人早孕期滋养细胞通过表达趋化因子SDF-1募集蜕膜免疫活性细胞(摘要)

目的研究人早孕期绒毛及滋养细胞趋化因子SDF-1的表达、分泌及其对蜕膜免疫活性细胞的募集作用.方法收集早孕期绒毛组织并检测SDF-1的定位表达;用ELISA分析早孕期滋养细胞培养上清液中SDF-1的浓度水平;分离早孕期蜕膜免疫活性细胞,以趋化试验研究SDF-1及滋养细胞培养上清液对蜕膜免疫活性细胞的趋化作用.结果人早孕期滋养细胞表达并分泌SDF-1;一定浓度范围的SDF-l对蜕膜免疫活性细胞具有趋化作用,最大趋化指数为3.27±0.89;滋养细胞培养上清液也明显趋化蜕膜免疫活性细胞,趋化指数为2.11±0.79.结论人早孕期滋养细胞表达的SDF-1对蜕膜免疫活性细胞具有趋化、募集作用,从而有助于形成蜕膜独特的淋巴细胞群体并维持母-胎免疫耐受.     

蜕膜自然杀伤细胞在人早孕期基蜕膜和壁蜕膜的分布比较

目的对比蜕膜自然杀伤(decidual natural killer,dNK)细胞在人早孕期同一个体基蜕膜和壁蜕膜中的分布,探讨其在早孕期的可能作用。方法采用HE染色和免疫组织化学方法标记细胞角蛋白7阳性细胞以区分壁蜕膜和基蜕膜,进而检测CD56的表达,从而显示壁蜕膜和基蜕膜中dNK细胞的数量。结果基质中有细胞角蛋白7阳性的绒毛外滋养层细胞的是基蜕膜标记;CD56呈阳性反应的dNK细胞在基蜕膜中的数量明显多于(P<0.01)壁蜕膜。结论蜕膜自然杀伤细胞在人正常早孕蜕膜中的分布不同,其可能与滋养层细胞的侵入有关。     

蜕膜自然杀伤细胞的表型及功能变化

目的:通过比较蜕膜自然杀伤细胞(dNK细胞)与外周血NK细胞(pNK细胞)的表型及功能变化,探讨dNK细胞特殊的表型和功能与母胎界面免疫耐受调节机制的关系。方法:收集晚孕胎膜组织及外周血,流式细胞术检测dNK细胞与pNK细胞表型的差异;免疫磁珠分选dNK细胞与pNK细胞,乳酸脱氢酶法测定其对K562的自然杀伤活性。结果:dNK细胞表面CD16的表达明显低于pNK细胞(P0.01),NKG2A的表达明显高于pNK细胞(P0.01),NKG2D的表达低于pNK细胞(P0.05);dNK细胞对K562的自然杀伤活性明显低于pNK细胞(P0.01)。结论:dNK细胞特殊的表型和功能可能是维持母胎界面免疫耐受的重要因素。     

蜕膜自然杀伤细胞的表型及功能变化

目的：通过比较蜕膜自然杀伤细胞（dNK细胞）与外周血NK细胞（pNK细胞）的表型及功能变化,探讨dNK细胞特殊的表型和功能与母胎界面免疫耐受调节机制的关系.方法：收集晚孕胎膜组织及外周血,流式细胞术检测dNK细胞与pNK细胞表型的差异;免疫磁珠分选dNK细胞与pNK细胞,乳酸脱氢酶法测定其对K562的自然杀伤活性.结果：dNK细胞表面CD16的表达明显低于pNK细胞（P＜0.01）,NKG2A的表达明显高于pNK细胞（P＜0.01）,NKG2D的表达低于pNK细胞（P＜0.05）;dNK细胞对K562的自然杀伤活性明显低于pNK细胞（P＜0.01）.结论：dNK细胞特殊的表型和功能可能是维持母胎界面免疫耐受的重要因素.     

