大鼠Alzheimer病模型制备

建立Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ病（ＡＤ）大鼠模型并观察其学习、记忆能力的改变。立体定位下将β－淀粉样蛋白（β－ＡＰ）注入大鼠迈入大鼠迈内特基底核（ＮＢＭ）建立大鼠ＡＤ模型,三等分Ｙ迷宫测定大鼠学习记忆能力。结果 模型组大鼠学习记忆能力下降;治疗组学习记忆虽有所改善,但与对照组比较仍有差异。提示β－ＡＰ注入ＮＢＭ能引起大鼠学习记忆损害,其行为学改变与ＡＤ早期症状相似。     

阿尔茨海默病患者β-淀粉样蛋白作用机制研究新进展

老年斑是阿尔茨海默病(Alzheimer disease,AD)患者脑内1个重要的病理改变,而β淀粉样蛋白(BA)是老年斑的主要组成成分。长期以来,人们就认识到BA对神经元的毒性作用,但对其作用机制一直存有争论。最近的研究表明,BA是通过与神经元表面受体结合,引起神经元内钙离子失衡,从而造成神经元的损伤的。     

天麻素对Aβ25-35诱导的Alzheimer病细胞模型的保护作用

目的研究天麻素(GAS)对诱导的阿尔茨海默病(AD)神经细胞的作用。方法以β-淀粉样肽25-35片段(Aβ25-35)20μmol/L诱导原代培养的大鼠大脑皮层、海马神经细胞建立AD细胞模型,以人参总皂甙作为阳性对照,通过形态学观察、MTT等方法检测细胞活力。结果与对照组比较,Aβ25-35诱导的培养神经元发生明显的形态学变化,MTT检测显示细胞活力明显下降,乳酸脱氢酶(LDH)释放增多,与对照组比较,差异有显著性(P<0.05);当预先加入不同质量浓度的天麻素、人参总皂甙时,Aβ25-35对神经细胞的损伤明显减轻,细胞活力明显增强,LDH释放减少,与实验对照组对比差异均有显著性(P<0.05)。结论天麻素具有预防和治疗AD的潜在功效。     

β-淀粉样肽诱导大鼠脑海马基因表达谱的差异分析

老年斑（SP）是阿尔茨海默病（AD）主要的组织病理学改变之一。老年斑的核心成分β淀粉样肽（Aβ）自1987年被首次分离成功后，它的结构及功能一直颇受关注。大量资料表明，Aβ是一种神经毒性物质，可以引起神经元的损伤、死亡，在AD的发病中起着相当重要的作用。它对神经细胞的毒性作用多样，机制复杂，至今其分子机理目前仍不十分明了。本研究选用含有4200条大鼠基因的eDNA表达谱基因芯片对Aβ1-40珈诱导后的大鼠海马组织进行基因表达谱分析，旨在探讨Aβ1-40珈毒性作用的分子机制。     

β-淀粉样肽研究进展

<正> 阿尔采末病(Alzheimer’s disease,AD)是临床上最常见的一种老年期痴呆综合征,它以细胞外老年斑(SPS)、细胞内神经原纤维缠结(NFTS)、神经元大量丢失为主要病理特征。β-淀粉样肽(β-amy-loid precursor Aβ)是老年斑的主要结构物质,且Aβ聚集后对体外培养的神经元具有毒性,Aβ被普遍认为     

穹隆-海马伞切断及去势大鼠脑内β淀粉样肽1-40表达的变化

①目的　观察穹隆 海马伞切断及去势大鼠脑内不同部位 β淀粉样肽 1 4 0 (Aβ1 40 )表达的变化 ,了解与阿尔茨海默病 (AD)相关的发病机制。②方法　将大鼠分为穹隆 海马伞切断及去势模型组 (模型组 )和假手术组 ,假手术组除不切断海马伞和去除卵巢外 ,其余步骤同模型组。常规处死大鼠取脑组织行Aβ1 40 免疫细胞化学染色 ,观察海马CA1区、皮质区、杏仁复合体区、基底前脑Meynert核等部位Aβ1 40 阳性细胞表达变化。③结果　假手术组大脑各观察区有少量的Aβ1 40 表达。与假手术组比较 ,模型组大脑海马CA1区、大脑皮质区、杏仁复合体区Aβ1 40 阳性细胞数明显增多 (t=3.96 9～ 6 .6 77,P <0 .0 1)。④结论　穹隆 海马伞切断加去势可致大鼠脑内多部位Aβ1 40 表达增多 ,此可能与老年性痴呆病理改变有关。     

