猕猴结核分枝杆菌PCR检测方法的建立与初步应用

目的建立猕猴结核分枝杆菌PCR快速检测方法。方法根据GenBank中报道的人型结核分枝杆菌标准株H37RV全基因序列，针对其中致病性结核分枝杆菌所特有的保守区域ESAT-6设计一对引物进行TouchdownPCR反应，利用此方法对100份野生来源猕猴全血标本进行检测，并与传统的PPD实验和咽拭子抗酸染色实验结果作比对。结果抽取33份野生来源猕猴的外周血，提取DNA进行扩增，扩增片段经纯化、回收克隆测序后用BLAST软件进行同源性对比，与GenBank中报道的序列基本相同，检测标本中有4份（4／33）为阳性，其中3份（3／33）标本与结核菌素试验和咽拭子抗酸染色试验结果相符合。结论建立了从猴全血中直接检测猴结核分枝杆菌DNA的TouchdownPCR方法，具有敏感性和特异性高，且简便的优点。     

31例老年肺下叶结核误诊分析

目的　探讨老年肺下叶结核的临床特点及误诊原因。方法　对 31例老年肺下叶结核的临床资料进行回顾分析 ,对临床症状、体征 ,X线胸片、痰检及结核菌素实验、纤维支气管镜等进行总结。结果　老年肺下叶结核误诊率较高 ,达 39.7% ,易误诊为肺部感染和肿瘤。结论　老年肺下叶结核诊断必须结合临床特点 ,全面考虑 ,综合判断 ,可减少误诊     

一例活动性肺结核大学生患者密切接触者感染筛查分析及预防措施研究

目的某高校2015级某女生于2016年患结核病后,对110例与其密切接触者进行筛查并进行结果分析,研究预防大学生结核病流行的措施。方法 110例肺结核患者密切接触者(其中3例最密切接触者)作为筛查对象,对其行结核菌素试验(PPD)和胸部X线检查,对结核菌素试验强阳性者进一步行痰结核分枝杆菌涂片检查。结果 110例密切接触者PPD实验结果显示强阳性17例,强阳性率为15.45%;胸部X线检查结果显示亲密接触者无阳性体征。痰结核分枝杆菌涂片结果显示没有发现结核杆菌。结论从结核患者亲密接触者各项筛查指标来看,该校结核病目前尚未构成肺结核疫情,未造成传播。大学生是肺结核传播的高危人群,应加强对其健康教育,养成良好的个人习惯,加强身体锻炼,增强对结核病的抵抗力,同时还应该采取积极有效的措施加以预防。     

肺结核诊断方法的评价

<正> 肺结核病的诊断是综合性诊断。应包括病史、体征、结核菌素试验、胸部X线检查及痰检等常规方法;也包括当前正在开展的纤维支气管镜(简称纤支镜)检查及结核抗体的测定。本文重点介绍胸部X线检查、痰检、纤支镜检查及结核抗体测定对肺结核的诊断价值。 1.胸部X线检查:胸片上结核病灶多分布在上叶的尖后段及下叶的背段,呈浓淡不均或伴有空洞的不同性质病灶共同存在为其特点。据此,可作出初步诊断、胸片不但可发现这类病变,且为进一步诊断及鉴     

肺下叶基底段结核30例误诊分析

目的 减少肺下叶基底段结核病的过诊、漏诊与误诊,提高其临床诊断水平.方法 回顾性分析2004年6月至2008年6月经临床证实为肺下叶基底段结核,而本所及外院放射科医生或临床医生15 d内未诊断为肺结核的患者列为误诊.结果 期间共有79例肺下叶基底段结核,误诊为其他肺部疾病30例,误诊率达38%.结论 对于肺下叶基底段结核,若按以下诊断方法并加以分析,定会提高肺下叶基底段结核的诊断正确率:①重视症状;②对可疑患者应体位排痰,反复多次查痰,必要时结核菌培养;③结核菌素试验,胸部正、侧位片,胸部CT检查,纤维支气管镜刷检或活检,在B超或CT引导下进行经皮肺穿刺活检均有一定的价值;④综合分析,高度怀疑结核病者可给予诊断性抗痨治疗.     

