抗癌药筛选的策略及方法

抗癌中草药的开发研究涉及到多学科多领域。作者就如何更为有效的筛抗癌中草药，结合当前国内外最新研究成果，从筛选的方向，体系、程序和方法等几方面进行了综述。     

用人脑胶质瘤体外细胞系筛选植物抗癌药

以人脑胶质瘤体外细胞系SHG—44为靶细胞,氟脲嘧啶脱氧核苷为阳性对照药,庆大霉素和PBS 为阴性对照,对26种植物药成份进行药物敏感性测定。按Bliss 正规机率单位法计算它们对SHG—44细胞的半数抑制浓度。结果表明,有两种植物药对SHG—44有较强的细胞毒作用,推荐作进一步研究。     

噬菌体展示技术及其在药物筛选中的应用

噬菌体展示文库是目前广泛应用于生物医学领域的较为重要的分子工具,近年来相关研究进展迅速,目前该技术以具有库容量大、结合特异性强等特点而成为药物筛选的实用性工具.本文以噬菌体展示技术的原理为出发点,对噬菌体载体的分子生物学、噬菌体展示文库的构建和筛选及其在药物筛选中的应用进行了综述.     

应用噬菌体展示技术筛选中药的药物靶点蛋白研究进展

噬菌体展示技术是一种有效的药物靶点筛选工具,可用其筛选中药的药物靶点蛋白。其原理是将外源性蛋白或多肽的DNA序列插入到噬菌体外壳蛋白结构基因的适当位置,使外源基因随外壳蛋白的表达而表达。药物靶点是药物在体内的作用结合位点,是药物筛选和新药研究的基础,良好的药物靶点也是发现性质优良药物的基础。利用现代生物技术为基础的高通量药物筛选技术,进行中药活性组分筛选是实现中药现代化的有效途径,并促进我国天然药物的开发和应用,为中药的研究提供一套完整的筛选和验证方案。      

噬菌体抗体库几种筛选方法的比较

目的：对多种不同的噬菌体抗体库筛选方法进行比较研究。方法：应用抗原固相化吸附筛选法,生物素化抗原液相筛选法和解离速率筛选法对半合成噬菌体抗体库或轻链替换库进行抗角蛋白噬菌体抗体的筛选,比较各自的筛选效率和优缺点。结果：3种方法筛选抗角蛋白抗体均获成功,抗原固相化吸附筛选法效果可靠,所获抗体特异性高但抗原消耗量大,生物素化抗原液相筛选法方法敏感且节省抗原,可以根据实验目的和抗体库性质灵活调节筛选体系,其不足是筛选获得的克隆中容易出现非特异性结合的克隆,而解离速率选是选择性获得高亲和力抗体的有效手段,结论：不同的筛选策略各具优势,在实际应用中可根据不同的实验目的选择相应的筛选方法。     

用T7噬菌体展示筛选系统筛选与p38相结合的蛋白

目的 用T7噬菌体筛选系统筛选与重要信号分子p38MAPK结合的蛋白。方法 以p38MAPK为靶蛋白，分别用不同的介(ELISA平板和Ni-NTA亲和树脂)筛选T7人肝和人肺cDNA文库。结果 选择86个第4轮筛选后的洗脱噬菌体单个噬斑克隆，经EDTA处理后利用特异性PCR引物扩增插入片断，回收PCR产物并进行测序，将所得到的序列用BLAST软件搜索GenBank中的同源序列，得到了46个编码蛋白的序列。结论 T7噬菌体展示筛选系统筛选新的结合蛋白简单、快速、有效。     

用T7噬菌体展示筛选系统筛选与p38相结合的蛋白

目的用T7噬菌体筛选系统筛选与重要信号分子p38 MAPK结合的蛋白。方法以p38 MAPK为靶蛋白,分别用不同的介质(ELISA平板和Ni-NTA亲和树脂)筛选T7人肝和人肺cDNA文库。结果选择86个第4轮筛选后的洗脱噬菌体单个噬斑克隆,经EDTA处理后利用特异性PCR引物扩增插入片断,回收PCR产物并进行测序,将所得到的序列用BLAST软件搜索GenBank中的同源序列,得到了46个编码蛋白的序列。结论T7噬菌体展示筛选系统筛选新的结合蛋白简单、快速、有效。     

利用噬菌体肽库筛选Survivin结合肽

目的：将纯化的Survivin蛋白作为诱饵,从噬菌体肽库中筛选出结合肽。方法：用纯化的Sur-vivin蛋白包被35 mm的塑料培养皿,加入随机12肽的噬菌体肽库,用靶分子溶液竞争性洗脱结合的噬菌体,通过测定噬菌体滴度检测Survivin蛋白的吸附、富集效果,筛选阳性噬菌斑,制作DNA测序模板进行测序。结果：经3轮筛选,噬菌体显示有良好的富集效果。从第3轮筛选产物中挑取8个蓝色噬菌斑（阳性克隆）进行测序,DNA测序结果表明,具有一致性序列GIANNFFTLKIS。结论：从噬菌体随机肽库中,筛选到能与Survivin蛋白特异性结合的一段短肽,为Survivin蛋白的进一步研究奠定基础。     

