人精子染色体改良技术及其应用

课题研究提供了改良的人精子染色体直接制备，Ｇ显带核分析技术。在对８０例对象的人精子染色体直接制备，Ｇ显带核型分析中，成功率为６２．５％，较Ｔｅｍｐｌａｄｏ方法的成功率（５８．１％）进一步提高。通过对正常人，不育，流产对象的男性精子染色体研究，发现精子染色体数目和结构畸变率分别为：正常人２．３％和０％，不育１４．０％和４．８％，流产组４．５％和２．４％，不育和流产组的畸变率较正常人增加。在对５例染色     

人精子染色体制备方法的改良与应用

对８０例正常人组进行精子染色体直接制备、Ｇ显带核型分析，成功率为６２．５％，与Ｔｅｍｐｌａｄｏ方法５８．１％比较，Ｐ〈０．０５，有差异。精子染色体数目和结构畸变率分别为２．３％和０％。另对４６例临床对象进行精子染色体研究，精子染色体数目和结构畸变率分别为：不育组１５例，１４．０％和４．８％；流产组２６例，４．５％和２．４％，均正常人组增加，染色体平衡易位携带者组５例，均发现中期１易位型染色体的环状     

人精子包被抗原的提取法研究

人精子经TritonX－100处理，冷冻高速离心后，制成人精子膜蛋白粗制品，经SephadexG－75抗人精浆亲和层析柱提取精子膜蛋白，经SDS－PAGE电泳呈单一区带，分子最为52ku。用其免疫新西兰兔产生具有精子凝集和制动活性的特异性抗血清。以其作为抗原，经ELISA间接法测定不育男子精浆中抗精抗体。结果，20例生育男子组和50例不育男子级精浆中抗精抗体IgG、IgA分别为10％，5％和38％，30％。两组有显著性差异（P＜0．05）。表明，本法提取的精子包被抗原具有较高的特异性和免疫原性。     

分泌抗人精子单克隆抗体杂交瘤细胞的建立

用人精子免疫BALB/C小鼠,用杂交瘤技术制备出9株抗人精子单克隆抗体。经酶联免疫吸附试验和间接免疫荧光实验证明,9株抗人精子单克隆抗体均能与人精子产生特异性免疫反应。连续传代及液氮中保存的杂交瘤细胞分泌抗人精子单克隆抗体的滴度持续稳定。     

组合单克隆抗体提高人胃癌细胞系及组织反应性的研究

采用７种识别不同抗原决定簇的胃癌单克隆抗体３Ｈ１１、３Ｇ９、ＰＤ４、ＰＣ１、ＰＣ６、ＢＢ４．３、３Ｆ４在单一和配对组合应用情况下，观察其与人胃癌细胞系及胃癌组织的反应性。单抗３Ｇ６９、ＢＢ４．３及其组合作用于胃癌细胞系上，经流式细胞仪分析３Ｇ９、ＢＢ４．３与胃细胞结合的膜荧光阳性率分别为７４．２％和５４．９％。平均膜荧光强度分别为５３．６和６５．８．两者合后，在相同抗体浓度下，膜荧光阳性率为９７．４％（Ｐ＜０．０１）；平均膜荧光强度为１２５．５（Ｐ＜００１）．２６例胃癌组织冰冻切片红ＡＢＣ免疫过氧化物酶染色法显示，３Ｇ９、ＢＢ４．３经合后，在相同抗体浓度下与单一单克隆抗体相比，胃癌细胞着染范围增大，染色强度增高。阳性率由单一单克隆抗体的５０．０％，６５．４％，提高到组合后的９６．０％（Ｐ＜０．０１）．单克隆抗３Ｇ９与ＢＢ４．３组合后作用于正常胃癌组织均呈阴性反应，表明单克隆抗体经组合后并未降低单危险抗体的选择性。因此，合理采用组合的单克隆抗体可提高单克隆抗体与人胃癌细胞系及组织的反应性，降低抗原表达的异质性，从而提高单克隆抗体的载体效应。     

