氯沙坦对高糖状态下内皮细胞的保护作用及其机制探讨

目的：探讨高糖环境下氯沙坦对内皮细胞的保护作用及其机制。方珐：比色法测定内皮细胞条件培养上清中超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）的活性和丙二醛（MDA）水平，RT—PCR方法分析细胞yEGFmRNA的表达水平，ELISA方法检测细胞分泌的VEGF蛋白。结果：在高糖处理的细胞条件培养上清中SOD和CAT活性降低，而MDA含量升高（P〈0．05），同时细胞yEGF mRNA和蛋白质表达增加（P〈0．05）；而氯沙坦可削弱上述变化，降低内皮细胞MDA含量、增强SOD与CAT活性，以及下调VEGF mRNA和蛋白质表达（P〈0．05）。结论：高糖可诱导内皮细胞活性氧产生增多，抗氧化酶活性下降，导致细胞氧化平衡失调，使yEGF mRNA表达与蛋白分泌增加，促进高糖时内皮细胞病变的进展，提示氯沙坦对高糖状态下的内皮细胞的保护作用可能与调节内皮细胞氧化平衡和抑制内皮细胞的活化有关。     

高糖、茶多酚对人系膜细胞结缔组织生长因子、纤维连接蛋白mRNA表达的影响

目的:研究高糖条件下系膜细胞氧化失衡与结缔组织生长因子(CTGF)、纤维连接蛋白(FN)mRNA表达之间的关系,通过抗氧化剂茶多酚证实氧化应激在糖尿病肾硬化发展中的作用。方法:高糖(35mmol/LD鄄糖)条件下培养系膜细胞,加或不加茶多酚(20μg/ml),采用分光光度法检测不同时间点(0、12、24、36、48h)的上清液中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性、丙二醛(MDA)含量及RT鄄PCR法细胞CTGF、FNmRNA的表达水平。结果:高糖显著降低上清SOD、CAT活力(P<0.05),升高MDA水平(P<0.05),刺激系膜细胞CTGF、FNmRNA高表达;茶多酚能有效抑制高糖的上述作用(P<0.05)。结论:①高糖条件下活性氧生成增多,抗氧化酶活性下降,氧化失衡,促进组织纤维化的进展。②茶多酚通过调节氧化失衡抑制纤维化的进展。③氧化平衡失调在DN发生、发展中具有重要的作用。     

高糖环境下肾小球系膜细胞和内皮细胞相互作用对活性氧产生的影响以及茶多酚的干预作用

目的 :探讨在高糖环境下肾小球系膜细胞与内皮细胞相互作用对活性氧产生的影响和茶多酚的干预作用。方法 :系膜细胞和内皮细胞单独分别培养和共同培养 ,分正常对照组、高糖组及茶多酚干预组 ,培养 0、12、3 6h后 ,用分光光度法检测培养液中丙二醛 (MDA)含量及超氧化物歧化酶 (SOD)活性。结果 :高糖共同培养时SOD活性比两者分别单独培养时更低(P <0 .0 1) ;共同培养时茶多酚干预组的SOD活性显著高于高糖组 (P <0 .0 1)。高糖共同培养时MDA含量较两种细胞单独培养明显增高 ,高于两种细胞单独培养的总和 (P <0 .0 1) ;共同培养时茶多酚干预组MDA含量低于高糖组 (P <0 .0 1)。结论 :( 1)高糖环境下 ,系膜细胞和内皮细胞存在相互作用 ,这种作用能促进肾细胞活性氧的产生 ;( 2 )茶多酚通过干预活性氧的产生影响细胞间相互作用     

