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相似文献
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1.
目的 :建立培养乳小鼠肝细胞蛋白质的双向电泳技术。方法 :取乳小鼠肝脏组织 ,进行肝细胞原代培养 ,提取肝细胞蛋白 ,以固相pH梯度 (IPG)等点聚焦为第一向 ,垂直SDS -PAGE为第二向进行双向电泳 ,并对样品处理方式、蛋白上样量、IPG等电聚焦和SDS -PAGE电泳参数设置、凝胶浓度等关键因素和环节进行了比较研究。结果 :通过实验条件的筛选和优化获得了较满意的双向电泳图谱。结论 :本文建立乳小鼠双向电泳分离技术 ,具有较高的分辨率和重复性 ,为研究肝脏不同条件下特异性蛋白的表达及分子标记奠定了基础  相似文献   

2.
目的:建立GSF细胞蛋白质组双向电泳图谱。方法:用含10%胎牛血清的DMEM培养液培养GSF细胞,胰酶消化后收集细胞,加入细胞裂解液使细胞充分裂解,离心后取上清液进行第一向等电聚焦电泳和平衡,再进行第二向SDS-PAGE(十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳)和银染显色及图像扫描与分析。结果:通过对GSF细胞蛋白提取液进行双向电泳,在17cm pH5~8IPG胶条上可得到重复性及分辨率均较好的蛋白位点。结论:GSF细胞蛋白质组双向电泳图谱的建立。为其蛋白质组学的进一步研究奠定了基础。  相似文献   

3.
目的:建立针对幽门螺杆菌蛋白质组学研究的双向电泳及其相关技术体系。方法:分别采用冻融兼Urea-CHAPS-DDT-SB3-10裂解提取法和超声兼Urea-CHAPS-DDT-SB3-10裂解提取法提取Hp菌体蛋白,取100μg菌体蛋白利用固相pH梯度等电聚焦双向电泳,对硝酸银染色后获得的双向电泳图谱进行图像分析。结果:冻融兼Urea-CHAPS-DTT-SB3-10裂解液一步提取法获得573±29个蛋白斑点,超声兼Urea-CHAPS-DTT-SB3-10裂解液一步提取法获得921±23个蛋白斑点。结论:超声兼Urea-CHAPS-DDT-SB3-10菌体蛋白提取法提高了双向电泳的分辨率,进而可增强生物质谱鉴定蛋白质的准确度。  相似文献   

4.
目的:建立大鼠肾脏组织蛋白质组双向电泳分离体系。方法:提取大鼠肾脏组织的样品蛋白,按标准条件对蛋白质进行双向电泳分离,并对各个关键因素进行优化。结果:最终选择的裂解液配方是1%TBP,4%CHAPS,0.2%Bio-Lyte,40mmol/LTris,8mol/L尿素,2mol/L硫脲;使用pH 4~7的IPG胶条进行被动水化上样,等电聚焦采用缓慢升压模式,电泳参数根据Bio-Rad公司的预设方案进行调整;改良硝酸银法进行蛋白质斑点染色。从而获得了满意的蛋白质组双向电泳图谱。结论:成功建立具有较高分辨率和重复性的大鼠肾脏组织蛋白质组双向电泳分离体系,为后续实验研究提供有力的技术保障。  相似文献   

5.
目的 建立霍乱弧菌全菌体蛋白的双向电泳技术,获得分辨度高、重复性好的双向电泳图谱.方法 利用适当的裂解液处理霍乱弧菌,提取全菌蛋白;采用pH梯度等电聚焦对全菌蛋白进行双向电泳;考马斯亮蓝染色后获得的双向电泳图谱,并利用ImageMaster 2D Elite 5.0图象分析软件进行分析,所得的数据用SPSS15.0进行统计分析.结果 得到了(1081±16)个蛋白斑点,蛋白主要集中在pI 4.24~7.20之间,重复胶的匹配点数为(1057±28),匹配率为97.85%.结论 建立了霍乱弧菌全菌双向电泳分析方法,2-DE图谱中蛋白位点的分辨率和重复性非常高,获得了较为理想、清晰的双向电泳图谱,为进一步研究其蛋白质组学奠定了基础.  相似文献   

6.
神经蛋白质组学双向电泳技术体系的建立   总被引:5,自引:2,他引:3  
目的:建立神经蛋白质组学双向电泳技术体系。方法:利用双向电泳技术分别以人脑脊液、人和鼠脑组织为研究对象。通过离心等手段提取蛋白。行双向电泳,硝酸银染色,进行图谱分析。结果:从双向电泳图谱上获得蛋白质斑点:正常人脑脊液359个,多发性硬化人脑脊液397个,正常人脑组织480个.正常鼠脑组织524个。经与SWISS-2DPAGE DATA比对,发现差异蛋白点。结论:从蛋白质水平探讨多发性硬化症、脑出血等疾病的发病机制。对寻找有效的药物靶点具有重要意义,同时为神经系统其它疾病的研究提供了切实可行的神经蛋白质组学研究技术体系。  相似文献   

