糖尿病肾病患者红细胞膜上Na~+-K~+-ATP酶及Ca~(2+)-Mg~(2+)-ATP酶活性的变化

糖尿病肾病是常见的糖尿病微血管并发症，患者红细胞膜上离子泵功能的异常在其发生中起一定的作用。作者测定了Ⅱ型糖尿病（ＤＭ）肾病患者红细胞膜上Ｎａ＋－Ｋ＋－ＡＴＰ酶及Ｃａ２＋－Ｍｇ２＋－ＡＴＰ酶活性的变化，并就其临床意义进行探讨。１对象与方法１．１对象１...     

人血小板肌球蛋白轻链激酶的研究

报道了人血小板匀浆上清液肌球蛋白轻链酶微量快速测定方法，对该酶的性质进行了初步研究，并建立了较为合适的测定酶活性的体系。该酶活性依赖于Ｃａ＾２＋和ＣａＭ，其半激活浓度分别为０．３５ｍｍｏｌ／Ｌ和１０μｍｏｌ／Ｌ，ＴＦＰ能抑制该酶活性，其半抑制浓度为１５０μｍｏｌ／Ｌ。     

心肌细胞核Ca~(2+)-ATP酶活性特征的研究

目的：观察心肌细胞核钙泵活性特征及核蛋白磷酸化对其活性的影响。方法：在密度梯度离心纯化的离体家兔心肌细胞核上进行实验，采用酶学方法测定Ca2+ATP酶活性。结果：心肌细胞核上存在Ca2+－ATPase，其活性具有〔Ca2+〕和〔ATP〕依赖性。蛋白激酶A（PKA）和蛋白激酶M（PKM）依赖的核蛋白磷酸化能显著抑制心肌细胞核Ca2+－ATPase活性，Vmax分别降低46％和44％，而Km分别降低47％和78％（P＜0.01）。结论：家兔心肌细胞核上存在高亲和力的钙泵，其活性受蛋白磷酸化调节，其生理和病理意义有待进一步探讨。     

健康人红细胞Na~＋－K~＋ATP酶、Ca~（2＋）－Mg~（2＋）ATP酶活性

用生物化学法及荧光法测定了成年人、老年人的红细胞Ｎａ＋－Ｋ＋ＡＴＰ酶、Ｃａ２＋－Ｍｇ２＋ＡＴＰ酶活性及胞浆游离Ｃａ２＋。结果显示：老年前期组Ｎａ＋－Ｋ＋ＡＴＰ酶及Ｃａ２＋－Ｍｇ２＋ＡＴＰ酶活性均显著低于成年人组（Ｐ＜０．０５），而胞浆游离Ｃａ２＋浓度明显高于成年人组（Ｐ＜０．０５）。老年组的两个ＡＴＰ酶活性均较老年前期组低，胞浆游离Ｃａ２＋浓度高于老年前期组。上述三个指标的随龄性变化以老年前期组最明显，特别是女性。     

高血糖对非胰岛素依赖型糖尿病患者红细胞（Ca~（2＋）－Mg~（2＋））－ATP酶的影响

为了解高血糖对非胰岛素依赖型糖尿病（ＮＩＤＤＭ）患者红细胞膜（Ｃａ２＋－Ｍｇ２＋）－Ａｒｐ酶的影响，采用改良的Ｈａｎａｈａｎ和Ｌｕｔｈｒａ法测定了红细胞膜（Ｃａ２＋－Ｍｇ２＋）－ＡＴＰ酶活性。结果表明，ＮＩＤＤＭ患者红细胞膜（Ｃａ２＋－Ｍｇ２＋）－ＡＴＰ酶活性降低，且与空腹血糖、糖化血红蛋白、果糖胺及红细胞变形指数呈负相关，后者与红细胞内Ｃａ２＋浓度呈正相关。说明（Ｃａ２＋－Ｍｇ２＋）－ＡＴＰ酶活性下降时，红细胞变形能力降低，可能与患者红细胞膜蛋白的过度糖化及细胞内Ｃａ２＋浓度的增高有关。     