趋化因子受体CXCR4在骨髓基质细胞中的表达及分析

目的 研究骨髓基质细胞的CXCR4表达,分析其表达规律.为改善和提高骨髓基质细胞的增殖和迁移能力寻找更有效的途径.为临床骨髓基质细胞更广泛的应用奠定基础.方法 体外培养大鼠骨髓间充质干细胞,观察其增殖及生长特性,应用免疫组化和RT-PCR方法对MSCs的CXCR4受体及CXCR4 mRNA表达水平进行检测,并应用神经胶质细胞进行对比,探讨其表达异常的因素.结果 骨髓基质细胞CXCR4m RNA表达水平稳定,CXCR4在各代骨髓基质细胞中表达小于5%,且随传代数增加而减少.结论 CXCR4在骨髓基质细胞中表达量很少,如果促进其CXCR4表达将会极大增强骨髓基质细胞的增殖与迁移能力.     

蜕膜自然杀伤细胞与母胎界面的免疫调节

母胎界面是由母体蜕膜组织和胚胎滋养层组织共同构成的 ,在调节胚胎发育和胎盘形成等方面发挥着重要作用。胚胎作为半同种移植物不被母体免疫系统排斥 ,受多种因素影响 ,其中子宫内膜局部免疫因素起着重要的调节作用。近年来 ,研究发现子宫蜕膜组织中含有一定量的免疫细胞 ,如巨噬细胞、自然杀伤 (ｎａｔｕｒａｌｋｉｌｌｅｒ,ＮＫ)细胞和Ｔ细胞 ,其中最丰富的是ＮＫ细胞 ,它们在孕期类固醇激素的影响下 ,发生一系列生理变化 ,通过分泌多种细胞因子 ,对子宫内膜起免疫调控作用 ,并参与胚胎着床、生长、发育及早期胎盘形成等调节 ,现就其研究…     

自然流产患者蜕膜组织中CXCR4的表达及意义

目的：探讨趋化因子受体4(CXCR4)在自然流产患者蜕膜组织中的表达情况及其临床意义。方法收集人正常妊娠(对照组)和自然流产蜕膜组织(自然流产组)各20例,采用免疫组织化学法检测CXCR4的表达。结果自然流产组CXCR4的表达显著高于正常对照组,差异有显著统计学意义(P<0.01)。结论自然流产患者蜕膜组织CXCR4表达增高,可能通过募集NK细胞引起免疫排斥而导致流产。     

自然杀伤细胞受体及其抗病毒免疫机制

自然杀伤细胞受体（NKR）是自然杀伤（NK）细胞发挥功能的分子基础，多种NKR可与主要组织相容性复合体（MHC）或非MHC类配体结合，传递激活或抑制信号，调节NK细胞活性。近年来NKR在抗病毒免疫方面的研究取得了一定进展。     

弓形虫感染致早孕蜕膜自然杀伤细胞亚群的变化

目的 通过检测弓形虫感染后早孕蜕膜自然杀伤(NK)细胞亚群的变化,探讨其与弓形虫感染致不良妊娠结局的相关性. 方法 无菌获取10例正常健康早孕孕妇蜕膜组织,分离并纯化蜕膜NK细胞,培养24 h后平均分为2组:实验组细胞与弓形虫强毒株(RH株)共培养48 h,对照组加等量生理盐水.流式细胞分析实验组和对照组蜕膜NK细胞亚群的变化. 结果 实验组蜕膜NK细胞CD56+CD16-亚群所占比例为(48.83±21.99)%,对照组为(57.70±18.97)%;实验组CD56+CD16+亚群所占比例为(11.48±10.70)%,对照组为(4.45±4.24)%;实验组CD56+ CD16-/CD56+CD16+比值为(10.92±17.84)%,对照组为(23.37±19.98)%;以上差异均有统计学意义(P＜0.05).实验组蜕膜NK细胞CD56+亚群所占比例为(60.31±22.53)%,对照组为(62.16±19.76)%,两组之间无统计学差异(P＞0.05). 结论 早孕期弓形虫感染可致蜕膜NK细胞CD56+CD16-亚群所占比例下降,且CD56+CD16+亚群所占比例上升,打破了正常妊娠时两者之间的平衡状态,这可能是早孕期弓形虫感染致不良妊娠结局的分子机制.     