PPARα激动剂对高糖刺激的肾系膜细胞PEDF和VEGF mRNA表达的影响

目的:研究色素上皮细胞衍生因子(PEDF)和血管内皮生长因子(VEGF)在糖尿病肾病中的作用以及PPARα激动剂与糖尿病肾病的关系。方法:将培养的大鼠HBZY-1肾小球系膜细胞株分为6组,高糖作为刺激因子,PPARα激动剂WY14643作为干预因素。分别设正常组,高糖组,高糖加WY14643治疗组(包括不同的WY14643浓度)以及高糖加WY14643溶剂对照组。用实时定量PCR法测定各组系膜细胞PEDF以及VEGF mRNA表达。结果:(1)与正常组相比较,高糖组肾系膜细胞PEDF mRNA的表达明显降低,而WY14643可逆转高糖导致的肾系膜细胞PEDF mRNA表达的降低。(2)高糖组肾系膜细胞VEGF mRNA的表达较正常组明显增加,而WY14643可减少高糖导致的肾系膜细胞VEGF mRNA表达的增加。结论:高糖可抑制大鼠肾系膜细胞PEDF并增加VEGF的表达,而PPARα激动剂可在一定程度上逆转高糖导致的这种改变。     

脂联素对高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞血管内皮生长因子表达的影响

目的 观察脂联素对高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞表达血管内皮生长因子(VEGF)的影响,探讨脂联素在糖尿病肾病中可能的保护作用.方法 体外培养大鼠肾小球系膜细胞,随机分为7组:对照组、高糖A组、高糖B组(培养液葡萄糖浓度分别为5.6 mmol/L、15 mmol/L、30 mmol/L);脂联素A、B、C、D组(各组培养液葡萄糖浓度均为30 mmol/L+脂联素,脂联素浓度依次为2.5 μg/ml、5 μg/ml、10 μg/ml、20 μg/ml),作用24 h,RT-PCR法测定各组细胞VEGF mRNA表达水平;ELISA法测定各组上清液中VEGF蛋白的含量.结果 与对照组相比,高糖A组、高糖B组大鼠肾小球系膜细胞VEGF mRNA及VEGF蛋白表达升高(P＜0.05);脂联素各组大鼠肾小球系膜细胞VEGF mRNA及VEGF蛋白表达低于高糖B组(P＜0.05).结论 高糖可刺激大鼠肾系膜细胞VEGF表达增高,脂联素可抑制高糖环境下系膜细胞对VEGF的表达.     

黄芪注射液对高糖所致血管内皮细胞损伤的保护作用

目的研究黄芪对高糖所诱导的血管内皮细胞损伤的保护作用。方法采用人脐静脉血管内皮细胞株EVC-304,在培养液中加入不同浓度的黄芪,孵育24h,高糖诱导损伤,再培养4h后,终止培养。观察细胞形态学变化并检测细胞活力、蛋白质含量,检测VEGFmRNA及蛋白的表达。结果正常对照组及黄芪各剂量组细胞活力、蛋白质含量均高于高糖损伤对照组,差异有显著性(P<0.05)。高糖明显抑制VEGF的活性和表达,黄芪则有明显的修复作用。结论黄芪可以减轻高糖对血管内皮细胞的损伤,具有一定保护作用。     

高糖对人脐静脉内皮细胞GSH-PX活力、NOS及ICAM-1表达的影响

目的:探讨体外培养条件下高糖状态对血管内皮细胞的影响。方法:培养人脐静脉内皮细胞株ECV3 0 4,分为对照组和高糖组,用分光光度比色法检测谷胱甘肽过氧化物酶(GSH PX)活力,RT- PCR法检测细胞间粘附分子1(ICAM- 1)mRNA水平,免疫细胞化学法观察内皮细胞型一氧化氮合酶(eNOS)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的蛋白表达。结果:高糖组GSH- PX活力明显下降,eNOS、iNOS蛋白表达明显增高,ICAM- 1mRNA水平也显著上升。结论:在较短时间内糖浓度升高可引起血管内皮细胞GSH PX活力下降,ICAM -1mRNA、eNOS和iNOS蛋白表达增高,对糖尿病血管病变早期进展起一定的作用。     