7.
目的:通过在Allen法基础上,采用自制击打器建立了不同程度急性脊髓损伤动物模型,并对其进行蛋白质组学研究。方法:在原有技术基础上,以IPG等电聚焦为第一向、垂直SDS PAGE为第二向,对脊髓蛋白质样品提取、等电聚焦上样量、等电聚焦电泳参数、SDS PAGE、SDS胶染色及保存进行了研究和实验条件优化,建立和优化了脊髓蛋白质组分析的双向电泳的技术。结果:本实验在国内首先成功建立了正常和损伤脊髓蛋白质组双向电泳图谱,该图谱能够从蛋白质水平上直接反映脊髓损伤所引发的脊髓蛋白质组变化的全貌。并识别和鉴定出部分差异表达的蛋白质,为阐明急性脊髓损伤后损伤和修复的机制奠立了初步基础,提供了实验依据。结论:应用改良Allen氏法成功建立了不同程度急性脊髓损伤动物模型。建立和优化了脊髓蛋白质组分析的双向电泳的技术,成功建立了分辨率高、重复性好的正常和损伤脊髓蛋白质组双向电泳图谱。  相似文献   

8.
志贺菌全菌蛋白质双向电泳技术的建立   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的:建立针对志贺菌全菌蛋白质组学研究的双向电泳及其相关技术体系.方法:采用超声兼尿素-3-[(3-胆酰胺丙基)-乙二胺]-1-丙磺酸(CHAPS)-二硫苏糖醇(DTT)裂解法提取临床分离志贺菌全菌蛋白,利用固相pH梯度等电聚焦对全菌蛋白进行双向电泳,银染后获得的双向电泳图谱进行Image Master 2D Platinum软件分析,并对实验条件进行调整优化. 结果:成功构建了高重复性的志贺菌全菌蛋白质双向电泳图谱,共获得946±37个蛋白质斑点, pI值主要集中在4.94~7.23之间.结论:通过相关条件的调整优化提高了双向电泳的分辨率,为后续志贺菌蛋白质组学研究奠定了基础.  相似文献   

9.
目的 优化双向电泳条件,以获得高分辨率、重复性好的蛋白质双向电泳图谱.方法 比较不同的细胞总蛋白质裂解液、不同的蛋白上样量、不同的等电聚焦电泳条件,选择最佳双向电泳条件.结果 确定了适合肝癌细胞株HepG2的最佳细胞总蛋白质裂解液5、最佳蛋白上样量650 μg和最佳等电聚焦电泳条件为最大电压34 kV、30 min.结论 优化双向电泳方法获得的肝癌细胞株HepG2蛋白质双向电泳图谱高分辨率、重复性好.  相似文献   

10.
目的:优化针对奇异变形杆菌蛋白质组学研究的双向电泳(2-DE)条件及其相关技术体系,阐明样品处理过程中超声功率、振摇时间和上样量对2-DE图谱的影响。方法:选取1株奇异变形杆菌,分别采用超声功率为130 W和80 W超声法裂解菌体提取总蛋白,将2种方法提取的蛋白在同一条件下进行等电聚焦和聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE);超声功率为80 W提取的奇异变形杆菌总蛋白,分别取上样量1和2 mg,在同一条件下17 cm胶条上进行双向电泳。结果:超声功率为130 W处理的样本得到的2-DE图谱中蛋白斑点较少,而超声功率为80W处理的样本蛋白点多、清晰且重复性好。上样量为2 mg得到的图谱中横纵条纹明显,蛋白斑点分离度较差,而上样量为1 mg时横纵条纹较少,蛋白斑点分离度较好。结论:采用低功率超声且较少上样量处理样品能得到较好的2-DE图谱。
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11.
李丽梅  王秀梅 《内蒙古医学杂志》2011,43(5):527-529,F0004
目的:优化双向电泳的样品处理方法,建立HepG2细胞蛋白质双向电泳图谱。方法:用含10%胎牛血清的RPM11640培养液培养HepG2细胞,胰酶消化后收集细胞,加入细胞裂解液使细胞充分裂解,冰浴超声离心后取上清液进行双向凝胶电泳,电泳图谱经考马斯亮蓝染色及图像扫描与分析。结果:通过对HepG2细胞蛋白提取液进行双向电泳,在13 cm pH 3~10(L)IPG胶条上可分离到(297±23)个重复性及分辨率均较好的蛋白质点,蛋白斑点的匹配率为83%。结论:HepG2细胞蛋白质组双向电泳条件的优化及图谱的建立,为进一步研究肝癌蛋白质组学奠定了基础。  相似文献   

