联合应用三苯氧胺和吉非替尼对ＮＳＣＬＣ细胞的抗增殖效应

目的:探讨雌激素受体拮抗剂三苯氧胺联合表皮生长因子受体抑制剂吉非替尼对人小细胞肺癌(NSCLC)细胞株增殖和凋亡的影响及相关的分子机制,为联合分子靶向和激素治疗NSCLC提供理论依据.方法:以吉非替尼及三苯氧胺单独或联合处理NSCLC细胞株,MTF法比较细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡.应用荧光定量PCR及Western blot检测三种肺癌细胞株中表皮生长因子受体(EGFR)及雌激素受体β(Erβ)的表达情况,并分别检测雌二醇.三苯氧胺(TAM)对细胞中EGFR,以及表皮生长因子(EGF)和吉非替尼对Erβ表达的影响,同时还检测了雌二醇对EGFR的磷酸化作用.结果:联合吉非替尼和三苯氧胺增强对EGFR,Erβ阳性的A549,H1650细胞的抑制作用,促进凋亡,但对EGFR,Erβ阴性的H520细胞无明显改变.雌二醇可促进细胞EGFR磷酸化,却也抑制其表达,而三苯氧胺则上调EGFR的表达.同时,EGF及吉非替尼对Erβ的表达也有类似的相反的调控作用.结论:联合吉非替尼和三苯氧胺能够增强对EGFR,Erβ均阳性的肺癌细胞的抗增殖作用,这可能与细胞内EGFR信号转导途径和雌激素信号通路的交叉有关.因此,结合针对EGFR的分子靶向治疗与激素治疗可能为肺癌的治疗提供新的途径.     

激光角膜切除后EGF及其受体的表达

目的研究haze形成的机理,检测激光角膜光学切除术(photorefractive keratectomy, PRK)后角膜上皮和基质表达EGF和表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor, EGFR)mRNA的变化. 方法"新西兰白兔20只,随机分成4组,其中15只施行PRK.于术后1、2、3月用裂隙灯显微镜观察haze形成情况,并用原位核酸分子杂交方法,检测角膜上皮和基质EGF、EGFR mRNA的表达. 结果正常角膜上皮层有EGF、EGFR mRNA表达;基质中有EGDFR mRNA表达.PRK后角膜组织表达EGF、EGFR mRNA增加,术后1、2月表达最明显.EGF、EGFR mRNA表达强弱与haze的形成密切相关. 结论 EGF、EGFR参与PRK后伤口愈合过程,且调节着haze的形成和发展.     

AAV-HGFK1抑制EGFR磷酸化拮抗大肠癌细胞生长

目的：研究腺相关病毒‐肝细胞生长因子K1（AAV‐HGFK1）对KRAS、BRAF野生型和突变型大肠癌细胞株的生长影响。方法选择人源的细胞株 KRAS和BRAF野生的SW48,KRAS突变的 Lovo ,KRAS突变且不表达表皮生长因子受体（EGFR）的SW620,BRAF突变的HT29,实时荧光定量PCR（RT‐PCR）测定EGFR基因转录水平,分别用5×104 vg/细胞的腺相关病毒（AAV）感染以上细胞株,荧光显微镜和流式细胞仪测定AAV‐EGFP感染率。加入或不加表皮生长因子（EGF）的情况下,蛋白免疫印迹法（Western blot）检测EGFR、磷酸化EGFR（p‐EGFR）和β‐actin ,四甲基偶氮唑盐比色（MTT）法测细胞增殖。结果Lovo和 HT29高表达EGFR ,而SW48表达EGFR较低,加入EGF促进了以上3种细胞的 EGFR磷酸化,AAV‐HGFK1抑制EGFR磷酸化,从而显著降低其增殖。EGF对SW620增殖无显著影响,但AAV‐HGFK1感染抑制了胎牛血清培养的SW620细胞。结论 AAV‐HGFK1可能直接作用于EGFR ,抑制其磷酸化从而阻断EGF促进细胞增殖,并可能通过其他通路对KRAS或BRA F基因野生或突变的大肠癌细胞都有抑制作用。     

