产前诊断的概况

产前诊断 (ｐｒｅｎａｔａｌｄｉａｇｎｏｓｉｓ)又称出生前诊断或宫内诊断。是在胎儿出生前 ,应用各种方法检测胎儿的健康状况 ,对患病的胎儿作出诊断 ,进行选择性流产或宫内治疗 ,从而降低先天缺陷儿的出生率 ,达到优生的目的。产前诊断是现代医学科学的一项重大进步。 1 95 5年 ,羊水细胞被首先用于性染色质检查 ,产前诊断胎儿的性别 ;1 966年 ,经培养的羊水细胞被成功地用于诊断胎儿先天愚型。近 1 0余年来 ,由于超声影像技术的进步及各种实验室检测手段的出现 ,产前诊断技术迅速发展。本文就目前产前诊断的概况作一介绍。1　侵入性产前…     

ras癌基因点突变的研究

N-ras基因第12密码子、K-ras基因第12和13位密码子无已知的限制性内切酶的酶切位点,不能使用PCR-RFLP方法分析这些位点的突变。我们在PCR引物的3’端引入了一个误配的硷基使之正好成为某限制性内切酶的酶切位点,因而能使用PCR-RFLP方法分析上述位点的突变。本文使用PCR-RFLP方法分析了c-Ha-ras基因第12和61位、N-ras基因第12位、K-ras基因第12位和13位密码子的点突变。     

非侵入性产前诊断的研究进展

长期以来,研究者一直试图找到安全、可靠、对胎儿无任何损害的产前诊断方法.尽管胎儿细胞有的存在于母体外周血中已被许多学者所证实,但是因数量少、个体差异及不同妊娠周的含量不同,难成为临床非创伤性产前诊断的检测方法.     

孕妇血浆DYS19位点巢式PCR法检测

目的：探讨使用巢式PCR检测孕妇外刷血浆中男性胎儿DNA的可能性并评估其在早期判定胎儿性别方面的准确性。方法：采取20例正常孕妇外周血（孕10～38周）各2mL，枸橼酸钠抗凝后提取血浆，经蛋白酶K及十二烷基磺酸钠消化后直接作为模板，以巢式PCR对其中的胎儿DyS19基因位点进行检测，并将实验结果与娩出后的新生儿实际性别比较。结果：20例孕妇中有8例经2轮PCR后扩增出DYS19基因，后均证实为男胎；未扩增出DYS19基因的12例中有10例证实为女性，2例证实为男性。男胎性别预测符合率为80．0％（8／10）。结论：应用巢式PCR能够直接从母体外周血中检测到男性胎儿基因，且预测胎儿性别有较高的准确度。     

中国人凝血因子IX基因研究

本采用PCR和DNA测序技术对6例血友病B及其母凝血因子IX（FIX）基因缺陷进行了检测，发现5种点突变，其中3种属世界上未曾报道的新的点突变，分别命名为FIX重庆1，2，3。本同时采用PCR和限制性内切酶酶解技术，对我国人群FIX基因限制性片段长度多态性进行了分析。发现两种有益的FLX基因多态性，其中MSe1-698位T/C基因频率分别为0.64和0.36.BstuI192A/G基因频率分别为0.81和0.19，该发现有利于我国人群中进行血友病B携带筛查和产前基因诊断。     

应用巢式PCR扩增孕妇血浆中胎儿SRY基因

目的:利用孕妇血浆中胎儿DNA进行无创产前诊断.方法:对包括10例X连锁隐性遗传病携带者的60例14～22孕周孕妇的血浆DNA进行巢式PCR,扩增胎儿来源的Y染色体特异性SRY基因.结果:38例妊娠男胎的孕妇中32例出现SRY基因扩增带,灵敏度为84.2%.22例妊娠女胎的孕妇中4例出现SRY扩增带,特异性为81.8%,总符合率为83.3%(50/60).10例X连锁隐性遗传病携带者中7例妊娠男胎的孕妇中6例检出SRY基因,3例妊娠女胎的孕妇均未检出SRY基因.结论:采用巢式PCR技术检测母体血浆中的胎儿DNA进行产前性别鉴定具有较高的灵敏度和特异性,在遗传病的产前诊断中具有很大的应用前景.     

用聚合酶链反应技术产前诊断早中孕期胎儿宫内巨细胞病毒感染

用聚合酶链反应（ＰＣＲ技术），选择３２例有病理妊娠史或孕妇巨细胞病毒ＨＣＭＶ－ＤＮＡ阳性者，在孕８￣２６周取绒毛或羊水检测巨细胞病毒胎儿宫内感染情况，检出ＨＣＭＶ－ＤＮＡ阳性率为４３．７５％，其中绒毛为４５％，羊水为４１．６７％。追踪监测结果，４例羊水阳性引产的胎儿有不同程度的发育障碍和畸形，１例死胎。绒毛阳性３例胎停育，２例自然流产。进一步证实子胎儿宫内感染巨细胞病毒对胎儿有一定的危害。     

