全反式维甲酸对培养大鼠主动脉血管平滑肌细胞增生及P21表达的影响

目的　探讨全反式维甲酸 (ATRA)对培养大鼠主动脉血管平滑肌细胞增生及P2 1蛋白表达水平的影响。方法　血管平滑肌细胞 (VSMC)采用组织贴块法培养。ATRA(2 .5×10 -6mol·L-1)作用于经 2 0 %胎牛血清刺激后的血管平滑肌细胞 ,2 4h后分别行 3H TdR掺入实验测定和P2 1蛋白印迹检测P2 1蛋白表达。结果　ATRA明显抑制血管平滑肌细胞DNA合成和促进P2 1蛋白表达。结论　ATRA促进P2 1蛋白表达是抑制VSMC增生的原因之一     

P21、P185、P53蛋白表达及P53基因突变与膀胱癌移行细胞生物学行为关系的研究

目的：探讨癌基因及抑癌基因改变与膀胱癌生物学行为产关系。方法：采用免疫组织化学方法及分子生物学技术,检测了８２例膀胱移行细胞癌Ｐ２１、Ｐ１８５、Ｐ５３蛋白表达及３８例Ｐ５３基因突变。结果：Ｐ２１、Ｐ１８５、Ｐ５３蛋白表达阳性率分别为６２．２％（５１例）、５８．５％（４８例）、３１．７％（２６例）。１２例（３１．６％）有Ｐ５３抑癌基因突变,其中全部有第２８０位密码子Ｇ－Ｃ突变;３例合并有２４８密码子     

一氧化氮对血管平滑肌细胞的作用

<正>一氧化氮(No)是生物体内一种结构最简单的多功能生物信号分子.它广泛分布于多种组织中,且在诸多疾病发生和人体正常功能调节中起着十分重要的作用.因此,No被称为20世纪90年代医学生物学领域最重要的“明星分子”,也是当今世界医学研究中的一个热点问题.No本身不带电荷,可以自由地通过膜性结构,又因其带有一个未配对电子(自由基),故而具有很高活性.它的半衰期仅为3分钟～5分钟,因此能被很快地     

动脉粥样硬化对平滑肌细胞凋亡及凋亡相关基因表达之影响

目的：究动脉粥样硬化对ＳＭＣ凋亡及凋亡相关基因表达的影响,探讨凋亡的分子机制及晚期ＡＳ斑块破裂之原因。方法：采用高维生素Ｄ３＋高脂肪高胆固醇饲料喂养法建立大鼠ＡＳ的模型;运用ＤＮＡ琼脂糖凝胶电泳法鉴定基因组ＤＮＡ的断裂情况,使用ＮｏｒｔｈｅｒｎＢｌｏｔ检测Ｐ５３,ｃ－ｍｙｃ及ｂｃｌ－２基因的表达活性。结果：ａ．ＡＳ斑块中ＳＭＣ的ＤＮＡ片断在电泳呈特征性梯状分布,ｂ．ＡＳ斑块中Ｐ５３及Ｃ－ｍｙｃ基因     

P21CIP1蛋白与P53蛋白在妊娠滋养细胞肿瘤中的表达

①目的比较P21CIP1与P53蛋白在葡萄胎及侵蚀性葡萄胎、绒毛膜癌(绒癌)组织中表达的差异,为探讨妊娠滋养细胞肿瘤中P21CIP1与P53蛋白参与细胞周期调控的机制提供实验依据.②方法采用免疫组化SABC法,检测100例葡萄胎组织和20例侵蚀性葡萄胎及绒癌组织P21CIP1与P53蛋白的表达情况.③结果葡萄胎组织中P21CIP1与P53蛋白表达比较,差异有显著性(χ2=5.02,P<0.05),而在侵蚀性葡萄胎及绒癌组织中二者差异无显著性(P=0.47).④结论在葡萄胎组织中P21CIP1与P53蛋白表达相互影响,而在侵蚀性葡萄胎和绒癌组织中二者无交互关系,即P21CIP1蛋白表达可由野生型P53诱导,而与突变型无关.     

