高纯度蛇毒因子抗非协调性大鼠异种肝脏移植超急性排斥反应的机制研究

目的　探讨高纯度眼镜蛇毒因子 (CVF)对非协调性异种大鼠肝脏移植超急性排斥反应(HAR)和存活时间的影响及其机制。方法　实验分为CVF治疗组和对照组 ,每组各 2 0对。在豚鼠到大鼠肝脏移植前 2 4h实验组大鼠静脉注射CVF(5 0 μg/kg) ,异种肝脏移植后记录受体生存时间 ,并观察移植肝的病理变化 ,免疫荧光法检测肝脏血管C3沉积情况 ,用大鼠TNF αELISA试剂盒检测异种肝脏移植术后 1h血清中细胞因子TNF α水平。结果　肝脏移植后 ,对照组均发生了HAR ,肝内小血管血栓形成 ,间质出血 ,肝窦和中央静脉可见C3沉积 ,肠系膜淤血明显。实验组均无HAR发生 ,可见延迟性异种排斥反应 (DXR)的病理特征 ,血管内皮细胞 (EC)肿胀 ,单核细胞和中性粒细胞浸润 ,肝窦和中央静脉无C3沉积 ,肠道淤血不明显 ,血清TNF α水平下调 ,受体平均存活时间显著延长 (1 8±0 6与 7 4± 2 1h ,P <0 0 1)。结论　高纯度CVF清除补体可克服非协调性异种肝脏移植的HAR ,延长受体存活时间。CVF用于豚鼠到大鼠肝脏移植这一生命支持模型可以更深入地研究非协调性异种肝脏移植的相关机制     

热休克蛋白70对大鼠心脏停搏供体肝移植的保护作用

目的：采用心脏停搏供体大鼠原位肝移植模型，观察热休克蛋白70（HSP70）对心脏停搏后不同时间的供肝缺血再灌注损伤的影响。 方法：以缺血预处理方法诱导大鼠肝脏组织产生HSP70，以预处理(IP)与否及供体心脏停搏45 min或60 min的不同，将供体大鼠分为4组(IP-45，IP-60，C-45和C-60)。于肝移植术后1 h采血检测肝功能，术后1 h及7 d切取肝脏，观察肝脏病理学改变，并观察各组大鼠术后存活时间。结果：缺血预处理后24~48 h，肝组织HSP70表达明显增强；肝移植术后1 h，血清ALT和AST水平IP组明显低于对照(C)组（P<0.05）；术后7 d，IP组移植肝光学显微镜下肝小叶结构完好，汇管区有少量淋巴细胞浸润，C组移植肝则出现了较多的肝细胞坏死和气球样变。C-45和C-60组1周存活率分别为12.5%和0；而IP-45和IP-60组1周存活率分别为62.5%和37.5%。 结论：HSP70明显改善术后肝脏功能和减轻肝脏病理学改变，显著提高心脏停搏供体肝移植的存活率，HSP70对心脏停搏供体肝移植缺血再灌注损伤具有明显保护作用。     

己酮可可碱对非协调性异种心脏移植的影响

目的：探讨己酮可可碱（PTX）对非协调性异种心脏移植[CTx(DC)]存活时间的影响。方法：50只雄性豚 鼠和50只雄性SD大鼠随机分成A、B、C3组进行异种心脏（豚鼠－大鼠）移植于颈部、移植前1hA组受体生理盐水1mL腹膜腔内注射（ip),B组受体PTX50mg/kgip,C组供体、受体均以PTX50mg/kgip。用免疫组织化学方法检测移植心脏血管内皮细胞（EC）P－选择素表达情况。结果：①B、C组移植心脏平均存活时间分别为25．6min和25．9min,较A组13．9min明显延长,P＜0．05。②移植后8min和排斥时移植心脏血管ECP－选择素表达B、C组不如A组明显,P＜0．05,结论：PTX可以通过保护EC,延长CTx(DC)存活时间。     

己酮可可碱对非协调性异种心脏移植的影响

【目(的】探讨己酮可可酮碱（PTX）对非协调性异种心脏移植［CTx(DC)］存活时间的影响。【方法】50只雄性豚鼠和50只雄性SD大鼠随机分成A、B、C3组进行异种心脏（豚鼠-大鼠）移植于颈部,移植前1hA组受体生理盐水1mL腹膜腔内注射(ip),B组受体PTX50mg/kgip,C组供体、受体均以PTX50mg/kgip。用免疫组织化学方法检测移植心脏血管内皮细胞（EC）P-选择素表达情况。【结果】①B、C组移植心脏平均存活时间分别为25.6min和25.9min,较A组13.9min明显延长,P<0.05。②移植后8min和排斥时移植心脏血管ECP-选择素表达B、C组不如A组明显,P<0.05。【结论】PTX可以通过保护EC,延长CTx（DC）存活时间。     