人精子甘露糖受体对精卵融合的影响

目的：进一步探讨人精子甘露糖受体（MR）在精卵融合中的作用。方法：采用改良后的甘露糖-琼脂糖凝胶亲和层析法分离纯化人精子MR，并将提纯的人精子甘露糖受体（pMR）作用于去透明带的金黄地鼠卵母细胞，应用透射电子显微镜技术和罗丹明偶联的兵豆凝集素（TAITC-LCA）免疫荧光标记技术观察pMR对卵子的影响。同时以pMR免疫小鼠获得抗MR抗血清，将其同人精子共同孵育一段时间，采用异种体外受精实验模型，即精子穿透试验（SPA），观察其对人精子与卵母细胞体外受精的影响。结果：（1）人精子MR能够诱发去透明带金黄地鼠卵母细胞中皮质颗粒的胞吐，并引起卵母细胞表面微绒毛形态和数量发生改变；（2）皮质颗粒胞吐后，其内容物可结合到卵3膜表面；（3）抗MR抗血清预处理精子可抑制精子与卵子的结合与融合，使受精率、穿透指数和结合指数下降，并均有剂量依赖性。结论：人精子MR在受精过程中起重要作用，其主要作用可能是介导精-卵膜融合并促进卵母细胞的活化。     

人精子穿透金黄仓鼠卵试验在男性不育症中的诊断价值

用人精子穿透金黄仓鼠卵试验（ＳＰＡ），对３４例已知有生育力的供者和４８例男性不育症患者进行了检测。３４例有生育力的供者，穿透率为２６％￣１００％，平均为８３．４％；４８例男性不育症患者，穿透率为０％￣３１％，平均为４．３％，穿透率≤１０％者占９３％。不育组ＳＰＡ穿透率与精液常规检查中的精子密度，精子活动率和畸形率无明显相关关系（Ｐ〉０．０５）。结果提示：ＳＰＡ是评价精子受精能力的一个 良好方法。     

人工流产后不孕患者抗精子抗体监测

采用酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ），对７８例因人工流产后所引起的不孕症、１４０例非人工流产不孕症以及２８例正常已婚育龄妇女进行血清抗精子抗体检测。结果：人工流产后不孕组、非人工流产不孕组及正常组抗精子抗体的阳性率分别为３３．３３％，１５．７１％，３．５７％。人工流产后不孕组血清中抗精子抗体的阳性率显著高于非人工流产不孕组和正常已婚育龄妇女（Ｐ＜０．０５）。提示：由人工流产后所引起的不孕症，在某些方面可能与免疫因素有关。子宫内膜的破损和炎症可能是抗精子抗体产生的一个重要诱因。     

人精子穿透金黄仓鼠卵试验在男性不育症中的诊断价值

用人精子穿透金黄仓鼠卵试验（ＳＰＡ），对３４例已知有生育力的供者和４８例男性不育症患者进行了检测。３４例有生育力的供者，穿透率为２６％～１００％，平均为８３．４％；４８例男性不育症患者，穿透率为０％～３１％，平均为４．３％，穿透率≤１０％者占９３％。不育组ＳＰＡ穿透率与精液常规检查中的精子密度，精子活动率和畸形率无明显相关关系（Ｐ＞０．０５）。结果提示：ＳＰＡ是评价精子受精能力的一个良好方法。     

人精子顶体酶活性及影响因素分析

作者报告了我室门诊３５６例男性不育患者精子顶体酶活性的测定结果，分析了某些因素对顶体酶活性的影响。结果表明，精子顶体酶活性呈正偏态分布，６３．２％低于正常值（１８μＩＵ／１０＾６精子）；相关检测表明，顶体酶活性与镜下精液白细胞数，精子畸形率显著负相关，而与精子活率，活力明显正相关，与精液支原体感染无关；卡方检验结果表明，精子顶体酶活性与精浆抗精子抗体存在无关。     

