siRNA沉默survivin对人胃癌SGC-7901细胞生长的抑制作用

目的: 探讨siRNA沉默survivin基因表达对胃癌细胞生长的抑制作用及其机制,为胃癌及survivin阳性肿瘤的治疗提供理论依据。方法: 针对survivin　mRNA 序列设计合成编码siRNA的DNA模板,构建2个重组质粒pGCsilencerU6/GFP/survivin siRNA-１和-２;实验分为脂质体对照、空质粒转染对照及survivin siRNA重组质粒转染治疗组,转染胃癌细胞SGC-7901,采用RT-PCR法检测survivin　mRNA的表达,Western blotting检测蛋白表达,观察重组质粒对其转染的SCG-7901细胞survivin基因表达的影响;用四甲基偶氮唑盐(MTT)法测量细胞生长情况;用流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果: Western blotting、RT-PCR结果证实转染重组质粒pGCsilenerU6/GFP/survivin-siRNA-1 的SCG-7901细胞survivin蛋白质及mRNA抑制率（78.25%及88.75%）均高于脂质体对照组（5%及2%）和空质粒对照组（1%及6%）（P<0.01）;转染重组质粒pGCsilenerU6/GFP/survivin-siRNA-2的SCG-7901细胞survivin蛋白质及mRNA抑制率（42%及77%）也均高于脂质体对照组和空质粒对照组（P<0.01）;MTT法检测结果显示转染重组质粒pGCsilenerU6/GFP/survivin-siRNA-1组细胞体外生长的抑制率（64%）高于空质粒对照组（11%）（P<0.01）;流式细胞术检测的转染重组质粒pGCsilenerU6/GFP/survivin-siRNA-1组细胞凋亡率（21.20±3.21）高于脂质体对照组（0.830±0.001）和空质粒对照组（1.98±0.67）（P<0.01）。结论:重组质粒pGCsilencerU6/GFP/survivin-siRNA可抑制胃癌细胞中survivin的表达,并抑制胃癌细胞生长,促进其凋亡。     

糙皮侧耳碱提水溶性多糖对肿瘤的抑制作用及其机制

目的：研究糙皮侧耳(Pleurotus ostreatus)碱提水溶性多糖对肿瘤的抑制作用,并探讨其作用机制。方法：通过碱液提取、乙醇沉淀、联合脱蛋白和柱层析方法,分离得到粗皮侧耳碱提水溶性多糖WPOP-N1;BalB/C小鼠前肢腋皮下注射S-180肉瘤细胞建立肿瘤小鼠模型,将60只雌性小鼠随机分为正常对照组、模型对照组、环磷酰胺阳性对照组（30 mg/kg）、WPOP-N1 低、中和高剂量组（100、200和400 mg/kg）,每组10 只。除正常对照组外,在每只小鼠的前肢腋皮下注射S-180肉瘤细胞悬液,对照组小鼠给予生理盐水,模型对照组小鼠给予脂多糖10 mg?L-1。采用ELISA法检测各组小鼠血清TNF-α水平,评价WPOP-N1对巨噬细胞吞噬作用,NO和TNF-α水平的影响。结果： WPOP-N1低、中和高剂量组小鼠瘤质量分别为（2.38±0.55）、（1.79±0.64）和（1.37±0.51）g,均低于正常对照组［（3.71±0.81）g］（P<0.05）;WPOP-N1低、中和高剂量组抑瘤率分别为35.8%、51.8%和63.1％;WPOP-N1中、高剂量组荷瘤小鼠血清TNF-α水平高于正常对照组（P<0.05或P<0.01）;腹腔巨噬细胞的吞噬能力高于正常对照组（P<0.05或P<0.01）;WPOP-N1低、中和高剂量组小鼠腹腔巨噬细胞分泌NO和TNF-α水平升高（P<0.05）,并具有剂量效应。结论： WPOP-N1具有显著的体内肿瘤抑制作用,其作用机制可能是活化巨噬细胞分泌NO和TNF-α,并增强巨噬细胞的吞噬能力。     