肺部X线阴影与纤维支气管镜检查的对比分析

目的　研究X线检查与纤维支气管镜检查在胸部发现阴影时诊断的符合情况。方法　对 2 2 3例经X线、CT检查发现肺部阴影、同时做纤维支气管镜及病理检查确诊的患者作回顾性分析。结果　经纤维支气管镜检查确定诊断 :炎症 93例 (41.7% ) ,结核 5 3例 (2 3.8% ) ,肿瘤 6 6例 (2 9.6 % )及其他 11例 (4.9% )。胸部X线检查与纤维支气管镜检查符合率 76 .2 %。结论　纤维支气管镜检查能补充胸部X线检查的不足     

儿童隐性结核感染

隐性结核染系指感染分枝杆菌或(?)型分枝杆菌的儿童,对5个单位结核菌素试验阳性(硬结直径10毫米以上),但无临床症状及异常胸部X线表现者.     

全血γ干扰素测定在55例结核病诊断中的应用

结核病是对人类健康存在极大威胁的一种慢性传染性疾病,主要由结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis）的感染所致。目前,结核菌素皮肤试验（tuberculin skin test,TST）仍然是临床上应用最多且方便可行的诊断结核病的试验技术。结核菌素的纯蛋白衍生物（protein purified derivative,PPD）是含有200多种蛋白质的混合物,即使检测出阳性结果也很难区分是否是结核分枝杆菌或者是卡介苗接种导致的感染,因此临床上需要一种更准确的诊断方法以取代TST。     

肺下叶结核90例临床分析

目的 探讨肺下叶结核的临床特点.方法 对90例肺下叶临床症状、体征、X线表现、痰检、结核菌素试验及纤维支气管镜等进行回顾性分析.结果 本组73.3%的患者缺乏典型的临床表现,而被误诊为其他疾病.结论 对肺下叶结核症状、X线表现不典型者,要综合判断,反复查痰找抗酸杆菌及纤支镜检查有助于早期诊断.     

电子支气管镜检查在痰菌阴性支气管内膜结核诊断中的价值

目的探讨痰菌阴性支气管内膜结核的临床及电子支气管镜下特点。方法回顾性分析本院经电子支气管镜检查后确诊痰菌阴性支气管内膜结核69例的临床、胸部影像和电子支气管镜下表现。结果 X线胸片或胸部CT片显示肺部渗出性改变、肺不张及支气管炎,23.2%的患者肺部未见异常。电子支气管镜下所见分为浸润型、溃疡型、肉芽增殖型、闭塞型。钳检病理学阳性率87.0%,刷检物涂片抗酸杆菌阳性率84.1%。结论痰菌阴性支气管内膜结核的临床症状与X线表现无特征性,电子支气管镜检查中联合活检组织病理及刷检物涂片抗酸杆菌检测是有效的诊断手段。     

北京昌平区北京/W系结核分枝杆菌的流行特征

目的:探讨北京/W系结核分枝杆菌在北京市昌平区的流行特征。方法:连续收集北京市昌平区2004年1月1日至2006年12月31日的结核分枝杆菌分离株336株,采用Spoligotyping和多重PCR法对其进行分型及亚分型;同时采用谱系定义靶标RD105、RD181、RD150、RD142和Real-timePCR方法进行分型和亚分型,并分析北京/W系的2个亚系与其对应患者年龄、出生地、抗结核药物敏感谱和卡介苗(BCG)接种情况之间的关系。结果:2种方法对该地区结核分枝杆菌分型及亚分型结果完全一致,均为:299株为北京/W系和37株为非北京/W系结核分枝杆菌;在北京/W系结核分枝杆菌中,存在RD181的非典型北京菌株47株(15.7%),而相对现代的缺失RD181的W菌/典型北京家族菌株252株(84.3%);在W菌/典型北京家族菌株中,RD150和RD142缺失的菌株分别为168和173株。W菌/典型北京家族菌株和非典型北京菌株2个亚系的分布与患者出生地、BCG接种情况、年龄以及抗结核药物敏感谱(链霉素、异烟肼、利福平和乙胺丁醇)均无关(χ2分别为0.530、1.623、2.180、<0.001、0.849、...     