蜕膜细胞条件培养液对滋养细胞侵袭调节基因表达的影响

目的　探讨蜕膜细胞条件培养液（DCM）对滋养细胞侵袭调节基因表达的影响。方法　用体外培养早孕、晚孕蜕膜细胞的方法制备DCM,然后将其处理体外培养的早孕滋养细胞。用半定量反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）分析早孕滋养细胞侵袭调节基因表达的变化。结果　正常培养的早孕滋养细胞中基质金属蛋白酶（MMP）-2、MMP-9、基质金属蛋白酶抑制物（TIMP-1）、尿激酶型纤溶酶原激活因子（u-PA）mRNA均有表达;而TIMP-2、纤溶酶原激活因子抑制因子（PAI-1）mRNA未见表达。早孕和晚孕DCM均能下调滋养细胞MMP-2、MMP-9、u-PAmRNA的表达,而上调TIMP-1mRNA的表达。早孕、晚孕DCM均能诱导滋养细胞PAI-1mRNA的表达,但对TIMP-2mRNA的表达未见有影响。结论　蜕膜细胞可能通过调节滋养细胞中MMP-2、MMP-9与TIMP-1之间的平衡以及u-PA与PAI-1之间的平衡,而影响滋养细胞的侵袭能力。     

Increased early activation of CD56dimCD16dim/- natural killer cells in immunological non-responders correlates with CD4+ T-cell recovery

BackgroundNatural killer (NK) cells play a critical role in suppressing human immunodeficiency virus-1 (HIV-1) infection, but knowledge on whether and how NK cells affect immune reconstitution in HIV-1-infected individuals who receive antiretroviral therapy (ART) is limited.MethodsWe performed a case-control study with 35 healthy individuals and 66 HIV-1-infected patients including 32 immunological non-responders (INRs) with poor CD4⁺ T-cell recovery (<500 cells/μL after 4 years of ART) and 34 immunological responders (IRs) with improved CD4⁺ T-cell recovery (>500 cells/μL after 4 years of ART). NK cell phenotype, receptor repertoire, and early activation in INRs and IRs were investigated by flow cytometry.ResultsA significantly higher proportion of CD56^dimCD16^dim/- NK cells was observed in INRs than IRs before ART and after 4 years of ART. The number of CD56^dimCD16^dim/- NK cells was inversely correlated with CD4⁺ T-cell counts in INRs before ART (r = –0.344, P = 0.050). The more CD69-expressing NK cells there were, the lower the CD4⁺ T-cell counts and ΔCD4, and these correlations were observed in INRs after ART (r = –0.416, P = 0.019; r = –0.509, P = 0.003, respectively). Additionally, CD69-expressing CD56^dimCD16^dim/- NK cells were more abundant in INRs than those in IRs (P = 0.018) after ART, both of which had an inverse association trend towards significance with CD4⁺ T-cell counts. The expression of the activating receptors NKG2C, NKG2D, and NKp46 on CD56^dimCD16^dim/- NK cell subsets were higher in IRs than that in INRs after 4 years of ART (all P < 0.01). Strong inverse correlations were observed between CD69 expression and NKG2C, NKG2A^-NKG2C⁺, NKG2D, and NKp46 expression on CD56^dimCD16^dim/- NK cells in INRs after ART (NKG2C: r = –0.491, P = 0.004; NKG2A^-NKG2C⁺: r = –0.434, P = 0.013; NKG2D: r = –0.405, P = 0.021; NKp46: r = –0.457, P = 0.008, respectively).ConclusionsINRs had a larger number of CD56^dimCD16^dim/- NK cells characterized by higher activation levels than did IRs after ART. The increase in the CD56^dimCD16^dim/- NK cell subset may play an adverse role in immune reconstitution. Further functional studies of CD56^dimCD16^dim/- NK cells in INRs are urgently needed to inform targeted interventions to optimize immune recovery.     