人表皮生长因子真核细胞缓释型滴眼剂的基因治疗研究

目的:构建人表皮生长因子的真核表达载体,探讨用人表皮生长因子对角膜损伤治疗的可行性。方法:采用基因重组技术将人表皮生长因子基因插入pcDNA.3.1真核表达穿梭质粒,用脂质体包裹制成人表皮生长因子基因缓释型滴眼剂,滴眼治疗家兔角膜碱烧伤。结果:将hEGF-pcDNA3.1重组体进行限制性酶切及PCR扩增可见目的片段;基因治疗组在模型治疗后第7 d,角膜荧光着色变浅,溃疡面变小;第18～21 d溃疡面消失;在基因治疗后第1至28 d,从角膜组织中均可检测出hEGF mRNA,基因治疗组蛋白质表达水平明显升高,第7d达高峰,为224.286 ng/g角膜湿重,持续可表达3周以上;基因治疗眼角膜免疫组织化学染色可在角膜细胞内见hEGF蛋白质表达,第7 d达高峰,细胞转染率高达95%以上,并可持续表达3周以上。结论:用pcDNA.3.1真核表达穿梭质粒作为载体,携带人表皮生长因子基因,用脂质体包裹后制成缓释型滴眼液,以滴眼的方式给药转染角膜,可达到极高的转染率,具有良好的应用前景。     

表皮生长因子对卵细胞及胚胎发育的影响

表皮生长因子(EGF)是1962年由cohen首次从小鼠颌下腺中分离出来的。它含有53个氨基酸，为单链多肽类生长因子。EGF超家族成员包括：转化生长因子α(TGFα、肝素结合EGF(HB—EGF)、双调蛋白(AR)、痘病毒生长因子(PVGF)、cripto和heregulin等。所有这些细胞因子都可通过与EGF受体(EGFR)结合，通过EGFR自身磷酸化而发挥其生物学作用。     

EGF、EGFR表达与慢性胃炎辨证分型相关性研究

通过对慢性胃炎患者唾液中表皮生长因子(EGF)含量的测定及舌苔上皮细胞表皮生长因子受体(EGFR)的蛋白检测,研究EGF及其受体表达与中医慢性胃炎辨证分型的相关性。结果显示,唾液EGF含量、EGFR表达与慢性胃炎中医辨证分型有相关性。     

PRK与LASIK术后角膜愈合机制比较分析及基因重组表皮生长因子在屈光手术中的应用效果初探

方法将32只家兔分为PRK、LASIK、PRK+EGF和对照组,分别制作动物模型,按术后24小时、1周、1月、2月、3月进行观察.采用裂隙灯显微镜检查各组角膜上皮修复和Haze情况,进行纪录比较.并取角膜进行切片光镜检查和原位杂交试验,检测角膜屈光手术后修复过程中形态学改变和EGF、EGFRmRNA的表达.结果发现Haze从PRK术后1-2周开始出现,2月达到最高峰,之后逐渐减退;正常兔角膜上皮和基质有EGF、EGFRmRNA表达,PRK术后EGF、EGFRmRNA表达增加,且以术后1～2月表达最明显并与角膜Haze的出现和程度相关;LASIK术后无Haze出现,EGF、EGFRmRNA表达无明显增加;基因重组人表皮生长因子滴眼液可加速PRK术后角膜的修复过程.结论EGF参与PRK术后伤口愈合过程,且与Haze的形成和发展相关;PRK和LASIK术后角膜修复过程中的形态改变及调节机制存在很大差异;基因重组人表皮生长因子能够安全的应用于角膜屈光手术后角膜的修复过程.     

表皮生长因子通过PI-3K信号通路诱导非小细胞肺癌细胞表达CXCR4

目的:研究非小细胞肺癌细胞株A549中表皮生长因子受体(EGFR)和CXCR4之间的关系.方法:用不同浓度(20,40,60 μg/L)的表皮生长因子(EGF)处理血清饥饿的A549细胞24 h,RT-PCR检测CXCR4 mR-NA;血清饥饿的A549细胞用AG1478(EGFR磷酸化特异性抑制剂,10 μmol/L)处理24 h,分别用RT-PCR和Western blot检测CXCR4 mRNA和蛋白表达水平;分别在有/无LY294002(PI-3K通路抑制剂)情况下,用EGF处理血清饥饿的A549细胞,检测CXCR4 mRNA水平.结果:EGF使非小细胞肺癌细胞CXCR4表达上调约3-4倍,EGFR磷酸化抑制剂AG1478能降低CXCR4表达,EGF通过PI-3K信号通路上调CXCR4表达且CXCR4 mR-NA含量以浓度依赖的方式增加.结论:EGF通过EGFR和PI-3K信号通路上调CXCR4表达,CXCR4和EGFR胞内信号通路之间的交互作用可能促进肿瘤进展,对于协同表达CXCR4和EGFR的非小细胞肺癌患者,同时抑制EGFR和CXCR4可能是潜在的治疗靶点.     