β-淀粉样肽与阿尔茨海默病

阿尔茨海默病(Alzheimer disease,AD)是老年人群中最常见的一种痴呆症,为病因和发病机制尚不清楚的神经系统退行性病变。AD的组织病理学表现主要为老年斑(senile plaques,SP),神经元纤维缠结(neurofibrillary tangles,NFTs),以及由凋亡引起的区域性神经细胞死亡等。患者脑内老年斑主要是由具有神经毒性和血管毒性的β淀粉肽(β-amyloid,Aβ)生成。由于AD为多因异质性疾病,目前Aβ-淀粉样肽级联假说引起广泛关注和重视,本文就近年关于Aβ与AD的关系作一综述。     

侧脑室注射链脲霉素引起大鼠脑Aβ1-40和Aβ1-42表达增加

目的:探讨大鼠侧脑室注射链脲霉素(Streptozotocin,STZ)阻断脑内胰岛素信号传导与Aβ表达的关系.方法:24只SD大鼠随机等分为手术组和对照组(n=12),手术组双侧侧脑室注入STZ 3 mg/kg,第3日重复此剂量,对照组只手术操作但不注射药物.21 d后,采用免疫组化方法观测各组大鼠大脑皮层和海马区的Aβ1-40和Aβ1-42阳性表达.结果:与对照组相比,手术组皮层、海马Aβ1-40和Aβ1-42阳性细胞明显增多.结论:侧脑室注射STZ可以引起脑内Aβ表达增多,提示胰岛素/胰岛素受体系统障碍与阿尔茨海默病(AD)发病有密切关系.     

Pathway and mechanism of oxidative stress in Alzheimer''''s disease

Current hypotheses of pathogenesis of neuronal degeneration in Alzheimer's disease (AD) have been proposed, including formation of free radicals, oxidative stress, mitochondrial dysfunction, inflammatory processes, genetic factors, environmental impact factors, apoptosis, and so on. Especially, oxidative stress plays an essential role in AD pathogenesis by the function of linking agent. Oxidative stress in AD mainly includes lipid peroxidation, protein oxidation and DNA oxidation. Lipid peroxidation plays a key role in the development and progression of AD. Protein oxidation is an important mechanism in AD. Oxidative damage to DNA may plays an important role in aging and AD.     

侧脑室注射链脲霉素引起大鼠脑Aβ1-40、Aβ1-42和tau202、tau396、tau404表达增加

目的 探讨用链脲霉素(Streptozotocin,STZ)阻断脑内胰岛素信号传导,引起脑能量代谢障碍与Aβ表达及tau蛋白过度磷酸化的关系。方法 24只SD大鼠随机分为实验组和生理盐水组,实验组双侧侧脑室注入STZ3mg/kg,第3天重复此剂量;生理盐水组手术操作相同,但注入等量的生理盐水代替STZ。21d后,采用免疫组化方法观测各组大鼠大脑皮层和海马区的Aβ_1-40、Aβ_1-42、tau³⁹⁶、tau⁴⁰⁴阳性细胞表达。结果 与生理盐水组相比,实验组皮层和海马Aβ_1-40、Aβ_1-42、tau²⁰²、tau³⁹⁶、tau⁴⁰⁴阳性细胞明显增多。结论 侧脑室注射STZ可以引起脑内Aβ表达增多和tau蛋白过度磷酸化。     

天然抗氧化剂在阿尔兹海默病中的应用研究进展

氧化应激极易触发细胞内信号转导,催化神经元变性,导致神经元死亡和丢失,进而引起和加重阿尔茨海默病（Alzheimer's disease,AD）,在AD的发生与发展中发挥至关重要的作用。积极的抗氧化措施可预防、延缓和治疗AD。在各种抗氧化干预中,天然抗氧化剂因易摄取,副作用小等特点成为未来AD新药研发的重点之一。本文综述了近年来天然抗氧化剂预防及治疗AD的研究进展。     

Protective effect of cyclophilin A against Alzheimer＇s amyloid beta-peptide （25-35）-induced oxidative stress in PC12 cells

