肾小球内皮细胞对系膜细胞表达细胞粘附分子的影响

肾小球内皮细胞对系膜细胞表达细胞粘附分子的影响傅博程庆砾陈香美李文歌肾小球内皮细胞与肾小球基底膜、系膜细胞相毗邻，肾小球内皮细胞的损伤往往可以导致系膜细胞的病变［１］。为了探讨内皮细胞与系膜细胞相互关系在肾小球损伤演变过程中的作用，我们观察了肾小球内...     

脂联素对高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞血管内皮生长因子表达的影响

目的 观察脂联素对高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞表达血管内皮生长因子(VEGF)的影响,探讨脂联素在糖尿病肾病中可能的保护作用.方法 体外培养大鼠肾小球系膜细胞,随机分为7组:对照组、高糖A组、高糖B组(培养液葡萄糖浓度分别为5.6 mmol/L、15 mmol/L、30 mmol/L);脂联素A、B、C、D组(各组培养液葡萄糖浓度均为30 mmol/L+脂联素,脂联素浓度依次为2.5 μg/ml、5 μg/ml、10 μg/ml、20 μg/ml),作用24 h,RT-PCR法测定各组细胞VEGF mRNA表达水平;ELISA法测定各组上清液中VEGF蛋白的含量.结果 与对照组相比,高糖A组、高糖B组大鼠肾小球系膜细胞VEGF mRNA及VEGF蛋白表达升高(P＜0.05);脂联素各组大鼠肾小球系膜细胞VEGF mRNA及VEGF蛋白表达低于高糖B组(P＜0.05).结论 高糖可刺激大鼠肾系膜细胞VEGF表达增高,脂联素可抑制高糖环境下系膜细胞对VEGF的表达.     

高糖诱导血管内皮细胞表达结缔组织生长因子的影响

目的观察高糖对血管内皮细胞表达结缔组织生长因子（connective tissue growth faeotr, CTGF）的影响。方法体外培养人脐静脉内皮细胞（human umibilical vein endotheial cells,HUVECs）,分别在含正常葡萄糖（5．5mM）、高糖（25mM葡萄糖）、25mM甘露醇及高糖加转化生长因子β1（transforming frowth factorβ1,TGFβ1）中和抗体的培养基中培养24、48或72小时,并在相应时间点收集细胞总RNA及总蛋白。分别用半定量RT-PCR及Western Blot方法检测CTGFmRNA及蛋白表达水平的变化。结果与正常葡萄糖培养及25mM甘露醇对照组相比,高糖刺激24小时后,HUVECs的CTGFmRNA及蛋白表达水平均显著增加,并且这种作用持续到48小时。TGFβ1的中和抗体能部分阻断高糖的这种刺激作用。结论高糖能诱导HUVECs表达CTGF,而内皮细胞CTGF的表达增加可能是高糖参与动脉粥样硬化等心血管疾病发生的机制之一。     

高糖对大鼠系膜细胞NADPH氧化酶的影响

目的 探讨高糖对大鼠系膜细胞NADPH氧化酶表达及活性的影响.方法 高糖体外培养大鼠系膜细胞,RT-PCR技术检测系膜细胞内NADPH氧化酶亚基p22phox mRNA的表达,流式细胞术检测超氧离子(.O2-)和过氧化氢(H2O2)反映NADPH氧化酶活性.结果 高糖(10mM)培养3天及5天组,p22phox mRNA表达较正常组和培养1天组升高(P<0.05).随着葡萄糖浓度升高和作用时间的延长随着葡萄糖浓度升高和作用时间的延长,.O2-和H2O2的表达增多(P<0.05).结论 高糖使系膜细胞NADPH氧化酶表达增多、活性增强.     

