例、叉头状螺旋转录因子(Foxp3)表达水平和血清转化生长因子β1(TGF-β1)、白细胞介素10(IL-10)含量。结果结肠癌肺转移患者外周血CD4~+CD25~+调节性T细胞占总CD4~+的比例、Foxp3表达水平及TGF-β1及IL-10的浓度均明显高于健康人(P<0.001或P<0.05)。结论结肠癌肺转移患者外周血CD4~+CD25~+调节性T细胞占总CD4+调节性T细胞的比例明显升高,可能是通过Foxp3基因控制的抑制性细胞因子TGF-β1和IL-10而参与结肠癌肺转移的免疫耐受。     

川崎病患者血中CD4~+CD25~+调节性T细胞与血清IL-4、IFN-γ水平关系

目的探讨CD4+CD25+调节性T细胞在川崎病(KD)发病机制中的作用。方法 KD组患儿32例;对照组30例中分为两组:非KD发热组15例为急性呼吸道感染的发热患儿,健康组15例为健康体检患儿。KD患儿分别于静注丙种球蛋白(IVIG)前和IVIG治疗后热退2~3天取外周血,用流式细胞仪测定CD4+CD25+调节性T细胞比例,用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清干扰素-γ(IFN-γ)、白细胞介素-4(IL-4)水平并分析其关系。结果急性期KD患儿外周血CD4+CD25+调节性T细胞比例[(4.40±1.31)%]与非KD发热组[(6.37±1.99)%]和健康对照组[(7.45±3.18)%]相比均明显降低(P<0.01),而IVIG治疗后热退2~3天,CD4+CD25+调节性T细胞比例[(6.88±2.50)%]明显升高,接近于正常水平。同时在KD急性期,血清IFN-γ、IL-4水平均明显升高,在IVIG治疗后热退2~3天无明显下降。且在KD急性期血清IFN-γ、IL-4水平与CD4+CD25+调节性T细胞比例成负相关性(r=-0.838,P<0.01)。在静注IVIG后热退2~3天,血清IFN-γ、IL-4水平与CD4+CD25+调节性T细胞比例无明显相关性(r分别为-0.04和-0.072,P>0.05)。结论 CD4+CD25+调节性T细胞可能通过对体内Th1和Th2细胞的调控参与了KD的发病机制。     

卵巢癌患者外周血CD4+调节T细胞与TGF-β1水平的相关性研究

目的：探讨卵巢癌患者外周血中CD4+CD25+及CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞的水平及其与转化生长因子β1（transforming growth factor-β1, TGF-β1）水平的相关性。方法：采用流式细胞术对24例上皮性卵巢癌患者外周血中CD4+CD25+及CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞水平进行检测,收集每例患者对应的血浆,ELISA法检测卵巢癌患者血浆中TGF-β1浓度,并选20例卵巢良性疾病及20例健康体检者做对比研究。结果：与卵巢良性疾病及健康对照组相比,卵巢癌患者CD4+CD25+、CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞及TGF-β1的表达水平明显增高（均P<0.01）;Ⅲ~Ⅳ期卵巢癌患者CD4+CD25+、CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞及TGF-β1的表达水平明显高于Ⅰ~Ⅱ期患者（P<0.05）;Pearson相关性分析结果显示,卵巢癌患者外周血CD4+CD25+及CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞水平与血浆TGF-β1水平均呈正相关（r=0.656, P<0.05; r=0.574, P<0.05）。结论：卵巢癌患者外周血存在高水平CD4+调节T细胞,且其与血浆TGF-β1水平呈正相关。检测外周血CD4+调节T细胞与TGF-β1水平对于判断卵巢癌不同病期有重要意义。TGF-β1水平增高可能参与调节CD4+调节T细胞对卵巢癌机体的免疫负调节机制。     

CD4~+ D25~+调节性T细胞在晚期食管癌中的表达及临床意义

目的:探讨CD4+CD25+调节性T细胞(Treg细胞)在食管癌中的表达及其临床意义。方法:应用流式细胞术分析60例食管癌患者外周血CD4+CD25+Treg细胞表达水平,与20例健康对照组比较。结果:食管癌患者外周血CD4+CD25+Treg细胞数量增加(15.9±4.1)%,表达高于正常人(5.91±3.7)%(P<0.001)。食管癌患者外周血中Treg细胞数量与患者的病理类型无关(P>0.05),但与淋巴结转移和组织学分化程度有关(P<0.01)。结论:Treg细胞在食管癌患者中比率明显升高,是患者免疫功能紊乱的一个证据。     