12.
应用等位基因特异性PCR检测血管紧张素原基因突变   总被引:1,自引:1,他引:0  
目的:建立检测血管紧张素原(angiotensinogen,AGT)基因2种常见突变的等位基因特异性PCR技术。方法:应用针对AGT基因T174M和M235T这2种常见的突变位点设计的等位基因特异性PCR技术,对海南汉、黎族人群中AGT基因突变类型进行了检测,同时对经上述等位基因特异性PCR检测的样本进行序列测定。结果:在海南汉、黎族人群中,T174M突变位点可检测出TT、TM、MM 3种基因型,M235T突变位点可检测出MM、MT、TT 3种基因型,用等位基因特异性PCR鉴定的AGT基因突变的基因分型结果与序列测定结果完全符合。结论:等位基因特异性PCR技术操作简便,重复性和稳定性好,可作为鉴定AGT基因突变类型的可行方法。  相似文献   

13.
翟旭光  陈广通 《南通医学院学报》2010,30(5):315-318,F0002
目的:研究20(S)-原人参二醇(PPD)对人胚肾293细胞(HEK-293细胞)生长抑制作用。方法:采用台盼蓝染色和噻唑蓝(MTT)法观察PPD对HEK-293细胞增殖的抑制作用,同时通过Hoechst33258染色和DNA Ladder方法测定PPD对HEK-293细胞凋亡影响。结果:PPD可明显降低HEK-293细胞存活率和细胞活性,半数抑制浓度(IC50)为21.8μmol/L。PPD处理后HEK-293细胞核出现典型的凋亡形态学的改变,琼脂糖电泳呈现明显的DNALadder条带。结论:PPD对HEK-293细胞生长有明显的抑制作用并有剂量依赖关系。  相似文献   

14.
目的探讨载脂蛋白a(TTTTA)n基因多态性在血管性认知功能障碍患者中的分布状况及其与血清脂蛋白a[1 ipoprote in(a),Lp(a)]水平的关系。方法2008年1月至2009年8月在我院诊治的血管性认知功能障碍患者122例,健康对照组88例。运用免疫投射比浊法测定血清Lp(a)浓度,同时用聚合酶链反应(PCR)和聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定载脂蛋白a[apolipoprote ina,Apo(a)]基因的5’调控区(TTTTA)n基因的多态性,并加以分析。结果共检出8种等位基因,16种基因型,常见的基因型为8/8、8/9、5/8、9/9四种。两组中5/8基因型携带者的血清Lp(a)水平均高于其他基因型携带者(P〈0.05);高Lp(a)组5/8基因型携带者多于低Lp(a)组(P〈0.05);且高Lp(a)组中血管性认知功能障碍患者所占比例明显高于低Lp(a)组(P〈0.05)。结论血清Lp(a)是血管性认知功能障碍患者的高危因素。Apo(a)(TTTTA)(n)5/8基因型携带者血清Lp(a)水平升高,Apo(a)(TTTTA)n基因多态性可能与血管性认知功能障碍发病相关。  相似文献   

15.
目的探讨IL-1β与TM、EPCR基因在百草枯中毒鼠所致急性肺损伤中的表达.方法90只SD雄性大鼠分为正常对照组(C组30只)、百草枯中毒组(PQ组60只).PQ组一次性灌胃PQ25mg/kg染毒,C组予等体积生理盐水灌胃.观察各组大鼠在中毒后6h、12h、1d、3d、5d、7d肺组织病理改变,采用反转录一聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测鼠肺组织TM、EPCRmRNA的表达;采用ELISA方法检测血清的IL-1β表达.结果C组肺组织结构完整,无炎症细胞渗出.PQ组肺组织炎性细胞浸润明显增多,且随时间推移肺损伤加重.C组TM和EPCRmRNA有一定水平表达;与c组相比PQ组鼠肺组织TM和EPCRmRNA的表达增强,差异有统计学意义(P〈0.05);PQ组TM和EPCRmRNA的表达在1d达高峰之后下降,第3天基本恢复到C组水平.PQ组IL-1β与TM表达呈正相关(P〈0.01);IL-1β与EPCR表达呈正相关(P〈0.01).结论IL-1β与TM、EPCR基因介导的炎症反应参与百草枯中毒所致肺损伤.  相似文献   

16.
目的:运用反相高效液相色谱法同时测定不同产地龙胆中龙胆苦苷(GPS)和2’-(2,3-二羟基苯甲酰)-獐牙菜苷(DHBS)的含量。方法:色谱柱为Ultimate XB-C18(150 mm×4.6 mm,5μm);甲醇-乙腈-水为流动相,梯度洗脱,检测波长为270 nm和215 nm,柱温为25℃,流速为1.0 ml/min。结果:龙胆苦苷和2’-(2,3-二羟基苯甲酰)-獐牙菜苷的线性范围分别为0.0201 5~5.038μg(r=1)和0.00512~0.409 6μg(r=0.999 8),平均加样回收率分别为100.4%(RSD 2.72%)和102.2%(RSD 1.99%)。结论:本法准确、简便、重现性好。龙胆的种间(四基源药材)的龙胆苦苷和2’-(2,3-二羟基苯甲酰)-獐牙菜苷的含量有较大差异。  相似文献   

