miR-133a在急性髓系细胞白血病中的表达及意义

目的:探讨miR-133a在急性髓系细胞白血病(AML)骨髓有核细胞中的表达及意义。方法:收集37例AML初诊患者及25例化疗后完全缓解患者、12例急性淋巴细胞白血病(ALL)初诊患者和22例骨髓象正常的发热患者的骨髓标本。分离有核细胞,抽提总RNA,以U6为内参,采用实时荧光定量茎环RT-PCR检测并比较AML、ALL及骨髓象正常的非白血病患者骨髓有核细胞中miR-133a的表达,同时比较miR-133a在AML常见亚型及化疗缓解前后的表达水平。结果:miR-133a在AML初诊患者骨髓中相对表达量(N=2-△Ct)明显高于ALL和非白血病患者(P<0.05);M3、M4及M5三种常见AML类型中,M5患者的骨髓标本miR-133a表达明显高于M3患者(P<0.05);AML化疗完全缓解后骨髓有核细胞中miR-133a的表达较化疗前明显下降(P<0.05)。结论:miR-133a可能参与AML的发生发展进程,其骨髓表达水平可为化疗敏感性评价提供一个新的指标。     

miR-221/miR-222在乳腺浸润性导管癌中的表达及临床意义

目的：探讨miR-221/miR-222在乳腺浸润性导管癌中的表达及与临床病理特征的相关性。方法：应用茎环Real-time RT-PCR方法检测36例乳腺浸润性导管癌及癌旁非肿瘤乳腺组织中成簇分布的miR-221和miR-222表达,分析miR-221和miR-222表达与乳腺癌常用的临床病理指标的关系。结果：乳腺癌组织miR-221和miR-222表达明显高于其对应的正常乳腺组织（P值均小于0.05）,但miR-221和miR-222两者比值差异无显著性（P=0.176）。miR-221和miR-222的表达和雌激素受体状态及Her-2表达有关。低雌激素受体表达和高Her-2表达的乳腺癌组织的miR-221和miR-222表达均明显高于高雌激素受体和低Her-2表达的标本（P值均小于0.05）。miR-221和miR-222的表达与月经状况、肿块大小、孕激素受体状态、淋巴结转移及TMN分期无关。结论：miR-221/miR-222不但是乳腺癌重要的标记,而且可能成为内分泌治疗抵抗的预兆性标记物和靶向治疗潜在作用靶点。     

慢性乙型肝炎患者体内不同来源标本中miR-146a和miR-155的表达

目的：通过检测慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B,CHB)患者不同来源标本中miR-146a和miR-155的表达, 了解不同来源标本中2种miRNAs表达的相关性,为研究miRNA在肝病中的作用机制提供标本选择的理论依据。 方法：采用real-time PCR对41例CHB患者核苷(酸)类似物抗病毒治疗基线期和第104周血浆、外周血单个核细胞和肝 组织中miR-146a和miR-155的表达进行检测,分析3种来源标本中这2种miRNAs表达的相关性。结果：治疗第104周时 血浆、外周血单个核细胞和肝组织miR-146a和miR-155的表达水平均较基线期显著下调(P<0.05)。基线期血浆和肝组 织(r=0.560,P=0.007)、外周血单个核细胞和肝组织(r=0.428,P=0.047)miR-146a的表达均相关。基线期血浆和肝组织 (r=0.587,P=0.004)、外周血单个核细胞和肝组织(r=0.483,P=0.023)miR-155的表达相关,miR-146a和miR-155在血浆中 的表达与外周血单个核细胞中的表达不相关(P>0.05)。结论：与外周血单个核细胞相比,血浆中miR-146a和miR-155的 表达能更好地反映和预测肝组织miR-146a和miR-155的表达,血浆可作为研究miR-146a和miR-155在肝病中作用机制的 标本来源。     