脓毒症患者CD4~+CD25~+调节性T细胞检测的临床意义

目的探讨脓毒症患者CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)的水平与机体细胞免疫状态的关系及其检测的临床意义。方法将脓毒症患者40例按照疾病严重程度分为3组:脓毒症组14例,严重脓毒症组15例,脓毒症休克组11例。所有入选的40例脓毒症患者在入选当天行流式细胞术检测血中CD4+CD25+调节性T细胞的比例和CD3+、CD4+、CD8+和CD4+/CD8+水平。比较脓毒症组、严重脓毒症组和脓毒症休克组血中CD4+CD25+调节性T细胞比例变化和CD3+、CD4+、CD8+和CD4+/CD8+水平变化。同时选取20例健康人为对照组。结果健康对照组CD4+CD25+调节性T细胞表达率脓毒症休克组最高,严重脓毒症组次之,脓毒症组最低,三组间两两比较差异有统计学意义(P<0.05)。脓毒症组CD3+、CD4+和CD4+/CD8+较正常对照组明显升高(P<0.05),CD8+较正常对照组差异不明显(P>0.05)。严重脓毒症组和脓毒症休克患者CD3+、CD4+、CD4+/CD8+较正常对照组明显降低(P<0.05),CD8+较正常对照组改变不明显(P>0.05)。结论脓毒症患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞表达增加,可能导致CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平降低,免疫抑制加强。提示CD4+CD25+调节性T细胞在脓毒症的免疫发病机制中可能起着重要作用,对评估患者预后有临床价值。     

Th17及CD4~+CD25~+调节性T细胞在结肠癌患者外周血中的表达

目的检测结肠癌患者外周血Th17及CD4+CD25+调节性T细胞水平及功能状态,探讨其在结肠癌发病过程中的免疫机制。方法应用流式细胞仪测定结肠癌患者及对照组外周血中Th17和CD4+CD25+调节性T细胞占CD4+T细胞的百分比,采用ELISA法测定两组患者外周血IL-17、IL-23、TGF-β1和IL-6的水平。结果结肠癌患者外周血Th17、CD4+CD25+调节性T细胞占CD4+T细胞的百分比及各相关的细胞因子较对照组升高,差异均有统计学意义(P<0.05);中晚期结肠癌组外周血Th17、CD4+CD25+调节性T细胞占CD4+T细胞的百分比及各相关的细胞因子较早期结肠癌组升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 Th17、CD4+CD25+调节性T细胞分化失衡与结肠癌发生、发展密切相关,为结肠癌免疫治疗提供新思路。     

肺积方调节CD4+CD25+Treg 细胞及T 淋巴细胞增殖与抗Lewis 肺癌移植鼠肿瘤生长作用研究

目的:观察肺积方联合化疗对Lewis肺癌移植小鼠肿瘤生长情况及脾脏CD4+CD25+Treg细胞、胸腺T淋巴细胞增殖变化的影响,探讨肺积方联合化疗抗肺癌免疫逃逸的作用机制。方法:采用随机对照研究方法,将64只Lewis肺癌移植小鼠随机分为对照组、肺积方组、综合组(肺积方联合顺铂)、顺铂(DDP)组,每组16只,并分别以生理盐水、肺积方、肺积方联合DDP、DDP药物干预,观察小鼠瘤体变化,流式细胞术检测小鼠脾脏CD4+CD25+Treg细胞含量,MTT法检测小鼠胸腺和脾脏T淋巴细胞增殖情况。结果:DDP组、肺积方组、综合组小鼠瘤体、瘤重均小于对照组(P<0.05),综合组瘤体、瘤重均小于DDP组和肺积方组(P<0.01);第10、21天DDP组、肺积方组、综合组小鼠胸腺、脾脏T淋巴细胞增殖指数与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05),其中肺积方组、综合组T淋巴细胞增殖指数增高,而DDP组T淋巴细胞增殖指数降低;DDP组干预后T淋巴细胞增殖指数明显低于干预前(P<0.05);而肺积方组、综合组第21天与第10天T淋巴细胞增殖指数组内比较无明显变化(P>0.05)。第10、21天DDP组、肺积方组、综合组荷瘤小鼠胸腺CD4+CD25+Treg细胞比例均较对照组降低(P<0.05);DDP组第21天胸腺CD4+CD25+Treg细胞比例较第10天明显升高(P<0.05);综合组脾脏CD4+CD25+Treg细胞比例较低,与肺积方组、DDP组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:肺积方联合化疗具有抗Lewis肺癌移植小鼠肿瘤生长的作用,该作用可能与其下调CD4+CD25+Treg细胞含量相关。     