应用FITC-PSA荧光标记法检测人精子顶体结构及功能的初步研究

目的 :测定人类精子顶体结构及功能来探讨人精子的授精能力。方法 :应用络合异硫氰酸荧光素的豌豆凝集素 ( FITC-PSA )进行精子顶体荧光标记 ,分别测定 5 6例不育患者及 38例正常生育男子的精液标本 ,比较两组间精子顶体完整率 ,精子-透明带结合的差异。结果 :正常生育组的顶体完整率及精子 -透明带结合率均显著高于不育组 ( P <0 .0 1)。结论 :FITC-PSA荧光标记法操作简便 ,技术结果可靠 ,特异性强 ,具有良好的应用价值     

精子受精机能的实验研究

本实验应用 Balb/c 小鼠卵代替仓鼠卵作人精子穿透试验;用 ConA-Au 探针显示精子和卵表面的 ConA 受体。实验表明人精子穿透率,能育者为14.8%,不育者为10.32%,经抗精子抗体处理的为5.5%。小鼠精子表面 ConA-Au 标记主要分布在头部,特别是顶体前端和顶体后区,当获能和顶体反应时,前者标记减少;在此相当时期,人精子顶体外膜、内膜及顶体后区也出现标记。结果提示顶体后区在受精中具有重要意义。经 D-甘露糖或抗精子抗体处理及免疫不育者的精子均未被 ConA-Au 标记。小鼠卵透明带表面见有少量 ConA-Au 标记,去透明带后,卵膜上未见标记。本文对精子与卵识别机制作了讨论。     

Ca^2＋对人精子穿透无透明带金黄地鼠卵的影响

应用人精子穿透无透明带金黄地鼠卵（SPA）技术，在BWW培养液中分别以不同浓度的Ca^ （1．71mmol,3.42mmol,5.13mmol,1.71mmol和ETA0．50mmol,1.71mmol和EGTA1．71mmol),对10例人精液标本进行分析，研究Ca^ 对人精子体外获能和穿透无透明带金黄地鼠卵的生物学效应，同时用透射电镜观察精子的亚细胞结构变化。结果表明：对照组（Ca^ 1．71mmol)穿透率为82．2％，而试验组的穿透率显著降低（P＜0．01），分别为9．5％，0，17．2％，0。Ca^ 对人精子亚微结构的影响主要发生在精子的顶体和颈部。本试验初步表明Ca^ 与人精子获能和顶体反应存在着一定的依存关系，Ca^ 浓度过高（＞1．71mmol）或过低（＜1．71mmol)，对精子获和穿透能力都有明显的抑制作用。     

不同密度绿脓杆菌体外对人精子前向运动百分率的影响

为了阐明绿脓杆菌体外对人精子的运动有无影响,先制备不同密度的绿脓杆菌悬液,再将其在体外与10例健康成年生育男性的经上游优化处理精子一起孵化不同时间,采用德国Mika计算机辅助的精子分析系统测定人精于前向运动百分率。结果显示:细菌与精子的比例分别为10:10、100、1000或10000孵化0、2、4和6h后,人精子前向运动百分率无明显变化。这说明当绿脓杆菌与人精子比例≤1:1孵化6h以内时,绿脓杆菌体外对人精子前向运动百分率无明显影响。     

精子染色质扩散试验及末端转移酶标记法检测精子脱氧核糖核酸完整性

目的 比较精子染色质扩散试验(SCD)和脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)检测精子DNA完整性.方法 对20名已生育的成年健康男性和32例不育患者的精液用上游法筛选得到活动精子,同时进行SCD和TUNEL.结果 不育组和生育组DNA损伤精子百分率的SCD检测结果分别为(12.8±5.8)%和(7.6±3.3)%,2组比较差异有统计学意义(t=3.576,P=0.001);TUNEL检测结果分别为(11.1±5.1)%和(6.8±2.8)%,2组比较差异有统计学意义(t=3.467,P=0.001).SCD与TUNEL检测结果在不育组(r=0.841,P=0.000)和生育组(r=0.823,P=0.000)均具有明显的线性相关关系.生育组SCD检测结果与TUNEL检测结果比较差异无统计学意义(t=1.996,P=0.060),而不育组SCD检测结果明显高于TUNEL检测结果,差异有统计学意义(t=3.023,P=0.005).结论 精子DNA损伤与男性不育有关.与TUNEL比较,SCD是一种更为准确、简单、廉价的检测精子DNA完整性的方法.     

