重组hEGF-TCS融合蛋白基因表达载体的构建及表达产物的纯化

目的 构建新型人表皮生长因子(human epidermal growth factor,hEGF)和天花粉蛋白(trichosanthin,TCS)融合蛋白的表达载体,在大肠杆菌中表达并纯化EGF-TCS融合蛋白.方法 利用基因工程技术将人表皮生长因子EGF和天花粉蛋白基因连接起来,克隆到高效表达载体pQE30中,构建重组表达质粒pQE30-EGF-TCS.并在大肠杆菌M15中表达该融合蛋白(EGF-TCS).产物经Ni-NTA Agrose亲和层析柱纯化.结果 重组表达质粒pQE30-EGF-TCS在大肠杆菌M15中获得稳定、高效的融合表达.目的蛋白占细胞总蛋白的40%左右,以可溶性形式存在,表达上清柱纯化纯度达95%以上.结论 应用基因工程技术,成功构建了融合蛋白EGF-TCS,为进一步研究其结构功能关系和临床应用奠定了基础.     

人表皮生长因子-天花粉蛋白融合蛋白的基因克隆、表达及纯化

目的 构建人表皮生长因子(EGF)-linker-天花粉蛋白(TCS)融合蛋白的表达载体,在大肠杆菌中表达并纯化EGF-linker-TCS融合蛋白.方法 用PCR方法扩增EGF及柔性连接肽Linker基因片段,插入质粒PQE30-TCS中,转化至大肠杆菌M15中,表达该融合蛋白(EGF-linker-TCS).表达产物经Ni-NTA Agrose亲和层析柱纯化.结果 PQE30-EGF-linker-TCS蛋白在大肠杆菌M15中获得稳定、高效的融合表达.目的蛋白占细胞总蛋白的40%左右,以可溶性形式存在,表达上清柱纯化后纯度达95%以上.结论 应用基因工程技术,成功地构建了融合蛋白EGF-linker-TCS的表达载体,表达并纯化了该融合蛋白,为进一步研究其结构功能关系和肿瘤临床应用奠定了基础.     

重组人表皮生长因子联合纳米银护创液作用于糖尿病溃疡动物模型的实验研究

目的观察重组人表皮生长因子（rhEGF）联合纳米银护创液作用于糖尿病溃疡动物模型创面的疗效。方法建立糖尿病溃疡动物模型,随机分为重组人表皮生长因子组和重组人表皮生长因子＋纳米银护创液组,动态观察两组的溃疡愈合面积、愈合时间及动态愈合率。结果重组人表皮生长因子＋纳米银护创液组溃疡的面积变化、愈合时间及动态愈合率与重组人表皮生长因子组相比较均有显著性差异（P〈0.01）。结论重组人表皮生长因子与纳米银护创液联合使用比单纯使用重组人表皮生长因子更能显著促进糖尿病溃疡创面的愈合。     

重组人表皮生长因子作用于糖尿病溃疡动物模型的实验研究

目的 观察重组人表皮生长因子(rhEGF)作用于糖尿病溃疡动物模型创面的疗效.方法 建立糖尿病溃疡动物模型,随机分为凡士林纱布组和重组人表皮生长因子组,动态观察凡士林纱布和重组人表皮生长因子对溃疡面积、愈合时间及动态愈合率的影响.结果 重组人表皮生长因子组溃疡的面积变化、愈合时间及动态愈合率与凡士林纱布组相比较有显著差异(P<0.01).结论 重组人表皮生长因子可以显著促进糖尿病溃疡创面的愈合.     

人表皮生长因子真核表达载体的构建

目的：构建人表皮生长因子的真核表达载体。方法：采用RT-PCR扩增人表皮生长因子(hEGF)cDNA基因序列并克隆入PGEM-T载体，再用限制性内切酶切取目的基因，插入pcDNA3．1真核表达载体。结果：重组体经转化E．coli JM109感受态大肠杆菌后可大量扩增，提取重组体进行限制性酶切及PCR可见目的片段。结论：已成功构建hEGF真核表达载体，为进一步研究hEGF的功能奠定了基础。     