高糖对原代培养人系膜细胞表达TGF—β1的影响

目的了解高糖对原代培养的人肾小球系膜细胞表达TGF—β1的影响,并进一步探讨糖尿病肾病的发病机制。方法取自愿水囊引产的胎儿肾并解剖取肾皮质剪碎,应用肾皮质组织块法合优生选择法培养人肾小球系膜细胞。以ELISA方法检测TGF-β1的表达。结果与正常组相比较,高糖组TGF-β1在24、48、72h均显著升高（P〈0．05或P〈0．01）。结论高糖能够升高系膜细胞TGF—β1分泌,这可能与肾小球系膜细胞细胞外基质积聚和糖尿病肾病发病密切相关。     

高糖环境下肾小球系膜细胞和内皮细胞相互作用对活性氧产生的影响以及茶多酚的干预作用

目的 :探讨在高糖环境下肾小球系膜细胞与内皮细胞相互作用对活性氧产生的影响和茶多酚的干预作用。方法 :系膜细胞和内皮细胞单独分别培养和共同培养 ,分正常对照组、高糖组及茶多酚干预组 ,培养 0、12、3 6h后 ,用分光光度法检测培养液中丙二醛 (MDA)含量及超氧化物歧化酶 (SOD)活性。结果 :高糖共同培养时SOD活性比两者分别单独培养时更低(P <0 .0 1) ;共同培养时茶多酚干预组的SOD活性显著高于高糖组 (P <0 .0 1)。高糖共同培养时MDA含量较两种细胞单独培养明显增高 ,高于两种细胞单独培养的总和 (P <0 .0 1) ;共同培养时茶多酚干预组MDA含量低于高糖组 (P <0 .0 1)。结论 :( 1)高糖环境下 ,系膜细胞和内皮细胞存在相互作用 ,这种作用能促进肾细胞活性氧的产生 ;( 2 )茶多酚通过干预活性氧的产生影响细胞间相互作用     

高糖环境对人肾小球系膜细胞表达结缔组织生长因子及其受体蛋白的影响

目的 探讨高糖环境对体外培养的人肾小球系膜细胞(HMC)表达结缔组织生长因子(CTGF)及其受体--低密度脂蛋白受体相关蛋白(LRP)的影响以及相应的信号机制。方法 以体外培养的HMC为研究对象,采用双抗体夹心酶联免疫吸附法(ABC ELISA)测定正常糖组(NG组)、高糖组(HG组)和甘露醇组(MG组)培养液中CTGF、人磷酸化细胞外信号调节激酶(pERK)及LPR的浓度变化,分别观察高糖环境对系膜细胞CTGF蛋白表达、丝裂素激活蛋白激酶(MAPKS)信号通路的活化以及CTGF受体LRP表达的影响。结果 HMC本身存在基础水平的CTGF蛋白表达,HG组培养1d后,CTGF蛋白表达升高,峰值出现在第3天,自第4天开始下降;而NG组、MG组的CTGF蛋白表达未随时间发生显著变化;高糖环境下HMC外信号调节激酶(ERK)出现动态活化：1h即开始检测到pERK升高,峰值出现在第8至24小时,于48h内降至基础水平,而NG组、MG组在各时点均未能检测到pERK表达;加入ERK活化特异抑制剂PD98059后发现高糖环境对HMC表达CTGF蛋白增加的影响被抵消;另外,高糖环境未影响LRP的表达。结论 高糖环境下HMC表达CTGF蛋白增加,但未增加CTGF受体LRP的表达,初步明确CTGF的高表达是通过磷酸化激活ERK实现的。     