精子凝集试验、固相酶法和ELISA法检测不孕症夫妇血清抗精子抗体的分析

采用精子凝集试验、固相酶法和ELISA法对102对不明原因的不孕症夫妇进行了血清中的抗精子抗体检测。结果发现,不明原因的不孕症夫妇血清抗精子抗体阳性检出率为43.5％。明显地高于生育组(5.6％),P<0.01。三种检测方法中,ELISA 法敏感度较高,是检测抗精子抗体较为理想的方法。     

囊性纤维化跨膜转导调节因子表达率与人精子受精能力的关系

目的：研究人精子囊性纤维化跨膜转导调节因子（cystic fibrosis transmembrane conduc-tanceregulator,CFTR）表达率与精子受精能力间的关系。方法：运用间接免疫荧光法及蛋白印迹分析法研究CFTR在人精子上的表达及其在不同类型（生育组、不明原因性不育组及不育组）精子上的表达率情况。结果：通过间接免疫荧光法发现CFTR表达在人精子赤道板上,蛋白印迹分析进一步证实人精子中存在CFTR,分子量为170kD;采用间接免疫荧光技术,CFTR在生育组、不明原因性不育组及不育组（包括畸形精子症、弱精症、少精症）上的表达率有显著差异：CFTR在生育组精子上的表达率（88.13%±3.79%）远高于不明原因性不育组（52.93%±15.36%）及不育组（35.89%±20.41%）（P〈0.01）。结论：CFTR表达率下降与人精子受精能力降低有关。     

抗精子抗体ELISA检测法及其应用

建立了用精子可溶性抗原包被的ELISA法,检测了100例处女血清,均为阴性,17例有生育能力者和1000例不育患者血清的阳性率分别为5.9％和22％,抗体检出率符合国外多数学者的结果。重复性试验定性符合率达97％。表明用该法检测抗精子抗体具有敏感、特异、稳定等特点,可获较为满意的结果。     

SEMEN ANALYSIS OF 542 CHINESE MEN WITH NORMAL FERTILITY

Semen analysis of 542 normal fertile Chinese men was done in various districts of China, and the normal value was obtained. The items of semen examination include semen volume, liquefaction, viscosity, pH, sperm density, total number of sperms per ejaculation, sperm motility after 1 to 6 h of ejaculation, sperm forward progression, sperm morphology, etc. Moreover, the testicle volume was calculated. In order to evaluate the motility of the sperm, we used single or multiple exposure photograph in 76 cases, sperm capillary tube penetrating test in 110 cases, and sperm velocity test in 159 cases.     

精子形态正常率与体外受精妊娠结局的关系

目的：探索精子形态对卵子受精率、卵裂率及临床妊娠率的影响,为不孕症患者行辅助生殖技术治疗前助孕方式的选择提供理论依据也为辅助生殖技术方法的改善,积累理论和实践经验。方法：回顾性分析2008年1月至12月接受辅助生殖治疗的1 369例患者的精液分析资料,根据患者精子形态分为4组（≤5.0%,5.1%～10.0%,10.1%～15.0%,＞15.0%）,分别采用体外受精（IVF;n=490)或卵胞浆精子注射(ICSI; n=261）的受精方式。供精者（618例）精子也分为4组（14.0%～17.0%, 17.1%～19.0%,19.1%～23.0%及＞23.0%）,采用IVF受精方式。比较各组精子形态与受精率、卵裂率及临床妊娠率的关系。结果： IVF（病人或供精者）受精方式下,各形态精子组的临床妊娠率、受精率差异有统计学意义（P＜0.05),但卵裂率差异无统计学意义（P＞0.05);ICSI受精方式下,各形态精子组的临床妊娠率、受精率、卵裂率间差异无统计学意义(P＞0.05)。结论：精子形态异常影响IVF成功率;精子形态对ICSI治疗结局无显著影响,对精子形态异常患者采用ICSI技术为最佳。