大鼠肝移植自发性免疫耐受的研究

目的建立大鼠肝移植自发性免疫耐受模型，初步了解其移植后的免疫学变化。方法按Kamada的双管套法，选用近交系Lewis（LEW）、Wistar Furth（WF）大鼠进行原位全肝移植，术后动态观察宿主的肝功能和肝脏病理变化。另外，观察移植后不同时期，宿主植入供体同源的心脏后的免疫耐受情况。结果LEW→WF肝移植后血清谷丙转氨酶（ALT）及总胆红素（TB）的峰值在术后第4天，ALT在2周内、TB在4周内基本恢复到正常范围内；但肝脏炎症细胞的浸润则在第2周最为明显。通过再移植供体心脏的方法提示宿主对供体的特异性免疫耐受是移植2周后建立的。结论该组合早期虽存在急性排斥反应，但术后不需给予免疫抑制剂，可以自然克服这种损害而长期生存，属自发性免疫耐受模型。     

血红素加氧酶-1基因转染对非协调性异种心脏移植物的影响

目的 观察血红素加氧酶-1(HO-1)基因转染对非协调性异种心脏移植物的影响,并探讨其可能的保护机制.方法 采用颈部袖套血管吻合法联合应用中华眼镜蛇毒因子(CVF)建立稳定的豚鼠-SD大鼠非协调性异种异位心脏移植模型.供体豚鼠和受体SD大鼠各24只,每组各8只随机配对分为Ⅰ组(对照组)、Ⅱ组(空白载体组)和Ⅲ组(HO-...     

豚鼠-大鼠异种心脏移植术及提高手术成功率的有关方法

为建立研究非协调性异种心脏移植的动物模型和探讨延长异种器官术后近期存活期的方法。行豚鼠－大鼠腹腔内异种异位心脏移植正式手术40例,并改进有关方法以防止受体休克、吻合口渗血、吻合口狭窄,加强供心保护,提高手术成功率。     

异种移植超急性排斥反应

异种移植排斥反应比同种移植排斥反应强烈 ,且目前的药物难以控制。一般分为超急性排斥反应 (ＨＡＲ) ,延迟性异种移植排斥反应 (ＤＸＲ)和细胞介导的异种移植排斥反应。近 1 5年来 ,异种移植研究的最大成就就是基本弄清了ＨＡＲ的发生机理并发展了防治ＨＡＲ的诸多措施 ,本文就ＨＡＲ的研究进展综述如下。1　ＨＡＲ的病理表现ＨＡＲ发生于非协调性异种移植 ,在移植物血管再通后数分钟至数小时发生。表现为移植物内广泛血管内血栓形成和血管外出血 ,免疫荧光检查有ＩｇＭ和补体Ｃ3沉积 ,移植物失去功能。ＨＡＲ是由Ⅰ型内皮细胞 (ＥＣ)活化…     

VEGF对大鼠50%减体积肝脏移植术后肝再生的影响

目的探讨血管内皮生长因子(VEGF)对大鼠减体积肝移植术后肝脏再生的影响。方法建立大鼠50%减体积肝移植模型,分3组,VEGF治疗组、anti-VEGF组、对照组。分别于术后注射鼠重组VEGF、anti-VEGF、生理盐水(NaCl)。在术后不同时相点测定肝细胞核增殖蛋白抗原(PCNA)表达指数,测定血清HGFI、L-6的含量,测定术后肝脏生化指标。结果VEGF组术后肝细胞PCNA表达指数较对照组升高,anti-VEGF组较对照组降低,差异有统计学意义。anti-VEGF组天冬氨酸转氨酶(AST)、丙氨酸转氨酶(ALT)较VEGF组及对照组升高,差异有统计学意义。VEGF组术后血清HGFI、L-6浓度较对照组增高,anti-VEGF组较对照组明显减弱。结论VEGF治疗增强大鼠减体积肝移植术后肝脏再生活性,改善术后肝功能。这可能与VEGF促进肝脏HGFI、L-6分泌有关。     