血管内皮细胞生长因子对体外培养大鼠凋亡椎间盘细胞的影响

目的观察血管内皮细胞生长因子（VEGF）对体外培养大鼠椎间盘细胞及基质代谢的影响。方法建立大鼠椎间盘细胞培养体系,体外单层培养大鼠椎间盘细胞,取生长良好的第2代细胞实验,使用抗-Fas抗体诱导凋亡,加入不同浓度（10,100,1000μg/L）的碱性成纤维生长因子影响椎间盘细胞的凋亡及代谢过程,利用流式细胞仪-PI标记法检测椎间盘细胞凋亡情况;利用氯胺-T法和DMB比色法分别检测细胞培养液中羟脯氨酸及蛋白多糖的含量。结果（1）不同浓度的血管内皮细胞生长因子（10,100,l 000μg/L）椎间盘细胞凋亡率（87.62±11.06）%、（53.30±9.23）%、（16.75±4.21）%与正常组比较均有显著性差异（P〈0.01）。（2）随着血管内皮细胞生长因子浓度的增加（10,100,1 000μg/L）,羟脯氨酸含量、蛋白多糖含量明显增加,[羟脯氨酸含量（6.71±0.33）、（9.12±0.41）、（11.58±0.12）μg/L,P〈0.01;蛋白多糖含量（23.21±2.87）、（32.45±5.23）、（37.18±3.22）μg/L,P〈0.01]。血管内皮细胞生长因子的浓度与两者呈正相关（ra=0.972,P〈0.01;rb=0.907,P〈0.01）。结论血管内皮细胞生长因子可以抑制体外培养的椎间盘细胞凋亡,促进椎间盘细胞基质中胶原及蛋白多糖的合成。     

血管紧张素Ⅱ、卡托普利及氯沙坦对血管内皮细胞凋亡的影响

目的：探讨血管紧张素Ⅱ在不同浓度和不同作用时间下对血管内皮细胞凋亡的作用及卡托普利和氯沙坦的影响。方法：采用流式细胞术测定在血管紧张素Ⅱ不同浓度和不同作用时间下血管内皮细胞凋亡率的变化和卡托普利、氯沙坦的影响。结果：血管紧张素Ⅱ可明显促进血管内皮细胞凋亡，且其作用呈剂量依赖性和时间依赖性；单用氯沙坦对细胞凋亡无明显作用，卡托普利有一定的作用，二者合用时抑制作用较明显。结论：血管紧张素Ⅱ具有明显的促血管内皮细胞凋亡的作用；合用卡托普利和氯沙坦可明显抑制内皮细胞凋亡。     

茶多酚对高糖所致人肾小球系膜细胞活性氧产生的影响

目的：探讨高糖对人肾小球系膜细胞活性氧产生的影响以及茶多酚对其的干预作用。方法：应用比色法检测高糖作用后培养系膜细胞上清液中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH—PX)的活力和丙二醛(MDA)、超氧阴离子自由基(O2^-)的水平，以及加入茶多酚后各指标的改变。结果：高糖可降低系膜细胞培养上清液中SOD和GSH-PC的活力，增加MDA和O2^-的含量；茶多酚可提高上清液中SOD和GSH—PX的活力，降低MDA和O2^-的含量。结论：高糖可导致人肾小球系膜细胞活性氧产生增多，而茶多酚可进行有效干预。     

人参三七组方对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子分泌及其受体2表达的影响

目的：探讨益气活血中药人参三七组方对人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cell,HUVEC）血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）及其受体2（vascular endothelialgrowth factor receptor-2,VEGFR-2）表达的影响。方法：体外培养HUVEC,分为高剂量人参三七组方（0.4 mg/mL）组、中剂量人参三七组方（0.2 mg/mL）组、低剂量人参三七组方（0.1 mg/mL）组,另设碱性成纤维细胞生长因子（bovine basic fibroblast growth factor,bFGF,320 U/mL）阳性对照组和只加培养液的空白对照组。酶联免疫吸附测定法检测细胞上清液中的VEGF含量,免疫细胞化学法检测VEGFR-2阳性细胞数及其光密度值,蛋白印迹法检测VEGFR-2蛋白的表达。结果：与空白对照组比较,高剂量人参三七组方组和bFGF组细胞上清液中VEGF含量增加（P〈0.05）,VEGFR-2阳性细胞数及光密度值增加,细胞中VEGFR-2蛋白表达增强。结论：促进HUVEC分泌VEGF和表达VEGFR-2可能是人参三七组方促血管生成的基础。     