rhTRAIL对黑色素瘤A-375细胞凋亡的影响

目的：研究重组人肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体（rhTRAIL）对黑色素瘤A-375细胞生长及诱导细胞凋亡的影响，并探讨其可能机制。方法：将培养的黑色素瘤A-375细胞分为对照组和rhTRAIL低、中、高剂量组（0.25、0.50、1.00 mg•L^-1），经不同剂量rhTRAIL作用后，观察细胞形态；MTT法检测细胞存活分数；TUNEL法检测细胞凋亡率；流式细胞仪检测细胞凋亡及细胞周期变化。 结果：对照组细胞呈梭形贴壁或半贴壁生长，rhTRAIL组一部分细胞变圆，贴壁不佳，细胞数低于对照组。与对照组比较，rhTRAIL明显抑制黑色素瘤A-375的生长，1.00 mg•L^-1 组的生长抑制率最高，0.50 mg•L^-1 组次之，0.25 mg•L^-1 组最低，3组间比较差异有显著性（P<0.05 )。流式细胞检测结果显示，rhTRAIL蛋白可诱导A-375细胞凋亡，rhTRAIL低、中、高剂量组细胞凋亡率分别为6.68 %、24.59 % 和28.91 %，且凋亡率随剂量增大而升高，3组间比较差异有显著性（P<0.05 )。rhTRAIL低、中、高剂量组细胞处于G₁期的百分率（45.26%、60.67%和69.10 %）明显高于对照组（37.41 %）（P<0.05 )。结论： rhTRAIL对A-375细胞生长有显著的抑制作用,呈剂量依赖性，其机制可能与细胞周期阻滞、诱导细胞凋亡有关。     

RNAi沉默Survivin基因对人甲状腺癌SW579增殖的影响

目的:应用RNAi技术封闭Survivin基因,对甲状腺癌细胞增殖的影响,探讨RNA干扰survivin基因表达治疗甲状腺癌的可行性。方法:实验设为空白组、脂质体组、阴性对照组和RNAi组。RNAi组是针对Survivin基因的有效序列合成DNA正义链及反义链,经变性、退火,形成双链DNA,与pGenesil-1线性质粒构建重组体,经脂质体转染SW579细胞。各组利用RT-PCR、Western-bloting检测survivin表达情况;MTT法检测细胞增殖的变化,流式细胞仪检测转染后SW579细胞凋亡的变化。结果:RT-PCR、Western blotin结果显示,转染survivin基因重组体组的mRNA和蛋白水平的表达与其它各组比较均明显下调(P<0.01),转染后SW579细胞生长率下降,凋亡指数明显增加(P<0.01)。结论:特异封闭survivin基因,能够有效地抑制甲状腺癌细胞的增殖,诱导其凋亡的发生。     

五味子油对2型糖尿病大鼠胰岛B细胞凋亡的影响

目的：研究五味子油对2型糖尿病大鼠胰岛B细胞的保护作用,探讨其降血糖作用及机制。方法：Wistar　雄性大鼠,高脂饮食联合小剂量链脲佐菌素(STZ,30 mg.kg^-1）间隔2次注射建立2型糖尿病大鼠模型,将模型成功大鼠随机分为糖尿病模型组（DM）和五味子油治疗组（DM+SCO）,另设正常对照组（CON）和正常五味子油组（CON+SCO）。药物干预6周后,检测各组动物血清空腹血糖（FBG）、空腹血清胰岛素（FINS）水平;大鼠血清丙二醛（MDA）含量、超氧化物歧化酶（SOD）和过氧化氢酶（CAT）活性;采用RT-PCR法检测大鼠胰腺组织B
cl-2、Bax 和Caspase 3 mRNA表达水平。结果：与模型组比较,五味子油治疗组大鼠FBG水平明显下（P<0.05）,FINS水平明显升高（P<0.05）;五味子油治疗组大鼠血清MDA含量下降（P<0.05）,SOD及CAT活性升高（P<0.05）;五味子油治疗组大鼠胰腺组织Bcl-2 mRNA表达水平升高,Caspase 3 mRNA表达水平下降（P<0.05）,Bax表达无明显变化,但Bax/bcl-2比值降低。与正常对照组比较,正常五味子油组大鼠上述指标未出现明显改变。结论：五味子油可通过降低脂质过氧化反应副产物,增强抗氧化物酶活力,调节凋亡相关基因,促进血清胰岛素分泌,从而降低血糖。     