Background β-amyloid peptide （Aβ） is considered responsible for the pathogenesis of Alzheimer＇s disease （AD）. Possible mechanisms underlying Aβ-induced neuronal cytotoxicity include excessive production of reactive oxidative species （ROS） and apoptosis. Cyclophilin A （CypA）, exhibits antioxidant properties and protects neurons against oxidative stress induced injury. This study was conducted to demonstrate whether CyPA added to cultured PC12 cells could alleviate Aβ-induced oxidative stress and protect them from apoptosis.
Methods PC12 cells were pre-incubated for 30 minutes with recombinant human cyclophilin A （rhCyPA） in 0.1 nmol/L, 1.0 nmol/L, 10 nmol/L and 100 nmol/L and then incubated with 10 μmol/L Aβ25-35. In every group, cell viability, apoptotic morphology, apoptotic rate, intracellular ROS accumulation, the activities of superoxide dismutase （SOD） and glutathione peroxidase （GSH-Px） of PC12 cells and mitochondrial transmembrane potential were detected. Subsequently, the expression of the active form of caspase-3 was determined by Western blotting.
Results It was shown that cultures treated with 1.0 nmol/L, 1U nmol/L or 100 nmol/L rnL, rhCyPA＋Aβ25-35 had significantly higher cell viability and a lower rate of apoptosis compared with the cultures exposed only to Aβ25-35. In addition, rhCyPA attenuated Aβ25-35-induced overproduction of intracellular ROS and Aβ25.35-induced a decrease in activity of the key antioxidant enzymes SOD and GSH-Px. Furthermore, rhCyPA also attenuated Aβ25.35-induced mitochondrial dysfunction and the activation of caspase-3.
Conclusion CyPA may act as an ROS scavenger, and prevent Aβ25-35-induced neurotoxicity through attenuating oxidative stress induced by Aβ25-35.     

健脑益智汤对阿尔茨海默病大鼠学习记忆和氧化应激的影响

目的观察健脑益智汤对AD大鼠学习记忆和氧化应激的影响。方法选出正常老年大鼠48只,随机分为对照组、模型组、安理申组和健脑益智汤大、中、小剂量组。除对照组左侧侧脑室注射5μl生理盐水外,其余各组给予等量聚集态的Aβ25-35建立AD模型,并且各组按规定剂量灌胃3周。采用Morris水迷宫测试各组大鼠学习记忆能力,并检测血清和脑组织MDA含量和SOD活力。结果健脑益智汤大、中剂量组较安理申组能更有效地减少AD大鼠MDA含量(P<0.05)、增加SOD活力;而对AD大鼠学习记忆能力的改善作用二者无明显差别。结论健脑益智汤可以通过影响自由基水平对阿尔茨海默病大鼠有一定的防治作用。     

中药更年春含药血清对β淀粉样蛋白诱导的PC12细胞凋亡的影响

目的：研究大鼠更年春含药血清对β淀粉样蛋白25-35（amyloid beta protein 25-35,Aβ_（25-35））导致的大鼠肾嗜铬细胞瘤细胞（pheochromocytoma cell,PC12）损伤的抗凋亡作用。方法：通过对去势雌性大鼠灌服中药更年春制备含药血清,细胞计数试剂盒（cell counting kit-8,CCK-8）检测不同浓度含药血清对PC12细胞存活率的影响;不同浓度Aβ_（25-35）作用于PC12细胞,建立阿尔茨海默病细胞模型,CCK-8法检测含药血清对损伤细胞的保护作用,流式细胞术检测PC12细胞在Aβ_（25-35）和含药血清共同培养下的细胞凋亡率;蛋白印迹法检测各组细胞Bcl-2、Bax和半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶3（caspase-3）的蛋白表达情况。结果：与空白血清相比,20%含药血清培养PC12细胞24 h或48 h后可促进其增殖（P〈0.05）。Aβ_（25-35）对PC12细胞有细胞毒性,并呈剂量依赖性地降低细胞存活率（P〈0.05）,导致细胞凋亡。CCK-8法和流式细胞术检测均显示,20%更年春含药血清对Aβ_（25-35）诱导的PC12细胞损伤有保护作用（P〈0.05）,其作用效果类似于阳性对照药神经生长因子。蛋白印迹法检测显示,与模型组比较,含药血清组Bax和Bcl-2蛋白表达的比值和caspase-3蛋白表达均降低。结论：更年春含药血清可提高Aβ25-35损伤的PC12细胞的存活率,并减少PC12细胞凋亡。其机制可能与调控Bcl-2家族蛋白的表达而实现抗凋亡作用有关。     

Cerebrospinal Fluid Biomarkers in Dementia Patients with Cerebral Amyloid Angiopathy