初发SLE患者外周血中CD4+ T细胞表面趋化因子受体的表达及其意义

目的了解初发系统性红斑狼疮(SLE)外周血CD4+T细胞表面趋化因子受体的表达情况并探讨在发病中的意义。方法流式细胞术检测18例初发SLE患者(有肾炎10例,无肾炎8例)及10例正常对照外周血CD4+T细胞表面趋化因子受体CCR1、CCR3、CCR5的表达情况,比较SLE治疗前后以及正常对照CD4+CCR1+、CD4+CCR3+、CD4+CCR5+T细胞亚群占全部CD4+T细胞比例的差异。结果SLE患者CD4+CCR1+、CD4+CCR5+T细胞亚群百分率显著低于对照组(P均<0.001);CD4+CCR3+T细胞亚群百分率在SLE和对照组间差异无统计学意义。三种T细胞亚群在肾炎组及无肾炎组的差异均不显著(P均>0.05)。CD4+CCR1+T细胞亚群百分率治疗后显著升高(P=0.022);CD4+CCR5+T细胞亚群百分率治疗后升高(1.81±0.95%和2.88±1.42%),但无统计学意义(P=0.065);CD4+CCR3+T细胞亚群百分率治疗后变化无显著性。结论CD4+CCR1+和CD4+CCR5+T细胞亚群可能参与SLE发病机制。     

CD4^＋ iNKT细胞在实验性变应性鼻炎发病中的作用

目的探讨实验性变应性鼻炎发病过程中CD4^＋iNKT细胞浸润情况。方法将30只C57BL/6小鼠随机分为变应性鼻炎组（A组）和对照组（B组）。比较2组小鼠变应性鼻炎症状评分、鼻黏膜嗜酸粒细胞（EOS）计数、鼻黏膜组织形态,免疫酶标技术检测各组鼻黏膜CD4^＋ iNKT细胞的浸润,流式细胞技术（FCM）检测鼻腔黏膜中的CD4^＋ iNKT细胞。并进行比较分析。结果（1）A组症状评分（7.3±1.0）分较B组（0.7±0.6）分明显增高（P〈0.01）。（2）A组EOS计数（7.5±1.2）个/HP较B组（0.4±0.5）个/HP明显增高（P〈0.01）。（3）HE染色见A组纤毛结构大量脱落,组织水肿,小血管增生,黏膜上皮下固有层EOS、淋巴细胞浸润;B组纤毛结构完整,无明显EOS浸润。（4）A组鼻黏膜下有多量的CD_4和NK1.1双阳性染色细胞,即CD4^＋ iNKT细胞;B组仅见少量的CD4^＋细胞。（5）A组鼻黏膜CD4^＋ iNKT细胞阳性率（72.6%±7.9%）明显高于B组（0.49%±0.01%）（P〈0.01）。结论变应性鼻炎小鼠鼻腔黏膜有大量的CD4^＋ iNKT细胞浸润,其数量远远超过CD4^＋T细胞。     

