乙肝病毒表面蛋白及其抗体复合物对人精子功能的影响

目的：研究乙肝表面蛋白（HBs）与其单克隆抗体（MAb）复合物对人精子功能的影响,探讨乙肝病毒（HBV）损害人精子的可能机制。方法：对HBs-HBsMAb孵育后的精子活力进行分析,采用JC-1染料结合流式细胞术监测人精子线粒体膜电位（MMP）。结果：人精子在体外与25μg/mL的HBs和不同浓度（20、40、80μg/mL）HBsMAb共孵育后,活力好的精子百分比例显著下降（P〈0.01）,MMP也下降。结论：HBV可能通过HBs-HBsMAb对人精子功能产生负面影响。     

LPS、PLA_2及氧自由基对线粒体跨膜质子转运和H~+ -ATPase的影响

目的：研究细菌内毒素（LPS）、磷脂酶A2（PLA2）及自由基对质子跨膜转运及H+－ATP酶的影响。方法：采用正常大鼠，制备线粒体、亚线粒体（SMP），用SMP与LPS（100μg／ml）、PLA2（10u／ml）、FeSO4；／VitC（30／900μmol／L）分别共同温育（30C，30min），用ACMA荧光淬灭法测定质子跨膜转运能力。线粒体与不同浓度LPS、PLA2和FeSO4／VitC共同孵育，测定H+－ATP酶、PLA2、MDA。结果：LPS、PLA2、FeSO4／VitC可致亚线粒体ACMA荧光淬灭显著改变，LPS可引起线粒体膜PLA2活性、MDA含量升高（P＜0．05），LPS、PLA2可引起H+－ATP酶的活性进行性下降，小剂量FeSO4／VitC引起H+－ATP酶活性升高，大剂量FeSO4／VitC引起H+－ATP酶活性降低。结论：LPS、PLA2、LPO是造成质子转运能力下降的重要原因．自由基与H+－ATP酶损伤密切相关。     

流式细胞仪检测rhTNF-α对人正常精子线粒体功能和质膜完整性影响的实验研究

目的观察rhTNF-α在体外对人正常精子线粒体功能和质膜完整性的影响.方法56例健康成年男性手淫法获得精液,按照WHO精液标准分析,合格40例.Peroll梯度离心法得到的精子为精子模型,将精子密度调整为10×106/ml,与终浓度30 pg/ml、60 pg/ml、90 pg/ml、270 pg/ml的rhTNF-α分别在37℃、5% CO2的环境中孵育,同时设立对照组.在0.5 h、1 h、2 h、3 h、4 h时间段取样,用终浓度为10 μg/ml 的Rh123和PI双染色精子,流式细胞仪检测精子线粒体膜电位及质膜完整性的变化.结果与对照组相比较,60 pg/ml、90 pg/ml、270 pg/ml各组的线粒体功能良好的精子明显减少,这种变化趋势与TNF-α浓度和孵育时间呈正相关(P﹤0.01).30pg/ml组的精子线粒体功能与对照组相比较无统计学差异(P>0.05);30pg/ml、60 pg/ml、90 pg/ml、270 pg/ml各组的PI染色阳性而Rh123染色阳性的精子数量较对照组多,并且与rhTNF-α浓度和孵育时间呈正相关(P﹤0.01).结论rhTNF-α对人精子线粒体功能有一定的影响,提示有可能干扰精子的能量代谢,降低精子受精能力,并有可能通过线粒体凋亡途径,促进精子凋亡;同时影响精子质膜的完整性.     