高糖环境下肾小球细胞间相互作用对TGF-β1表达的影响及茶多酚的干预作用

目的探讨在高糖环境下人肾小球系膜细胞与内皮细胞间相互作用对TGF-β1mRNA表达的影响和茶多酚的干预作用.方法建立系膜细胞和内皮细胞共培养模型,分空白对照组、高糖组、茶多酚干预组和茶多酚对照组,培养0、12、36 h后,应用RT-PCR法检测模型中两种细胞转化生长因子-β1(TGF-β1)的表达情况.结果高糖可上调共培养模型中系膜细胞和内皮细胞TGF-β1mRNA表达,其作用显著强于单独培养的系膜细胞和内皮细胞,茶多酚可降低共培养模型中细胞TGF-β1mRNA表达,且效果优于单独培养.结论(1)高糖环境下系膜细胞和内皮细胞间存在相互作用,这种作用能促进两种细胞TGF-β1mRNA高表达.(2)茶多酚通过对TGF-β1mRNA表达的抑制影响细胞间相互作用.     

高糖环境下肾小球细胞间相互作用对TGF-β1表达的影响及茶多酚的干预作用

目的：探讨在高糖环境下人肾小球系膜细胞与内皮细胞间相互作用对TGF-β1mRNA表达的影响和茶多酚的干预作用。方法：建立系膜细胞和内皮细胞共培养模型，分空白对照组、高糖组、茶多酚干预组和茶多酚对照组,培养0、12、36h后，应用RT-PCR法检测模型中两种细胞转化生长因子-β1(TGF-β1)的表达情况。结果：高糖可上调共培养模型中系膜细胞和内皮细胞TGF-β1 mRNA表达，其作用显著强于单独培养的系膜细胞和内皮细胞，茶多酚可降低共培养模型中细胞TGF--β1 mRNA表达，且效果优于单独培养。结论：(1)高糖环境下系膜细胞和内皮细胞问存在相互作用，这种作用能促进两种细胞TGF-β1 mRNA高表达。(2)茶多酚通过对TGF-β1 mRNA表达的抑制影响细胞间相互作用。     

茶多酚对高糖所致人肾小球系膜细胞活性氧产生的影响

目的：探讨高糖对人肾小球系膜细胞活性氧产生的影响以及茶多酚对其的干预作用。方法：应用比色法检测高糖作用后培养系膜细胞上清液中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH—PX)的活力和丙二醛(MDA)、超氧阴离子自由基(O2^-)的水平，以及加入茶多酚后各指标的改变。结果：高糖可降低系膜细胞培养上清液中SOD和GSH-PC的活力，增加MDA和O2^-的含量；茶多酚可提高上清液中SOD和GSH—PX的活力，降低MDA和O2^-的含量。结论：高糖可导致人肾小球系膜细胞活性氧产生增多，而茶多酚可进行有效干预。     

螺内酯对高糖诱导的肾小球系膜细胞氧化应激的影响

目的:观察螺内酯对高糖诱导的肾小球系膜细胞氧化应激的影响,并且探讨该作用是否与MAPKs家族信号通路相关?方法:采用高糖和(或)螺内酯处理人肾小球系膜细胞株(HMC)后,DHE荧光染色检测细胞内活性氧(ROS)水平,NBT试剂盒法检测细胞内超氧化物歧化酶(SOD)活性,Western blot法检测MAPKs家族ERK?JNK?p38MAPK的磷酸化及总蛋白水平?结果:DHE染色结果显示,高糖可明显增加HMC内ROS含量,而给予螺内酯干预处理后,细胞内ROS水平明显降低,与高糖刺激组相比,螺内酯干预组细胞内SOD活性明显增加(P < 0.05);Western blot结果表明,高糖可明显增加HMC细胞内ERK及p38MAPK的磷酸化水平,给予螺内酯处理后可逆转高糖的上述作用(P < 0.05),而各组之间磷酸化JNK及总ERK?p38MAPK?JNK蛋白水平无明显变化?结论:螺内酯可能通过下调MAPK家族信号蛋白的磷酸化水平,降低细胞内ROS含量,增加SOD活性,拮抗由高糖所引起的氧化应激,从而起到保护肾小球系膜细胞,延缓肾小球硬化的作用?     