正常人外周血自然杀伤T细胞（CD3^＋CD16^＋CD56^＋）比例

目的：探讨正常人外周血中自然杀伤T（NKT）细胞（CD3^＋CD16^＋CD56^＋）比例的95%参考值范围。方法：取141名正常成年人和30例肺癌患者外周血,直接双色荧光抗体染色,溶血洗涤后用流式细胞仪检测NKT细胞和T细胞各亚群的数量。分析获取的结果以百分位数计算95%的正常值范围。结果：141名正常人外周血NKT细胞（CD3^＋CD16^＋CD56^＋）的百分率平均数为4.16%,标准差为4.13%,以百分位数法获得95%参考值范围为（0.78～11.71）%;18～30岁组、31～50岁组和51～70岁组的NKT细胞（CD3^＋CD16^＋CD56^＋）比例的平均数分别为4.64%,3.91%和3.57%,差异无统计学意义（P〉0.05）;30例肺癌患者组与正常组该项指标的差异亦无统计学意义（P〉0.05）。同时检测到正常人CD3^＋细胞、CD3^＋CD4＋细胞、CD3^＋CD8＋细胞、CD3^＋CD4＋/CD3^＋CD8＋比值以及NK细胞（CD3-CD16^＋CD56^＋）的比例均与大多数报道的正常值相似。结论：正常人外周血中NKT细胞（CD3^＋CD16^＋CD56^＋）比例的95%参考值范围是（0.78～11.71）%,平均数为4.16%,中位数为2.97%,虽然NKT细胞比例随年龄增加而减少,但两者之间无直线相关关系。未发现肺癌组患者NKT细胞比例与正常人有显著性差异。     

多发性硬化症(MS)患者外周血淋巴细胞CD56的表达

目的 探讨CD56淋巴细胞在多发性硬化(MS)中的变化。方法 流式细胞仪测定32例复发缓解型MS患者(复发期23例,缓解期9例)及13例复发期MS患者予糖皮质激素治疗后外周血淋巴细胞CD56表达的阳性百分率。结果 复发期和缓解期MS患者CD56的表达均高于对照组,15例复发期MS患者CD56的阳性百分率与血脑屏障受损呈正相关,复发期MS患者CD56的水平与发作时间、整个痫程、EDSS伤残评分无关;缓解期MS患者CD56的水平与病程无关,激素对CD56的表达无影响。结论 CD56淋巴细胞与MS的发病机制有一定关联。     

子痫前期孕妇外周血辅助性T细胞和自然杀伤细胞的表达水平分析

目的:分析子痫前期(PE)孕妇外周血辅助性T细胞和自然杀伤(NK)细胞表达水平。方法:选择近期住院确诊的PE妇女42例,入选对象均接受辅助性T细胞和自然杀伤(NK)细胞(CD3+、CD4+、CD+8、CD4+/CD8+、CD56+)检测,并与同期住院正常怀孕产妇(对照组,20例)的检测结果比较。结果:PE组血清CD4+、CD4+/CD8+、CD56+表达水平明显高于对照组,而CD8+表达水平则显著低于后者(P均<0.05~0.01)。结论:子痫前期孕妇外周血辅助性T细胞和自然杀伤(NK)细胞的水平异常表达。     

柯萨奇B组病毒性心肌炎的自然杀伤细胞活性及T细胞亚群的测定

目的 了解细胞免疫功能低下或失调对病毒性心肌炎发病、预后的影响。方法 检测柯萨奇Ｂ组病毒（ＣＶＢ）性心肌炎７０例,正常人（ＮＣ）４０例外周血的自然杀伤细胞９ＮＫＣ）活性和Ｔ细胞亚群。结果 病毒性心肌炎（ＶＭＣ）组ＮＫＣ活性高于ＮＣ组。Ｔ细胞亚群与ＮＣ组比较,急性ＶＭＣ患者总Ｔ细胞（ＣＤ３）,辅助性Ｔ细胞（ＣＤ４）,和抑制性Ｔ细胞（ＣＤ８）,及ＣＤ４／ＣＤ８比值均减少,Ｐ〈０．０５￣０．０１。慢性Ｖ     