miR-155和miR-146a在系统性红斑狼疮患者中的表达

目的通过检测miR-155和miR-146a在系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单个核细胞(PBMC)和血浆中的表达,探讨miR-155和miR-146a的表达在SLE发病中的作用。方法 SLE患者20例,健康对照组15例。取外周血分离PBMC和血浆,提取和纯化miRNA,实时定量PCR检测miR-155和miR-146a的表达,以小分子RNAU6作为内对照,计算标准化后的2-△Ct值表示miRNA的相对表达含量。结果 SLE患者PBMC中miR-155和miR-146a的表达水平是健康对照组的3.07倍(P<0.01)和1.91倍(P=0.056);SLE患者血浆中miR-155和miR-146a的表达水平比对照组低,但差异无统计学意义;同时SLE患者中蛋白尿阳性组血浆中两种miRNAs表达水平有降低的趋势,活动组患者血浆中两种miRNAs表达水平也有降低的趋势,但差异无统计学意义。结论 SLE患者PBMC中miR-155和miR-146a异常高表达,但血浆miR-155和miR-146a的表达水平有下降的趋势。     

FLT3基因在急性髓细胞白血病中的表达及临床意义

目的 研究急性髓细胞白血病(AML)患者FLT3的表达水平,探讨Fms样的酪氨酸激酶3(FLT3)在AML中的作用机制及临床意义.方法 采用半定量RT-PCR方法检测70例AML患者和11例良性血液病为对照组FLT3表达水平.老年AML 36例,非老年AML 34例,其中初治组31例,完全缓解(CR)组15例,难治复发组24例.结果 70例AML FLT3表达水平明显高于对照组,差别有统计学意义(P<0.01);36例老年AML组与34例非老年AML组间FLT3表达水平无显著性差异(P0.05);复发难治组FLT3表达水平最高,初治组居中,CR组最低,三者表达水平具有显著性差异(P<0.05);AML初治组按FAB亚型分组,M3组表达水平最低,与其它亚型有显著性差异(P<0.05);M2、M4、M<6居中,三者间表达水平无显著性差异(P0.05);M5组表达水平最高,与其它亚型有显著性差异(P<0.05).结论 FLT3在AML中过度表达,以M5最为明显,提示FLT3在白血病的发病机制中有一定作用,与疾病进展及预后有关,在检测微小残留病方面,也可能有一定价值.     

miR126在成人急性髓系白血病患者骨髓中的表达

目的 探讨miR126在成人急性髓系白血病(AML)患者骨髓中的表达及与临床变量的相关性.方法 应用实时定量PCR方法检测47例AML患者及9名正常人骨髓中miR126的相对表达水平,分析其与患者性别、年龄、血象、亚型分类和基因型的关系.结果 AML患者骨髓中miR126相对表达水平较正常对照组增高,但差异无统计学意义(P＞ 0.05);miR126在M3型AML患者中表达水平明显低于非M3型(P＜0.05);正常基因型与异常基因型间miR126表达无统计学差异(P＞0.05);伴有t(15;17)或PML/RaRa阳性的AML患者miR126表达水平低于其他基因型AML患者(P＜0.05);本研究中AML患者miR126表达水平与初诊时骨髓原始细胞百分数呈负相关(r =-0.352,P=0.018),与初诊时外周血白细胞数、年龄、性别均无相关性.结论 miR126在M3型AML患者中表达低于非M3型,伴有t(15;17)或PML/RaRa阳性的AML患者miR126表达水平较其他核型表达水平低,提示miR126可用于区分AML亚型.     

miR-193a-5p/HOXA7轴对急性髓细胞白血病细胞增殖与凋亡的影响

目的 探究miR-193a-5p/HOXA7轴在急性髓细胞白血病(AML)细胞增殖与凋亡过程中的作用.方法 收集初治AML患者及健康志愿者的骨髓样本,检测骨髓样本中miR-193a-5p与HOXA7表达水平的变化,分析miR-193a-5p与HOXA7的调控作用.体外培养AML细胞系THP-1,分别给予转染空载体、mi...     