五味子多糖对人结肠癌SW480细胞增殖和凋亡的作用

目的：探讨五味子多糖（Schisandra polysaccharide,SCP）对人结肠癌SW480细胞的增殖和凋亡的影响及其机制。方法：将人结肠癌SW480细胞分为对照组,SCP高剂量组、SCP中剂量组和SCP低剂量组,MTT法检测肿瘤细胞增殖情况,流式细胞仪检测凋亡,免疫组化法检测凋亡蛋白表达。结果：与对照组比较,SCP高、中、低剂量组均能不同程度抑制结肠癌SW480细胞的增殖,促进肿瘤细胞凋亡,使凋亡蛋白Bcl－2表达降低,Bax表达增加,具有剂量依赖关系。结论：五味子多糖能够抑制结肠癌SW480细胞的增殖同时促进细胞凋亡,这可能与其影响凋亡蛋白的表达相关。     

靶向存活素基因的RNAi联合X线照射对肺腺癌A549细胞凋亡的影响

目的:构建靶向存活素（survivin）基因的RNA干扰(RNAi）载体,观察其联合X射线照射对肺腺癌A549细胞凋亡的影响。方法:根据GenBank中survivin的cDNA序列设计干扰序列,构建重组干扰质粒pGenesil2-survivin。酶切、测序鉴定正确后,干扰质粒经脂质体介导转染肺腺癌A549细胞;实验设正常组、空载体组、pGenesil2-survivin组、5 Gy照射组和pGenesil2-survivin + 5 Gy照射组。流式细胞术与TUNEL检测细胞凋亡的变化,Western blotting检测survivin及caspase-3蛋白表达。结果：KpnⅠ和EcoRⅠ双酶切,得到大小为389 bp和4 206 bp的两个片段,与预期结果一致;测序结果与寡核苷酸链经DNAssist2.0软件进行比对,二者完全一致,说明载体构建正确;质粒pGenesil2-survivin转染肺腺癌A549细胞48 h,pGenesil2-survivin与5 Gy X射线照射都能诱导细胞凋亡百分率增加（P< 0.05）,二者共同作用凋亡百分率增加更明显;Western blotting结果显示,pGenesil2-survivin组中survivin蛋白与β-actin蛋白灰度比值较正常组明显降低（P< 0.01）;而caspase-3蛋白与β-actin蛋白灰度比值较正常组明显增强,且pGenesil2-survivin+5 Gy照射组增加更明显（P< 0.01）。结论:靶向存活素基因的RNAi能够明显抑制survivin蛋白表达,增强caspase-3蛋白表达,促进凋亡;联合5 Gy X射线照射,增强促凋亡作用。     

蛋白激酶CK2抑制剂TBB对甲状腺鳞癌细胞株SW579CK2β和Akt表达的影响

目的：观察四溴苯三唑(TBB)对甲状腺鳞癌SW579细胞株CK2β和Akt表达的影响,探讨TBB抗甲状腺癌的作用机制。方法：体外培养SW579细胞,实验分为对照组（未加任何处理组和DMSO组）、TBB组（终浓度为25 μmol/L）和Wortmannin组(终浓度为100 nmol/L)。MTT比色法测定细胞生长抑制率,同时测定蛋白激酶CK2的活性。采用RT-PCR方法检测SW579细胞CK2β及Akt的mRNA表达,分析各处理组CK2β及Akt基因表达变化。采用Western blotting方法检测SW579细胞CK2β及Akt的蛋白表达,分析各处理组CK2β及Akt的蛋白表达变化。结果：与对照组比较,TBB组SW579细胞生长抑制率明显增加（P<0.01）,细胞内CK2的活性明显降低（P<0.01）。RT-PCR结果表明,与对照组比较,TBB组CK2β的mRNA 表达水平显著降低（P<0.01）,Akt的mRNA 表达水平无明显变化（P>0.05）。Western blotting结果表明,与未处理组比较,Wortmannin组内源性CK2的活性无明显变化（P>0.05）,TBB组CK2β的表达明显降低（P<0.01）,同时Akt Thr308和Ser473磷酸化状态受到抑制（P<0.01）,总Akt水平无明显变化。结论：TBB可降低SW579细胞蛋白激酶CK2β的表达,进而再下调Akt的活性。     

