抗肾小球基底膜抗体的抗原决定簇的研究

目的研究抗肾小球基底膜（GBM）抗体的抗原决定簇及其与临床表现的关系。方法以抗Ⅳ型胶原α3链非胶原区1［α3(Ⅳ)NC1］单抗（Mab3）和抗α5(Ⅳ)NC1单抗（Mab5）,及辣根过氧化物酶标记的亲和层析纯化的抗GBM自身抗体（APab-HRP）,作为识别GBM上不同抗原决定簇的探针,应用竞争性ELISA法测定33例抗GBM抗体的抗原决定簇,同时初步探讨其与临床表现的关系。结果33例患者血清均可抑制Mab3,30/33例可抑制APab-HRP,11/33例可抑制Mab5。但不同血清对同一探针,同一血清对不同探针的抑制率均不平行。单纯抗GBM抗体组（27例）对APab-HRP的平均抑制率为55%±18%,而抗GBM抗体伴抗中性粒细胞胞浆抗体阳性组（6例）仅为32%±22%,两组相比差异有显著意义(P=0.01)。在有或无肺出血患者之间,对各种探针抑制率的差异均无显著意义（P>0.05）。结论抗GBM抗体血清均识别位于α3(Ⅳ)NC1上的主要抗原决定簇。但不同患者所识别的抗原决定簇并不完全一致,少数血清可识别α5(Ⅳ)NC1。是否合并ANCA,所识别的抗原决定簇可能存在差异。     

4种自身抗体对间接免疫荧光法检测抗中性粒细胞胞质抗体的影响

目的:观察抗核抗体、抗线粒体抗体、抗高尔基体抗体和抗核糖体P蛋白抗体对间接免疫荧光(IIF)法检测抗中性粒细胞胞质抗体(ANCA)结果的影响. 方法:用IIF法检测4种自身抗体阳性血清可能出现的ANCA荧光图谱;用ELISA法确认上述4种血清的靶抗原. 结果:用乙醇固定的中性粒细胞检测ANCA受自身抗体的影响较大,甲醛固定的中性粒细胞受到的影响较小,同时应用猴肝切片可将这4种自身抗体与ANCA区别. 结论:联合应用猴肝切片与乙醇和甲醛固定的中性粒细胞抗原片,有助于准确判断ANCA结果.     

抗中性粒细胞胞浆抗体阳性患者18例的结果分析

目的:探讨血清中抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA)与疾病的相关性.方法:应用间接免疫荧光法(IIF)与欧盟印迹法联合检测抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA)与抗肾小球基底膜抗体(GBM).结果:受检的192例患者中ANCA阳性标本18例,均核周型(pANCA),抗髓过氧化物(MPO)阳性5例,抗肾小球基底膜抗体(GBM)阳性1例.     

两种方法分离人抗肾小球基底膜抗体靶抗原

目的：比较超声粉碎法和化学去污剂法对人抗肾小球基底膜(GBM)抗体靶抗原(粗抗原)的分离纯化效果。方法：取正常肾组织分离肾小球，用两种方法分别分离GBM，将胶原酶消化后的可溶性蛋白进行SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，并用Western blot和EHSA法检测抗GBM抗体与所分离靶抗原的反应情况。结果：电泳结果显示两种方法分离纯化的可溶性蛋白相对分子质量都主要位于27ku和54ku，且均为抗GBM抗体阳性血清所识别。ELISA显示两种方法分离纯化的蛋白与抗GBM抗体相关疾病患者的血清均呈阳性反应。结论：两种方法都可以用于抗GBM抗体靶抗原的分离纯化，且化学去污剂方法更为简便。     