MicroRNA-221(miR-221)抑制p27~(Kip1)蛋白促进慢性粒细胞白血病的发生

目的探讨microRNA-221(miR-221)与慢性粒细胞白血病(chronic myeloid leuklemia,CML)的相关性及其作用机制。方法采用荧光实时定量PCR(quantificational real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)法检测35例CML病人与25例对照组病人骨髓中miR-221的表达情况。K562细胞转染miR-221模拟物和miR-221抑制剂48 h,qRT-PCR法检测miR-221的表达。分别用MTT法检测转染后的K562细胞增生能力,利用流式细胞仪检测转染后K562细胞周期和凋亡。利用数据库预测miR-221的调节基因为p27~(Kip1)。qRT-PCR和Western blotting法检测miR-221对p27~(Kip1)的mRNA和蛋白的表达的影响。结果 CML病人组miR-221表达明显高于对照组。转染miR-221抑制剂组K562细胞凋亡比例显著升高,细胞周期阻滞于G2SM期,细胞增生能力明显受到抑制。而miR-221过表达则明显促进了K562细胞的增生和细胞周期进程。抑制miR-221表达后K562细胞中p27~(Kip1)蛋白表达显著升高,而当miR-221过表达后p27~(Kip1)表达也随之明显降低。结论 miR-221在CML病人的骨髓中高表达,并抑制下游p27~(Kip1)蛋白的表达从而促进白血病K562细胞增生,促进细胞进入细胞周期,可能是CML发生、发展的一个潜在靶点。     

miR-21在白血病发病过程中的作用研究

目的 本实验旨在研究miR-21在白血病细胞中表达情况,探讨miR-21基因与白血病发病的关系.方法 提取组织中的小于200 bp的RNA,用poly(A)聚合酶在其3′末端加尾,再用5′带40 nt延伸序列的单碱基锚定Olig-dT引物进行反转录,然后用特异引物进行real-time PCR扩增,从而检测部分miRNAs在白血病细胞株K562中的表达,并与正常人骨髓表达情况相对比.结果 通过real-time PCR 分析,癌基因miR-21在K562细胞中的表达量约为(1.73±0.24)×105 个拷贝,明显高于正常人骨髓组织中miR-21的表达(P＜0.01).结论 本研究表明miR-21在K562细胞中的表达量增高,可能在白血病的发生过程中起重要作用.     

急性白血病细胞端粒结合蛋白2表达的研究

目的研究人类白血病细胞株及原代白血病细胞中人端粒结合蛋白2(TRF2)的表达.方法应用实时定量RT-PCR,检测白血病细胞株及原代白血病细胞中TRF2 mRNA的表达,应用Western Blot,检测TRF2蛋白的表达.结果T淋巴系白血病细胞株的TRF2表达显著高于骨髓单个核细胞和髓系白血病细胞株.在原代白血病细胞中,M0和M1亚型患者白血病细胞TRF2的表达高于其他各亚型急性髓系白血病(AML)患者.结论预后差的AML患者和T细胞恶性肿瘤细胞株高表达TRF2,提示TRF2高表达可能和白血病的预后有关.     

原发性中枢神经系统淋巴瘤血浆miR-21和miR-222的表达及其与预后的关系

 目的 评估血浆microRNAs（miR-21和miR-222）表达水平对原发性中枢神经系统淋巴瘤（primary central nervous system lymphoma,PCNSL）预后的影响。方法 纳入2011年9月至2016年12月期间于复旦大学附属华山医院新诊断的PCNSL患者41例。收集患者临床资料,qRT-PCR检测首次化疗前患者外周血标本中血浆miR-21及miR-222表达水平。采用Kaplan-Meier绘制生存曲线,Log-rank检验进行单因素分析,Cox回归进行多因素分析。结果 中位随访44.47个月。取中位表达水平为截断值将全部病例分为miR-21及miR-222高表达组和低表达组。miR-21高表达组中位疾病无进展生存期（progression free survival,PFS）为22.63个月,显著高于miR-21低表达组（15.50个月,P=0.049）;两组患者中位总生存期（overall survival,OS）无明显差异。miR-222高表达组与低表达组患者在PFS与OS上均无显著差异。单因素分析结果显示血浆miR-21表达水平、ECOG体能评分（performance status,PS）、血清乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）以及大剂量甲氨蝶呤（high-dose methotrexate,HDMTX）联合替尼泊苷（teniposide,Vm26）化疗方案与PFS相关。Cox比例风险回归模型显示血浆miR-21、ECOGPS评分以及LDH水平是影响PCNSL患者PFS的独立预后因素。结论 HD-MTX联合Vm26化疗方案有助于改善PCNSL患者的PFS,血浆miR-21高水平的患者具有更好的PFS。     