北京基因型结核分枝杆菌感染THP-1细胞系表达谱的研究

目的通过分析不同结核分枝杆菌感染巨噬细胞后表达谱的改变,探讨结核病(tuberculosis,TB),尤其是北京基因型结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis M.tb)感染的结核病免疫发病机制。方法具有IS6110 DNARFLP和Spoligotyping基因分型结果的265株北京基因型结核分枝杆菌(简称M.tb Beijing genotype)鉴定自2000年中国结核病流行病学抽样调查(简称2000年流调),采用平均连锁方法计算北京基因型结核分枝杆菌中心菌。结核分枝杆菌(M.tb H37Rv)、牛分枝杆菌(M.bovis)标准菌株和M.tb Beijing genotype感染THP-1细胞,采用基因芯片分析其表达谱的改变。结果输入MAS系统,行进一步的分析。结果依据计算原则,相似系数最大为0.514,其对应菌株为结核分枝杆菌北京基因型中心菌株。分枝杆菌感染THP-1细胞后相应的芯片结果具有可靠性和可分析性。M.tb H37Rv、M.bovis、M.tb Beijing genotype感染THP-1细胞的共同表达293个基因。共同表达基因的GO和pathway分析,发现一些不为人特别关注,但对结核免疫有一定作用的信号通路,例如B细胞受体信号通路。M.tb H37Rv、M.tb Beijing genotype感染THP-1细胞差异表达基因包括:tnf,tnfrsf9,pim-1,icam-1和cd48。结论 2000年结核病流调以中国人口为整体,采用分层整群随机抽样。因此获得的M.tb Beijing genotype中心菌株具有中国代表性。293个基因可作为筛选用于菌阴结核病诊断的候选靶标。对这些差异表达基因涉及的信号通路,例如:JAK-STAT信号通路和自然杀伤细胞介导的细胞毒性以及TNF的深入分析,将对理解M.tb Beijing genotype免疫毒性特征有益。     

痰液miR-155检测作为诊断结核分枝杆菌感染标志物的研究

目的 分析结核分枝杆菌H37Rv感染诱导宿主巨噬细胞表达miRNA的变化,进而验证差异miRNA对结核分枝杆菌感染的临床诊断意义。方法 使用H37Rv菌株感染人巨噬细胞系THP-1细胞后,收集12 h、24 h和48 h细胞并提取总RNA,进行miRNA微阵列芯片分析;再将临床分离的120株不同个体来源的结核分枝杆菌菌株与THP-1细胞共培养,使用实时定量PCR (real time-PCR, rt-PCR)验证差异miRNA的表达水平;随后收集结核患者的痰液标本处理后,提取总RNA,进行实时荧光定量PCR检测痰液中的差异表达的miRNA水平。结果 H37Rv体外刺激THP-1细胞,使用miRNA微阵列芯片分析,结果显示：miR-155、miR-29b-1*、miR-150、miR-146a、miR-212和miR-483-5p 共计6个miRNAs水平在3个时间点升高均较为明显;将来自不同区域的120株结核菌株分别与THP-1细胞的共培养24 h,检测发现miR-155表达水平最高;以miRNA-155为检测靶标,对68例结核患者的痰液进行检测,灵敏度和特异度分别为94.1%和93.8%。其灵敏度高于痰涂片的22.1%和结核抗体的83.8% ,差异具有统计学意义（P<0.05）。但与ELISpot法的97.1%,差异无统计学意义（P>0.05）。在对痰涂片阳性结果与miRNA检测结果相关性分析中,发现miR-155其表达水平与痰涂片阳性等级呈正相关（R²=0.743, P<0.05）。结论 此研究提示miR-155能够作为活动性结核诊断的有效靶标,且对间接评估患者肺部荷菌量有重要意义。     

结核病患者中性粒细胞表面Toll样受体2和Toll样受体4的表达及意义

目的:检测结核病患者外周血中性粒细胞(PMN)体外感染结核分枝杆菌(M.tb)前后表面Toll样受体2(TLR2)和Toll样受体4(TLR4)的表达,并探讨其意义。方法:采用流式细胞仪检测结核病患者PMN表面TLR2和TLR4的表达,同时检测正常人PMN表面TLR2和TLR4的表达率;再用M.tb感染结核病患者和正常人外周血,检测PMN表面TLR2和TLR4表达情况。结果:结核病患者外周血感染M.tb前PMN表面TLR2和TLR4表达率明显高于正常人(P0.01);结核病患者和正常人外周血在感染M.tb后PMN表面TLR2和TLR4表达率均较感染前明显降低(P0.01)。结论:结核病患者PMN表面TLR2和TLR4的表达和活化有助于机体抵御结核感染,TLR2和TLR4共同参与了宿主对M.tb的免疫应答。     

经纤支镜高频电刀灼烧并放置支架治疗结核性左主支气管狭窄

目的:探讨经纤支镜高频电刀灼烧扩大管腔并放置金属支架治疗左主支气管结核性狭窄的疗效和安全性。方法:对11例结核性左主支气管狭窄并左肺不张的患者,经纤维支气管镜采用高频电刀烧灼扩大管腔并置放镍-钛记忆合金气道支架的方法治疗。结果:11例经治疗后左主支气管恢复畅通,9例全肺复张,2例下肺复张;追踪观察4个月后,2例因上、下叶以下支气管结核性肉芽肿阻塞,再发生左全肺不张。结论:用经纤支镜高频电刀灼烧扩大管腔后置放支气管金属支架的方法,治疗结核性左主支气管狭窄,比采用单一的高频电刀或置放金属支架治疗效果更好,但远期疗效及副作用有待进一步观察。     