噬菌体抗体库的构建及抗AFP人单抗的筛选

目的 运用噬菌体抗体库技术,制备人源性抗ＡＦＰＦａｂ段,为进一步的研究和临床运用打下基础。方法 用ＲＴ－ＰＣＲ方法扩增人免疫球蛋白重链Ｆｄ及к链基因,构建噬菌体抗体库,筛选出人抗ＡＦＰＦａｂ片断,用ＥＬＩＳＡ检测其特异性结果 初步克隆出人抗ＡＦＰＦａｂ,该Ｆａｂ具有结合ＡＦＰ的活性。结论噬菌体抗体库技术绕过了细胞杂交这一步骤,较好的解决人体杂交瘤低效的难题,为人源性单抗的制备开辟了广阔的前景。     

116种中草药对白念珠菌的抑菌实验

用出芽实验和琼脂扩散法筛选抗白念珠菌中草药。同时作５０％乙醇浸提液与水溶液对照试验，从１１６种中草药中筛选出对白念珠菌具有抑菌作用的药物共３８种，其中前法筛选出有效药物３１种，后法筛选出２１种，两法均有效者１４种两种浸剂对照试验结果表明，除少数药物外，５０％乙醇沉剂与水溶液对白念珠菌的作用无显著差别。     

抗HIV药物的筛选评价方法

随着对艾滋病致病机制的深入研究,越来越多新的抗艾滋病病毒（HIV）药物进入临床试验,但大量抗HIV药物的应用也导致了耐药性问题的出现。因此,建立高通量快速的抗HIV药物筛选平台对研究新的抗HIV药物非常重要。本文综述了目前抗HIV药物研究中常用的体外和体内筛选模型,重点阐述了体外以病毒复制特异性功能活动或特定结构作为靶点的筛选系统及其评价方法。     

回生口服液对随访期卵巢癌患者复发风险的影响

目的探讨抗肿瘤中成药回生口服液对随访期卵巢癌患者复发风险的影响。方法选择经过一线治疗取得完全缓解的卵巢癌患者82例,分为服药组和观察组,服药组给予回生口服液10 ml,3次/d,口服,连服3周休1周,如此重复;观察组不应用任何抗肿瘤中西药物。两组均按照美国国立综合癌症网络(NCCN)指南要求进行随访,确诊疾病复发后随即终止试验。结果服药组52例患者平均疾病进展时间为25.83个月,观察组30例平均疾病进展时间为21.62个月,两组复发风险比较,差异无统计学意义(χ2=0.673,P=0.412)。各随访节点服药组的CA-125水平均低于观察组,并于随访的第6至24个月期间,两组检测值间差异均有统计学意义(P<0.05)。结论回生口服液对随访期卵巢癌患者有确切的康复治疗作用,对降低卵巢癌患者的复发风险有一定的临床效果。     

基于间充质干细胞的小分子化学药物肿瘤靶向递送系统研究进展

近年来,大量研究通过细胞内化或细胞膜结合的方式将生物大分子或小分子化学药物负载于间充质干细胞（MSC）上,利用其天然的肿瘤归巢特性实现药物的靶向递送,继而通过在靶部位药物的释放或基因表达,达到肿瘤治疗的目的。基因修饰MSC的研究较为成熟,而递送小分子化学药物的研究起步较晚。本文从MSC肿瘤迁移机制、细胞注射后体内分布特点入手,总结了MSC在小分子化学药物肿瘤靶向递送中的研究;同时介绍了MSC与原型药物、载药纳米粒构建的复合系统的载药、释药过程,展望了该系统遇到的挑战和应用前景。     