乳腺癌患者血浆miR221表达及其对临床分期和耐药性的监测作用

目的 :探讨乳腺癌患者血浆miR221表达及其临床意义。方法:采用实时荧光定量PCR法检测56例乳腺癌患者癌及癌旁组织miR-221的表达,并进一步检测56例乳腺癌患者和20例正常人血浆miR-221的表达;结合临床资料用t检验、多因素Logistic回归等方法分析血浆miR-221表达及其临床意义。结果:miR-221在乳腺癌患者治疗前血浆中的表达(8.19±2.97)高于正常人血浆(3.75±0.67),差异有统计学意义(P<0.05);乳腺癌患者癌组织miR-221表达与治疗前血浆中miR-221表达呈正相关(r=0.832,P<0.001);患者治疗前血浆miR-221表达与淋巴结转移和临床分期呈正相关;患者化疗后血浆miR-221表达与耐药性呈正相关。结论:miR-221在乳腺癌患者血浆中表达水平明显上调,能够反映乳腺癌组织miR-221的表达水平,其或可成为监测乳腺癌患者临床分期及耐药性的一个潜在指标。     

miR-222在胃癌中的表达分析及其靶基因FOS的鉴定

目的分析miR-222在胃癌中的表达水平并鉴定miR-222的靶基因。方法选取第三军医大学新桥医院普外科10例患者的胃癌及远癌组织,匀浆法提取总RNA,用Real-time PCR法检测miR-222表达。利用miRNA靶基因预测数据库TargetScan,MICROCOSM及PicTar对miR-222的靶基因进行预测。化学合成包含有miR-222结合位点的靶基因3′非编码区(3′UTR)退火引物,插入荧光素酶报告载体pMIR-REPORT及绿色荧光蛋白(GFP)报告载体pMIR-GFP-RE-PORT,检测荧光素酶的活性变化及观察GFP表达量,并在蛋白水平用Western blot检测miR-222对靶基因的抑制。结果 miR-222在70%(7/10)的胃癌组织样本中表达上调。生物信息学(TargetScan,MICROCOSM及PicTar 3个miRNA靶基因预测数据库)分析可得在包括人类在内的不同物种中,FOS基因3′UTR区都有miR-222的保守结合种子序列。通过荧光素酶活性检测和GFP抑制试验可得miR-222在mRNA水平可以与FOS基因结合。Western blot结果显示miR-222...     

血清miR-221表达水平对老年哮喘的诊断价值

目的 检测老年哮喘患者的血清miR-221表达水平,并评价血清miR-221对老年哮喘的诊断价值.方法 选取我院109位老年哮喘患者(实验组)和115位健康老年人(对照组).采用RT-PCR检测2组老年人血清miR-221表达水平,并对结果进行ROC曲线绘制.Elisa法测定2组老年人血清白细胞介素(IL)-4和IL-12浓度,同时对2组老年人进行肺功能检测.最后应用Spearman相关分析计算血清miR-221表达水平与血清细胞因子浓度和肺功能参数的相关性.结果 与对照组比较,实验组患者血清miR-221表达水平显著升高,差异有统计学意义(P<0.05).ROC曲线绘制结果显示,血清miR-221的诊断阈值为1.37.实验组和对照组患者的血清IL-4浓度、血清IL-12浓度、FVC值、FEV1值和PEF值差异均存在统计学意义(P<0.05).用Spearman相关分析发现,血清miR-221表达水平与血清IL-4浓度、血清IL-12浓度、FVC值、FEV1值和PEF值均存在显著相关性(P<0.05).结论 血清miR-221的表达水平可以作为老年哮喘病情判断指标,同时也为老年哮喘的临床治疗开辟了新思路.     

miR-222下调高糖下小鼠系膜细胞TIMP3表达

目的探讨miR-222是否通过靶向调控TIMP3表达参与糖尿病肾病的发生过程,从而进一步揭示糖尿病肾病的发病机制。方法运用qRT—PCR检测经25mmol／L葡萄糖处理的小鼠系膜细胞（HG组）和对照小鼠系膜细胞（5mmol／L葡萄糖,NG组）中miR-222和TIMP3的表达;将miR-222mimics转染小鼠系膜细胞,以TIMP3siRNA为阳性对照,采用Westernblot检测其对TIMP3蛋白表达水平的影响。结果qRT—PCR检测结果显示,miR-222在经高糖处理的小鼠系膜细胞中的表达相对比正常浓度糖处理的小鼠系膜细胞中明显上调,而TIMP3在经高糖处理的小鼠系膜细胞中mRNA的表达相对比正常浓度糖处理的小鼠系膜细胞中明显下调;Westernblot结果显示,过表达miR-222或干扰TIMP3可抑制TIMP3蛋白的表达（P〈0．05）。结论miR-222可能通过调控TIMP3的表达参与糖尿病肾病的发生发展。     

