核酸适配体筛选方法研究进展

指数富集的配基数系统进化(SELEX)技术的基本过程是用化学方法合成一个单链寡核苷酸库,将之于与靶标物质混合,寡核苷酸链与靶标物质结合形成复合物,去除未结合的核酸链后,再将结合的核酸分子与靶标物质分离,以此寡核苷酸分子为模板进行PCR扩增,用其产物进行下一个循环的筛选。经过数次循环,即可得到能与靶标物质高亲和力高特异性结合的核酸适配体分子。本文综述了SELEX技术筛选核酸适配体技术的一些研究进展。     

SELEX技术及寡核苷酸适配体的近期研究进展

指数富集的配体系统进化（SELEX）技术是一类具备蓬勃发展前景的体外筛选技术,在生物学、药学及化学领域已引起广泛关注。本文即针对2004年以来SELEX技术的发展特点,主要介绍两类新型SELEX策略,即毛细管电泳-SELEX和针对复杂靶标的SELEX方法,并简要总结了寡核苷酸适配体在生物医学和药学相关方面的最新应用进展。     

雌激素受体核酸适配体在乳腺癌免疫组织化学检测中的应用

  目的  筛选出能应用于乳腺癌免疫组织化学检测的雌激素受体（ER）核酸。  方法  制备ER蛋白,用指数富集的配体系统进化（SELEX）技术筛选出对ER具有高亲和力和特异性的核酸适配体。采用配体－受体相互反应实验来测定合成的ER适配体复合物的亲和力,用生物素化ER适配体和ER单克隆抗体分别作为一抗对105例乳腺癌组织进行免疫组化染色,以检测合成的ER适配体在癌组织中的特异性表达。用Kappa检验进行一致性检验。  结果  线性回归法计算获得生物素化适配体与ER复合物的解离常数Kd值为（0.34±0.05）nmol/L (n=3, r=0.989),最大结合力（B_max）为769.23 fmol/(mg prot·nmol-1·L-1)。实验结果表明,分别用生物素化ER适配体和ER单克隆抗体分别作为一抗进行免疫组化染色的结果具有高度一致性。其中ER阳性和阴性样本n=105,kappa值=0.943,95%可信区间=0.879~1.006,P<0.05;而ER弱阳性和中度/强表达样本n=75,kappa值=0.805,95%可信区间=0.642~0.967,P<0.05。进一步观察发现,ER适配体和ER抗体能使乳腺癌组织同一部位出现阳性表达,而阴性对照组均无表达。2例子宫内膜癌用生物素化ER适配体检测,癌细胞ER表达均为阳性。  结论  我们合成的ER适配体在体外能高度结合ER,ER适配体和ER抗体都能检测乳腺癌组织中ER的特异性表达。     

核酸适配子在疾病诊断研究中的应用

核酸适配子是通过指数富集的配体系统进化(systematic evolution of ligands by exponential enrichment，SELEX)
技术从单链随机寡核苷酸文库中筛选得到的单链寡核苷酸配体，其与靶标的结合具有高特异性及高亲和力等优点，
使其能广泛地应用于疾病诊断研究。适配子在生化检测、新肿瘤标志物发现、分子成像、病原微生物检测等领域的
研究应用中均有报道，并显示出良好的应用前景。     

核酸适配体在肿瘤液体活检中的应用

肿瘤的液体活检（CTCs、ctDNA和外泌体）可以提供全面、动态的病理信息,对肿瘤的早期诊疗、疗效监测和复发监控有重要作用,但在检测的灵敏度和特异性方面需要改进。而核酸适配体具有独特的空间构象,易于合成,能够进行特定的修饰与组装,能够放大检测信号,因此核酸适配体在肿瘤液体活检的应用中具有广阔的前景。本文对核酸适配体在肿瘤液体活检中的应用作一综述。     

核酸适配体技术在海洋生物毒素检测中的应用

核酸适配体是利用指数富集的配基系统进化技术体外筛选得到的单链DNA或RNA片段,能高亲和、高特异性地结合氨基酸、糖类、蛋白质、细胞、细菌和病毒等多种目标物质,具有操作简单、灵敏度高和检测成本低等优点.在海洋生物毒素的检测和预防中,核酸适配体技术已显示出巨大的潜力.本文概述了核酸适配体技术的基本原理、目前的应用现状及优势,分析了海洋生物毒素分子的特点及现有检测手段的局限,并对核酸适配体技术在海洋生物毒素检测中的应用前景进行了展望.     