Objective To study the changes of biomarkers in cerebrospinal fluid (CSF) in cerebral amyloid angiopathy (CAA) dementia and Alzheimer's disease. Methods Levels of amyloid proteinβ (Aβ42, Aβ40) and phosphorylated Tau-protein (P-tau) in CSF and ratio of Aβ42/Aβ40 were tested in 5 cases with CAA dementia and 20 cases with Alzheimer's disease collected at Peking Union Medical College Hospital from December 2001 to March 2011. Results The levels of Aβ42, Aβ40, and P-tau in CSF and ratio of Aβ42/Aβ40 were (660.4±265.2) ng/L, (7111.0±1033.4) ng/L, (71.8±51.5) ng/L, and 0.077±0.033, respectively in CAA dementia and (663.6±365.6) ng/L, (5115.0±2931.1) ng/L, (47.7±38.8) ng/L, and 0.192±0.140, respectively in Alzheimer's disease patients. There were no statistically significant differences between CAA dementia and Alzheimer's disease in terms of these CSF biomarkers (allP>0.05). Conclusion Measurements of CSF biomarkers may not be helpful in differential diagnosis of CAA and Alzheimer's disease.     

阿尔茨海默病发生机制的研究进展

阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD),又称老年性痴呆,是一种神经系统退行性疾病,是痴呆中最常见的类型,在老年人中发病率越来越高,临床上主要表现为渐进性记忆减退、认知功能障碍以及其他神经精神症状和行为障碍。阿尔茨海默病的病因尚未明确,发病机制十分复杂,本文就阿尔茨海默病发生机制的研究进展作一简要综述。     

异氟醚对Aβ25-35诱导大鼠PC12细胞氧化应激损伤的影响及海藻糖的保护作用

目的:探讨吸入麻醉药异氟醚对β淀粉样蛋白25-35(Aβ25-35)诱导大鼠PC12细胞氧化应激损伤的影响,阐明海藻糖对其可能的预防及保护作用。方法:将大鼠PC12细胞随机分为正常对照组(Control组)、异氟醚组(Iso组)、Aβ25-35组(Aβ组)、异氟醚+Aβ25-35组(Iso+Aβ组)、异氟醚+Aβ25-35+海藻糖组(Iso+Aβ+Tre组)和海藻糖组(Tre组)。正常对照组,PC12细胞给予正常细胞培养基培养;Iso组,PC12细胞给予2%异氟醚;Aβ组,PC12细胞给予10 μmol·L^-1 Aβ25-35;Iso+Aβ组,PC12细胞给予2%异氟醚和10 μmol·L^-1 Aβ 25-35;Iso+Aβ+Tre组,PC12细胞给予2%异氟醚、10 μmol·L^-1 Aβ25-35和200 mmol·L^-1海藻糖;Tre组,PC12细胞给予200 mmol·L^-1海藻糖。采用MTT法检测细胞存活率;Hoechst 33342荧光染色检测细胞凋亡率;二氯二氢荧光素-乙酰乙酸酯(DCFH-DA)荧光法检测细胞中活性氧(ROS)水平;化学发光法测定细胞中丙二醛(MDA)水平,超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)及过氧化氢酶(CAT)活性。结果:与正常对照组比较,Iso组、Aβ组和Iso+Aβ组PC12细胞凋亡率明显升高(P<0.05或P<0.01),细胞存活率明显降低(P<0.05或P<0.01),细胞中ROS和MDA水平(P<0.05或P<0.01)明显升高,细胞中SOD、GSH-Px和CAT活性明显降低(P<0.05或P<0.01);与Iso和Aβ组比较,Iso+Aβ组细胞凋亡率明显升高(P<0.05),但细胞存活率明显降低(P<0.05),细胞中ROS、MDA水平(P<0.05)明显升高,细胞中SOD和GSH-Px和CAT活性明显降低(P<0.05);与Iso+Aβ组比较,Iso+Aβ+Tre组细胞凋亡率(P<0.05)明显降低,细胞存活率明显升高(P<0.05),细胞中ROS和MDA水平明显降低(P<0.05),细胞中SOD、GSH-Px和CAT活性明显升高(P<0.05)。结论:吸入麻醉药异氟醚能够加剧Aβ25-35诱导PC12细胞氧化应激损伤和细胞凋亡,海藻糖能够通过抗氧化和抗凋亡作用拮抗异氟醚的细胞毒性。