人表皮生长因子受体胞内酪氨酸激酶结构域原核表达

目的研究人表皮生长因子受体（EGFR）胞内酪氨酸激酶结构域的原核表达及纯化条件。方法构建原核表达人EGFR胞内酪氨酸激酶结构域的重组质粒pGEX／GST—EGFR-TKD，在大肠杆菌中表达目的融合蛋白，通过在尿素中变性、在梯度尿素中透析复性，经GST融合蛋白纯化，肠激酶去除GST“标签”后获得人EGFR胞内酪氨酸激酶结构域蛋白。结果限制酶切分析和测序表明成功构建重组质粒pGEX／GST—EGFR—TKD；SDS-PAGE分析表明，异丙基硫代-β-D半乳糖苷诱导下可以表达融合蛋白GST—EGFR-TKD，但以不溶性包涵体的形式存在。经尿素变性、梯度透析复性及去除GST“标签”后，获得重折叠的人EGFR胞内酪氨酸激酶结构域蛋白。结论在大肠杆菌中可成功表达人EGFR胞内酪氨酸激酶结构域蛋白。     

人表皮生长因子对兔角膜上皮细胞生长的影响

人表皮生长因子是细胞生长因子之一。应用本室自制的人表皮生长因子加入培养的兔角膜上皮细胞中，观察对角膜上皮细胞生长的影响。结果表明：加入人表皮生长因子的实验组比未加人表皮生长因子的对照组的上皮细胞数目明显增加。本文提出了快速、简单、大量培养上皮细胞的新方法。     

人表皮生长因子对兔用角膜上皮细胞生长的影响

人表皮生长因子是细胞生长因子之一。应用本室自制的人表皮生长因子加入培养的兔角膜上皮细胞中，观察对角膜上皮细胞生长的影响，结果表明：加入人表皮生长因子的实验组比未加人表皮生长因子的对照组的上皮细胞数目明显增加。本文提出了快速、简单，大量培养上皮细胞的新方法。     

肝癌细胞生物学行为改变涉及p120ctn酪氨酸磷酸化的研究

目的 以表皮生长因子刺激肝癌细胞内p120^ctn酪氨酸磷酸化,观察p120^ctn酪氨酸磷酸化与p120^ctn在细胞内转位及肝癌细胞生物学行为的关系,探讨p120^ctn在肝癌细胞粘附和信号转导中的作用。方法 使用免疫沉淀和免疫印迹法检测表皮生长因子引起的p120^ctn酪氨酸磷酸化改变情况,用间接免疫荧光法观察了表皮生长因子引起的p120^ctn在BEL—7404人肝癌细胞内的分布、转位。用相应的方法检测表皮生长因子促使BEL—7404人肝癌细胞的细胞形态和细胞粘附能力的改变情况。人全长p120^ctn反义核苷酸转染细胞,观察表皮生长因子促使的p120^ctn磷酸化改变情况是否受到明显抑制。结果表皮生长因子可使BEL—7404人肝癌细胞内的p120^ctn酪氨酸发生磷酸化,以表皮生长因子作用20min时最明显;在细胞内转染人全长p120^ctn反义核苷酸后,表皮生长因子对p120^ctn酪氨酸磷酸化的上调作用明显减弱。表皮生长因子刺激下,磷酸化的p120^ctn发生了细胞内转位,表现为p120^ctn细胞膜的表达明显减少,核表达增加;同时β—连环蛋白也发生相似的改变;表皮生长因子刺激下,BEL—7404人肝癌细胞的粘附能力明显下降;细胞形态变为细长和不规则,伪足增多。结论 在表皮生长因子刺激下BEL—7404中p120^ctn酪氨酸磷酸化增加,p120^ctn发生从细胞膜到核内的转位,并同表皮生长因子引起的细胞形态和细胞粘附能力的改变密切相关。结果 提示p120^ctn酪氨酸磷酸化与p120^ctn在细胞内的转位和细胞的生物学行为密切相关。     

表皮生长因子治疗萎缩性鼻炎的效果观察

表皮生长因子 (EGF)是一种促进上皮细胞生长的活性肽 ,Cohen首次以小鼠颌下腺分离出表皮生长因子 (hEGF) ,随后他从人的体液中分离出人表皮生长因子 (hEGF) [1] 。表皮生长因子能与靶细胞中的生长因子受体结合而产生生物效应 ,具有刺激细胞增殖 ,分化的作用 ,局部应用可促进创面组织愈合 ,表皮生长因子是已达到可用临床研究的细胞因子之一。最近我们将表皮生长因子应用于临床上对比较难治的萎缩性鼻炎进行治疗 ,取得比较满意的效果 ;现将观察结果报告如下。1　临床资料1 1　一般资料　萎缩性鼻炎 6 8例 ,其中女 6 7例 ,男 1例 ;年龄 2 5…