单宁酸对高糖和糖化终末产物培养条件下肾小球系膜细胞氧化应激及微炎症状态的改善作用

目的：探讨单宁酸对肾小球系膜细胞（GMC）的作用,从氧化应激及微炎症角度阐明单宁酸改善糖尿病肾病(DN)的作用机制。方法：体外培养GMC,分别用高浓度葡萄糖（30 mmol/L）及糖化终末产物(AGEs)牛血清白蛋白（BSA,250 mg/L）处理,正常糖培养及不含糖的BSA处理的细胞作为相应对照组,在高糖或AGEs处理的同时采用不同浓度单宁酸（10、20、40和80 μmol/L）进行干预,培养48 h后检测细胞培养上清中丙二醛（MDA）水平及谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、超氧化物歧化酶（SOD）和过氧化氢酶（CAT）活性,ELISA法检测细胞培养上清中8-羟基脱氧鸟苷（8-OHdG）水平,免疫组织化学法检测GMC中细胞间黏附分子1（ICAM-1）蛋白表达,RT-PCR法检测GMC中单核细胞趋化蛋白1（MCP-1）和ICAM-1 mRNA的表达水平。结果：与高糖组和AGEs组比较,单宁酸处理组MDA水平明显降低（P<0.05）,GSH-Px、SOD及CAT活性明显升高（P<0.05或P<0.01）,GMC培养上清中8-OHdG水平明显降低（P<0.05）。与高糖组和AGEs组比较,40 和80 μmol/L单宁酸组ICAM-1蛋白表达水平明显降低（P<0.05）。与高糖组比较,单宁酸组MCP-1和ICAM-1 mRNA表达水平明显降低（P<0.01）。结论：单宁酸可保护GMC免受氧化及炎症介质的损伤,从而延缓和改善DN的肾小球病变。     

丹参注射液对高糖诱导的大鼠腹膜间皮细胞的过氧化损伤及E钙黏素和α平滑肌肌动蛋白表达的影响

目的 研究丹参注射液对高糖作用下的大鼠腹膜间皮细胞过氧化损伤及E钙黏素和α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达的影响.方法 体外培养大鼠原代腹膜间皮细胞,第3代细胞经无血清培养基同步培养24 h后分为正常对照组、高糖诱导组(25 mg/mL葡萄糖)、甘露醇对照组(25 mg/mL甘露醇)和丹参干预组(15 mg/mL丹参注射液+25 mg/mL葡萄糖),测定各组细胞内丙二醛(MDA)和活性氧(ROS)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活性;采用RT-PCR技术和Western blotting方法检测各组细胞内E钙黏素和α-SMA的mRNA和蛋白表达.结果 与正常对照组比较,高糖诱导组细胞内ROS和MDA含量增高,而SOD活性降低,E钙黏素mRNA和蛋白的表达减少,α-SMA mRNA和蛋白的表达增加,组间比较差异均有统计学意义(P＜0.05).与高糖诱导组比较,丹参干预组细胞内ROS和MDA含量减少,SOD活性增强,E钙黏素mRNA和蛋白的表达增加,而α-SMA mRNA和蛋白的表达减少,组间比较差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 丹参注射液可明显减轻高糖诱导的腹膜间皮细胞的过氧化损伤,其对细胞内E钙黏素和α-SMA表达的调控作用可能与延缓腹膜纤维化作用有关.     