抗GBM抗体IgG亚型分布及临床意义

目的:探讨抗肾小球基底膜(glomerular basement membrane,GBM)抗体各IgG亚型在血清中的分布规律及其与临床表型的关系.方法:从1991至2003年于我院确诊的患有抗GBM抗体相关疾病的患者中,选取50例抗GBM抗体滴度较高者,利用ELISA法检测其血清中抗GBM抗体各IgG亚型的百分结合率及其阳性率.结果:抗GBM抗体各亚型的阳性率分别为IgG1 94%、IgG2 56%、IgG3 12%、IgG4 88%,差异有显著性(P＜0.01).各亚型阳性率在男女之间差异无显著性,而男性患者IgG4亚型的百分结合率明显高于女性(29.3% vs 15.57%,P＜0.01).抗GBM抗体各IgG亚型阳性与否与患者年龄无关.各亚型分布与是否合并抗中性粒细胞胞浆抗体(antineutropil cytoplasmic antibody,ANCA),是否表现肉眼血尿、大量蛋白尿或咯血均不相关.血清肌酐≥600μmol/L者IgG1亚型的百分结合率显著高于血清肌酐＜600μmol/L者(26.08% vs 12.14%,P＜0.05).IgG4的百分结合率在吸烟者中显著高于不吸烟者(23.86% vs 13.14%,P＜0.01).结论:在抗GBM抗体相关疾病中抗GBM抗体各亚型呈限制性分布,且以IgG1和IgG4亚型为主.但各亚型阳性率与性别无关.     

抗中性粒细胞抗体在血栓闭塞性脉管炎中的临床应用

目的:探索抗中性粒细胞胞浆抗体(Antineutrophil cytoplasmic antibody, ANCA)及其特异性抗原在血栓闭塞性脉管炎(Thromboangiitis obliterans,TAO)中的表达.方法:TAO组23例,动脉硬化闭塞组(Arteriosclerosis obliterans,ASO)25例,健康组25例.采用间接免疫荧光法(Endirect immunofluorescence,IIF)检测3组中ANCA.用酶联免疫吸附法(Enzyme-linked -immu nosorbentassay,ELISA)检测TAO组和健康组ANCA抗蛋白酶3(PR3)、髓过氧化物酶(MPO)、人白细胞弹性蛋白酶(HLE) 、乳铁蛋白酶(LF)、组织蛋白酶G(CG)、杀菌/渗透性增高蛋白(BPI)抗体.结果:(1) 23例TAO组患者中有12例ANCA阳性,检测率为52.2%.25例ASO组患者有1例ANCA阳性,检测率4%.健康组未检测出ANCA阳性.(2) TAO组重度患者ANCA的临床检出率(66.7%;10/15)及ANCA滴度均要高于中度患者(25%;2/8).(3)12例ANCA阳性血清中有5例抗髓过氧化物酶(MPO)抗体为阳性,有3例抗乳铁蛋白酶(LF)抗体为阳性,1例抗人白细胞弹性蛋白酶(HLE)抗体为阳性,1例抗杀菌/渗透性增高蛋白(BPI)抗体为阳性,抗蛋白酶3(PR3)抗体,抗组织蛋白酶G(CG)抗体均为阴性.(4)4种阳性抗体均发现于严重血栓闭塞性脉管炎患者中.结论:ANCA的检测率和抗体水平与疾病的严重程度有关,ANCA的检测对临床血栓闭塞性脉管炎是1个有效的血清学检查.     

丙型肝炎患者肝特异性自身抗体的研究

目的:检测丙型肝炎患者血清肝特异性自身抗体并分析其临床意义.方法:以HEP-2细胞、猴肝、大鼠胃和大鼠肾组织为抗原,采用间接免疫荧光法对67例丙型肝炎患者血清、32例甲型肝炎、50例其它疾病和30例正常人血清作抗核抗体、抗平滑肌抗体、抗线粒体抗体和抗肝肾微粒体抗体检测.结果:丙型肝炎患者自身抗体总阳性率为25.4%,均高于其余3组对照组(P＜0.05).自身抗体以低滴度为主,主要为抗核抗体.自身抗体的阳性与患者的性别无关(P＞0.05),与年龄有关(P＜0.05).结论:HCV感染能诱导自身免疫反应使患者血清出现多种自身抗体,检测其自身抗体及其滴度对丙型肝炎患者的治疗有一定的参考价值.     

抗人有机阴离子转运蛋白3抗体制备及其在肾脏定位的研究

目的 采用新的基因免疫方法制备小鼠抗人有机阴离子转运蛋白3(anti-human organicanion transporter 3,hOAT3)多克隆抗体,并用该抗体对hOAT3在人肾小管上皮细胞的表达进行定位研究.方法 应用Accelrys软件分析hOAT3抗原表位,选择其细胞内表位,用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法从人肾组织RNA中扩增其261 bp的cDNA序列,克隆到pBQAP-TT构建基因免疫载体,与辅助载体pCMVi-GMCSF和pCMVi-FIT3L同时免疫小鼠,5周后获得血清抗体,人肾组织Western blot和免疫组化鉴定抗体的特异性和定位表达.结果 成功构建基因免疫载体pBQAP-TT-hOAT3,序列分析鉴定正确,ELISA方法测得抗体滴度高达1∶3 000,该抗体识别人肾皮质膜蛋白62×103的hOAT3,人肾组织免疫组化提示该抗体识别定位在肾小管上皮细胞基底膜.结论 成功用基因免疫方法制备高效特异性抗hOAT3多克隆抗体,为今后的生理病理研究奠定基础.     