P53和P21蛋白在鼻咽癌中的表达及其临床意义

目的：探讨P53和P21蛋白在鼻咽癌（NPC）、癌旁组织和鼻咽慢性炎症中表达的差异，及其与肿瘤生物学行为的关系。材料与方法：首程放疗前的NPC病人100例，癌旁组织和鼻咽慢性炎症对照组各20例，用SP法进行P53和P21蛋白免疫组化染色，P53阳性细胞的标准为：癌巢内肿瘤细胞核有棕色沉着的细胞；P21阳性细胞的标准为：癌巢内肿瘤细胞浆有棕色沉着的细胞。结果：在鼻咽癌、癌旁组织和鼻咽慢性炎症组织中，P53蛋白的阳性率分别为：78．0％、35．0％和0．0％，P＝0．001；P21蛋白的阳性率分别为：83．0％、75．0％和65．0％，P＝0．170。在鼻咽癌原发灶早期（T1＋2）和晚期（T3＋4），颈结阴性和阳性及临床早期（Ⅰ Ⅱ）和临床晚期（Ⅲ Ⅳ）各组中，P53蛋白和P21蛋白的阳性率均无差异（P＞0．05）。结论：P53基因的突变与鼻咽癌的发生有一定的关系。P53蛋白可能是鼻咽癌癌病变的指标；P21的突变可能与鼻咽癌的发生无明显的关系，P53蛋白和P21蛋白的阳性率与鼻咽癌原发灶的早晚，颈结转移，和临床分期无关。     

P53，P21蛋白在人类白血病细胞表达及其临床意义

有关单一基因与白血病的关系已有较多报道,而多种癌基因联合研究的报道尚较少,故本研究采用免疫组化方法对40例白血病骨髓活检标本进行了P53、P21蛋白检测,旨在探讨这两种蛋白与白血病的分类及预后的关系,为进一步深入研究提供线索。     

卡托普利抑制实验性高血压大鼠血管平滑肌细胞增殖及对HSP70和P53的影响

采用氚-胸腺嘧啶核苷(~3H-TdR)参入法,电镜,免疫组化,原位杂交法,观察了卡托普利(Cap)对实验性高血压大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的作用及对热应激蛋白70 kd(HSP70)及其mRNA和抑癌基因P53表达的影响。结果发现:Cap在降低血压同时,能减少VSMC的线粒体、粗面内质网和~3H-TdR参入量(均为P<0.01),并能逆转VSMC增殖时HSP70及其mRNA表达增强(均P<0.01),P53抑癌基因mRNA表达减弱(P<0.05)。结果表明:Cap能抑制实验性高血压大鼠的VSMC增殖,与HSP70及P53的调控有关。     

P53和PCNA在辐射诱导犬胆管增殖平滑肌细胞凋亡中的表达及意义

目的探讨在辐射诱导犬胆管增殖平滑肌细胞凋亡中,P53和PCNA的表达及意义。方法12只犬随机分两组,每组6只犬,在犬胆管内分别植入103pd(103钯)放射性支架和普通胆管支架,术后30d取出胆管标本采用ABC法进行PCNA免疫组化染色,核出现棕色反应为阳性细胞;原位杂交进行P53细胞染色,细胞浆出现棕褐色反应为阳性细胞;又行平滑肌细胞凋亡染色,阳性细胞为细胞核有棕黄色颗粒即为凋亡细胞。结果103Pd支架组PCNA蛋白阳性表达率明显低于普通支架组,两组之间比较差异有非常显著性(P<0.01),103Pd支架组P53蛋白阳性表达率明显高于普通支架组,两组之间比较差异有非常显著性(P<0.01)。103Pd支架组平滑肌细胞凋亡数较普通支架组明显增多,两者有显著差异(P<0.05),103pd放射性支架组犬胆管腔无明显狭窄,而普通支架组犬胆管腔有明显狭窄。结论以上结果证实103Pd支架组犬胆管平滑肌组织PCNA表达较弱,而普通支架组犬胆管平滑肌组织PCNA表达却增高,说明辐射可以抑制平滑肌细胞增殖,辐射可激活P53基因而诱导犬胆管平滑肌细胞凋亡,同时抑制犬胆管损伤后胆管狭窄。     