脓毒症大鼠脑线粒体功能损伤与氧化应激的关系

目的：探索脓毒症脑组织线粒体功能及可能损伤机制．方法：选取40只清洁级雄性SD大鼠（180～220g）,以抽签方式随机分为4组：正常对照组,3h脓毒症组（3LPS组）,6h脓毒症组（6LPS组）和24h脓毒症组（24LPS组）,每组10只．腹腔注射革兰阴性菌脂多糖（LPS）溶液建立脓毒症大鼠动物模型,各脓毒症组大鼠在相应时点处死后分离获得线粒体．测定各组大鼠脑线粒体膜电位、线粒体丙二醛（mtMDA）含量、线粒体一氧化氮合酶（mtNOS）活性以及线粒体一氧化氮（mtNO）浓度．结果：3LPS组大鼠脑线粒体膜电位较正常对照组明显降低[（0．5±0．5）vs（1．2±0．6）,P〈0．05];6LPS组和24LPS组大鼠脑线粒体膜电位与正常对照组无明显差异[（1．4±0．7）vs（1．2±0．6）,（1．6±0．7）vs（1．2±0．6）]．3LPS组和6LPS组大鼠脑mtMDA含量较正常对照组明显升高[（12．0±2．1）μmol／L vs（5．7±0．8）μmol／L,（8．7±0．8）μmol／L vs（5．7±0．8）μmol／L,P〈0．01];24LPS组大鼠脑mtMDA含量较正常对照组无明显差别[（6．5±1．6）μmol／L vs（5．7±0．8）μmol／L]．3LPS组和6LPS组大鼠脑mtNOS活性较正常对照组明显升高[（74±24）μkat／g vs （16±13）μkat／g,P〈0．01;（32±10）μkat／g vs（16±13）μkat／g,P〈0．05];24LPS组大鼠脑mtNOS活性较正常对照组无明显差别[（28±12）μkat／g vs（16±13）μkat／g]．3LPS组、6LPS组和24LPS组大鼠脑mtNO浓度均较正常对照组明显升高[（15．4±4．8）μmol／g vs（1．2±2．6）μmol／g,（6．5±3．8）μmol／g vs（1．2±2．6）μmol／g,（3．6±2．1）μmol／g vs（1．2±2．6）μmol／g,P〈0．01]．脓毒症大鼠脑mtMDA含量、mtNOS活性和mtNO浓度与脑线粒体膜电位存在明显负相关性（r=-0．677,P〈0．01;r=-0．738,P〈0．01;r=-0．715,P〈0．01）．结论：大鼠脓毒症病程中存在可逆?     

川芎嗪对缺氧时视网膜血管内皮细胞ATP分泌的影响

目的探讨川芎嗪对缺氧牛视网膜血管内皮细胞中ATP含量的影响。方法用酶消化法分离牛眼视网膜血管内皮细胞,进行形态学的观察并用Ⅷ相关免疫组化法鉴定。取3代的细胞用于实验。细胞分组：取常规培养的第3代细胞,分为5组：正常对照组（F12培养基常规培养）,缺氧组（加入终浓度125μmmol/L的CoCl2）和缺氧加药物组（加入含20、40、120μg/ml川芎嗪）。免疫组化法和生物荧光法分别检测川芎嗪对CoCl2诱导的缺氧的牛视网膜血管内皮细胞中ATP含量。结果缺氧BREC细胞ATP含量增加,而川芎嗪可减少缺氧引起的ATP浓度升高,且呈剂量依赖性。当川芎嗪浓度为20μg/ml时,其ATP含量水平已显著下降（P〈0.01）。结论川芎嗪可减少缺氧诱导的血管内皮细胞ATP含量增加。     

慢性低氧高二氧化碳对小鼠大脑线粒体功能的影响

目的：探讨慢性低氧高二氧化碳对小鼠大脑线粒体功能的影响。方法：雄性C57BL/6小鼠30只,随机分成2组：A组（低氧高二氧化碳组15只）和B组（正常对照组15只）。A组饲养于氧舱中,舱内氧浓度为9%～11%,二氧化碳浓度为5%～6%,每天8h～每周6d,共4周,其余时间与B组一样,生活于正常环境。测量脑组织ATP,ADP,AMP的浓度;线粒体膜电位、COXⅠ和Ⅲ活性。结果：低氧高二氧化碳组小鼠脑组织ATP,AMP浓度显著低于正常对照组（P〈0.01）,线粒体形态明显改变,脑线粒体膜电位低下、COXⅠ和Ⅲ活性受到抑制（P〈0.01）,脑组织SOD、GSH活性降低（P〈0.01）。结论：慢性低氧高二氧化碳可导致小鼠大脑线粒体功能明显异常,其机制可能与氧化应激反应有关。     