Kupffer细胞和自然杀伤细胞在大鼠实验性肝癌中分布及意义

目的：探讨Kupffer细胞(KC)、肝脏自然杀伤(NK)细胞在实验性肝癌细胞凋亡中的作用及其相互关系。方法：建立在诱癌过程中控制KC功能状态的肝癌试验动物模型，应用免疫组化S—P法检测各组大鼠肝癌中的CD68、CD57及Bcl-2、Bax的表达，对各组CD68、CD57阳性细胞数进行定量比较与相关分析，并比较各组Bcl-2、Bax的表达。结果：(1)CD68阳性细胞数在激活组、单纯诱癌组、抑制组依次递减；(2)CD57、CD68阳性细胞数呈正相关；(3)抑制组Bcl-2阳性表达率显著高于激活组，而Bax阳性率显著低于激活组。结论：(1)KC在肝脏NK细胞归巢、分化和活化中发挥着重要作用。(2)KC和肝脏NK细胞可促进实验性肝癌细胞的凋亡，抑制肝癌的形成。     

肝癌组织中巨噬细胞和自然杀伤细胞的免疫组化研究

目的：探讨巨噬细胞（MФ）、肝自然杀伤（NK）细胞在原发性肝细胞癌（HCC）及肝硬化组织中的数量、分布规律及其与患者预后的关系，为HCC患者临床预测提供新思路。方法：应用免疫组化S-P法检测60例HCC，62例单纯性肝硬化，23例正常肝组织MФ标记物CD68和NK细胞标记物CD57的表达，并分析阳性细胞数量与临床各参数的关系。结果：①各组MФ平均数从高到低为依次为癌旁组织、肝硬化、正常肝、HCC（P〈0．05）；NK细胞平均数从高到低依次为HCC、癌旁组织、正常肝、肝硬化（P〈0．05）。②HCC中MФ细胞数量随分化程度降低而减少（P〈0．05）；NK细胞数量与组织学分级无明显关系。③HCC和癌旁组织中MФ细胞分布与临床TNM分期无关；HCC中NK细胞随着临床分期的发展有下降的趋势（P〈0．05）。④癌组织中15个月内有转移组的MФ细胞数少于无转移组（P〈0．05）；15个月内转移复发组癌和癌旁组织的NK细胞计数均明显少于无转移复发组（P〈0．01）。⑤在癌组织中MФ、NK细胞数呈线性正相关（r=0．344，P〈0．05）。结论：有转移瘤发生的HCC患者MФ和NK细胞数量明显少于无转移组；MФ数量与HCC分化程度密切相关；MФ和NK细胞计数可能是反映机体抗肿瘤免疫状态和生物学行为以及判断患者预后的重要指标。     

CD3+CD16+CD56+自然杀伤T淋巴细胞与移植肾免疫状态的关系

目的 探讨肾移植患者CD3+CD16+CD56+自然杀伤T细胞(NKT)在外周血中的表达与移植肾免疫状态的关系,以及钙调磷酸酶抑制剂(CNI)不同的血药浓度下NKT细胞的水平。 方法 将92例肾移植患者根据CNI血药浓度水平及有无排斥反应分为3组：正常血药浓度的无排斥组（A组,58例）、低血药浓度的无排斥组（B组,8例）、排斥组(C组,26例),10例正常人群作为对照组(D组),采用流式细胞术检测各组外周血CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD3-CD16+CD56+自然杀伤（NK）和CD3+CD16+CD56+NKT细胞及人白细胞抗原（HLA）抗体的水平。结果 A、B、C、D组CD3+CD16+CD56+NKT细胞的百分数分别是（4.29±2.57）%、（4.31±2.08）%、（1.23±1.06）%、（3.98±2.26）%。A、B组与D组比较,NKT细胞百分数、NK细胞百分数及CD4+/CD8+无差异,HLA抗体阳性比率无显著升高;C组NKT细胞的百分数与正常对照组相比降低(P＜0.05),NK细胞、CD4+/CD8+均显著高于D组(P＜0.05),HLA抗体阳性比率显著升高。结论 肾移植后排斥反应时NKT细胞低表达,出现HLA抗体;无排斥反应时NKT细胞表达正常,不受低血药浓度的影响。CD3+CD16+CD56+NKT细胞在抑制移植肾免疫激活中起着重要作用。