亚硒酸钠对大鼠肾小球系膜细胞表达VEGF的调控

目的 观察亚硒酸钠对大鼠肾小球系膜细胞系HBZY-1表达血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）的影响,从而研究硒在防治糖尿病肾病中的作用机制。方法 分别以高葡萄糖、高胰岛素、过氧化氢和糖基化终产物孵育细胞系HBZY-1;先给予亚硒酸钠预处理细胞后,再分别给予上述4种因素孵育细胞系HBZY-1,观察细胞系HBZY-1VEGF蛋白表达。结果 4种刺激因素均可作为独立因素,导致细胞系HBZY-1VEGF蛋白表达量增加;亚硒酸钠能抑制上述4种因素所致的VEGF蛋白表达。结论 亚硒酸钠通过抑制VEGF在细胞系HBZY-1中的表达,从而有效地防治糖尿病肾病的发生发展。     

醛固酮对大鼠肾小球系膜细胞结缔组织生长因子基因表达的影响

目的 探讨醛固酮(ALD)对大鼠肾小球系膜细胞结缔组织生长因子(CTGF)基因表达的影响.方法 ①以不同浓度的ALD (10-11、10-10、10-9、10-8、10-7mol/L)刺激肾小球系膜细胞72 h后,用半定量KT-PCR.法检测细胞中CTGF mRNA的表达.②以10-9 mol/L的ALD刺激肾小球系膜细胞不同时间(12、24、48、72 h)后,用半定量RT-PCR法检测细胞中CTGF mRNA的表达.结果 半定量RT-PCK结果显示,随着ALD浓度的升高,CTGF mKNA的表达量(以CTGF/GAPDH mRNA表示)明显增加.在10-7mol/L时达高峰,与对照组比较,差异有显著性(P＜0.01).表明ALD促进肾小球系膜细胞CTGF mRNA的表达,且具有一定的剂量-反应关系.以10-7mol/L的ALD作用于大鼠肾小球系膜细胞12～72h,随着作用时间的延长,CTGF mRNA的表达量明显增加,在72 h时达高峰,与对照组比较,差异有显著性(P＜0.01).表明ALD促进系膜细胞CTGF mRNA的表达,且具有一定的时间-效应关系.结论 ALD促进大鼠肾小球系膜细胞CTGF mRNA的表达,从而促进慢性肾脏病进展.     

高糖对体外培养兔视网膜Müller细胞表达血管内皮生长因子的影响

目的探讨高糖对体外培养兔视网膜Müller细胞表达血管内皮生长因子（VEGF）的影响。方法体外培养兔视网膜Müller细胞，采用免疫细胞化学方法半定量检测不同浓度葡萄糖对视网膜Müller细胞表达VEGF的影响。结果高糖可以明显增加Müller细胞VEGF的表达，且具有一定的浓度依赖性。结论高糖促进体外培养兔视网膜Müller细胞VEGF的表达，提示高血糖作为糖尿病视网膜病变（DR）的始动因素，其可能机制之一为诱导Müller细胞VEGF的表达。     

血管内皮生长因子对缺氧诱导内皮细胞凋亡的影响

目的 探讨缺氧对培养人静脉内皮细胞凋亡的影响及血管内皮生长因子的干预性影响。方法 （1）人脐静脉内皮细胞的培养及鉴定。（2）建立人脐静脉内皮细胞缺氧模型,TUNEL法观测不同缺氧时间（0、12、24、48h）对内皮细胞凋亡的影响及血管内皮生长因子的干预作用。结果 随缺氧时间延长,NUVECs凋亡率显著升高,血管内皮生长因子抑制缺氧导致的内皮细胞凋亡。结论 内皮细胞的过渡凋亡是引起内皮功能障碍的一个重要因素,血管内皮生长因子通过抑制内皮细胞凋亡,而具有内皮细胞保护作用。     