肝细胞生长因子对高糖条件下系膜细胞基质降解酶系统及转化生长因子β1的影响

目的通过体外培养大鼠肾系膜细胞,研究肝细胞生长因子(hepatocyte grouth factor,HGF)对高糖条件下系膜细胞表达及分泌转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinases-9,MMP-9)及其抑制物金属蛋白酶组织抑制物-1(tissue inhibitor of metalloproteinase-1,TIMP-1)的影响,从而探讨HGF在糖尿病肾病中肾脏保护作用的机制。方法体外培养大鼠肾系膜细胞,分为正常对照组、高糖刺激组及HGF干预组,通过MTT比色测定不同时间、不同HGF浓度对大鼠肾系膜细胞增殖的影响;采用ELISA法测定细胞上清中MMP-9、TIMP-1、TGF-β1、HGF以及Ⅳ型胶原(Ⅳcol)的含量;以RT-PCR法检测系膜细胞MMP-9,TIMP-1、TGF-β1及HGF基因的表达。结果同正常对照组相比高糖刺激系膜细胞增生,HGF可以抑制高糖引起的系膜细胞增生。通过外源添加HGF可以显著抑制高糖条件下系膜细胞Ⅳcol、TIMP-1及TGF-β1的分泌,但对高糖条件下系膜细胞MMP-9的分泌则无显著影响。同高糖刺激组相比,外源HGF使系膜细胞MMP-9及HGF基因表达明显增强,而显著抑制系膜细胞TIMP-1及TGF-β1基因的表达。结论HGF对于高糖条件下的大鼠肾系膜细胞可能具有保护性作用,这一作用可能同以下途径有关:HGF抑制高糖刺激所导致的系膜细胞增生;HGF抑制TIMP-1mRNA表达及蛋白合成,促进MMP-9mRNA表达,从而调节MMP-9与TIMP-1之间的比例促进ECM降解;HGF显著抑制TGF-β1mRNA表达及蛋白合成,并且促使内源HGFmRNA表达增高,从而恢复TGF-β1与HGF之间的平衡。     

金丝桃苷对高糖诱导的心肌细胞氧化应激损伤的影响及其机制研究

目的 探索金丝桃苷在高糖诱导的心肌细胞氧化应激损伤中的作用及其分子机制。 方法 高糖处理模拟心肌细胞氧化应激损伤。细胞分为5个组:正常对照组（5.5 mmol/L葡萄糖）,高糖损伤模型组（35 mmol/L葡萄糖）,低、中、高浓度金丝桃苷保护组（35 mmol/L葡萄糖+4/8/20 nmol/L金丝桃苷）。各组细胞培养48 h后,CCK-8检测细胞存活力;流式细胞术分析细胞凋亡;通过流式细胞仪利用活性氧（ROS）检测试剂盒DCFH-DA分析ROS水平;超氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA）试剂盒检测SOD和MDA水平;Western blot法检测磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）、蛋白激酶B（AKT）、磷酸化（p）-AKT、核因子E2相关因子2（Nrf2）、p-Nrf2的表达;免疫荧光染色分析AKT的活化情况。 结果 与正常对照组比较,高糖损伤模型组细胞存活率降低,细胞凋亡率增高,ROS、MDA水平升高,SOD水平降低,PI3K相对表达量及AKT、Nrf2磷酸化水平（p-AKT/AKT和p-Nrf2/Nrf2的比值）降低,AKT阳性细胞数比率降低,以上差异均有统计学意义（P<0.05）。与高糖损伤模型组相比,金丝桃苷保护组（4、8、20 nmol/L）细胞存活率升高,细胞凋亡率降低,ROS、MDA水平降低,SOD水平升高,PI3K相对表达量及AKT、Nrf2磷酸化水平升高,AKT阳性细胞数比率升高,以上差异均有统计学意义（P<0.05）。 结论 金丝桃苷可通过激活PI3K/AKT/Nrf2信号通路保护心肌细胞免受高糖诱导的氧化应激损伤。