Staurosporine对甲状腺癌SW579细胞的促凋亡作用

【目的】研究星形孢菌素促进人甲状腺癌细胞SW579凋亡的作用,从而为肿瘤治疗寻找新的方向。【方法】MTT法检测ST对SW579细胞增殖的抑制作用。流式细胞术检测细胞周期分布及细胞凋亡情况。用Hochest33258及MDC染色方法分别检测细胞的凋亡及自噬发生情况。Western blotting用于检测相关蛋白的表达情况。【结果】通过MTT检测发现staurosporine对SW579增殖的抑制呈浓度和时间依赖性。流式细胞术检测发现staurosporine对SW579细胞具有G0~G1期阻滞。【结论】Staurosporine能够诱导对SW579细胞凋亡从而抑制肿瘤细胞的增殖。     

血管内皮钙黏蛋白在非小细胞肺癌血管生成中的作用

［摘 要］ 目的:探讨血管内皮钙黏蛋白（VE-cadherin）在非小细胞肺癌(NSCLC)血管生成中的作用,为NSCLC的抗血管生成治疗提供实验依据。方法:将人肺癌A549细胞分为空白对照组、干扰组和阴性对照组,VE-cadherin-siRNA瞬时转染A549细胞,实时定量PCR和Western blotting法检测VE-cadherin在各组细胞中表达水平;新型四唑氮盐（MTS）比色法检测A549细胞吸光度(A490)值的变化;流式细胞术检测细胞周期和凋亡率;ELISA法分析A549细胞瞬时转染上清中VE-cadherin的表达水平;并分析上清液作用后人脐静脉内皮细胞(HUVECs)A490值、各周期(G0/G1、G2/M和S)细胞比率、凋亡率和Matrigel小管形成数的改变。结果:干扰组VE-cadherin mRNA的表达水平（0.299±0.039）明显低于空白对照组（1.137±0.082）和阴性对照组（1.001±0.076）（P<0.05）;干扰组VE-cadherin蛋白的表达水平（0.297±0.045）明显低于空白对照组（0.833±0.119）和阴性对照组（0.794±0.095）(P<0.05);各组A549细胞A490值、各周期细胞比率和凋亡率比较差异无统计学意义;干扰组上清液中VE-cadherin的表达水平［(2.89±0.07) μg/L］明显低于空白对照组［（11.43±0.09）μg/L］和阴性对照组［（11.15±0.04）μg/L］（P<0.05）。干扰组与阴性对照组上清液作用后G0/G1、G2/M和S期HUVECs所占百分比比较差异无统计学意义(P>0.05);干扰组上清液明显抑制了HUVECs的增殖,作用24、48和72 h细胞增殖抑制率分别为29.2%、33.8%和30.1%;作用48 h干扰组HUVECs的凋亡率为27.12%±5.22%,显著高于阴性对照组(13.43%±3.50%)（P<0.05）。干扰组HUVECs小管形成数为1.53±0.31,显著低于阴性对照组（14.53±1.51）（P<0.05）。结论:VE-cadherin可能通过促进血管生成参与NSCLC的发生发展,有望成为NSCLC抗血管生成治疗的新靶点。     

甘草和五味子对大鼠丙咪嗪药代动力学的影响

以丙咪嗪为探针药物,采用体内代谢的方法研究甘草和五味子对大鼠肝微粒体细胞色素P450(CYP450)的影响。将大鼠随机分为甘草、五味子、生理盐水(空白对照)、苯巴比妥(阳性对照)组,测定各组CYP450的质量摩尔浓度。并于末次给药次日,进行大鼠右侧颈静脉插管手术。手术后第2天静脉给予丙咪嗪,定点取血,HPLC法测定丙咪嗪体内代谢变化。结果:各中草药组CYP450的水平均被显著诱导,丙咪嗪的体内代谢发生了明显改变。研究显示甘草和五味子对大鼠CYP450有诱导作用,且与剂量及诱导时间有关;被诱导的大鼠丙咪嗪的体内代谢加快,甘草和五味子与丙咪嗪合用时药代动力学发生改变。     