溃疡平对胃溃疡大鼠胃黏膜组织中EGF和EGFR mRNA表达的影响

目的观察溃疡平对胃溃疡大鼠胃黏膜组织表皮生长因子(EGF)和表皮生长因子受体(EG-FR)mRNA表达的影响,探讨溃疡平的促进胃溃疡愈合的机制。方法采用改良Okabe法制备慢性乙酸胃溃疡模型;随机分为:实验对照组,模型组,溃疡平高、中、低剂量组,盐酸雷尼替丁组,共6组;给药治疗14 d,采用实时荧光定量PCR法检测胃黏膜组织EGF和EGFR mRNA表达。结果与模型组相比,溃疡平低、中、高剂量组的EGF 2-ΔΔCT值明显增高,表明溃疡平能使EGF mRNA表达上调,有统计学意义(P<0.01);溃疡平低、中、高剂量组的EGFR 2-ΔΔCT值明显增高,表明溃疡平能使EGFR mRNA表达上调,有统计学意义(P<0.001)。结论溃疡平可促进胃溃疡大鼠胃黏膜组织EGF和EGFR mRNA表达,这可能是其促进溃疡愈合,提高溃疡愈合质量,减少溃疡复发的分子学基础之一。     

胃泌素及丙谷胺对胃癌细胞株MKN45增殖及EGF表达的影响

目的:观察五肽胃泌素(PG)及其受体拮抗剂丙谷胺(PGL)对人胃癌细胞株MKN45增殖及表皮生长因子(EGF)表达的影响。方法:MTT法检测人胃癌细胞株MKN45增殖;放射免疫法(RIA)测定表皮生长因子(EGF)的表达。结果:PG(10-6mol/L)明显促进人胃癌细胞株MKN45增殖,24、48h的促细胞增殖率分别为11.24%、17.63%,丙谷胺(2.0～10.0mmol/L)能阻断这一促增殖作用,并可剂量依赖性地抑制胃癌细胞的生长,且随作用时间延长而增强。同时,在胃癌细胞株MKN45培养液中可检测到EGF,且随培养时间延长EGF含量增加;PG(10-6mol/L)可显著增加MKN45培养液中EGF的含量,丙谷胺(6.0mmol/L)不仅明显阻断PG诱导的EGF增加,并且能够减少胃癌细胞MKN45培养液EGF的含量。结论:五肽胃泌素能促进胃癌细胞株MKN45增殖及EGF表达,而其受体拮抗剂丙谷胺不仅能阻断这一的促进作用,并可抑制胃癌细胞株MKN45增殖及EGF的表达。提示PG的促胃癌细胞增殖作用可能与促进EGF表达有关。     

重组人表皮生长因子对翼状胬肉切除后角膜损伤的修复作用

目的 观察重组人表皮生长因子滴眼液对胬肉切除后角膜损伤的修复作用。方法 选择单纯性非复发性胬、局麻、显微镜下切除并做结膜瓣转移和缝合。术后滴EGF滴眼液2滴,5min后结膜囊涂0．3％氧氟沙星眼膏,钆扎患眼。术后每日按时换药并观察角膜愈合情况。结果 对照组角膜上皮100％痊愈时间为7d,与实验组角膜上皮100％痊愈时间5d相比,差异有显著性（P＜0．05）;同样,将两组“显效”、“有效”进行比较,差异均有显著性（P＜0．05）。结论 EGF滴眼液能有效地促进角膜上皮细胞再生与修复。所有受试者主观感觉良好,无过敏等副作用。     