吸入麻醉药对离体鼠肝线粒体跨膜电位的影响

目的：通过观察吸入麻醉药对离体鼠肝线粒体跨膜电位的影响，研究吸入麻醉药肝毒性与线粒体能量代谢的关系，方法：应用碱性藏红为探针，在3ml的反应体系中分别加入5，10，20，50μg/ml氟烷，恩氟烷，异氟烷及七氟烷，用UV－3000分光光度计进行双波长（511－533nm)扫描，观察上述4种药物对ATP或琥珀酸能化及非能化鼠肝线粒体跨膜电位（Δψ）的影响。结果：氟烷与经典的解耦联剂氰化－对－三氟甲氧基苯腙相似，能明显降低能化及非能化线粒体的跨膜电位，而其余3种药物仅在大剂量时才降低线粒体的跨膜电位。结论：氟烷具有解耦联作用，氟烷与其他吸入麻醉药在能量代谢上的这种差异是否为它们肝毒性差异的原因值得引起重视。     

格列吡嗪对正常及糖尿病大鼠心肌线粒体ATP敏感性钾通道的影响

目的：探讨格列吡嗪（Glip）对正常及糖尿病大鼠心肌线粒体ATP敏感性钾通道（mito KATP）的影响．方法：取分离鉴定的Wister大鼠和2型糖尿病GK大鼠心肌组织线粒体悬浮液，加入到含有K^＋和KATP通道阻滞剂ATP的待测溶液中，再按如下分组进行药物干预，即空白对照组（Con组）、特异性mito KATP激活剂二氮嗪组（Dia组）、Dia＋Glip组（分别为5，50μmol／L Glip），即刻检测溶液在3min内光散射值的变化，以此作为反映线粒体体积变化的指标．结果：各组线粒体体积均随时间增大，Con组增加速度极慢，Dia组最快，而Dia＋Glip组则介于两者之间．不同浓度Glip均能使两种大鼠线粒体体积增加速度减慢（P〈0．01），高浓度作用更明显（P〈0．01）；相同浓度Glip对不同大鼠组的影响程度不同，对糖尿病GK大鼠的影响明显弱于正常大鼠（P〈0．01）．结论：Glip对正常及糖尿病大鼠心肌mito KATP均有关闭作用，但对糖尿病大鼠的作用明显较弱．相当于临床治疗中血药浓度峰值的Glip浓度（5μmol／L）虽可干扰正常大鼠心肌mito KATP的活性，但对糖尿病大鼠心肌mito KATP无显著影响．     

肥胖男性不育患者精子线粒体膜电位、游离脂肪酸、活性氧的关系

目的：探讨肥胖男性不育患者精子线粒体膜电位的改变,以及线粒体膜电位与精浆中游离脂肪酸、活性氧之间的关系。方法按照研究条件,随机整群选取正常生育男性51人（对照组）、正常体重指数不育男性36人（正常体重不育组）、超重不育男性44人（超重不育组）、肥胖不育男性45人（肥胖不育组）。精液常规分析,ELSA法检测精浆中游离脂肪酸、活性氧,流式细胞仪检测精子线粒体膜电位。结果线粒体膜电位正常率的比较中正常体重不育组（27.34%±13.38%）、超重不育组（28.26%±9.76%）、肥胖不育组（25.27%±7.51%）均低于对照组（35.12%±15.90%）,差异有统计学意义（P<0.01）。肥胖不育组中线粒体膜电位正常率虽然低于正常体重不育组及超重不育组,但差异无统计学意义。精子线粒体膜电位正常率与精子前向运动率呈明显正相关（r=0.29,P<0.01）。精浆中游离脂肪酸与精浆中活性氧呈明显正相关（r=0.30,P<0.01）,精浆中活性氧与精子正常线粒体膜电位呈明显负相关（r=-0.24,P<0.01）。结论超重及肥胖男性不育患者精浆中游离脂肪酸增高,引起活性氧增加,活性氧使得线粒体膜电位下降,最终可能导致精子运动能力下降。治疗时应考虑建议患者减少高脂餐、适当运动。     