CD4＋CD25＋调节性 T 细胞及其相关因子在恶性肿瘤患者胸腔积液及外周血中的表达

目的:探讨CD4~+CD25~+调节性T细胞及其相关因子在恶性肿瘤患者胸腔积液及外周血中的表达。方法:选取42例恶性肿瘤胸腔积液患者为研究组,38例健康体检者为对照组,采用流式细胞仪(FCM)和酶联免疫法(ELISA)检测研究组胸腔积液和外周血、对照组外周血中CD4~+CD25~+/CD4~+比例、淋巴细胞亚群以及转化生长因子-β1(TGF-β1)、白细胞介素-10(IL-10)和干扰素-γ(IFN-γ)水平。结果:研究组胸腔积液及外周血中CD4~+CD25~+/CD4~+比例及TGF-β1、IL-10水平均显著高于对照组(P<0.01),且胸腔积液高于外周血(P<0.01),而IFN-γ水平显著低于对照组,且胸腔积液低于外周血(P<0.01)。结论:对恶性肿瘤患者外周血和胸腔积液中CD4~+ CD25~+调节性T细胞及TGF-β1、IL-10和IFN-γ水平进行检测有利于判断病情预后和转归。     

CD4+ CD25+调节性T细胞在肺癌中的表达及其临床意义

目的：：探讨CD4+ CD25+调节性T细胞在晚期肺癌中的表达及其临床意义。方法：应用流式细胞术分析42例肺癌患者(肺癌组)外周血CD4+ CD25+调节性T细胞表达水平,与15名健康志愿者作对照。结果：肺癌组患者外周血CD4+ CD25+调节性T细胞数量为(7.17±3.63)%,明显高于对照组的(4.25±2.11)%(P<0.01)。肺癌组患者外周血中调节性T细胞数量在病理类型间差异无统计学意义(P>0.05),晚期肺癌患者外周调节性T细胞数量高于早期患者(P<0.05)。结论：调节性T细胞在肺癌患者中比率明显升高,并与临床进展有关。     

低剂量环磷酰胺对Lewis肺癌小鼠CD4+CD25+Treg细胞功能的影响

目的：研究低剂量环磷酰胺（CTX）单次注射对Lewis肺癌小鼠CD4⁺CD25⁺Treg细胞功能的影响,探讨CD4⁺CD25⁺Treg 细胞与肿瘤发生、发展的关系。方法：将传代培养的Lewis肺癌细胞接种于C57BL/6小鼠右腋皮下,建立Lewis肺癌模型,随机分成3组：CTX组、肿瘤组、单纯对照组。采用CTX单次注射,观测各组肿瘤体积动态变化;采用流式细胞术检测各组小鼠脾脏CD4⁺CD25⁺Treg细胞数量变化;采用半定量RT-PCR方法检测各组小鼠脾脏Foxp3 mRNA表达水平;采用MTT法检测脾脏T淋巴细胞增殖功能;采用LDH释放法检测脾脏特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTLs)细胞的杀伤活性。结果：与未治疗肿瘤组相比,CTX治疗可延缓荷19 d Lewis肺癌小鼠的肿瘤生长;CTX组小鼠脾脏CD4⁺CD25⁺Treg细胞数量低于肿瘤组（P< 0.05）;CTX组小鼠脾脏Foxp3 mRNA表达水平明显低于肿瘤组（P< 0.05）;CTX组小鼠脾脏T淋巴细胞功能明显高于肿瘤组（P<0. 05）;CTX组小鼠脾脏T淋巴细胞杀伤活性比肿瘤组略高,但变化不显著（P>0.05）。结论：CTX单次注射可降低Lewis肺癌小鼠脾脏CD4⁺CD25⁺Treg细胞的数量及Foxp3 mRNA表达,使T淋巴细胞增殖功能及脾细胞中CTLs杀伤功能增强。     