类风湿关节炎患者外周血miR-146a及miR-16的表达及与病情活动的相关性研究

目的探讨类风湿关节炎(RA)患者外周血单个核细胞(PBMCs)中miR-146a及miR-16的表达及与RA病情活动的相关性。方法应用实时荧光定量聚合酶链反应检测RA患者活动组24例、缓解组16例及健康对照16例PBMCs-miR-146a、miR-16的表达水平,并且与RA患者临床指标进行相关性分析。结果 RA患者组miR-146a、miR-16的表达高于健康对照组(P<0.05);在RA活动组与缓解组的比较中发现活动组miR-146a、miR-16表达水平高于缓解组(P<0.05)。RA患者组miR-146a、miR-16的表达与ESR、CRP及DAS28评分之间呈正相关(P均<0.01),与RF无相关性(P>0.05)。结论 RA患者外周血miR-146a和miR-16表达上调,其表达水平与RA病情活动相关,提示miR-146a和miR-16的检测可作为RA病情活动的判断指标。     

miR-21、miR-182、miR-382在非小细胞肺癌中的临床意义及益气除痰法的干预作用

【目的】分析miR-21、miR-182、miR-382基因对肺癌进展的影响及益气除痰法的干预作用。【方法】应用生存分析在线软件Kaplan-Meier plotter分析miR-21、miR-182、miR-382对肺癌预后的影响,应用功能富集分析工具FunRich数据库对miR-21、miR-182、miR-382进行功能富集、通路富集分析,GeneMANIA数据库分析靶基因蛋白的互作网络。选取单纯中药治疗中晚期非小细胞肺癌患者(设为“中医组”)和中药联合维持化疗的中晚期非小细胞肺癌患者(设为“结合组”),采用定量聚合酶链反应(PCR)方法分析益气除痰法对患者外周血中miR-21、miR-182、miR-382表达的影响。【结果】miR-21、miR-382的表达量与肺腺癌的生存期呈负相关,与肺鳞癌的生存期关系不明显。miR-182的表达量与肺腺癌患者的生存期无明显相关性,与肺鳞癌的生存期呈正相关。miR-21、miR-182、miR-382靶基因的功能主要为信号传导、细胞之间的通讯,所涉及的信号通路主要包括:整合素家族信号通路、血管内皮生长因子(VEGF)/血管内皮生长因子受体(VEGFR)通路及肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)通路等。miR-21与肿瘤转移密切相关的靶基因包括:RECK、TNFRSF11B、TGFBI、PDCD4、SPRY2、FOXF2。中医组miR-21的增加水平较结合组低。【结论】miR-21可能影响肿瘤转移及肺腺癌的生存,益气除痰法可能通过调控miR-21的表达有效治疗中晚期非小细胞肺癌。     

miR-21、miR-155在乳腺癌患者血液与肿瘤组织中表达水平的相关性研究

目的 对健康女性血清及乳腺癌患者血清中miR-21和miR-155表达水平进行实时定量PCR检测,同肿瘤患者癌组织与对应癌旁组织的miR-21和miR-155表达水平的变化趋势相比较,以评价血清中miR-21和miR-155在乳腺癌早期诊断中的潜在价值.方法 收集健康女性血液和患者血液与患者癌组织和癌旁组织,利用实时荧光定量PCR对提取的RNA miR-21和miR-155进行相对定量检测,得到miR-21和miR-155在血清中变化趋势与在组织中变化趋势的相关性.结果 miR-21和miR-155在肿瘤组织的表达水平明显高于其在癌旁组织的表达水平,miR-21和miR-155在乳腺癌患者血清中的表达水平也要高于其在健康体检者血清中的表达水平.血清中miR-21和miR-155表达水平变化趋势与组织中miR-21和miR-155表达水平变化趋势一致.结论 血清中miR-21和miR-155能反映乳腺癌的发生,miR-21和miR-155有可能作为乳腺癌早期诊断的肿瘤标志物.