恙虫病与抗中性粒细胞胞浆抗体的相关性研究

目的:探讨恙虫病与抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA)的相关性.方法:对45例恙虫病患者均行ANCA检测,同时检测肝功、肾功、心酶、血常规,对照组为其余病因引起的发热疾病50例,均行ANCA及肝功、肾功、心酶、血常规检测,分析恙虫病与ANCA的相关性.结果:45例恙虫病患者中有6例患者ANCA阳性,6例患者ALT、肌酐CK...     

牛肾小球基底膜Ⅳ型胶原α链非胶原区1的分离纯化及其在抗肾小球基底膜相关疾病中的应用

目的:分离纯化抗肾小球基底膜(GBM)抗体的特异性靶抗原,并评价其在抗GBM抗体检测中的应用价值.方法:通过孔径不同的筛网从牛肾脏中提取牛肾小球,采用改良的40 g*L-1去氧胆酸钠破坏肾小球细胞而获得GBM,经胶原酶消化后收集可溶性牛GBM粗抗原.在pH 7.5的条件下经Mono Q阴离子交换层析柱分离纯化肾小球基底膜Ⅳ型胶原α链非胶原区1[α(Ⅳ)NC1],并经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳和Western blot鉴定其纯度及活性.应用2 mg*L-1纯化的牛α(Ⅳ)NC1包被酶标板,建立牛α(Ⅳ)NC1-ELISA 方法检测血清中抗GBM抗体,并与经典的以人GBM可溶性蛋白为粗抗原的ELISA法进行对照研究.血清来自90例已知抗人GBM抗体阳性的患者、100例正常人和50例其他肾脏疾病患者.对两种方法进行相关分析并计算牛α(Ⅳ)NC1-ELISA的敏感性、特异性.结果:纯化的牛α(Ⅳ)NC1经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳表现为相对分子质量为25×103和50×103的蛋白并可被抗GBM抗体阳性血清所识别;应用牛α(Ⅳ)NC1-ELISA法检测抗GBM抗体的敏感性和特异性分别为100%和98%,与人GBM粗抗原-ELISA的相关性为0.6.结论:应用改良的去氧胆酸钠方法破坏肾小球内细胞并进一步经MonoQ离子交换柱分离纯化牛α(Ⅳ)NC1,可以得到高纯度的特异性靶抗原;纯化的牛α(Ⅳ)NC1可以作为特异性抗原来检测人抗GBM抗体.     

间接免疫荧光法及蛋白质印迹法对肺癌患者体内自身抗体的分析

目的：了解肺癌患者血清自身抗体阳性率、细胞内定位及荧光图形特点,探索自身抗体作为肿瘤樗物的可能性。方法：应用间接免疫荧光法（ｉｎｄｉｒｅｃｔ ｉｍｍｕｎｏｆｌｕｏｒｅｓｓｅｅｎｅｅ,ＩＩＦ）检测７７份肺癌以及１４０份不同年龄段正常人血清中自身抗体。提取人喉癌上皮细胞（Ｈｅｐ－２）蛋白抗原,采用蛋白质印迹法对８１份肺癌患者及５２份正常人血清进行分析。结果：肺癌组和对照组的自身抗体阳性率有显著差别,两     