替米沙坦对脂多糖诱导3T3-L1脂肪细胞生成炎性因子的影响

目的探讨血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂替米沙坦对小鼠3T3-L1脂肪细胞合成白细胞介素6（IL-6）和肿瘤坏死因子α（TNF-α）的影响。方法脂肪细胞诱导至90%成熟,随机分为5组：对照组,脂多糖（LPS）组,LPS＋替米沙坦组,其中替米沙坦设0.1μg/ml、1μg/ml和10μg/ml 3个浓度梯度。对照组中加DMSO,LPS＋替米沙坦组中加不同浓度替米沙坦,孵育2h后,再向LPS组和LPS＋替米沙坦组加入LPS（1μg/ml）,与替米沙坦共同孵育细胞1h。酶联免疫吸附法（ELISA）检测各组IL-6和TNF-α的蛋白分泌水平,Q-PCR检测各组IL-6和TNF-αmRNA基因表达。结果脂多糖处理后IL-6分泌较对照组增加约2.7倍,IL-6mRNA表达增加4倍。替米沙坦干预后各组IL-6浓度较脂多糖组均明显下降,10μg/ml组降低67%,IL-6mRNA表达随替米沙坦浓度升高而下降,10μg/ml组下降约63%。此外,与对照组相比,脂多糖处理组TNF-α分泌增加1.3倍,其mRNA表达增加3.5倍,替米沙坦干预后,各组TNF-α蛋白分泌及mRNA表达均较脂多糖组明显降低,大剂量替米沙坦干预后（10μg/ml）,TNF-α蛋白分泌下降约85%,mRNA表达下降约23%。结论替米沙坦通过影响脂肪细胞炎性因子的产生发挥抗炎作用,10μg/ml大剂量时作用尤为明显。     

神经生长因子对精子活动力的影响

目的 影响精子活动力的因素较多.文中研究拟通过动物实验观察神经生长因子(never growth factor,NGF)对人精子活动力的影响,以找出更多的临床治疗弱精子症的手段并分析其机制.方法 将NGF粉剂配成0、10、50、100μg/L 4个浓度溶液,作用于人精液30、60、90min后,观察精子活率和活动力的变化.大鼠肌注100μl(0.1μg)NGF,连续注射14d,观察大鼠附睾尾精子数目和活力.结果 NGF处理精液60min后,浓度为50μg/L时活率显著高于正常对照组和100μg/L组(P＜0.05),其他各组与对照组相比,精子活率差异均无统计学意义(P＞0.05).不同浓度NGF处理不同时间后,各组间精子活力差异无统计学意义(P＞0.05).NGF注射后,实验组大鼠附睾尾精子计数和精子活力明显增加,附睾尾精子相对计数显著高于对照组(P＜0.05).结论 NGF能促进精子的发生,对精子的活动力具有调控作用,有望为男性不育的治疗提供新思路.     

黄芪对脂多糖活化小鼠巨噬细胞产生一氧化氮的影响

目的研究黄芪经水提醇沉所得提取物及黄芪甲苷对脂多糖(LPS)活化小鼠巨噬细胞RAW 264.7细胞产生一氧化氮(NO)的影响作用,并测定提取物中黄芪甲苷的含量。方法小鼠三磷腺苷荧光试剂盒(ATPliteTM)测定黄芪提取物及黄芪甲苷对RAW 264.7细胞的毒性作用,Griss法测定样品对LPS活化RAW 264.7细胞后细胞培养液中亚硝酸盐(NO2-)的含量间接反映NO生成量,姜黄素为阳性对照。液相色谱仪测定提取物中黄芪甲苷的含量。结果黄芪提取物在200~400μg·mL-1、黄芪甲苷在10~20μg·mL-1的剂量范围内均表现出显著抑制NO生成的作用(P0.05)。每1 mg提取物中含6.1μg黄芪甲苷,400μg·mL-1提取物的抑制作用(其中含黄芪甲苷2.4μg·mL-1)与20μg·mL-1的黄芪甲苷相比,差异无统计学意义(P0.05)。结论黄芪具有抑制LPS活化小鼠巨噬细胞产生NO的作用,黄芪甲苷为其效应成分之一。     

Effect of rhTNF-α on Mitochondrial Transmembrane Potential and Motility of Human Sperm in vitro by Flow Cytometry and Computer Aided of Semen Analysis