Cd~(2+)和Hg~(2+)对肌球蛋白轻链激酶活性的调节

应用平滑肌肌球蛋白轻链激酶(MLCK)体系,观察了重金属离子Cd~(2+)和Hg~(2+)对MLCK活性的影响,得到以下结果:1.Cd~(2+)和Hg~(2+)对MLCK具有双相作用,低浓度下激活MLCK,高浓度下抑制MLCK;2.Cd~(2+)对MLCK的激活作用,被钙调素拮抗剂氯丙嗪所抑制;3.疏基化合物能逆转Cd~(2+)和Hg~(2+)对MLCK的抑制。结果提示,Cd~(2+)和Hg~(2+)能通过活化caM使MLCK激活,高浓度时直接作用于MLCK抑制其活性。     

孔雀绿比色法同步测定大鼠成骨细胞膜Ca~(2+)-ATP酶和Na~+、K~+-ATP酶活性

为探索同步测定大鼠成骨细胞膜Ｃａ２＋－ＡＴＰ酶和Ｎａ＋、Ｋ＋－ＡＴＰ酶活性的方法。采用孔雀绿比色法测定磷以反映酶活性。结果显示：Ｃａ２＋浓度以及成骨细胞传代培养的代数是影响酶活性的重要因素。Ｃａ２＋有助于提高ＡＴＰａｓｅ活性。Ｃａ２＋浓度为４０μｍｏｌ／Ｌ时，ＡＴＰａｓｅ活性较高。细胞传代越多，膜Ｃａ２＋－ＡＴＰａｓｅ活性越低。成骨细胞膜Ｃａ２＋－ＡＴＰａｓｅ活性低于Ｎａ＋、Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ。结论：孔雀绿比色法同步测定大鼠成骨细胞膜Ｃａ２＋－ＡＴＰ酶和Ｎａ＋、Ｋ＋－ＡＴＰ酶活性，方法简便、灵敏、可靠。     

苄普地尔对大鼠心肌质膜Ca~（2＋），Mg~（2＋）－ATP酶的非竞争抑制作用

钙通道阻滞剂苄普地尔在体外非竞争性抑制大鼠心肌质膜Ｃａ~（２＋），Ｍｇ~（２＋）－ＡＴＰ酶，抑制常数Ｋｉ＝４３．０±１．３μｍｏｌ／Ｌ，半数抑制浓度ＩＣ５０＝６７±６μｍｏｌ／Ｌ，表明其钙泵和或钙调素拮抗作用较维拉帕米强。     

丹参酮Ⅱ-A磺酸钠对血小板肌动蛋白激活的Mg~(2+)-ATP酶活性的影响

测定了初步纯化的血小板肌动球蛋白的肌动蛋白激活的Mg~(2+)-ATP酶活力,并观察了丹参酮Ⅱ-A磺酸钠对此酶活性的影响。实验结果发现,丹参酮Ⅱ-A磺酸钠对此酶活性有抑制作用。此酶最大反应速度V_(max)=78.15μmol/L·min,米氏常数K_m=2.1×10~(-3)mol/L。在丹参酮Ⅱ-A磺酸钠存在下(0.721mmol/L),VV_(max)下降至29.14μmol/L·min,但K_m不变可见丹参酮Ⅱ-A磺酸钠对此酶具有非竞争性抑制作用。其抑制常数K_i=4.3×10~(-4)mol/L。这些结果表明丹参酮Ⅱ-A磺酸钠可能通过抑制血小板的肌动蛋白激活-Mg~(2+)-ATP酶活力而表现抑制血小板各种功能的药理作用。     

反相高效液相色谱法测定Ca~（2＋），Mg~（2＋）－ATPase活力的方法

应用反相ＨＰＬＣ方法测定了大鼠心肌Ｃａ２＋,Ｍｇ２＋－ＡＴＰａｓｅ活力。高效液相色谱条件：Ｗａｔｅｒｓ－４８０高效液相色谱仪,ＷａｔｅｒｓＣ－１８高效反相色谱柱,流动相为０．０６６７ｍｏｌ／ＬＫＨ２ＰＯ４／Ｋ２ＨＰＯ４缓冲液（ｐＨ５．９２）,流速１．５ｍｌ／ｍｉｎ,柱压３０００Ｐａ,检测波长２５４ｎｍ。方法简便,快速,灵敏度高,重复性好。     

Ca~(2+)、Mg~(2+)对完整红细胞膜脂区流动性的影响

以1,6.-二苯基-1,3,5-已三烯(DPH)为荧光探剂,用荧光偏振法测定了Ca~(2+)、Mg~(2+)对完整红细胞膜脂区流动性的影响。Ca~(2+)能降低红细胞膜的流动性,而Mg~(2+)则无显著影响,细胞膜流动性的大小与膜上结合的Ca~(2+)量有关,而细胞所处的介质中Ca~(2+)浓度可影响膜上Ca~(2+)结合量。胰岛素对膜的流动性影响可能与膜上结合Ca~(2+)和Mg~(2+)相对量有关。     

