Beagle犬脊神经根组织化学染色的实验研究

目的用Fuminori乙酰胆碱酯酶染色法鉴别脊神经根的性质,并观察脊神经根标本在室温下放置随时间的延长和液氮冷冻次数增加后染色结果的变化,为临床上快速地鉴别周围神经束的性质提供动物实验基础。方法取4条Beagle犬的T1-S1的所有新鲜脊神经根标本,分为A组和B组：A组标本在室温下每隔1 h做切片,连续8 h,在显微镜下观察染色结果;B组脊神经根取出后迅速保存在液氮里,间隔10 min取出室温下解冻5min后做病理切片,观察染色结果,连续10次。结果切片染色0.5 h后运动根出现红棕色染色,感觉根不被染色。室温下放置5 h后及液氮冷冻7次以后的切片,运动根染色明显减弱,切片出现神经标本的脆裂现象。结论脊神经根的性质可以用Fuminori乙酰胆碱酯酶染色法快速准确地鉴别出来,越是新鲜的标本,染色效果越好。     

RNAlater在保存甲状旁腺腺瘤中的研究和探索

目的 探讨不同保存方法对甲状旁腺组织保存的影响,为组织库规范化建设提供理论支持.方法 收集北京协和医院2010年8月至2011年11月的散发甲状旁腺腺瘤组织共22例标本,所有标本均经手术病理证实,其中11例标本用传统液氮法保存（A组）,另11例标本用RNAlater保存（B组）,分别提取组织总RNA,测定OD 260/OD 280值;进行RNA质量评价,琼脂凝胶电泳判断RNA完整性;分别利用Realtime-PCR技术检测内参基因β-actin的表达情况.结果 在RNA的提取纯度和浓度及RNA完整性方面对比2组标本结果差异无统计学意义（P＞0.05）;B组内参基因β-actin的表达量明显高于A组（P＜0.05）.结论 RNAlater在保存RNA和预防RNA降解方面和传统液氮法相比无明显差异,但RNAlater保存法对于长期保存组织标本方面优于传统液氮法.     

少量外周血提取RNA方法的研究

目的建立从少量外周血中提取RNA的方法,为相关分子生物学及遗传学研究提供条件。方法从13例健康成人各抽取外周血3份,每份0．3ml,一份立即提取RNA,一份放置室温3d,另一份放置-20℃保存21d,提取RNA,测定RNA产量、RNA的完整性及用RT—PCR方法检测其对不同基因的表达。结果从新鲜全血中提取RNA的产量相对较高,与从室温及冰冻保存的全血中提取的RNA的产量相比有统计学意义。三组提取RNA均有良好的完整性,均可用于RT—PCR。结论在用少量外周血标本做RT—PCR等研究时,可以用PreAnlytix方法提取少量血中RNA,为留取标本的方便。也可用室温或冰冻保存的全血标本     

全血标本保存条件对人总RNA提取效率的影响

目的探讨全血标本保存条件对RNA提取效率和RNA完整性的影响。方法从179例保存在不同温度、不同时间的全血标本中提取总RNA,测定其浓度和纯度、分析其完整性。另选20例标本研究冻融次数对RNA提取效率的影响。179例中的73例总RNA在-80℃下保存1周前、后分别测定浓度和纯度,观察两者差异。结果新鲜血来源的总RNA浓度最高,平均306.51ng/μl;冻融2次全血仍可获得足量的RNA,浓度181.98ng/μl,RNA完整性有所下降;-80℃保存1周的RNA,浓度和纯度都略有下降。结论利用Trizol法可从小体积全血标本中获取足量有效的总RNA;不同保存条件全血中所获取的总RNA浓度存在差异;总RNA-80℃短期保存也会略有降解。     

佛手茎尖玻璃化超低温保存和植株再生

目的 为佛手种质资源的保存提供一条新途径。 方法 对佛手茎尖进行了玻璃化超低温保存,并对保存后的茎尖进行微嫁接试验,获得再生植株。 结果 佛手茎尖在含5%DMSO和5%蔗糖的MS培养基上预培养48 h后,切取3～4 mm的茎尖,室温(25 ℃)下装载液(60%PVS2)预处理30 min,0 ℃下玻璃化液PVS2处理80 min,投入液氮保存24 h后取出,在40 ℃水浴快速化冻,室温下分别用1.2 mol/L蔗糖和MT基本培养基洗涤2次,每次10 min。保存后的茎尖经TTC法检测,成活率达81.25%;将茎尖嫁接到黑暗培养基的砧木上,再生率可达52.94%,且再生植株生长和分化正常,经PCR检测不含黄龙病病原。 结论 玻璃化超低温保存方法可用于佛手种质资源保存。     