肾小管间质性肾炎中抗肾小管基底膜抗体的检测

目的:探讨肾小管间质性肾炎(tubulointerstitial nephritis,TIN)患者血清中抗肾小管基底膜抗体及其意义.方法:选取北京大学第一医院肾内科2000年至2002年经肾穿刺活检确诊为TIN患者46例.抗肾小管基底膜抗体检测用Westem-blot方法.人肾小管来源于肾肿瘤切除肾脏的正常肾皮质,并经不同目数的筛网获得.肾小管基底膜(tubular basement membrane,TBM)经超声粉碎细胞后得到,在经6 mol/L盐酸胍处理后即为TBM可溶性抗原.分别对阳性和阴性患者的临床指标进行统计分析.结果:其中11人检出抗TBM抗体,可识别34×103、55×103、61×103、72×103、85×103、94×103、119×103蛋白条带,其中识别55×103的患者最多,占63.6%.抗TBM抗体阳性率在急性TIN患者中为29.6%,慢性TIN患者中为21.1%,两者相比差异无显著性.急性TIN患者抗TBM抗体阳性者与阴性者相比,其血沉和血清IgG、IgM均较高,差异有显著性.其它指标包括性别、年龄、血红蛋白、补体C3、IgA、血肌酐及内生肌酐清除率等差异均无显著性.慢性TIN患者上述指标差异均无显著性.结论:部分TIN患者血清中可检测到抗TBM抗体,提示自身免疫因素有可能参与了间质性肾炎的发病机制.     

SARS相关抗肺自身抗体产生机制的初步研究

目的:检测严重急性呼吸综合征(SARS)患者血清中抗SARS病毒抗体与肺组织的反应性.方法:采用酶联免疫吸附法检测SARS患者恢复期血清中抗SARS病毒抗体,并采用肺组织与抗体共同孵育的方法,吸附抗SARS病毒抗体中同肺组织反应的SARS相关抗体.结果:与肺组织共同孵育后,抗SARS病毒抗体被部分中和,中和率为13.6％～32.2％.结论:部分抗SARS病毒抗体可以与肺组织反应,SARS病毒抗原同肺组织抗原有部分同源性.机体对SARS病毒抗原和肺组织的交叉免疫性可能是SARS相关抗肺自身抗体产生的原因.     

系统性红斑狼疮相关自身抗体检测及临床意义

目的：评价抗核抗体（ANA）、抗Sm抗体、抗dsDNA抗体、抗核小体抗体（AnuA）等相关自身抗体联合检测对系统性红斑狼疮（SLE）的诊断价值。方法：采用间接免疫荧光法（IIF）、酶联免疫吸附法（ELISA）和免疫印迹法（LIA）测定1 409例SLE患者（SLE组）和1 058例其他结缔组织病患者（非SLE组）血清中ANA、抗dsDNA抗体、抗Sm抗体、AnuA等相关自身抗体含量。结果：除抗CENPB抗体、抗Jo-1抗体和抗Scl-70抗体在两组间差异无统计学意义（P〉0.05）外,其余自身抗体在两组间差异均有统计学意义（P〈0.05,P〈0.01）;ANA阳性率79.1%,远高于非SLE组的34.7%（P〈0.01）;SLE组患者除ANA抗体、抗SSA抗体和抗nRNP/Sm抗体性别间差异有统计学意义（P〈0.05）外,其它自身抗体在性别间差异无统计学意义（P〉0.05）;SLE患者以女性发病最多,占90.8%（1 280/1 409）,发病年龄以20~39岁最高,占49.3%,其次为40~59岁,占37.0%。在ANA抗体阴性时,抗SSA抗体的阳性检出率较高。结论：SLE患者血清中可出现大量的自身抗体,联合检测灵敏度高、结果可靠、方法简便,对SLE的鉴别诊断和治疗有重要意义。     

PRESENCE OF ANTILAMIN ANTIBODIES IN SERA OF PATIENTS WITH SYSTEMIC LUPUS ERYTHEMATOSUS

In this study,we characterized specifically-stained sera from patients with systemic lupus erythematosus (SLE) which had been shown to display the homogeneous or peripheral region of nuclei by indirect immunoflucrescence (IIF),By western blotting,we demonstrated that in some cases these was a correlation between the peripheral or homogenous,IIF staining of nuclei by sera from patients with SLE and the presence of autoantibodies to lamins.Here we first report the presence of 2.2% anti-lamin autoantibodies in the sera among the 174 patients with SLE in China.     