CD4+ CD25+ Foxp3+及CD4+ CD25- Foxp3+调节性T细胞在小鼠衰老过程中的变化规律

目的分析小鼠脾细胞中CD4⁺ CD25⁺ Foxp3⁺及CD4⁺ CD25^- Foxp3⁺调节性T细胞随小鼠年龄增长的变化, 探讨调节性T细胞与衰老的关系。方法2个月(青年)、6个月(中年)和15个月(老年)小鼠各5只，无菌取脾脏制备单个脾细胞悬液，首先用PECy5-CD4抗体和FITC-CD25抗体进行细胞表面染色，PBS洗涤后，经打孔液和固定液处理，最后用PE-Foxp3抗体进行核内染色，并用流式细胞仪检测CD4⁺调节性T细胞的变化。结果脾脏中CD4⁺ T细胞的数量在不同年龄小鼠间变化不大，CD4⁺ T细胞中CD4⁺ CD25⁺ T细胞的数量也无明显改变，但随小鼠年龄的增长CD4⁺ Foxp3⁺ T细胞的数量明显升高，15个月小鼠CD4⁺ Foxp3⁺ T数量高达（16.83±0.44）%，明显高于2个月和6个月小鼠（P＜0.01）。随着年龄的增长CD25⁺ Foxp3⁺调节性T细胞数量逐渐减低，CD25⁺ Foxp3⁺ T细胞在15个月和6个月小鼠脾细胞中的数量明显低于2个月小鼠（P＜0.05）；而CD25^- Foxp3⁺ 调节性T瞎胞的数量随着年龄的增长持续升高(P＜0.01)；随着年龄的增长小鼠脾细胞中CD4⁺ CD25⁺ Foxp3⁺ T细胞与CD4⁺ CD25^- Foxp3⁺ T细胞的比值呈下降趋势。结论小鼠衰老过程中CD4⁺ CD25⁺ Foxp3⁺ T细胞的数量明显下降，而CD4 ⁺CD25^- Foxp3⁺ T细胞的数量明显上升，提示这两群调节性T细胞亚群在小鼠衰老中可能发挥不同作用。     

CD4~+CD25~+调节性T细胞在HBV宫内感染的表达及意义

目的:探讨CD4+CD25+调节性T细胞(CD4+CD25+Treg)在HBV宫内感染者血液中的表达及意义。方法:流式细胞技术检测157例乙肝大三阳但肝功能正常孕产妇外周血、其分娩新生儿脐血、HBV宫内感染婴幼儿外周血中CD4+CD25+Treg表达水平。结果:HBV宫内感染产妇外周血及新生儿脐血中CD4+CD25+Treg的百分数较未感染组高(P<0.05);HBV持续感染者CD4+CD25+Treg比例较感染转阴组高(P<0.05)。结论:CD4+CD25+Treg抑制体内HBV清除,宫内感染与其表达上调有关。     

通络方剂对实验性糖尿病大鼠胸腺CD4+CD25+调节性T细胞的影响

目的探讨通络方剂对实验性糖尿病大鼠胸腺CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)的影响。方法 112只SD大鼠随机分为3组:正常对照组、糖尿病模型组、通络方剂干预组。后两组一次性腹腔注射链脲佐菌素60mg/kg制备1型糖尿病大鼠模型。通络方剂干预组再分为2组:分别于糖尿病造模成功后当天及普通饲养12周后0.4g.kg-1.d-1)灌胃给药,即预防性给药组(TL-1)和治疗性给药组(TL-2)。灌胃时间均为12周。实验周期6个月,不同时间点(对照组和模型组:4、8、12、16、20、24周;通络方剂组:12和24周)处死大鼠,流式细胞仪检测胸腺CD4+CD25+Treg数量及其占CD4+T细胞比例,H-E染色观察胸腺形态,免疫组化检测Foxp3蛋白表达。结果随糖尿病病程发展,与正常对照组相比,糖尿病大鼠胸腺逐渐萎缩,Treg占CD4+T细胞比例逐渐减少,Foxp3表达减少。两组通络方剂组较糖尿病组Treg比例升高(P<0.01),胸腺指数升高(P<0.05),Foxp3有表达。结论通络方剂可显著提高Treg比例,提高胸腺指数,提高Foxp3表达,可能对实验性糖尿病大鼠的胸腺Treg有保护作用。     