PDCD4对甲状腺癌SW579细胞调亡及成瘤能力的影响

目的 研究程序性细胞死亡因子4(PDCD4)诱导的对甲状腺癌SW579细胞凋亡效应及抑制成瘤能力的可能作用机制.方法 将对数生长期的细胞分为两组,观察组先予以PDCD4凋亡相关基因Bax的刺激14 h进行细胞的收集,然后加入tPA刺激细胞进行收集.对照组未加PDCD4凋亡相关基因Bax的刺激和tPA刺激.应用AnnexinV/PI和API等标记,Cyclins/DNA双标流式细胞仪检测甲状腺癌SW579细胞的凋亡及周期特异性,运用RT-PCR的方法检查Caspase-3、Caspase-9活化情况.结果 处于静止期的外周血对PDCD4凋亡诱导不敏感,而G1期PDCD4诱导甲状腺癌SW579细胞出现了明显的细胞凋亡.PDCD4诱导的细胞凋亡主要是在细胞周期的G1期发生.观察组的Caspase-3、Caspase-9 mRNA的表达值分别为(1.12±0.56)、(1.10±0.29),显著高于对照组的(0.82±0.31)、(0.72±0.26),差异有统计学意义(P<0.05).结论 PDCD4诱导的细胞凋亡与甲状腺癌SW579细胞的细胞周期相关,存在G1期细胞周期阻滞的周期特异性,且此过程中发生了Caspase活化,参与细胞凋亡及可能抑制细胞成瘤能力.     

PKB/CDC25B信号通路对甲状腺鳞癌SW579细胞生长增殖的调控作用

目的探讨PKB/Cdc25B信号通路对甲状腺鳞癌SW579细胞生长增殖的调控作用。方法体外培养甲状腺鳞癌SW579细胞,实验分为对照组、Wortmannin组和DMSO组,在倒置显微镜下观察细胞生长情况及形态变化;用western blot方法检测PKB、CDC25B蛋白表达和PKB-pS473、CDC25B-pS353及CDC2-pTyr15的磷酸化状态;用ELISA方法检测MPF活性。结果与对照组相比,DMSO组细胞形态无明显变化,各项检测指标无明显差异（P〉0.05）;Wortmannin组细胞形态回缩,PKB和CDC25B蛋白表达明显下降（P〈0.01）,PKB-pS473和CDC25B-pS353的磷酸化水平显著下调（P〈0.01）,而CDC2-pTyr15的磷酸化水平显著上调（P〈0.01）,MPF活性明显下降（P〈0.01）。结论甲状腺鳞癌SW579细胞内源性PKB可以通过调控CDC25B对MPF活性及细胞增殖产生影响。     

骨桥蛋白对甲状腺癌细胞生物学效应的影响

目的探讨骨桥蛋白(OPN)对甲状腺癌生物学行为的影响。方法 SW579细胞置于6孔板中培养,采用随机数字表法分成对照组、阴性对照组、OPN siRNA干扰组3组,每组3个孔,每个孔2 m L,细胞密度为1×10~4/m L。对照组不作任何处理,阴性对照组转染OPN阴性序列,OPN siRNA干扰组转染OPN siRNA序列。采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)测定并比较转染后3组细胞OPN、MMP-2、MMP-9、Caspase-3的mRNA水平,四甲基偶氮唑盐(MTT)测定转染后3组细胞的抑制率,流式细胞仪检测转染后3组细胞凋亡率,Transwell小室检测转染后3组细胞的侵袭力,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测3组OPN、MMP-2、MMP-9、Casepase-3的蛋白水平。结果 OPN siRNA干扰组的OPN mRNA的表达水平显著低于对照组和阴性对照组,细胞凋亡率显著高于对照组以及阴性对照组,侵袭能力显著低于对照组和阴性对照组,OPN、MMP-2、MMP-9 mRNA和蛋白水平显著低于对照组和阴性对照组,Casepase-3mRNA和蛋白水平显著高于对照组和阴性对照组,差异均有统计学意义(P <0. 05)。结论 OPN干扰后SW579细胞增殖和侵袭能力下降,凋亡率增加,其机制可能与凋亡蛋白caspase-3水平增加,MMP-2、MMP-9水平下降有关。     