外源性神经节苷脂GM_3对Ca~（2＋）－ATP酶及红细胞胞浆Ca~（2＋）－浓度的影响

研究神经节苷脂ＧＭ３（简称ＧＭ３）对部分纯化的人红细胞膜Ｃａ２＋－ＡＴＰ酶的作用和对完整兔红细胞浆［Ｃａ２＋］的影响。结果表明：外源性ＧＭ３对Ｃａ２＋－ＡＴＰ酶的作用呈浓度依赖性双相调节即浓度为１～６．５μｍｏｌ／Ｌ时抑制酶活性，浓度大于６．５μｍｏｌ／Ｌ时激活酶活性；ＧＭ３不影响钙调素（ＣａＭ）对酶的激活；ＣＭ３对兔红细胞浆［Ｃａ２＋］也呈浓度依赖性双相调节即在ＧＭ３浓度低于６９μｍｏｌ／Ｌ时［Ｃａ２＋］有不同程度升高，浓度大于６０μｍｏｌ／Ｌ时则降低［Ｃａ２＋］。     

风心瓣膜病变患者红细胞膜钠、钙泵活性和脂质过氧化的变化

用酶解法和Ｈ２Ｏ２分解法分别测定２８例风心瓣膜病变患者红细胞膜钠泵（Ｎａ＋、Ｋ＋－ＡＴＰ酶）、钙泵（Ｃａ２＋、Ｍｇ２＋－ＡＴＰ酶）活性和膜过氧化氢酶（ＣＡＴ）活性，并用硫代巴比妥酸比色法测定患者红细胞膜脂质过氧化物（ＬＰＯ）含量。患者红细胞膜Ｎａ＋、Ｋ＋－ＡＴＰ酶活性和Ｃａ２＋、Ｍｇ２＋－ＡＴＰ酶活性分别显著低于正常人３４．７５％（Ｐ＜０．０１）和２６．７７％（Ｐ＜０．０１）；ＣＡＴ活性显著低于正常人２０．０７％（Ｐ＜０．０１）；而患者ＬＰＯ含量却显著高于正常人９７．５０％（Ｐ＜０．０１）。结果提示风心病患者瓣膜病变与质膜钠、钙泵活性变化以及膜脂质过氧化作用有关。     

DMSO诱导的HL-60细胞分化后胞液Ca~(2+)浓度、磷酸化酶a和微粒体Ca~(2+)-ATP酶活性的改变

Ca~(2+)与肿瘤代谢有着极为密切的关系。本文测定了HL—60细胞经DMSO诱导分化前后胞液Ca~(2+)浓度、磷酸化酶a活性和微粒体Ca~(2+)—ATP酶活性。结果表明,DMSO加入HL—60细胞培养液后120h,细胞NBT染色阳性率为75％,细胞形态趋同于正常分化的细胞。同时,胞液Ca~(2+)浓度和微粒体Ca~(2+)—ATP酶活性明显降低,胞液磷酸化酶a活性则显著升高。结果提示,在DMSO作用下,HL—60细胞不仅吞噬功能增强,细胞内钙及与钙恒稳有关的酶活性也同时发生改变。     

应激大鼠肾脏中MDA含量及GSH-px、CAT和Ca~(2 )-ATPase活性的变化

通过观察大鼠在应激状态下肾脏中丙二醛（ＭＤＡ）含量以及谷胱甘肽过氧化物酶（ＧＳＨ－ｐｘ）、过氧化氢酶（ＣＡＴ）和钙泵（Ｃａ２＋－ＡＴＰａｓｅ）活性的变化。结果显示：在应激状态下，肾脏ＭＤＡ的含量在应激２ｈ后迅速并持续升高，ＣＡＴ和Ｃａ２＋－ＡＴＰａｓｅ活性增加高峰均在应激２ｈ时，之后又有所下降，但依然显著高于对照组，ＧＳＨ－ｐｘ活性也有所升高，但只在应激２ｈ时显著高于对照组。结果提示：在应激状态下，肾脏的脂质过氧化作用加强，抗氧化能力和清除细胞内Ｃａ２＋能力在应激一定时间内（２ｈ）代偿性加强后又有所下降     