p53-p21通路在动脉血管平滑肌细胞衰老中的作用研究

[摘要]　目的　研究p53-p21通路在血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cell,VSMC）衰老中的作用。　方法　用血管紧张素II（angiotensin II,Ang II）持续作用引起VSMC衰老,检测衰老相关蛋白分子的表达。利用β半乳糖苷酶（senescence associated beta galactosidase,SA-β-gal）染色确定VSMC衰老,检测经Ang II诱导的p53敲除小鼠及其同窝野生型小鼠VSMC的衰老情况,通过感染腺病毒p21及其对照GFP的方法使VSMC中p21过表达,用3H标记脱氧胸腺嘧啶核苷（3H-TdR）掺入法检测p21过表达VSMC增殖,用流式细胞仪测定细胞周期。　结果　Ang II处理引起VSMC的p53、p21、p16表达增加,Ang II 处理后使p53基因敲除的VSMC衰老细胞数明显少于其对照p53野生型鼠的VSMC（P<0.01）,过表达p21显著抑制VSMC的3H-TdR掺入（P<0.01）,并且引起细胞周期G1期阻滞;过表达p21能引起VSMC衰老。　结论　p53-p21通路在Ang II引起的VSMC衰老发生过程中发挥重要作用。     

gax基因对血管平滑肌细胞中p21基因表达的影响

目的：研究p21基因在gax基因抑制血管平滑肌细胞(VSMC)增殖中的作用。方法：以携带大鼠gax基因表达序列的复制缺陷型5型腺病毒载体(AdCMV—gax)常规转染VSMC后，应用免疫细胞化学染色检测gax和p21表达的变化；应用RT—PCR检测p21 mRNA表达的变化；应用^3H标记的胸腺嘧啶核苷(^3H-TdR)掺入试验观察gax基因表达增强对VSMC增殖的影响。结果：①AdCMV—gax转染前，血小板衍化生长因子BB(PDGF—BB)下调gax蛋白的表达，AdCMV—gax转染后，无论有无PDGF—BB刺激，VSMC中gax蛋白的表达均比转染前显著增高。②AdCMV—gax转染使VSMC的p21表达比未转染组显著增高。③AdCMV—gax转染使VSMC的^3H-TdR掺入量均较未转染组显著降低。结论：gax基因抑制VSMC增殖的机制与其增强p21表达有关。     

静止压力诱导血管平滑肌细胞的增殖与凋亡

目的 探讨静止压力对血管平滑肌细胞增殖与凋亡的影响。方法 将胚胎鼠血管平滑肌细胞系A10细胞分别在正常大气压下、80、100、200mmHg等静止压力下培养;利用MTT法测定细胞成活率,流式细胞仪测试样品的细胞周期与凋亡率。结果在较低压力下（100mmHg）A10细胞成活率增加,细胞增殖,处于G0／G1期的A10细胞百分比显著降低,增殖指数（PI）显著升高,凋亡率与正常无差异;在200mmHg的压力下成活率降低,G0／G1期A10细胞百分比显著升高,细胞增殖受抑制,凋亡率亦显著增加。结论 较低的压力可促进血管平滑肌细胞增殖,而过高的压力则可诱导细胞凋亡。     

磷酸化细胞外信号调节激酶和P21ras在高血压血管平滑肌细胞中表达增强

目的探讨高血压血管平滑肌细胞增生和ERK激活的机制。方法采用免疫组织化学和Westernblotting技术,对比观察肾血管性高血压和自发性高血压大鼠肾细小动脉平滑肌细胞中磷酸化细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)和P21ras表达。结果实验期间,Wistar肾血管性高血压组动脉血压从(104±18)mmHg升高到实验结束时的(198±33)mmHg,自发性高血压大鼠16周龄时的血压为(163±23)mmHg。肾血管性高血压组肾小球发生了明显的纤维化(P<0.05),自发性高血压大鼠肾小球纤维化等与对照组无显著性差异。肾血管性高血压组入球动脉、小叶间动脉、叶间动脉和弓形动脉血管平滑肌细胞中磷酸化ERK1/2染色阳性率分别为7.09%、14.57%、29.44%和13.63%,均明显高于对照组(P<0.01)。自发性高血压大鼠入球动脉、小叶间动脉、叶间动脉和弓形动脉血管平滑肌细胞中磷酸化ERK1/2染色阳性率分别为16.09%、24.17%、32.44%和18.61%,均明显高于对照组(P<0.01);肾血管性高血压组和16周龄自发性高血压大鼠入球动脉、小叶间动脉和弓形动脉平滑肌细胞中P21ras的阳性率明显高于对照组(P<0.01);Westernbloting检测可见高血压组和16周龄自发性高血压大鼠肾组织磷酸化ERK1/2和P21ras蛋白含量明显高于对照组(P<0.01)。结论在大鼠两肾一夹型高血压和自发性高血压时,P21ras基因表达增加使部分血管平滑肌细胞丝裂原激活蛋白激酶系统激活,导致部分小动脉血管平滑肌细胞增生。     