表皮生长因子治疗兔角膜碱烧伤研究

本试验制成兔角膜碱烧伤模型，应用重组表皮生长因子（ｒｈＥＧＦ）滴眼剂对碱烧伤后的兔角膜溃疡创面进行治疗。６３只纯种新西兰白兔分为７组，每组９只，其中５组为治疗组，另２组为对照组，治疗组分别用每毫升０．５，５，２０，５０和１００μｇ表皮生长因子滴眼剂滴眼，对照组分别用纤维结合蛋白和氯霉素滴眼。伤后２４，４８，７２，９６及１２０ｈ裂隙灯荧光素染色，照像观察溃疡面积，经计算机图像处理，计算。结果显示５组治疗组创面愈合时间明显短于对照组，（Ｐ＜０．０５）。提示ＥＧＦ对角膜碱烧伤后的溃疡面愈合有促进作用。     

五种生长因子mRNA在兔角膜中的表达

目的　了解EGF、TGF-α、bFGF、TGF-β1和PDGF在兔角膜上皮和基质中的表达情况,探讨其在角膜伤口愈合中的作用。方法 应用原位核酸分子杂交方法检测兔角膜上皮和基质中EGF、TGF-α、bFGF、TGF-β1和PDGF mRNA的表达。 结果 EGF、TGF-α和PDGF mRNA仅在正常角膜上皮细胞层表达,基质中未见表达;bFGF和TGF-β1mRNA在正常角膜上皮和基质中均有表达。 结论 角膜能合成和分泌EGF、TGF-α、bFGF、TGF-β1和PDGF,且共同调节着角膜伤口的愈合。     

利用表皮干细胞治疗兔角膜缘干细胞缺损

目的利用自体表皮干细胞与异体角膜基质细胞在体外构建双层组织工程角膜,并修复兔角膜缘干细胞的缺损.方法建立兔角膜缘干细胞缺损模型,以去细胞猪角膜基质片作为支架材料,以自体表皮干细胞与异体角膜基质细胞作为种子细胞,在体外构建组织工程角膜,并用来修复兔角膜缘干细胞缺损.结果利用自体表皮干细胞与异体角膜基质细胞复合异种去角膜基质片在体外成功构建组织工程角膜;构建的组织工程角膜与正常角膜相似,具有上皮层和基质层;用组织工程角膜修复兔角膜缘干细胞缺损3个月后,损伤角膜透明度恢复良好,组织学结构基本恢复正常.结论成功构建了兔的双层组织工程眼角膜,并修复了兔角膜缘干细胞缺损.     

大鼠角膜酸烧伤对角膜内皮细胞损伤和修复的实验观察

目的研究大鼠角膜酸烧伤对内皮细胞的损伤和影响内皮修复的因素.方法建立轻、中、重度大鼠角膜酸烧伤模型,裂隙灯下动态观察角膜水肿、混浊及上皮愈合情况;各组于烧伤后不同时间点取角膜行内皮细胞台盼蓝-茜素红联合活细胞染色及HE染色,观察内皮细胞损伤、修复及白细胞浸润情况.结果轻、中度酸烧伤角膜内皮细胞未见损伤改变,角膜少量白细胞浸润,上皮愈合及水肿消退均较快;重度酸烧伤损伤区内皮细胞坏死、脱落,修复期损伤周边区内皮细胞变形、伸长,向创面移行,角膜大量白细胞浸润,角膜上皮愈合延迟,水肿消退慢.结论重度酸烧伤可直接造成角膜内皮细胞受损,继发性炎症反应参与了酸烧伤后角膜内皮细胞的损害;内皮细胞受损可使角膜溃疡及水肿迁延不愈.     

含药辐照异种角膜在眼热烧伤中的应用

对１０ 例（１７ 眼）眼热烧伤应用含药辐照异种角膜治疗,结果临床效果良好,未发生角膜穿孔,有效率达７０６％ 。认为含药辐照异种角膜具有抗感染、促进角膜上皮愈合、预防角膜溃疡和穿孔的作用,并对其作用机理进行了讨论。     