去甲肾上腺素性心肌损害心肌细胞膜结合Ca~(2+)变化的细胞化学研究

研究利用细胞化学ＰＰＡ法观察去甲肾上腺素性心肌损害心肌细胞膜结合Ｃａ２＋的变化。结果表明,去甲肾上腺素可使心肌细胞膜及闰盘两侧的结合Ｃａ２＋丢失,线粒体内大量Ｃａ２＋沉淀物聚集。可能系胞质内ＰＨ下降,肌膜的酸性磷脂数量发生了变化,丧失了与钙的亲和力所致。     

不同程度减压低氧对心肌肌浆网钙摄取和Ca~（2＋）－ATP酶活性的影响

将实验大鼠分别置于模拟５０００和８０００ｍ海拔高度的低压仓内７ｄ，观察两种减压低氧对大鼠左心功能及左心室肌肌浆网（ＳＲ）钙摄取及Ｃａ~（２＋）－ＡＴＰ酶活性的影响。结果表明，５０００ｍ低氧大鼠左心功能抑制程度明显轻于８０００ｍ低氧，ＳＲＣａ~（２＋）－ＡＴＰ酶活性及~（４５）Ｃａ~（２＋）摄取降低程度也明显低于８０００ｍ低氧，ＡＴＰ酶和钙摄取的变化基本一致。从而推论，心肌ＳＲＣａ~（２＋）－ＡＴＰ酶活性及~（４５）Ｃａ~（２＋）摄取的改变可能是心功能变化的病理生理基础之一。     

缺血及缺血/再灌心律失常大鼠心肌~(45)Ca~(2+)内流变化

本实验采用麻醉大鼠缺血、及缺血再灌心律失常法以及同位素示踪法,对大鼠心肌缺血40mm和缺血10mm再灌30mm心律失常发生与心肌损伤致~(45)Ca~(2+)内流的变化进行了观察。结果表明,心肌缺血40mm心律失常发生较轻VF(53％),~(45)Ca~(2+)内流不明显(与正常心肌组比P>0.05)。缺血10mm再灌30mm心律失常发生严重(91％),室颤发生率较高(80％),~(45)Ca~(2+)内流量明显增加(与正常,缺血心肌组比P<0.01)。证实缺血性心律失常与心肌损伤引起Ca~(2+)内流关系不明显,而再灌心律失常的发生则与心肌损伤引起Ca~(2+)内流增加有关。     

硬脂酸、苹婆酸对培养的大鼠肝癌细胞膜表面Mg~(2+)-ATP酶活性的影响

作者应用细胞化学方法研究了培养的大鼠肝癌FSK-7902细胞,在硬脂酸、苹婆酸处理后,细胞膜表面Mg~(2+)-ATP酶的活性变化.并用显微分光光度计进行了定量分析.结果显示,未处理的培养大鼠肝癌细胞膜表面Mg~(2+)-ATP酶的阳性反应十分显著,主要分布于细胞与细胞相互接触面上.硬脂酸、苹婆酸处理后的癌细胞,当呈现生长抑制状态时,细胞相互接触面上Mg~(2+)-ATP酶的阳性反应显著降低.尤其在硬脂酸和苹婆酸联合应用时,酶阳性反应降低更显著.分光光度计测定结果表明,硬脂酸、苹婆酸处理后,癌细胞膜表面酶的总光密度和平均光密度都明显降低.提示细胞膜Mg~(2+)-ATP酶的活性降低可能与细胞产生生长抑制有关.硬脂酸和苹婆酸联合应用有协同作用,对其机理进行了讨论.     

血小板衍生生长因子刺激鼠成骨细胞内Ca~(2十)浓度变化的实验研究

目的观察血小板衍生生长因子（PDGF）等生长因子对鼠成骨细胞内Ca2+脏度变化的影响。方法酶消化法体外分离培养胎儿鼠成骨细胞,应用ACAS检测成骨细胞内Ca2+脓度的变化。结果PDGF可促进成骨细胞内Ca2+脓度的瞬时增加;PDGF与BMP、TGF-β联合应用对成骨细胞Ca2+浓度升高有协同作用;ACAS能准确测量胞内Ca2+浓度的动态变化。结论PDGF可促进成骨细胞内Ca2+浓度的增加．且与BMP、TGF-β有协同效应。