冷冻研钵在核酸或蛋白质提取中的应用

分子病理学实验中制备高纯度的核酸或蛋白质是进行研究的首要条件。 1年多来笔者利用简便易行的冷冻研钵提取新鲜组织的核酸和蛋白质取得较好效果 ,现介绍如下。1　方法与结果1.1　材料　超低温冰箱 (- 85℃ ,MDF380型 ,日本三洋株式会社 )。手术切除的新鲜标本 ,30 m in内取材 ,立刻置液氮冷冻 ,- 85℃保存。白瓷研钵若干个。1.2　方法1.2 .1　研钵经硫酸清洁液 [2 ] 按配方 2浸泡 2 4h,流水冲洗 ,180～ 2 0 0℃烘烤或装在器械盒中经 1.0 34× 10 5Pa高压 2 0min,自然冷却 ,取出 ,放入 - 80℃冰箱备用。若用于提取RNA则需经 0 .1%焦碳酸…     

25%蔗糖磷酸盐缓冲液对肝和肺组织核酸的保护作用

目的 探讨蔗糖磷酸缓冲液作标本保存剂对不同组织标本中核酸的保护作用.方法 用25%蔗糖磷酸缓冲液固定小鼠肝脏和肺组织2～72 h后,检测RNA完整性和纯度.结果 肝组织经25%蔗糖磷酸缓冲液保存48 h内,从中提取的RNA完整性与液氮保存的组织无明显区别,72 h内有明显差别;而肺组织保存72 h内无明显差别.结论 25%蔗糖磷酸缓冲液固定肝组织48 h内,不影响组织标本的RNA提取,而肺组织72 h内不影响组织标本的RNA提取.25%蔗糖磷酸盐缓冲液对不同组织的核酸保护作用时间不同.     

从磷酸蔗糖固定OCT包埋冰冻5年的组织中提取RNA

目的磷酸蔗糖固定后OCT包埋冰冻保存5年的组织中提取RNA。方法小鼠的脑、肝、肾等组织,经25%蔗糖磷酸缓冲液固定12~24h后,制备成OCT包埋块,在-20℃冰箱中保存5年后,取出冰冻的OCT包埋组织进行RNA提取,用凝胶电泳、紫外分光光度计及RT-PCR等方法检测所提取的RNA。结果从经25%蔗糖磷酸缓冲液固定冰冻保存5年OCT包埋组织中能提取RNA,所提RNA仍保持较好的完整性,可用于进行RT-PCR,并能扩增出较长的片段。结论从25%蔗糖磷酸缓冲液固定OCT包埋的冰冻时间较长的组织标本中可提取组织RNA,并用于进行RT-PCR扩增。     

骨冻干技术研究进展

骨病和创伤引起的骨缺损或功能障碍是危害人类健康的主要原因之一。骨组织工程的提出、建立和发展为从根本上解决骨缺损的修复、结构以及功能重建提供了新的途径，但目前的组织工程骨构建需要较长的时间且保存条件苛刻，不能达到“随取随用”的最终要求。早期的研究发现，部分蛋白制品通过冷冻干燥技术处理后的真空包装可以达到在室温下保存两年而不发生变质的良好效果．从最早应用于处理生物学材料，后历经应用氟利昂-12改良处理法，直到今天Hanes等使用冻干同种异体骨成功修复牙周骨缺损，冻干技术在骨组织保存方面的研究走过了近六十年的发展历程，本文将从冻干原理、技术方法以及冻干技术在骨组织工程相关产品处理中的应用三个方面较为系统地阐述冻干技术在骨组织工程中的研究进展，希望为冻干技术应用于组织工程骨临床修复骨缺损提供理论基础。     

乳腺癌患者外周血RNA提取方法的探讨

目的：建立外周血RNA的提取方法，为用逆转录－聚合酶链反应检测乳腺癌外周血中微转移打好基础。方法：从30例乳腺癌患者的冰冻保存和新鲜全血标本，用两种不同方法分离外周血有核细胞，提取RNA，测定RNA产量及RNA的完整性。结果：从冰冻保存和新鲜全血标本，提取的总RNA的OD值有显著性差异。从新鲜全血中提取RNA的产量高于从冰冻保存的全血中提取的RNA的产量。但是，电泳时均有28S与18S的条带。结论：用逆转录－聚合酶链反应时，以从新鲜全血中提取RNA为宜，但为留取标本的方便，也可用冰冻保存的全血标本，该实验中所采用的两种分离外周血有核细胞提取RNA的方法都切实可行。