17.
目的:以活性天然产物牛蒡苷元为原料,合成其脱甲基衍生物,寻找适宜的脱甲基化方法。方法:以牛蒡苷元为底物,分别以无水氯化铝或氢溴酸为脱甲基试剂进行反应,比较两者脱甲基能力,并制备了目标产物。结果:合成了两个牛蒡苷元脱甲基衍生物,其中化合物2是首次利用氢溴酸-冰醋酸系统进行脱甲基反应而制备得到,采用氢溴酸-冰醋酸系统进行脱甲基反应,收率较高,操作简单。结论:牛蒡苷元脱甲基化最佳工艺条件为:以牛蒡苷元为原料,氢溴酸作为脱甲基试剂,在110℃条件下反应8h,收率87%,并通过核磁共振碳谱和氢谱对目标产物进行了结构确证。  相似文献   

18.
目的:探讨外周静脉血清基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、基质金属蛋白酶组织抑制剂-1(TIMP-1)、高敏C反应蛋白(hs-CRP)水平与冠心病(CHD)合并2型糖尿病(T2DM)的关系并评价其临床意义。方法:选取CHD合并T2DM患者31例,单纯CHD患者50例,选择门诊体检者30例为正常对照组。用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清MMP-9,TIMP-1,用免疫散射比浊法检测血清hs-CRP的表达情况。结果:CHD合并T2DM组血清MMP-9的浓度(M=409.62ng/mL)显著高于CHD组(M=263.40ng/mL)及对照组[(196.15±44.89)ng/mL(]均P<0.05)。CHD合并T2DM组血清TIMP-1的浓度[(229.27±46.85)ng/mL]低于对照组[(272.75±72.35)ng/mL(]P<0.05)。CHD合并T2DM组血清hs-CRP的浓度(M=17.20mg/L)明显高于CHD组(M=4.57mg/L)及对照组[(1.52±0.78)mg/L(]均P<0.01)。CHD合并T2DM组患者血清MMP-9,TIMP-1与hs-CRP的浓度呈正相关。结论:联合检测...  相似文献   

19.
目的通过与B超和手术所见,评价多层螺旋CT(MSCT)在诊断主动脉缩窄(CoA)中的临床价值。方法主动脉缩窄患者52例,单纯型18例,复杂型34例;26例在我院或外院行手术治疗,33例均行B超检查。结果本组MSCT共诊断CoA52例,单纯型13例,占25%,复杂性婴儿型35例,占67.3%,复杂不典型型4例,占7.7%,MSCT诊断局限性缩窄31例(59.6%),管性缩窄21例(40.4%)。46例CoA中最窄处内径与主肺动脉水平升主动脉内径比值R为0.29±0.13,轻度缩窄2(4.3%)例,中度缩窄23(50.0%)例,重度缩窄21(45.7%)例。26例经手术证实的CoA病例中MSCT均明确诊断,准确率为100%(26/26)。超声心动图检查18例明确诊断,2例诊断可疑,6例漏诊,准确率为69.2%(18/26)。结论在诊断主动脉缩窄上,MSCT明显优于心脏超声(transthoracic echocardiography,TTE),B超可以作为诊断主动脉缩窄筛查手段,MSCT可以作为手术的依据。  相似文献   

20.
目的探讨系统性红斑狼疮(SLE)患者肾损害时凝血指标的变化及意义。方法选取54例SLE患者为观察组,其中分为肾损害组29例,非肾损害组25例;检测血浆D-二聚体(D—Dimer,D—D)、纤维蛋白原降解产物(FDP)、血管性假性血友病因子抗原(VWF:Ag)、凝血酶调节蛋白(TM)、组织型纤溶酶激活物(t—PA)、纤维蛋白原(FIB)和血浆凝血酶原时间(P11)、活化部分凝血活酶时间(APTF)、凝血酶时间(1Tr)的水平,并作对比分析。结果SLE组D—D、VWF-Ag、TM和t-PA明显高于对照组(P〈0.01);肾损害组上述四项指标明显高于非肾损害组(P〈0.01);与对照组比较,PT、Am明显缩短(P〈0.01);TT和FIB两项指标无统计学意义(P〉0.05)。结论D—D、VWF:Ag、TM、FDP和t—PA的水平变化与系统性红斑狼疮患者的肾损害明显关联,指标水平随着肾损害的加重而升高。  相似文献   

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