血管抑素下调人舌鳞癌细胞血管内皮生长因子的表达

目的探讨血管抑素（angiostatin,AS）对人舌鳞癌细胞血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）表达的影响。方法将Tca8113人舌鳞癌细胞移植到18只裸鼠皮下,用随机数字表法将裸鼠分成3组（每组6只）。PBS组：注射PBS;AS（250ng）组：注射250ng纯化AS;AS（30μg）组：注射30μg纯化As,腹腔注射,2次／d,同时测量肿瘤的大小,2次／周。21d后处死小鼠,将取出的每个肿瘤2等分,一半用免疫组织化学检测VEGF及其两个受体（VEGFR1、VEGFR2）和CD34,用TUNEL法检测肿瘤细胞的凋亡;另一半用半定量RT-PCR检测VEGF、VEGFRl和VEG-FR2的mRNA表达。结果AS（250ng）组和AS（30μg）组中,细胞凋亡指数（AI）明显增加（P〈0．05）;而肿瘤体积、微血管密度（MVD,用CD34抗体标记并用来评价肿瘤血管生成）及VEGF、VEGFR1和VEGFR2在蛋白质和mRNA的水平表达,都有明显降低（P〈0．05）,且AS（30μg）组更为显著。结论AS下调人舌鳞癌细胞VEGF的表达且呈剂量依赖性。     

血管内皮生长因子在羊膜为载体培养的角膜上皮细胞中的表达

目的探讨血管内皮生长因子(VEGF)在羊膜为载体培养的角膜上皮细胞中的表达情况。方法体外羊膜为载体培养大鼠角膜上皮细胞(羊膜载体组),以无载体培养的角膜上皮细胞为对照组。逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测两组细胞VEGF mRNA表达,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测两组细胞VEGF蛋白表达。结果羊膜载体组角膜上皮细胞VEGF mRNA含量为0.66±0.08,蛋白表达量为1 605.22±196.08;对照组角膜上皮细胞VEGF mRNA含量为0.83±0.10,蛋白表达量为1 614.39±142.43;两组细胞VEGF表达水平无显著差异。结论羊膜载体不能有效抑制角膜上皮细胞VEGF的表达。     

辛伐他汀对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子表达影响的初步研究

目的:观察辛伐他汀对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)及其受体表达的影响.方法:将人脐静脉内皮细胞分为辛伐他汀组、TNF-α组、辛伐他汀+TNF-α组、IL-1β组、辛伐他汀+IL-1β组和空白对照组.采用免疫细胞化学方法,观察TNF-α和IL-1β对细胞中VEGF及其受体表达的影响,并观察辛伐他汀的干预作用.结果:TNF-α组和IL-1β组的VEGF及其受体表达明显高于空白对照组(P＜0.05),辛伐他汀十TNF-α组和辛伐他汀+IL-1β组表达分别明显低于TNF-α组和IL-1β组(P＜0.05).结论:辛伐他汀可以抑制炎性刺激导致的人脐静脉内皮细胞VEGF及其受体的表达.     

氯沙坦对高糖状态下内皮细胞的保护作用及其机制探讨

目的：探讨高糖环境下氯沙坦对内皮细胞的保护作用及其机制。方珐：比色法测定内皮细胞条件培养上清中超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）的活性和丙二醛（MDA）水平，RT—PCR方法分析细胞yEGFmRNA的表达水平，ELISA方法检测细胞分泌的VEGF蛋白。结果：在高糖处理的细胞条件培养上清中SOD和CAT活性降低，而MDA含量升高（P〈0．05），同时细胞yEGF mRNA和蛋白质表达增加（P〈0．05）；而氯沙坦可削弱上述变化，降低内皮细胞MDA含量、增强SOD与CAT活性，以及下调VEGF mRNA和蛋白质表达（P〈0．05）。结论：高糖可诱导内皮细胞活性氧产生增多，抗氧化酶活性下降，导致细胞氧化平衡失调，使yEGF mRNA表达与蛋白分泌增加，促进高糖时内皮细胞病变的进展，提示氯沙坦对高糖状态下的内皮细胞的保护作用可能与调节内皮细胞氧化平衡和抑制内皮细胞的活化有关。