应用非同位素PCR—SSCP方法检测乳腺癌p53基因点突变

目的 探讨乳腺癌组织中p53基因点突变。方法 应用非同位素PCR－SSCP技术检测48例石蜡包埋乳癌组织中,p53基因点突变。结果 48例乳腺癌中20例出现异常电泳,表明这些病例相应DNA片段中发生了点突变,其中8例位于第5－6外显子,9例位于第7外显子,3例位于第8外显子。免疫组化检测突变p53蛋白的表达25例为阳性（52％）,其中5例SSCP未发现基因突变,突变可能发生在所检测的基因片点以外。结论 非同位素PCR－SSCP是一简便、快速、有效的检测基因点突点的方法,特别适用于大量标本基因点突变的筛选;p53基因点突变与突变型蛋白表达呈相关关系。     

散发性帕金森病α-synuclein基因突变的检测

目的探讨α-synuclein基因已知突变与散发性帕金森病人的关系.方法分离PD组和对照组的外围血基因组DNA,采用α-synuclein基因特异引物对其第四外显子进行PCR扩增,扩增产物用Tsp45Ⅰ酶切鉴定.结果两组PCR均可扩增出216bp的片段,PCR产物不能被Tsp45Ⅰ酶切.结论α-synuclein基因已知点突变与散发性帕金森病可能无明确关系.     

微乳液多重PCR基因芯片法在早孕期无创性胎儿性别诊断中的应用

目的 探讨微乳液多重PCR基因芯片法在早孕期无创性胎儿性别诊断中的应用价值。方法 收集138例4—12孕周孕妇的外周血液样品，提取血浆DNA。选取胎儿DNAY染色体上的6个特异性序列SRY1、SRY2、SRY3、DYS1、DYS14和DYZ3基因作为男性胎儿标志物，采用微乳液PCR进行扩增，同时标记荧光，以β-globin基因作为阳性内对照。扩增产物与固定在基因芯片上的探针分子杂交，采用ScanArray 5000扫描仪扫描芯片。检测结果与胎儿出生性别进行比较。结果 最早的检出样品来自孕31d的孕妇，在78份男性胎儿孕育者血样中，有76份样本6个Y染色体特异序列均为阳性；60份女性胎儿孕育者血样中没有一个Y染色体特异序列阳性。微乳液多重PCR基因芯片法对男性胎儿早孕期检测的灵敏度达到97．4％，特异度达到100％。结论 微乳液多重PCR基因芯片法检测孕妇外周血中男性胎儿DNA的方法具有较高的灵敏度和特异度，能够早期鉴定胎儿性别，对性连锁遗传病的筛选具有潜在的应用价值。     

应用引物延伸预扩增反应技术检测孕妇血浆中的胎儿DNA

目的：建立一种检测孕妇血浆中胎儿DNA的新方法。方法;对65例5－41孕周的孕妇血浆中胎儿DNA采用引物延伸预扩增（PEP）后行特异性位点聚合酶链反应（PCR）扩增,并用探针微孔板杂交法检测PCR产物。扩增的基因为Y染色体短臂SRY基因,扩增片段的大小分别为351bp和254bp。结果：46例妊娠男性胎儿的孕妇中41例血浆中出现SRY基因扩增带,检出率89．13％;19例妊娠女性胎儿的孕妇中3例（15．79％）为假阳性。本研究孕早、中、晚期的性别符合率分别为100％、90．91％、75％,总符合率86．15％。结论：利用PEP法能解决孕妇外周血中胎儿细胞数量太少达不到常规扩增条件所要求的最低模板量的问题,同时配合探针微孔板杂交法能使诊断结果更准确。     

孕妇血清中胎儿游离DNA产前筛查Down's综合征初探

目的应用TaqMan探针实时定量聚合酶链反应(Real-time quantitative PCR)技术检测孕妇血清中胎儿游离DNA含量,探讨以其含量变化作为Down's综合征产前筛查新指标的可行性.方法选择42例孕中期(16～19周)的妇女作为研究对象,其中7例为孕21三体男胎的妇女,18例为孕正常男胎的妇女,17例为孕正常女胎的妇女,提取其外周血血清中游离DNA,应用TaqMan探针实时定量聚合酶链反应技术检测Y染色体上的DYS14基因,以此确定母体血清中的胎儿游离DNA含量,并同时检测代表母体与胎儿总游离DNA的β-actin基因作为对照.结果孕21三体男胎组血清胎儿游离DNA含量明显高于孕正常男胎组,它们分别为94.5基因当量(genome equivalents,GE)/ml及42.8GE/ml(P《0.01),孕21三体男胎组血清中的胎儿游离DNA含量为孕正常男胎组的2.2倍.孕正常女胎组血清中未检测到Y-染色体上的DYS14基因.结论胎儿游离DNA可能成为产前筛查Down's综合征的候选指标.     

孕妇血清中DAZ基因含量在21三体产前筛查中的应用

目的：探讨检测孕妇血清中胎儿DNA含量在临床产前诊断21三体综合征的可行性.方法：采用70例孕早期（8～12wk）的妇女作为研究对象,其中10例为孕21三体男胎的妇女,30例为孕正常男胎的妇女,30例为孕正常女胎的妇女,提取其外周血血清中游离DNA,应用TaqMAN探针实时定量PCR技术检测Y染色体上无精症基因DAZ和代表母体及胎儿总游离DNA的β-actin基因的含量.结果：定量PCR检出孕21三体组血清中的胎儿游离DNA含量是正常男胎组的2.2倍.孕正常女胎组血清中未检测到DAZ基因.结论：定量PCR技术检测胎儿游离DNA可以作为产前筛查男胎21三体的重要指标.