异种抗体IgM对培养豚鼠主脏微血管内皮细胞的作用

目的：了解大鼠体内天然抗ＩｇＭ在非协调性异种心脏移植超急性排斥反应中的作用。方法：以培养豚鼠心脏微血管内此细胞为异种心脏移植的细胞实验模型,通过补体结合实验、免疫组化等方法研究大鼠抗体ＩｇＭ对该细胞的作用,了解异种抗体ＩｇＭ在异种移植超急性排斥反应中的作用机制。结果：在该模型中,大鼠抗体ＩｇＭ可与豚鼠心脏微血管内皮细胞结合并能激活补体,产生对该细胞的损伤,而经小鼠抗大鼠ＩｇＭ处理后的大鼠血清,对豚     

Experimental study on liver microcirculation disturbance following transplantation and the protective effect of prostaglandin E1 in the rat

Objective To determine the effect of PGE1 on liver microcirculation disturbance following orthotopic liver transplantation in rats.Methods Forty male adult Wistar rats were divided randomly into 3 groups. Eight transplantations were established in both the experimental and control group, while in the sham group, the liver was dissected like in the experimental group, but no resection was performed. In the experimental group, PGE1 (0.5 μg/kg*min-1) was injected intravenously into the donor before the operation, and added (1 mg/L)to the flush and preservation fluid, while PGE1 was replaced by normal saline in the control group. Confocal laser scan microscopy, biochemical test, and optical and electronic microscopy were used.Results In the control group the reperfusion state was poor,leukocyte infiltration appeared in the center of lobule,and transaminase rose after transplantation. In the experimental group distinctive improvement was seen as compared with the control group (P<0.05). Histological findings showed progressive degeneration and necrosis following transplantation in the control group, while in the experimental group the histological changes were improved to some degree by the use of PGE1.Conclusions In liver transplantation, ischemic reperfusion damage may lead to hepatic microcirculation disturbance, which is the major cause of graft failure. Infusing PGE1 into the donor intravenously before ischemia and adding PGE1 to the cold storage fluid could improve hepatic microcirculation, and thus reducing ischemic reperfusion damage in liver transplantation.In liver transplantation, ischemic reperfusion damage may lead to hepatic microcirculation disturbance, which is the major cause of graft failure. Infusing PGE1 into the donor intravenously before ischemia and adding PGE1 to the cold storage fluid could improve hepatic microcirculation, and thus reducing ischemic reperfusion damage in liver transplantation.     

金纳多对大鼠全脑缺血再灌注损伤后Fas和Bcl-2蛋白表达的影响

目的：研究金纳多对大鼠全脑缺血再灌注损伤的保护作用及对Fas、Bcl-2表达的影响。 方法：建立大鼠全脑缺血再灌注模型,应用免疫组织化学方法观察不同再灌注时间脑组织fas、bcl-2的表达,以及金纳多给药后的变化。 结果：单纯缺血及再灌注3 h均有Fas蛋白表达,再灌注6 h Fas蛋白表达达高峰,再灌注24 h Fas蛋白表达减少。Bcl-2表达于再灌注3 h达高峰,再灌注6 h呈下降趋势,24 h表达明显减少。金纳多给药组相应时间点Fas蛋白表达减少,Bcl-2蛋白表达增多。 结论：金纳多对脑缺血再灌注后的细胞凋亡有抑制作用,对脑缺血再灌注损伤起到保护作用。     

小体积肝移植损伤机制的实验观察

目的 探讨小体积移植肝损伤机制.方法 采用肝周骨骼化的去神经解剖、肝切除和原位灌注建立巴马小型猪不同移植量肝移植模型.分为3组(n=5):(1)A组:原位肝移植组;(2)B组:右半肝供肝肝部分移植组;(3)C组:右中叶和尾状叶供肝部分肝移植组.移植后观察动物7 d存活率,动态监测门静脉压(PVP)、门静脉血流量(PBF)以及移植肝组织学病理改变.结果 巴马小型猪不同移植量肝移植7 d存活率分别为:A组100%(5/5);B组100%(5/5)和C组20%(1/5).C组移植肝复流后PVP立即升高,高峰达(28.6±2.07)mm Hg,复流后1 h单位肝组织PBF达(3.56±0.11)ml·min-1·g-1.C组移植肝组织病理改变严重,包括肝窦淤血、出血,肝细胞气球样变或肝细胞坏死,内皮细胞脱落,狄氏间隙增宽或消失以及明显的细胞凋亡.结论 小体积肝移植中门静脉过度灌流和急性门静脉高压是移植肝的主要病因学机制.     