华支睾吸虫成虫特异性诊断抗原分析

目的:寻找诊断华支睾吸虫病的特异性抗原.方法:应用SDS-PAGE和Western blot对华支睾吸虫成虫可溶性抗原中的蛋白组分进行分析,试验血清包括旋毛虫感染的大鼠和小鼠血清,正常大鼠和小鼠血清,旋毛虫病、华支睾吸虫病、并殖吸虫病、日本血吸虫病及囊虫病患者血清,斯氏狸殖吸虫感染的大鼠血清和正常人血清.结果:华支睾吸虫成虫可溶性抗原蛋白经SDS-PAGE后显示17条蛋白带,其中相对分子质量为65 000、54 000、31 000、25 000、13 000的为主带.Western blot结果显示,相对分子质量为108 000、94 000、71 000、65 000、56 000、53 000、43 000的蛋白带可被华支睾吸虫病患者血清识别,108 000、71 000、65 000、63 000、53 000的蛋白带可被并殖吸虫病患者血清识别,108 000、94 000、71 000可被日本血吸虫病患者血清、旋毛虫感染的大鼠血清及旋毛虫病患者血清识别;56 000的蛋白组分只能被华支睾吸虫病患者血清识别,而不与其他试验血清发生交叉反应.结论:华支睾吸虫成虫可溶性抗原中相对分子质量为56 000的蛋白组分为华支睾吸虫成虫的特异性抗原.     

狼疮性肾炎中ANCN及其靶抗原的临床研究

目的探讨狼疮性肾炎(LN)患者血清中抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCN)及其靶抗原的表达及临床意义。方法收集103例LN病人血清,分别用间接免疫荧光法(IIF)及免疫酶联吸附实验(ELISA)法检测ANCA的阳性率及其靶抗原的表达率。结果活动期LN的ANCA阳性率及靶抗原的表达率均高于稳定期LN,且以组蛋白酶G(CG)及乳铁蛋白(LF)为主,活动期LN中抗dsDNA、低补体血症、血沉增快及肾功能下降的发生率均明显高于稳定期。结论LN患者血清中ANCN阳性及靶抗原的表达与LN的活动有关,肾脏损害以ANCA阳性者为重。     

糖尿病肾病患者血清抗AT1和α1受体抗体与肾小球滤过率的关系

目的探讨糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)患者血清抗血管紧张素II 1型受体自身抗体(angio-tensinⅡtype 1receptor activating antibody,AT1-AA)和抗α1肾上腺素能受体(α1-R)自身抗体与肾小球滤过率(glo-merular filtration rate,GFR)降低的相关性。方法①以合成的AT1受体和α1受体多肽片段为抗原,应用酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)技术,检测371例DN患者(A组)、107例2型糖尿病(type 2diabe-tes mellitus,T2DM)患者(B组)、47例正常对照(C组)自身抗体。②肾动态显像,采用同位素99 Tcm标记法测定GFR。③ELISA技术测定尿白蛋白排泄率(urinary albumin excretion rate,UAER)。结果①A组AT1和α1受体抗体阳性率分别为51.5%和47.7%,明显高于B组(19.5%和15.9%)及C组(10.6%和8.5%),P<0.05。②A组中,GFR异常者AT1和α1受体抗体阳性率分别为59.5%和63.1%,明显高于GFR正常者的30.5%和35.1%(P<0.01)。③A组中,GFR异常组中AT1和α1受体抗体均阳性者130例,阳性率为59.9%,显著高于GFR正常组(17.5%,27/154,P<0.01)。结论 DN患者GFR降低,血清抗AT1和α1受体抗体阳性率明显升高,糖尿病肾功能不全与抗AT1和α1受体自身抗体有关。     

副肿瘤性天疱疮患者的脱发机制

目的探讨副肿瘤性天疱疮(PNP)患者血清中抗桥粒芯蛋白(DSG)抗体与头皮脱发之间的关系.方法收集我科收治的2例PNP,2例大疱性类天疱疮患者和5例正常人血清,及2例正常人头皮组织.采用酶联免疫吸附(ELISA)方法检测PNP患者血清中DSG 1和3抗体水平,间接免疫荧光法检测PNP患者血清与正常人头皮毛囊结合情况,同时采用正常人血清和大疱性类天疱疮患者血清作对照.结果2例PNP患者中,有1例抗DSG 3抗体强阳性,抗DSG1抗体弱阳性;另1例患者两种抗体均为阴性.2例患者血清均可与正常人头皮毛囊结合,表皮细胞间和毛囊的外毛跟鞘均可见荧光信号.大疱性类天疱疮患者血清只能与表皮基底膜带结合,正常人血清在基底膜带、表皮细胞间和毛囊均无任何荧光信号.结论PNP患者出现脱发可能与患者血清中抗DSG3抗体水平有关.