局部应用菟丝子总多糖对家兔骨折修复中TGF-β1表达的实验研究

目的：研究局部运用菟丝子总多糖在促进家兔骨折修复中TGF-β1的表达及其机理。方法：选用健康成年家兔63只,体重2.5 kg左右。随机分为3组（即菟丝子组、BMP组和空白组）,每组21只。在小腿中段前外侧逐层切开皮肤,分离组织,以线锯于胫骨中段截骨约0.5 cm,手法复位并维持。菟丝子组、BMP组分别在骨缺损断端间置入菟丝子总多糖凝胶、骨形成蛋白填充于缺损处;空白组断端间不作处理。三组均予缝合、夹板外固定。术后于2、4、8周分批处死实验动物7只,取标本行TGF-β1免疫组化的方法进行评估。结果：中药组、BMP组TGF-β1免疫组化积分光密度值与空白组比较,都有显著性差异（P〈0.01或P〈0.05）;中药组与BMP组比较无统计学意义（P〉0.05）。结论：菟丝子总多糖可促进TGF-β1参与调节骨折修复。一定程度证实了中药菟丝子对骨折损伤的修复作用。     

参芪五味子片治疗失眠症46例疗效观察

目的探讨参芪五味子片治疗失眠症患者的临床疗效。方法选择2009年1月至2010年12月我院收治的92例失眠症患者,随机分为观察组和对照组两组各46例,观察组患者采用参芪五味子片治疗,对照组患者采用常规西医治疗,并比较两组患者的临床疗效。结果经过治疗,观察组患者的总有效率为86.96%,对照组的总有效率为69.57%,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论参芪五味子片治疗失眠症患者,其临床疗效显著且无不良反应发生,值得临床推广应用。     

五味子对雷公藤体外生物活性影响的实验研究

目的观察五味子与雷公藤配伍后对雷公藤体外生物活性的影响。方法通过四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测雷公藤及雷公藤与五味子配伍后的水提液对小鼠脾淋巴细胞和L-02肝细胞增殖的影响。结果雷公藤组0.6、3、15、75mg/m L浓度下对小鼠脾淋巴细胞增殖指数分别为(0.966±0.062)、(0.941±0.032)、(0.872±0.023)、(0.891±0.022),雷公藤加五味子组增殖指数分别为(0.900±0.053)、(0.940±0.081)、(0.963±0.015)、(0.973±0.039),两组比较差异无统计学意义(P0.05)。雷公藤加五味子组在四个实验浓度下对L-02人肝细胞增殖率分别为(24.885±7.722)%、(42.278±17.624)%、(84.709±18.941)%、(33.754±6.045)%,雷公藤组分别为-(62.092±7.840)%、-(68.555±0.788)%、-(65.577±0.755)%、-(67.829±5.495)%,两组各浓度L-02人肝细胞增殖率比较,P0.05。结论五味子与雷公藤配伍后,在保持雷公藤体外免疫抑制活性的同时能有效降低雷公藤对肝细胞的毒性。     

Kiss-1与结肠癌SW480细胞增殖的关系

目的以结肠癌细胞SW480为模型,初步探讨Kiss-1基因过表达与结肠癌细胞增殖的关系。方法采用脂质体转染的方法将Kiss-1/pEGFP-N1重组质粒转染至SW480细胞,上调结肠癌细胞中Kiss-1的表达水平,经G418筛选出稳定表达株;根据细胞分为3组：阴性对照组（转染pEGFP-N1空载体）、实验组（转染pEGFPN1-Kiss1）及空白对照组（未转染）。Western blot检测转染后细胞中Kiss-1表达量的变化;采用CCK8试验分析Kiss-1对SW480细胞增殖的抑制效果。结果成功将pEGFP-N1-Kiss-1重组质粒转染至SW480结肠癌细胞,western blot检测出阴性对照组和空白对照组中显示Kiss-1低表达,实验组Kiss-1表达量增加,CCK8试验表明实验组细胞增殖率明显低于对照组（P〈0.05）。结论 Kiss-1可抑制结肠癌细胞的增殖率。