Objective To evaluate effect of recombined human tumor necrosis factor (rhTNF-α)on mitochondrial transmembrane potential and motility of human sperm in vitro Methods Semen samples for study were obtained from 40 health men (average age 26± 1.2 years) with normal semen analysis. Sperm suspension with computer aided of semen analysis (CASA) technique; 2) were stained in the presence of 10 μg/ml Rh123and PI, mitochondrial transmembrane potential of those was analyzed by flow cytometry(FCM).Results Significant differences were found between experimental groups and control groups on viability, straight line velocity, curvilinear velocity, average path velocity,progressive motility of human sperm and number of sperm with normal mitochondrial transmembrane potential (P＜0. 01) expect final concentration 30 pg/ml group (P＞0.05). Sperm motility lowed with increasing rhTNF-α concentration and incubating time (P＜0.01). Number of sperm with normal mitochondrial transmembrane potential decreased with increasing rh TNF-a concentration and incubating time (P＜0.01).Conclusion rhTNF-α can decrease human sperm motility function in vitro, which can interfere the function of human sperm mitochondrial transmembrane potential and may inhibit sperm mitochondrial enzymatic activities.     

子宫内膜异位症腹腔液对精子运动功能影响的体外研究

目的　研究子宫内膜异位症 (内异症 )患者腹腔液体外对精子运动功能的影响 ,以探讨内异症引起不孕的机制。方法　取正常精液标本 ,经上游优化处理后 ,与内异症组 (30例 )及对照组 (18例 )腹腔液孵育 2h、4h ,采用计算机辅助精子分析系统 (CASA)检测精子的运动参数。结果　精子与腹腔液孵育 4h后 ,内异症组的精子总活动率、前向运动精子百分率、快速前向运动精子百分率及曲线速度 (VCL)、路径速度 (VAP)、直线速度 (VSL)、直线性(LIN)、摆动性 (WOB)、前向性 (STR)均显著低于对照组 (P <0 .0 1)。结论　内异症患者腹腔液对精子活动的抑制可能是导致不孕的一个因素。     

高效液相色谱法测定人血浆中苯妥英钠和苯巴比妥的浓度

目的：建立测定人血浆中苯妥英钠和苯巴比妥质量浓度的高效液相色谱方法。方法：血清经旋涡振摇和高速离心等处理后,取20μl进样分析,以ZORBAXSB-C18（4.6nm×250nm,5μl）为分离柱,磷酸二氢钾缓冲液（pH=3.5）-甲醇（40∶60）（V/V）为流动相,检测波长为210nm,流速为1ml/min,柱温为25℃。结果：苯妥英钠、苯巴比妥的血浆质量浓度分别在2.62～23.58μg/ml、6.24～56.12μg/ml检测范围内呈良好线性关系（r=0.9991、r=0.9992）;平均回收率分别为98.7%、98.6%;日内、日间差均小于4.0%,稳定性良好。结论：本方法准确可靠,简便快速,适用于人血浆中苯妥英钠和苯巴比妥质量浓度的测定及其药动学研究。     

右美托咪啶对男性患者全麻苏醒期导尿管相关膀胱刺激征的作用

目的：观察右美托咪啶对男性患者全麻苏醒期导尿管相关膀胱刺激征（CRBD）的作用。方法：择期全麻下手术男性患者150例,随机分为对照组（C组）和右美组（D组）,每组75例。C组给予咪唑安定0.03 mg·kg-1、芬太尼3μg·kg-1、丙泊酚1.5 mg·kg-1、琥珀胆碱2 mg·kg-1诱导,气管插管后静脉注射顺阿曲库铵0.1 mg·kg-1、芬太尼4μg·kg-1,泵入丙泊酚60-70μg·kg-1·min-1、顺阿曲库铵2-3μg·kg-1·min-1和瑞芬太尼0.1-0.3μg·kg-1·min-1维持麻醉。D组在气管插管后静脉泵入右美托咪啶1μg·kg-1,1 h泵完,余均同C组。两组均在诱导后放置导尿管,观察两组苏醒时间、苏醒期平均动脉压（MAP）和心率（HR）变化,并评估入麻醉恢复室（PACU）后CRBD发生率和严重程度。结果：与麻醉前比,苏醒期MAP和HR在D组无明显变化,而C组明显升高,两组比较差异有统计学意义（P〈0.05）;D组CRBD发生率和严重程度明显低于C组（P〈0.01或P〈0.05）。结论：右美托咪啶1μg·kg-1静脉泵入可降低男性患者全麻苏醒期CRBD发生率及严重程度,提高患者导尿后舒适度。     

