环境条件对磁螺菌生长的影响

目的了解碳源种类及浓度、氧、还原剂等条件对磁螺菌（Magnetospirillum gryphiswaldense）生长的影响；建立深层培养磁螺菌及磁小体的技术。方法在60ml血清瓶中，将供试菌株在不同种类和浓度的碳源培养基，不同氧浓度等条件下培养，测定OD600nm；在5L自动控制发酵罐（L．E．Marubishi Co．Tokyo，Japan）中，控制pH、温度及转速分别为7．2、30℃、400r／min，通气量为1．0L／min-1．2L／min，氧浓度为0．5％-0．7％的条件下，以乙酸钠-苹果酸培养基和乳酸钠培养基深层培养供试菌株，测定OD60nm.用高效液相色谱等分析培养过程中碳氮源变化规律；用电子显微镜观察磁小体的合成。结果碳源的种类及浓度是影响该菌生长和磁小体合成的重要因素之一；在乙酸钠一苹果酸培养基和乳酸钠培养基中深层培养25h的细胞密度分别为0．7和1．7OD600nm.结论乳酸钠培养基是适合于磁螺菌快速生长的最佳培养基。建立了深层培养磁螺菌及磁小体的技术和方法，该方法的建立对于大量获得细菌磁小体而进行应用开发具有重要意义。     

趋磁螺菌纳米磁小体的特征及标准化检测体系

目的:纯化趋磁螺菌细胞内合成的纳米级四氧化三铁颗粒(磁小体),并对其进行表征,建立标准化检测体系。方法:采用磁性分离系统获得磁小体,分别用透射电镜(TEM)、X射线衍射(XRD)、傅立叶变换红外光谱(FT-IR)、动态光散射(DLS)、zeta电位测定、室温磁滞回线测量等方法进行表征。结果:TEM分析显示,磁小体平均粒径约为43 nm,XRD线宽化法计算其晶粒大小约为35 nm;TEM和FTI-R分析显示,纯化的磁小体表面的质膜完整,—NH2存在,可作为连接其他化合物的位点;zeta电位分析表明,在水溶液中磁小体表面的zeta电位为-32.3 mV,体系比较稳定。结论:纯化磁小体颗粒均匀,有膜包被,可作为核酸、蛋白、药物的载体而应用于不同领域。     

磁小体对大鼠成纤维细胞的生长抑制研究

目的:探讨磁小体对大鼠成纤维细胞的生长抑制作用。方法:通过培养大鼠L929细胞,并在培养液中加入0.1mg/ml,0.5mg/ml,1.0mg/ml,1.3mg/ml不同浓度的磁小体继续培养,观察作用24、48、72h细胞生长情况,通过MTT检测细胞吸光度,判断活细胞的含量,从而判断磁小体对细胞的生长抑制作用。结果:由MTT法得到细胞生长抑制率,除有一组达到7.97%外,其余皆为负值。结论:实验结果表明磁小体对细胞生长没有明显的抑制作用。抑制率出现负值的原因可能与磁小体最外层脂质成分与MTT和DMSO发生反应,被DMSO溶解从而产生吸光度有关。     

大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞的培养、鉴定及体外特性初步研究

目的 建立成年大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(ATⅡ细胞)分离、纯化、原代培养和鉴定的技术方法,并观察其体外生长特性及SP-A表达情况.方法 将0.08%胰蛋白酶消化液从气管注入肺组织,消化分离ATⅡ细胞.将大鼠IgG包被的培养皿免疫吸附纯化后,进行原代培养.用倒置相差显微镜观察细胞生长情况,透射电镜(TEM )鉴定细胞,改良巴式染色法鉴定并计算细胞纯度,MTT法检测细胞增殖情况,Western blot检测细胞表达SP-A动态变化.结果 细胞产量约为2.2×107个/只大鼠.电镜下观察到ATⅡ细胞特征性结构--板层小体;纯度大于 90%.体外培养36～72 h时细胞生长良好,细胞质内有较多颗粒;96 h后细胞呈长索形,细胞内颗粒减少,并出现空泡.ATⅡ细胞表达SP-A在36 h左右达高峰,之后表达减弱.结论 利用0.08%胰蛋白酶消化分离和大鼠IgG免疫吸附纯化可获得满意的原代ATⅡ细胞.培养36～72 h时细胞增殖旺盛,生长良好,SP-A表达丰富,是进行体外实验的良好时期.     

铁因素对趋磁螺菌AMB-1磁小体形成及其相关基因表达的影响

目的 观察铁(Fe3+)对趋磁螺菌AMB-1磁小体形成及相关基因表达的影响,为优化磁小体最适生长条件和探讨磁小体形成机制提供实验依据.方法 驯化的无磁性AMB-1接种到有Fe3+或无Fe3+培养基中培养,测定Cmag值和透射电镜研究磁小体形成,qRT-PCR检测磁小体相关基因mms13,mms6和magA表达.结果 在...     