鼻咽癌核酸适配子的筛选及鉴定

目的利用指数富集的配套系统进化技术(SELEX)筛选人类疱疹病毒(EB病毒)阳性鼻咽癌细胞核酸适配子。方法体外合成长度为78个核苷酸的随机DNA文库,通过SELEX技术,以正常鼻咽上皮细胞为靶标进行消减筛选,以EB病毒阳性低分化鼻咽癌细胞为靶标进行10轮的筛选,克隆、测序,并对适配子进行鉴定。结果流式细胞仪检测亚文库与靶细胞的结合能力随着筛选轮数的增加荧光强度增强。聚类分析显示,适配子可以分为3个家族,1、2家族具有保守序列。结论初步建立EB病毒阳性鼻咽癌细胞适配子库,筛选到具有亲和力和特异性的核酸适配子。     

基于核酸适配体-荧光染料EvaGreenTM快速检测ATP的研究

目的 利用荧光嵌入染料EvaGreenTM在单双链DNA溶液中不同的荧光性质构建基于核酸适配体的ATP检测体系,建立一种简单、高效的检测ATP的新方法.方法 利用ATP核酸适配体双链DNA(dsDNA)和核酸绿色荧光染料Eva GreenTM嵌合作用,实现了对ATP的检测.考察了ATP的孵育温度、pH、浓度等因素对荧光...     

TLS9a核酸适配体对小鼠肝癌细胞的靶向作用研究

目的 探讨TLS9a核酸适配体对小鼠肝癌细胞的靶向作用.方法 制备马来酰亚胺修饰的装载阿霉素的脂质体(liposome),合成FITC荧光及巯基修饰的TLS9a核酸适配体,并将其耦联到脂质体表面.紫外分光光度法检测阿霉素包封率.动态光散射法(DLS)测纳米粒子粒径大小及电位分布,倒置荧光显微镜观察小鼠肝癌细胞对阿霉素摄入及用流式细胞技术检测平均荧光强度,评估小鼠肝癌细胞对药物摄入量.四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞活性.结果 流式细胞术检测TLS9a核酸适配体与BNL.1ME.A.7R.1小鼠肝癌细胞结合率为54.1％,TLS9a耦联的脂质体平均粒径分布在(116.0±5.0)nm.TLS9a-liposome/DOX在pH 5.0的环境中可以快速释放化疗药物DOX,72 h药物释放量超过70％.TLS9a-liposome/DOX在体外能够有效抑制小鼠肝癌细胞BN L.1ME.A.7R.1生长.结论 TLS9a核酸适配体可以特异性与小鼠肝癌细胞BNL.1ME.A.7R.1结合,可用于检测小鼠肝癌细胞.     

超声在乳腺癌诊断和治疗中的应用

乳腺癌是威胁中国女性健康的主要疾病之一,早期发现、早期诊断、早期治疗颇为重要,能显著提高患者的5年生存率和生存质量.超声是检查乳腺疾病的重要影像学手段之一,本文主要就超声在乳腺癌诊断与治疗中的应用作一综述.     

乳腺癌靶向治疗研究进展

乳腺癌的靶向治疗研究已经成为乳腺癌治疗领域研究的热点,是继手术、放疗和化疗三大传统模式之后一种全新的生物治疗模式。分子靶向治疗是指针对乳腺癌发生、发展有关的信号通路及其癌基因相关表达产物进行治疗。本文分别对以HER-2、VEGF、EGFR为靶点及多靶点等4个研究领域的靶向治疗最新进展进行综述。     

空心针穿刺活检在乳腺癌诊断中的应用价值

目的：探讨B超引导下空心针穿刺活检（core needle biopsy,CNB）在乳腺癌诊断中的应用价值。方法：对297例临床高度可疑恶性的乳腺肿块,进行空心针穿刺活检,活检组织病理检查与手术切除标本病理检查结果进行对比分析。结果：CNB病理结果良性23例,其中纤维腺瘤8例,浆细胞性乳腺炎15例;CNB诊断乳腺癌261例,其中叶状囊肉瘤2例;CNB病理结果不能定性者11例。CNB病理诊断结果与手术病理结果完全一致,未见假阳性结果。结论：CNB较细针抽吸细胞学（FNA）、麦默通乳腺微创旋切术简便易行、创伤小、准确率及敏感性高并且价格低廉。     

深度学习技术在乳腺癌诊断中的应用

目的 构建深度学习卷积神经网络模型,提高乳腺癌诊断的智能化和信息化水平.方法 通过对真实临床中公开的乳腺癌数据集进行统计分析,运用人工智能领域的卷积神经网络模型,为医疗人员诊断恶性乳腺癌患者提供可靠的理论基础.根据建立的神经网络模型,选取当前流行的乳腺癌数据集进行建模分析,得到相应的诊断结果.结果 实验结果显示,大数据...     