系统性红斑狼疮患者外周血调节性T细胞与IL-10及TGF-β_1的检测

目的:研究系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞(regulation T cells,Tr细胞)及相关细胞因子的变化,分析它们在SLE发病机制中的作用。方法:收集SLE患者及健康对照组外周抗凝静脉血,分离纯化T淋巴细胞。PE标记的抗CD4单抗,FITC标记的抗CD25单抗,作双色流式细胞术,分析SLE患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞百分率,ELISA法检测调节性T细胞相关细胞因子的表达。结果:SLE患者外周血Tr细胞的数量明显低于正常对照组[(2.83±1.05)%vs(5.07±0.59)%,P<0.05];患者血清中IL-10、TGF-β1的含量均低于正常对照组,差异有显著性[IL-10:(29.48±13.69)pg/mlvs(43.10±14.95)pg/ml,P<0.05;TGF-β1:(170.04±91.58)pg/mlvs(254.75±130.41)pg/ml,P<0.05]。患者外周血Tr细胞的比例与血清中IL-10、TGF-β1的含量呈正相关(r1=0.53,r2=0.64,P<0.05)。结论:SLE患者外周血存在细胞免疫功能失调,CD4+CD25+调节性T细胞数量与功能状态发生改变,T淋巴细胞耐受机制的破坏可能与SLE的免疫学发病机制有关。     

哮喘患者外周血Rho激酶及CD4+CD25+调节性T细胞测定

目的：比较不同研究对象外周血Rho激酶及CD4+CD25+调节性T细胞的表达规律，探讨Rho激酶和CD4+CD25+调节性T细胞在哮喘患者中的变化和相关性。方法：选取中、重度哮喘患者16例，健康对照组14例，通过年龄、性别配对，ELISA测定所有研究对象血清Rho激酶水平，流式细胞仪测定CD4+CD25+调节性T细胞水平，所有研究对象经肺功能仪测定肺功能。结果：哮喘组外周血Rho激酶表达水平高于对照组(P<0.05)，外周血CD4+CD25+调节性T细胞水平低于对照组(P<0.05)；两组外周血Rho激酶与肺功能第1秒用力呼气容积(forced expiratory volume in one second，FEV1)占预计值百分比(FEV1%)无相关关系(r=-0.491，P>0.05)；两组外周血CD4+CD25+调节性T细胞水平与肺功能FEV1%呈轻度正相关关系(r=0.380，P=0.038)；两组外周血Rho激酶与CD4+CD25+调节性T细胞水平无相关关系(r=-0.438，P>0.05)。结论：哮喘患者外周血Rho激酶水平升高，CD4+CD25+调节性T细胞水平降低，可能在哮喘发病过程中起一定的作用。     

外周血及蜕膜组织中CD4加CD25加调节性T细胞比例与原因不明复发性流产的关系研究

目的：：探讨外周血及蜕膜组织中 CD4＋CD25＋调节性 T 细胞比例与原因不明复发性流产的关系。方法：随机选取自2012年6月到2015年6月,我院门诊部与住院部的原因不明复发性流产患者62例(观察组)和正常妊娠妇女62例(对照组)作为研究对象。采用流式细胞四色荧光法测量两组研究对象外周血及蜕膜组织中的 CD4＋CD25＋调节性 T 细胞比例。分析比较两组研究对象外周血及蜕膜组织中 CD4＋CD25＋调节性 T 细胞比例情况。结果：观察组患者外周血中 CD4＋CD25＋调节性 T 细胞比例低于对照组患者外周血中 CD4＋CD25＋调节性 T 细胞的比例,且两组差异具有统计学意义( t ＝2.669,P ＝0.015);观察组患者蜕膜组织中 CD4＋CD25＋调节性 T 细胞比例低于对照组患者蜕膜组织中CD4＋CD25＋调节性 T 细胞比例,两组差异具有统计学意义(t ＝4.986,P ＝0.001)。结论：外周血及蜕膜组织中 CD4＋CD25＋调节性 T 细胞比例在早孕期显著升高,参与了正常妊娠的维持,有可能是调控母胎界面局部免疫耐受形成的一个重要因素;外周血及蜕膜组织中 CD4＋CD25＋调节性 T 细胞比例降低可能与 URSA 的发生有关。