流体切应力对大鼠血管平滑肌细胞凋亡的影响

目的探讨流体切应力（SS）对体外培养的血管平滑肌细胞（VSMC）形态学影响。方法运用倒置相差显微镜和免疫组化ABC方法对VSMC进行鉴定，采用荧光显微镜和TuNEL—AP方法观察其变化。结果组织块贴壁法培养的VSMC呈典型的长梭形，α—actin染色显示95％以上VSMC呈阳性；SS强度分别为1．041、4．767和10．389dyne／cm^2冲击VSMC12h其凋亡百分率分别为（1．56±0．28）％、（1、95±0．23）％和（2、62±0．49）％，而对照组分别为（0、61±0．12）％、（0．55±0．16）％和（0、64±0．24）％，两组比较差异有统计学意义（P〈0.01），随着冲击时间的延长凋亡细胞有进一步增多的趋势。结论VSMC大量凋亡可由SS所诱导，颅内动脉瘤组织内VSMC过度凋亡可能与局部升高的SS密切相关。     

超声辐照对血管平滑肌细胞增殖和凋亡的影响

目的:观察超声波辐照对培养的血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖和凋亡的影响,筛选防止介入治疗后血管再狭窄的辐照参数,并探讨其机理.方法:单声源压电陶瓷超声辐照系统声强连续可调,台盼蓝排斥实验分析辐照后即刻细胞存活率;MTT比色法描述辐照后5天VSMCs的生长动力学变化;BrdU掺入法检测辐照对VSMCs S期DNA复制的影响;ELISA法检测辐照后VSMCs凋亡情况.结果:1.超声辐照对培养的VSMCs有直接杀伤作用,该作用随辐照强度和辐照时间的增加而增加,相同辐照强度和时间下,低频超声该作用更显著.2.超声辐照组较对照组VSMCs生长曲线平缓,0.705MHz组以0.5W/cm2,5min辐照最为明显.3.BrdU掺入法测定S期细胞增殖发现,0.705MHz,0.5W/cm2,5min辐照组BrdU%低于对照组(40.5%±6.8%vs55.8%±3.3%,P＜0 05).4.0.705MHz,0.5W/cm2,5min辐照的凋亡富积因子与阳性对照相比为1.851±0.087vs1.924±0.074,P=0.836.结论:0.705MHz,0.5W/cm2,5min超声辐照在无明显杀伤细胞的情况下诱导培养的VSMCs凋亡,阻止VSMCs S期DNA复制,提示USE是一种潜在的治疗介入治疗后血管再狭窄的手段.     

加味桃核承气汤对糖尿病VSMC细胞周期及细胞凋亡影响的实验研究

目的探讨不同配伍组方加味桃核承气汤大鼠含药血清对胰岛素（Regular nsulin,RI）诱导兔血管平滑肌细胞（Vascular mooth musclecell,VSMC）的细胞周期及细胞凋亡的影响,寻找本方抗糖尿病动脉粥样硬化的最佳配伍组方。方法应用血清药理学方法,采用兔主动脉平滑肌细胞株,以RI诱导VSMC增殖,随机分为空白组、模型组、罗格列酮组、美迪康组、加味桃核承气汤组、活血组、泻热通下组、益气养阴组及活血一泻热通下组共9组,每组6孔,制备上述9组合药血清,采用碘化丙啶（PropidiumIodide,PI）单染色法,以流式细胞仪检测VSMC的凋亡率及细胞周期。结果各组在各细胞周期的DNA含量比较,总体差异显著（P〈0．01）;模型组、美迪康组细胞凋亡最少;罗格列酮组、活血组、活血十泻热通下组细胞凋亡较多;罗格列酮组、活血组、活血十泻热通下组促进凋亡作用（Sub．GO期）较加味桃核承气汤全方组显著（P〈0．01）。结论促进糖尿病VSMC凋亡的药物有效成分,可能在加味桃核承气汤活血组、活血＋泻热通下组当中含量更高。在促进糖尿病VSCM凋亡的机制方面,罗格列酮组可能与G0／G1、G2M期阻滞有关;活血＋泻热通下组、活血组可能与G2M期阻滞有关。     