压力对大鼠纯化视网膜神经节细胞中bcl-2、bax及p53mRNA表达的影响

目的通过检测不同压力下纯化培养的大鼠视网膜神经节细胞(Retinal ganglioncells,RGCs)中bcl-2,bax,p53mRNA表达情况,了解压力对视网膜神经节细胞凋亡的影响.方法用SD系大鼠脑源性星型胶质细胞同化培养液双界面法[1]培养羊抗鼠Thy1.1单克隆抗体纯化的SD系大鼠RGCs;在纯化培养的RGCs上分别施加0,20mmHg,40mmHg,60mmHg和80mmHg气压,培养24h及48h后TUNEL法检测各组细胞的凋亡,原位杂交检测细胞中bcl-2,bax及p53mRNA的表达.结果纯化的RGCs培养12h及24h用羊抗鼠FITC-Thy-1.1单克隆抗体进行鉴定阳性,纯度为97%.传三代后星型胶质细胞用胶质纤维酸性蛋白(GFAP)单克隆抗体标记和鉴定阳性.培养24h组TUNEL法检测对照组极少数细胞凋亡,20mmHg组见较多细胞凋亡,随着压力的增高细胞凋亡数增多,凋亡指数增高;与对照组相比差异均有显著性.培养48h组压力≥20mmHg各组较相同压力培养24h组凋亡指数增高,差异有显著性(P＜0.05).压力≥40mmHg时bcl-2 mRNA表达逐渐减少,压力≥20mmHg时bax及p53 mRNA表达则逐渐增加;与对照组相比均有显著性差异(P＜0.05).结论高于20mmHg压力时间超过24h可激活体外培养的视网膜神经节细胞的相关凋亡基因导致细胞的凋亡.     

大鼠胰岛的分离和纯化

目的 探讨获得足够数量和较高纯度大鼠胰岛的分离和纯化方法.方法 采用V型胶原酶灌注消化法分离成年大鼠胰岛,Ficoll 400非连续密度梯度法纯化胰岛.双硫腙(DTZ)染色鉴定培养的胰岛细胞,锥虫蓝染色检测细胞活性.葡萄糖刺激胰岛素释放试验评价胰岛细胞的功能.结果 分离纯化后大鼠胰岛平均收获量为(480±30)IEQ,纯度大于90%,活性大于90%.在低糖和高糖刺激下,胰岛素分泌量分别为(12.28±0.89)mIU/L、(19.01±1.49)mlU/L,二者相比较.差异有统计学意义(P<0.05),刺激指数为(1.55±0.01).结论 胶原酶V逆行灌注消化胰腺和Ficoll400非连续密度梯度纯化法,可获得高纯度高活率的大鼠胰岛.     

半自动消化法分离纯化人胰岛细胞的实验研究

目的 探索用半自动胰腺消化系统建立大规模人胰岛细胞纯化的可靠方法.方法 使用自制的半自动人胰腺消化分离装置及胶原酶P进行人胰腺的消化分离,用COBE2991细胞分离机及HCA-Ficoll纯化人胰岛细胞.通过DTZ染色,在倒置显微镜下计数胰岛细胞的数量和纯度,用胰岛素释放试验检测胰岛细胞的分泌功能.结果 消化后平均每条胰腺可平均获得(38 6201±78 219)个胰岛细胞当量(IEQ),纯化后平均每条胰腺可获得231 420±28 054IEQ,平均每克胰腺组织可获得(3148±317)IEQ,纯化后胰岛细胞平均纯度为(62.81±2.68)%.纯化后的胰岛细胞对胰岛素释放刺激反应良好,高糖(16.7 mmol/L)时胰岛素的释放量为低糖(3.3 mmol/L)时的3.53倍(P≤0.001).结论 成功建立了半自动人胰岛细胞分离、纯化的方法,纯化的人胰岛细胞具有良好的生物活性.     

EDC/NHS交联剂在新型生物材料磁小体修饰中的应用

目的使用1-乙基-3-(3-二甲基氨丙基)-碳化二亚胺(EDC)/N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)交联剂制备基于磁小体的主动靶向纳米颗粒。方法使用EDC/NHS作为交联剂,在超声振荡孵育下交联细胞色素c适体修饰的磁小体及甲氧基-聚乙二醇-羧基(methoxy-PEG-carboxymethyl,分子量2 000 Da,mPEGCOOH2000),得到终产物聚乙二醇化的靶向细胞色素c适体的磁小体纳米颗粒PEG-cBMP。结果透射电镜表征结果显示终产物PEG-cBMP的包膜较纯化磁小体的包膜明显增厚,约10 nm,说明在交联剂的作用下修饰磁小体成功。结论采用EDC/NHS交联剂修饰磁小体这种生物源性纳米材料是可行的。     

Inhibition of honokiol on the proliferation and melanin biosynthesis on B16 melanoma cells in vitro

目的 探讨和厚朴酚对小鼠黑色素瘤B16细胞增殖以及细胞内黑色素合成的影响.方法 体外培养小鼠B16细胞,MTT法检测和厚朴酚对B16细胞增殖的影响;DAPI染色法观察和厚朴酚对B16细胞细胞形态的影响;NaOH裂解法检测和厚朴酚对黑色素含量的影响.结果 和厚朴酚浓度为5、10、20、40、80 μmol/L 作用B16细胞,在不同的用药时间12、24和48 h,和厚朴酚对B16细胞增殖的IC50分别为23.4、13.1和11.4 μmol/L;同时和厚朴酚作用B16细胞12 h后,经DAPI染色,B16细胞呈现典型的凋亡形态;另外采用20、40、80 μmol/L的和厚朴酚分别作用B16细胞,B16细胞内黑色素合成量也呈现降低的趋势.结论 和厚朴酚能有效地抑制B16细胞增殖,且其抑制作用具有时间和浓度依赖性;药物作用后的B16细胞呈现凋亡形态并出现凋亡小体;和厚朴酚对B16细胞内黑色素合成也呈现抑制作用但不明显.