EGF、VEGF在老年人胃溃疡中的表达及其与溃疡愈合的关系

目的研究EGF、VEGF在老年人胃溃疡中的表达及其与溃疡愈合的关系,以指导临床正确选用药物,提高老年人胃溃疡的愈合质量和治愈率。方法选择同期老年和中青年活动期胃溃疡各30例,抽取胃液和活检胃黏膜组织用ELISA法和免疫组化检测EGF、VEGF表达;两组均予常规剂量服用埃索美拉唑镁肠溶片4周后复查胃镜,了解溃疡愈合情况。统计分析各组数据,探索老年人胃溃疡愈合与EGF及VEGF之间的关系。结果老年组胃液中EGF表达明显低于中青年组,差异有统计学意义(P<0.001)。治疗后,老年组溃疡愈合率明显低于中青年组(P<0.001),老年组胃液中EGF和黏膜组织中EGF、VEGF的表达均明显低于中青年组(P<0.001)。结论老年人胃黏膜在溃疡愈合过程中EGF、VEGF低水平表达,可能是老年人胃溃疡愈合质量差和难治愈的主要因素之一,故在治疗老年人胃溃疡时用PPI抑酸药联合促胃黏膜EGF、VEGF表达的胃黏膜保护剂,将提高老年人胃溃疡的愈合质量,解决难治愈的问题。     

羊膜移植对急性碱烧伤角膜中MMP-9及TIMP-1表达的影响

目的 :探讨羊膜移植对角膜碱烧伤后基质金属蛋白酶 (MMP 9)及其抑制剂 (TIMP 1)在小鼠角膜中的表达影响及意义。方法 :将 4 0只昆明小鼠随机分为实验组和对照组 ,采用 1mol·L-1氢氧化钠溶液烧伤小鼠角膜 ,建立炎症性角膜碱烧伤动物模型 ;对实验组小鼠右眼角膜行羊膜移植术 ;对照组不行羊膜移植。然后在羊膜移植术后第 2 ,7,14 ,2 1d处死动物。用免疫组织化学染色方法和计算机图像分析系统检测小鼠角膜烧伤后基质金属蛋白酶在角膜中的分布及其平均光度值。结果 :在对照组 ,角膜中MMP 9在第 2d出现表达 ,第 7d达高峰 ,以后逐渐降低。TIMP 1开始表达不明显 ,第 7d出现表达 ,14d达高峰 ,以后逐渐降低。羊膜移植组各时间点MMP 9表达低于对照组 ,而TIMP 1表达高于对照组。结论 :羊膜移植术可通过调节基质金属蛋白酶及其抑制剂的表达平衡 ,从而抑制和延迟碱烧伤后角膜融解的发生和发展。     

驻极体对创面愈合影响的实验研究

目的；研究有体对猪浅Ⅱ度创面愈合的影响。方法；将凡士林油纱布（对照组（和＋７００Ｖ之驻体薄膜（且）覆盖在猪背部２４个浅Ⅱ度创面上，地术后第１，２，３，５，７ｄ，分别测定创面上皮细胞ＤＮＡ含量；光镜下观察上皮细胞生长情况；科用微机计算创面面积的缩小及肉眼观察创面愈合情况．结果；实验组面积缩小率明显大于对照组，光镜下显示实验组上皮细胞生长旺盛，术后每天 其ＤＮＡ含量明显高于对照组（Ｐ〈０．０５）。结论     

创面修复中骨桥蛋白和表皮生长因子受体表达变化的实验研究

目的：探讨烧伤后创面组织愈合过程中骨桥蛋白（osteopontin,OPN）和表皮生长因子受体（epithelial growth fac-tor receptor,EGFr）表达顺序及分布规律。方法：应用免疫组化与原位杂交方法对临床15例烧伤患者创面愈合过程中OPN和EGFr表达变化进行检测,并计算阳性表达颗粒细胞数。结果：烧伤创面愈合中OPN和EGFr有明显规律性的表达变化,但两者的表达模式不尽相同。OPN的表达在伤后3 d达最高值,其阳性颗粒主要分布于真皮层成纤维细胞的胞浆中。EGFr的表达在伤后7 d达峰值,其阳性颗粒主要分布于表皮基底细胞胞浆及真皮成纤维细胞的胞核内。结论：烧伤可以诱导皮肤创面组织中OPN和EGFr的表达,其表达具有时相与部位分布特征。这表明OPN和EGFr作为调控因子参与了临床创面修复过程,合理调控其表达变化有助于临床创面修复。