木犀草素抗肿瘤细胞增殖及增敏抗肿瘤药物作用研究

目的:研究黄酮类化合物木犀草素(Luteolin)对体外抗肿瘤细胞增殖,以及其与抗肿瘤药联用的增敏作用.方法:选用5 μmol/L或10 μmol/L木犀草素与不同浓度抗肿瘤药联合作用肿瘤细胞24 h后,用MTS法检测其体外抗增殖作用.结果:5 μmol/L木犀草素对人非小细胞肺癌细胞(A549)、人子宫颈癌细胞(Hela)、人乳腺癌细胞(MCF-7)、人胃腺癌细胞(AGS)、人胃癌细胞(MGC-803)的抗增殖作用均<20%,对人结肠癌细胞(Caco2)和人肝癌细胞(HepG2)的抗增殖作用约20%.Bexarotene单一用药时对Hela细胞抑制率达50%(IC_(50))的浓度约为2 μmol/L,与5 μmol/L木犀草素联用后IC_(50)约0.2 μmol/L,5 μmol/L木犀草素与0.1 μmol/L Bexarotene联用对Hela细胞的抗增殖作用达44%,Bexarotene与木犀草素联用在MGC-803、HepG2、A549细胞中增敏较小,在Caco2和MCF-7细胞中无增敏作用;顺铂单一用药时对Hela细胞的IC_(50 )>30 μmol/L,与5 μmol/L木犀草素联用后IC_(50)约3 μmol/L,联用后在MGC-803、HepG2和A549中增敏较小;博来霉素单一用药时对Hela细胞的IC_(50)>100 μmol/L,对A549细胞的IC_(50)约为100 μmol/L,与5 μmol/L木犀草素联用后Hela细胞的IC_(50)约为1 μmol/L,与10 μmol/L木犀草素联用后A549细胞的IC_(50)约为10 μmol/L.木犀草素与格列卫联用在MGC-803、HepG2、A549和AGS中增敏较小.结论:木犀草素在低于10 μmol/L浓度时,对肿瘤细胞体外抗增殖作用较小.低浓度(5 μmol/L~10 μmol/L)的木犀草素在不同的肿瘤细胞中对抗肿瘤药的增敏作用强度不同,在Hela细胞中增敏作用最显著.     

2011年蚌埠地区250例抗肿瘤药不良反应分析

目的了解2011年蚌埠地区抗肿瘤药所致不良反应（英文简称ADR）的发生情况,总结抗肿瘤药发生不良反应规律,指导临床安全﹑合理用药,减少不良反应的发生。方法利用ADR监测网络,对蚌埠地区2011全年度上报的250例抗肿瘤药品的ADR报告采用回顾性分析方法进行分析、总结。结果年龄大于60岁的老年患者为较易发生不良反应人群;其例数为128例,所占比例为51.20%,40-49岁和50-59岁比例相当,分别占18.80%和19.60%,本次研究中小于18岁的人群中暂没有ADR病例的上报;男性患者使用抗肿瘤药发生不良反应的数量多于女性患者（148∶102）。抗肿瘤药的ADR表现：发生消化系统反应的患者数量最多为137例（占51.89%）,主要表现为恶心﹑呕吐;其次为皮肤系统47例（占17.80%）,主要表现为皮疹﹑瘙痒。有其他系统（主要为血液系统）反应的患者数量也较多44例（占16.67%）,主要表现为骨髓抑制。一般ADR主要发生于用药后的1 d;蚌埠市区几家大型医院的抗肿瘤药物的品种数明显多于基层医疗单位;在六类抗肿瘤药物中,监测到以其他类抗肿瘤药发生的ADR发生例数最多,其中主要为铂类抗肿瘤药。结论各级医疗机构应继续加强抗肿瘤药ADR的监测工作,以减少抗肿瘤药的不良反应的发生,为临床合理应用抗肿瘤药提供参考,提高患者的生活质量;部分厂家抗肿瘤药药物说明书中标明的不良反应不全面,应及时跟踪更新,以提高药品使用的安全性。     

Ⅱ.双硫脲类衍生物的合成

合成了6个双硫脲类衍生物,其化学结构由红外光谱和元素分析证实。对化合物Ⅰ进行了抗病毒活性测试,发现其对家蚕细胞质型多角体病毒具有较高的活性。     

止喘汤减少糖皮质激素吸入量治疗支气管哮喘的临床研究

将395例哮喘患者随机分为4组,A组在吸入二丙酸倍氯米松100μg的同时服用止喘汤,B、C、D组分别单纯吸入二丙酸倍氯米松200μg、服用止喘汤、吸入二丙酸倍氯米松100μg。A、B组患者治疗前后乙酰甲胆碱气道反应性、肺通气功能、血清嗜酸性阳离子蛋白及症状积分均有明显改善。提示止喘汤在减少糖皮质激素吸入量的同时能控制气道慢性炎症、降低气道反应性、提高患者肺通气功能。     

体外双层琼脂培养法检测抗癌药对人癌干细胞集落形成的能力

采用略加修改的 Hamburger-Salmon 体外双层琼脂培养法观察了高三尖杉酯碱(HH)、冬凌草甲素(Rub-A)以及三个标准抗癌药阿霉素(ADM)、长春新碱(VCR)和顺氯铵铂(DDP)对7种类型人体实体瘤集落形成能力的影响。结果表明,所试肿瘤标本中有5/16、5/17、10/16,4/13和4/8分别对HH、Rub-A、ADM、VCR和DDP表现敏感。提示修改的双层琼脂法亦适用于人癌干细胞药物敏感性的测定     

肝动脉碘油栓塞加抗癌药治疗原发性肝癌近期死亡原因分析及适应证的探讨

用肝动脉碘油栓塞加抗癌药丝裂霉素、阿霉素治疗103例原发性肝癌患者,近期(3个月内)死亡11例。分析死因认为术前高度黄疸,肝性糖尿病、患有原发性腹膜炎、肺间质感染并反复发作,有动静脉瘘的患者都不适宜作此疗法。治疗间隔期太长,会导致疗效不佳。为此,修改了适应证范畴。