缺血预处理对移植肝腺苷酸含量的影响

目的 探讨缺血预处理（IP）对大鼠移植肝缺血再灌注损伤的保护作用及可能机制。方法 制备三袖套大鼠同种异体原位肝移植（OLT）模型,将其分为OLT对照组和IP组,用自动生化分析仪检测血中ALT、AST和LDH,用高压液相色谱仪测定移植肝细胞中腺苷酸含量的变化。结果 IP后血中ALT、AST和LDH均较OLT组明显降低;肝细胞浊肿、变性,肝窦变窄,红细胞聚集及大量的中性白细胞和单核细胞附壁,局部小叶结构的破坏变变化也较OLT组为轻;移植肝组织中ATP、ADP和能荷（EC）较OLT组明显升高。结论 IP可以维持肝组织中较高浓度的ATP,这可能是减轻移植肝缺血再灌注损伤及恢复肝细胞功能的机制。     

丹参对大鼠移植肝脏再灌注损伤的防护及肝细胞凋亡的影响

目的 研究含丹参冷灌注液对移植肝缺血再灌流损伤的防护及肝细胞凋亡的影响.方法 将40只SD大鼠分为对照组、丹参组及假手术组,建立原位肝移植模型,在供肝灌注冷保存时,以4℃乳酸林格氏液为基液,丹参组灌注保存液中加丹参注射液(60ml/L),对照组不加丹参.保存5 h后置入受体.移植后6h处死大鼠取样,检测血清中AST、ALT及肝组织中氧自由基代谢相关指标丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)水平,采用TUNEL法检测移植术后肝细胞凋亡情况,光镜及透射电镜下观察移植肝脏组织形态学及超微结构的改变.结果 移植肝再灌注后丹参组AST、ALT显著低于对照组.与对照组相比,丹参组肝细胞凋亡指数明显下降(P<0.01),肝组织中MDA含量较对照组降低(P<0.01),SOD、GSH-PX活性较对照组升高(P<0.01).丹参组较对照组肝组织形态及超微结构上再灌注损害程度明显减轻.结论 丹参可抑制冷保存再灌注导致的肝细胞凋亡,对原位肝移植肝脏的缺血-再灌注损伤有保护作用.     

维拉帕米对大鼠肝脏低温保存再灌注损伤的防护机制

目的 在自制的器官保存液XJ－1液已取得较好结果的基础上,探讨维拉帕米对大鼠肝脏低温保存再灌注损伤的防护作用及其机制。方法 XJ－1液与XJ－1＋维拉帕米液保存大鼠肝脏18h后施行肝脏移植,检测术后血清转氨酶水平、肝组织钙离子及丙二醛含量等指标,观察大鼠术后1wk存活率及移植肝脏的组织病理学改变。结果 XJ－1＋维液保存的大鼠肝脏移植后4h,血清ALT,AST水平、肝组织钙离子含量、丙二醛含量均显低于XJ－1液组（P＜0．01,P＜0．05）,光镜与电镜下肝组织形态学改变较XJ－1液组好,同时术后生存状况及1wk存活率也优于XJ－1液（71％vs 57%)。结论 维拉帕米能够减轻肝脏体外保存再灌注损伤,明显增强了XJ－1液对大鼠肝脏的保存效果,原因在于其阻滞钙通道的钙离子拮抗作用。     

大鼠肝缺血/再灌注损伤时c-fos、Bcl-2在肝组织的表达及与肝细胞凋亡的关系

目的:观察大鼠肝缺血/再灌注损伤时c-fos、Bcl-2在肝组织中的表达及与肝细胞凋亡的关系,并探讨可能的机制。方法:选健康雄性Wistar大鼠48只,随机分为对照组、缺血30min组(I组)、缺血30min即刻再灌注组(I/R组)、缺血30min再灌注1h组(I/R1h组)、缺血30min再灌注2h组(I/R2h组)、缺血30min再灌注后4h组(I/R4h组),每组8只。应用免疫组化法分别测定各组大鼠肝组织c-fos、Bcl-2的表达,应用原位细胞凋亡法测定肝细胞凋亡的情况,同时观察肝脏组织病理变化。结果:肝脏I/R可出现肝细胞明显损伤、肝细胞水肿、炎性细胞浸润,甚至有细胞坏死。与对照组比较,cfos在I组表达就有增高(P<0.01),I/R4h组达到高峰。I/R组与I组、I/R4h组与I/R2h组相比差异有统计学意义(P<0.01)。肝组织Bcl2在I组表达增高(P<0.01),I/R2～4h达到高峰。I/R4h组与I/R2h组相比差异无统计学意义(P>0.01)。细胞凋亡指数:I组、I/R组与对照组比较明显增加(P<0.01),随着时间的延长细胞凋亡指数逐渐增加。c-fos与细胞凋亡指数呈正相关(r=0.889,P<0.01),Bcl-2与细胞凋亡指数呈正相关(r=0.901,P<0.01)。结论:肝缺血/再灌注损伤可引起肝组织的损伤及肝细胞凋亡。肝细胞凋亡与cfos的表达有关。Bcl2在缺血期发挥了其抑凋亡作用,随着再灌注时间的延长,其抑凋亡作     