三阴乳腺癌靶向治疗的研究进展

三阴性乳腺癌(triple negative breast cancer,TNBC)是雌激素受体(estrogen receptor,ER)孕激素受体(progesterone receptor,PR)和人表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor 2,Her-2)...     

血清PSA在乳腺癌中的诊断价值

目的探讨血清中PSA水平对乳腺癌的诊断价值。方法用化学发光免疫测定法检测97例乳腺癌患者、74例乳腺增生患者和50例正常人的血清PSA水平,评价其对乳腺癌的诊断价值。结果在所有女性血清中均有一定浓度的PSA,且随着疾病恶性程度的升高,其值可明显增高。结论检测血清PSA水平在乳腺癌的诊断中具有重要价值。     

铁死亡在乳腺癌预后和靶向治疗中的研究进展

铁死亡是近年来发现的新的细胞死亡方式,主要表现为铁离子代谢紊乱、脂质过氧化物堆积和细胞抗氧化系统破坏。乳腺癌作为发病率最高的恶性肿瘤,严重影响女性健康。铁死亡和乳腺癌关系密切,随着铁死亡机制不断完善,一些靶向铁死亡的药物和治疗方法被开发出来。本文对铁死亡细胞特征、发生机制,铁死亡与乳腺癌进展、预后相关性,针对铁死亡的靶向治疗进行综述,希望为研究者提供新的乳腺癌治疗思路。     

早期乳腺癌的诊断和治疗

乳腺癌仍为世界范围内女性最常见的恶性肿瘤,每年全球诊出约120万例。虽然它的发现率增加,但死亡率却在下降。这是由于及早诊出早期乳腺癌和采取有效治疗的结果。本文将论述重点放在早期乳腺癌的诊断上,并证实乳腺钼靶X线学检查和细针穿刺抽吸细胞学检查(FNAB)是实用的诊断方法。在处理方面,保乳手术和前哨淋巴结活检,放射治疗以及全身的辅助治疗、内分泌治疗等,可明显改善早期乳腺癌的预后。     

男性乳腺癌临床分析

目的 分析男性乳腺癌的临床特点,为诊断及治疗提供依据.方法 回顾性研究28例男性乳腺癌患者临床资料.结果 本组病例平均年龄为54岁,其中Ⅰ期5例,Ⅱ期20例,Ⅲ期2例,Ⅳ期1例.所有患者均行手术治疗,术后有17例患者行综合治疗(包括化疗、放疗和免疫治疗).19例患者得到随访,术后随访显示:共6例死亡,其中5例为死于复发及转移,1例死于心血管疾病,生存期为3～16年.结论 男性乳腺癌手术应以根治为主的综合治疗方案,内分泌治疗是辅助治疗首选.     

115例乳腺癌临床分析

目的 :总结乳腺癌的发病规律、早期临床表现 ,提高乳腺癌的诊断及治疗水平。 方法 :对 115例乳腺癌患者的临床表现、诊断、治疗和预后进行回顾性分析。 结果 :红外线诊断占 78 3% (18/ 2 3) ,X线钼靶的诊断占93 5 % (2 9/ 31) ,细胞学诊断占 80 % (16 / 2 0 )。分期早期与晚期的雌激素受体 (ER)及抗凋亡相关基因 (Bag 1)的表达差异无统计学意义 (P >0 .0 5 ) ,腋淋巴结转移组与无淋巴结转移组Bag 1的表达差异有统计学意义 (P <0 .0 5 )。随访 89例 ,2年、5年生存率分别为 92 .1% (82 / 89)和 85 7% (5 4 / 6 3)。 结论 :本组乳腺癌患病年龄以 4 1～6 0岁年龄多见 ,红外线、X线钼靶、细胞学检查是诊断乳腺癌的主要手段。早诊断、早治疗是提高乳腺癌患者生存率的关键。