穹窿主体蛋白对血管平滑肌细胞增殖的影响

目的:探讨穹窿主体蛋白(major vault protein,MVP)对血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)增殖的影响?方法:分离培养野生型小鼠VSMCs,用血小板源性生长因子(PDGF-BB)或15% 胎牛血清(FBS)刺激VSMCs增殖,Western blot检测VSMCs的MVP表达水平,同时检测特异性分化标记物α-SMA和SM22α表达水平?然后用PDGF-BB刺激人主动脉平滑肌细胞(HAoSMCs),检测MVP的表达差异?再分别分离培养野生型小鼠和MVP敲除型小鼠的VSMCs,通过CCK8细胞增殖实验检测两者的增殖能力;同时用siRNA干扰的方法,使HAoSMCs中MVP低表达,检测其增殖能力的变化?结果:用PDGF-BB或15% FBS刺激VSMCs后,MVP表达水平呈浓度和时间依赖性下降,α-SMA和SM22α表达水平也相应降低?MVP缺失或低表达情况下,VSMCs的增殖能力均下降?结论:MVP在VSMCs增殖中起了重要作用?     

氯沙坦对大鼠动脉损伤后平滑肌细胞凋亡及Fas抗原及其配体的影响

①目的探讨氯沙坦对大鼠颈动脉损伤后平滑肌细胞凋亡和相关基因Fas抗原与Fas配体的影响及其对临床预防经皮冠状动脉成形术后再狭窄的可行性。②方法将42只雄性W istar大鼠,随机分为氯沙坦实验组(n=21)及对照组(n=21),实验动物均行左侧颈总动脉球囊剥脱损伤内皮模型,术后于不同时间段取损伤段血管,均进行苏木精-伊红染色及计算机图像分析;Tunnel标记法检测平滑肌细胞凋亡率;免疫组化法测定Fas抗原及其配体在血管壁中的表达。③结果对照组于术后第7、14天损伤血管壁面积增加,相同时间段内两组比较,结果氯沙坦实验组管壁增生程度较对照组显著降低(P(0.05);术后第7、14天氯沙坦实验组的细胞凋亡率显著高于对照组(P(0.05);管壁中Fas抗原、Fas配体的表达较对照组明显增加。④结论血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂氯沙坦可以通过Fas系统调节损伤段血管平滑肌细胞的凋亡而抑制新生内膜的形成。     

TNP-470对大鼠血管平滑肌细胞生长的抑制作用及细胞周期的影响

目的研究TNP-470对血管平滑肌细胞生长的影响。方法采用MTT法检测TNP-470对体外培养的SD大鼠胸主动脉平滑肌细胞的生长抑制作用;流式细胞仪检测TNP-470对细胞周期分布及其相关蛋白CDK4、CyclinD1和p27表达的影响。结果TNP-470对血管平滑肌细胞生长具有抑制作用,IC50约为23.3μg/L。TNP-470处理组细胞S期比率[(15.43±5.16)%]和G2/M期比率[(9.49±2.70)%]明显低于对照组[(22.29±6.80)%、(16.51±8.61)%,P<0.05,P<0.05];而G0/G1期则相反,G0/G1期比率[(75.14±6.62)%]显著高于对照组[(60.38±7.23)%,P<0.001];处理组PI(23.76±7.92)明显小于对照组(39.62±7.23,P<0.001)。TNP-470处理组CyclinD1蛋白(27.93±4.22)和CDK4蛋白(51.80±6.65)表达明显低于对照组(32.13±3.28、59.65±7.34,P<0.05、P<0.05);但p27蛋白(51.27±3.75)表达较对照组(39.62±7.23)显著增多(P<0.001)。结论TNP-470通过细胞周期阻滞作用抑制血管平滑肌细胞的生长,该抑制作用与TNP-470影响VSMCs中CyclinD1、CDK4和p27蛋白的表达有关。