电子支气管镜对肺癌的诊断价值

目的评价电子支气管镜在肺癌诊断中的价值.方法选取昆明医学院第一附属医院2008年1月至2010年12月302例经电子支气管镜检查且病理学明确诊断为肺癌患者的数据,进行统计学分析,根据镜下肉眼所见病变性质分组：A-新生物组;B-浸润组;C-外压组;D-炎症组;E-未见异常组.结果诊断肺癌170例,诊断率为56.3%.新生物组诊断肺癌108例,诊断率96.4%,浸润组诊断肺癌27例,诊断率81.8%,外压组诊断肺癌14例,诊断率18.7%,炎症组诊断肺癌17例,诊断率53.1%,未见异常组诊断肺癌4例,诊断率8%,各组诊断率比较有统计学意义（P〈0.05）.A组经电子支气管镜确诊患者中鳞癌占64.8%,高于腺癌及小细胞肺癌（P〈0.05）.D组经电子支气管镜确诊者中,腺癌占70.6%,高于鳞癌及小细胞肺癌（P〈0.05）.结论电子支气管镜检查对肺癌的确诊有重要价值,镜下所见病变与肺癌的诊断率相关,且对肺癌的病理类型有一定提示作用.     

纤维支气管镜对右中叶肺不张的诊治价值(附50例报告)

目的：探讨应用纤维支气管镜检查术在右中叶肺不张诊断和治疗中的价值。方法：对50例右中叶肺不张患者应用纤维支气管镜进行诊断和治疗。结果：50例右中叶肺不张中非特异性炎症29例、肺癌12例、结核3例、异物1例、未确定诊断5例，总确诊率90％(45／50)；50例中33例经纤维支气管镜直视下局部治疗后复张，有效率66％(33／50)，术后未见严重并发症。结论：纤维支气管镜对右中叶肺不张有一定的临床诊断和治疗价值。     

超细支气管镜在诊断周围型肺癌中的应用价值

目的探讨超细支气管镜在周围型肺癌诊断中的应用价值。方法对21例怀疑周围型肺癌的患者,先用电子支气管镜行常规检查,未能发现支气管内肿物或者新生物位于上叶尖、后段以下,活检钳难以触及者,再选择行超细支气管镜检查。结果 21例患者中,经活组织病理检查(简称活检)诊断阳性率81%(17/21),联合毛刷诊断阳性率86%(18/21),其中15例为肺癌,肺癌诊断阳性率71%(15/21),2例为炎症,1例为结核。结论非X线引导下采用超细支气管镜检查联合活检可以提高周围型肺癌的诊断阳性率,值得临床开展应用。     

气管镜吸痰联合肺泡灌洗在难治性哮喘中的应用价值

目的探讨气管镜吸痰联合肺泡灌洗在难治性哮喘患者的应用价值及可行性。方法将32例入选病人随机分对照组及治疗组,在规范的治疗同时,治疗组接受气管镜吸痰、肺泡灌洗治疗2-3次后,观察两组ACT评分及肺功能指标改善水平。结果治疗组患者ACT评分及肺功能指标有明显改善,P〈0.01,有统计学意义。结论难治性哮喘患者行气管镜吸痰联合肺泡灌洗治疗后肺功能指标及ACT评分有明显改善。     

靶向递送人颗粒溶素与小鼠单链IL-12真核共表达质粒耻垢分枝杆菌的构建及鉴定

目的:构建携带编码人天然颗粒溶素(GLS)和小鼠单链IL-12基因的真核共表达载体pZM03,并构建可将其靶向递送入巨噬细胞中进行表达的重组耻垢分枝杆菌菌苗.方法:将人GLS,小鼠单链IL-12基因和分枝杆菌复制子OriM同时克隆进多启动子真核共表达载体pBudCE4.1中,得到穿梭质粒pZM03.以pZM03电转化耻垢分枝杆菌mc2-155,通过PCR方法检测重组菌中携带的真核共表达质粒;通过与小鼠巨噬细胞株RAW264.7共孵育检测重组菌的靶向性.结果:成功得到了可靶向递送GLS/IL-12真核共表达质粒pZM03进入巨噬细胞的新型重组菌.结论:利用耻垢分枝杆菌作为减毒生物体载体向巨噬细胞中靶向递送真核表达质粒是可能的.