热缺血损伤对大鼠无心跳供体供肝质量及肝移植预后的影响

目的 探讨不同热缺血时间条件下,无心跳供体(NHBD)的供肝质量与耐受热缺血的安全时限。方法实验动物大鼠按供肝热缺血时问分别为0、10、15、20、30、45、60min,随机分为7组(n=12)。然后按各组条件分别作原位肝移植,观察肝移植术后各组组织形态、肝脏功能状态和能量代谢的恢复性变化,并统计生存时间。结果在热缺血30min以内,肝组织损伤仍处在可复性阶段,复流后能逐渐恢复至正常的形态和功能。供肝热缺血损伤的时问与肝组织能量代谢功能的恢复及术后动物生存情况密切相关。供肝经受30min以内热缺血损伤,各组移植术后生存天数无明显差异。热缺血时间超过45min后,虽仍可获较短期的存活,但移植术后的长期存活时间明显缩短。热缺血60min以后,供肝已发生不可逆性损伤。结论供肝组织三磷酸腺苷(ATP)含量、能荷(EC)水平和肝糖原含量、酶组织化学活性的变化以及移植术后上述指标恢复性的潜能叮作为衡量供肝质量的重要标准。大鼠的供肝可以安全地耐受30min以内的热缺血。     

肝移植106例术后急性排斥反应的诊断和治疗

目的:总结肝移植急性排斥反应的新表现及诊治经验. 方法:回顾我中心106例肝移植资料,对其中发生急性排斥反应病例的临床表现、病理组织学改变、诊治方案加以分析. 结果:106例肝移植中,术后发生急性排斥反应17例(16.0%);其中临界型1例,轻度6例,中度7例,重度3例. 这些病例在具备病理组织学改变的同时缺乏典型的临床特征和肝功能生化指标的改变. 结论:由于强效免疫抑制剂的应用,肝移植术后急性排斥反应发生的临床症状和体征不典型,我们应该重视急性排斥反应的诊断并积极治疗.     

大鼠肝缺血再灌注损伤诱导型一氧化氮合酶表达与肝细胞凋亡的关系

目的观察肝缺血再灌注(I/R)损伤时诱导型一氧化氮合酶(iNOS)在肝组织中的表达及与肝细胞凋亡的关系,探讨其可能的机制。方法选健康雄性Wistar大鼠48只,随机分为假手术组、缺血30min组(I组)、缺血30min即刻再灌注组(I/R组)、缺血30min再灌注后1h组(I/R1h)、缺血30min再灌注后2h组(I/R2h)、缺血30min再灌注后4h组(I/R4h),每组8只。分别测定各组谷丙转氨酶(GTP)、碱性磷酸酶、γ-谷氨酰转肽酶含量及观察肝脏组织HE染色,应用免疫组化法分别测定各组大鼠iNOS在肝组织的表达,应用原位细胞凋亡法测定肝细胞凋亡。结果肝脏I/R过程导致了肝脏明显的损伤,表现为肝血清酶升高(P<0.01),肝细胞水肿,炎性细胞浸润,甚至有细胞坏死。病理组织学变化与GTP变化一致。肝组织iNOS在I/R组即有表达增高(P<0.01),I/R组与I组、I/R1h组与I/R组相比有统计学差异(P<0.05)。细胞凋亡指数I/R组与假手术组比较明显增加(P<0.01),I/R组与I组,I/R2h组与I/R1h组、I/R4h组与I/R2h组相比均有统计学差异(P<0.01)。iNOS与肝细胞凋亡指数间存在显著正相关(r=0.952),P<0.01)。结论肝脏I/R损伤可引起肝组织损伤及肝细胞凋亡,肝细胞的凋亡与iNOS的高表达有关。