吉西他滨及顺铂经动脉、静脉注射后血浆、组织药物浓度的变化

目的：分析不同化疗药物通过动脉及静脉途径注射后血浆及组织内药物浓度的变化情况。方法40只带瘤裸大鼠,随机分为8组,其中4组为动脉组,另4组为静脉组,带瘤裸大鼠分别经动脉及静脉注射吉西他滨及顺铂。于注射后5、10、20、40、80、120、360、720 min采血液标本,注射后10、40、120、720 min取组织标本,以高效液相色谱法测定血浆及肿瘤组织中吉西他滨浓度,ICP-MS法测定血浆及肿瘤组织中的铂含量,计算药代动力学参数。结果经动脉及静脉注射两种药物后,血浆及肿瘤组织中的药物浓度出现规律性变化,其变化过程均可用两室模型来描述。动脉注射两组药物的药代动力学参数与静脉注射的药代动力学参数不同,动脉组注射药物后,血浆药物峰浓度[吉西他滨：（20.84±10.11）μg/mL,顺铂：（15.13±7.12）μg/mL]均低于静脉组[吉西他滨：（28.96±7.02）μg/mL,顺铂：（21.64±9.72）μg/mL],靶组织内药物峰浓度[吉西他滨：（20.18±9.43）μg/mL,顺铂：（6.98±0.31）μg/mL]均高于静脉组[吉西他滨：（18.19±10.30）μg/mL,顺铂：（3.04±0.11）μg/mL],靶组织内药物曲线下面积[吉西他滨：（2641±411）μg/（min·mL）,顺铂：（6025±870）μg/（min·mL）]均明显高于静脉组[吉西他滨：（1663±568）μg/（min·mL）,顺铂：（1780±883）μg/（min·mL）],差异均有统计学意义（P〈0.05或P〈0.01）。结论动脉注射吉西他滨和顺铂较静脉注射有不同程度的优势,这种优势与药物的药理特性有关。     

小剂量玉米赤霉烯酮损害雄性小鼠生殖能力的研究

目的 评估小剂量(低于无明显作用水平的浓度)玉米赤霉烯酮(zearalenone,ZEA)暴露后小鼠精子发生及精液质量的变化趋势,探讨小剂量ZEA暴露对雄性小鼠生殖能力的影响.方法 90只出生后21 d的雄性CD-1小鼠按随机数字表法分成3组,分别暴露于0、20、40 μg/(kg·d)ZEA,处理14、28、42 d后,采用计算机辅助精液质量分析观察精子活力参数,吉姆萨染色观测精子畸形率,测量睾丸体积及质量,免疫组化染色检测生精细胞计数.结果 处理42 d后,20、40 μg,/(kg·d)组精子活动率低于0 μg/(kg·d)组[(82.80±4.34)％、(74.90±6.70)％ vs (93.20±1.66)％,P=0.004、0.002];20、40 μg/(kg·d)组小鼠畸形精子率高于0μg/(kg·d)组[(29.40±1.09)％、(40.80-±6.17)％ vs (19.40±0.45)％,P ＜0.001,P=0.002];20、40μg/(kg·d)组小鼠的单位面积生精细胞计数低于0μg/(kg·d)组(2 422.7±206.1、1 855.8±105.3 vs3 189.8 ±306.0,P=0.013、0.001).结论 小剂量ZEA的暴露能够降低雄性小鼠的精子发生及精液质量,损害其生殖能力.     

抗精子多肽抗体体外抗受精作用的初步研究

目的评价一种抗人工合成的精子多肽(35肽)抗体对人精子受精功能的影响情况.方法将含抗35肽抗体的兔血清与人精子共同孵育,用计算机辅助精液分析系统(computer aimed sperm assay, CASA)检测精子活动力,以及检测顶体反应率和穿卵率.结果抗35肽抗体兔血清可显著抑制精子的速度(包括直线速度、曲线速度和平均路径速度)、活动精子百分比、顶体反应率及穿卵率.结论抗35肽抗体可抑制人精子受精功能,35肽作为一种避孕疫苗有一定开发前景.