体外诱导成人外周血干细胞向血管内皮细胞分化

目的研究人外周血干细胞(PBSC)向血管内皮细胞分化。方法以血管内皮细胞生长因子(VEGF)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对经重组人粒细胞集落刺激因子刺激后采集的PBSC进行诱导培养,观察细胞形态的变化,运用流式细胞术检测诱导后的细胞表达CD31和vWF情况,并用透射电镜观察细胞的超微结构。结果经VEGF和bF-GF诱导后的细胞形态上表现内皮细胞特征,经流式细胞仪测定表达血管内皮细胞特有表面标志CD31和vWF,透射电镜细胞胞浆内可见特征性Weible-Palade小体。结论外周血干细胞在VEGF和bFGF诱导下,可分化为内皮细胞。     

Genistein对人卵巢癌细胞系SKOV3诱导内皮细胞迁移的作用及机制探讨

目的:研究Genistein对人卵巢浆液性乳头状囊腺癌细胞系SKOV3诱导人内皮细胞系ECV-304迁移的作用,以探讨Genistein抑制血管生成作用的机理.方法:采用微孔滤膜培养小室及双室联合细胞培养方法,观察在0.5%BS培养条件下,SKOV3细胞或其条件培养基诱导的ECV-304细胞迁移以及Genistein对SKOV3细胞或其条件培养基诱导的ECV-304细胞迁移的影响;用免疫组化方法检测血管生长因子VEGF、bFGF及TGFβ-l蛋白的表达水平.结果:SKOV3细胞或其条件培养基对内皮细胞均有较强的趋化作用,Genistein对SKOV3细胞或其条件培养基诱导的ECV-304细胞迁移有呈剂量依赖性的抑制作用.20μmol/L Genistein处理ECV-304细胞48h后,VEGF、bFGF蛋白的表达水平降低,而TGFβ-1蛋白的表达水平升高.结论:GenIStein可明显抑制人卵巢浆液性乳头状囊腺癌细胞系SKOV3及其条件培养基对人内皮细胞系ECV-304细胞的诱导迁移作用Genistein可能通过抑制促血管生成调节因子VEGF和bFGF的蛋白表达,增强血管生成的负性调节因子TGFβ-1的蛋白表达来抑制这种迁移诱导作用.     

清脉791-2冲剂对肢体血管闭塞大鼠促血管生成作用的实验研究

目的探讨经验方清脉791-2冲剂对肢体缺血动物模型的促血管生成作用及其疗效机理,为临床应用提供理论基础。方法建立大鼠后肢严重缺血模型,以活血化瘀代表药物丹参作为对照药。造模及药物治疗后2、4周分别观测以下指标:X线血管造影片血管面积,病理组织切片碱性磷酸酶染色观察毛细血管面积及密度,免疫组化法观察血管内皮细胞生长因子(VEGF)及碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的光密度值。结果791-2可显著增加血管造影片侧枝血管面积,增加病理组织切片毛细血管面积及密度,一定程度地增强及延长VEGF的表达,对bFGF的作用相对较弱。结论清脉791-2对肢体缺血实验动物具有一定的促血管生成作用;促进VEGF及bFGF的表达,是其可能的作用机制。     

血小板源性生长因子对于培养内皮细胞血管内皮细胞生长因子水平的影响

通过免疫组织化学的方法,观察血小板源性生长因子（PDGF）对于培养脐静脉内皮细胞血管内皮细胞生长因子（VEGF）水平的影响,揭示PDGF促进新生血管形成的机制。实验结果：缺氧培养时内皮细胞胞浆VEGF水平上升;不同剂量的PDGF在常规或缺氧培养条件下均能增加内皮细胞VEGF水平,且呈剂量依赖性,提示PDGF可能通过直接促血管形成生长因子的介导作用间接促进新生血管的形成。     

蜂毒素体外抑制内皮细胞血管生成及其作用机制

目的:探讨蜂毒素对人脐静脉来源内皮细胞(ECV304)血管生成的抑制作用及其机制.方法:体外培养ECV304细胞,分别测定蜂毒素对其增殖、迁移及形成管状结构的影响.采用酶联免疫吸附法检测血管内皮细胞生长因子(VEGF)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的含量.应用实时荧光定量PCR方法检测ECV304细胞VEGF mRNA和bFGF mRNA的表达.结果:经蜂毒素作用后,ECV304细胞的增殖明显受到抑制,24,48,72 h的IC50分别为5.11,4.68,4.40 mg/L.蜂毒素低、中、高浓度组和沙利度胺(TLD)组ECV304细胞迁移数目(19.44±6.54),(11.17±2.85),(4.22±1.83)和(18.28±5.29)个,明显低于空白对照组(42.33±9.63 )个(P＜0.01).蜂毒素低、中、高浓度组及TLD组形成管状结构的面积分别为 (5947.22±973.72),(1558.33±281.06),(705.85±318.01)和(2928.92±735.67) μm2/视野,均低于空白对照组(7828.94±1202.54) μm2/视野(P＜0.01).经蜂毒素处理后,ECV304细胞分泌VEGF及bFGF的功能明显下降.荧光定量PCR证实,蜂毒素可降低ECV304细胞VEGF mRNA和bFGF mRN的表达.结论:体外实验结果表明,蜂毒素具有抑制ECV304细胞血管生成的作用,这种效应与血管内皮细胞VEGF和bFGF的活性降低及其合成受到抑制有关.     

丹参多酚酸盐对高同型半胱氨酸诱导的人脐静脉内皮细胞组织因子表达的干预作用

目的:探讨丹参多酚酸盐对高浓度同型半胱氨酸诱导的人脐静脉内皮细胞组织因子(TissueFactor)表达的影响。方法:采用ELISA和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测不同浓度丹参多酚酸盐(0、0.5、1.0mg/L)在不同作用时间下(2、4、8、12、24、48、72h)对高浓度同型半胱氨酸(50μmol/L)诱导的人脐静脉内皮细胞TF蛋白和mRNA表达的影响。结果:在24h,随着丹参多酚酸盐浓度的增加,同型半胱氨酸诱导的内皮细胞培养液中TF表达呈浓度依赖性下降(P<0.05);当丹参多酚酸盐浓度恒定时(1.0mg/L),随作用时间的延长,同型半胱氨酸诱导的内皮细胞培养液中TF表达水平呈时间依赖性下降(P<0.05)。结论:丹参多酚酸盐可抑制高浓度同型半胱氨酸诱导的内皮细胞TF的表达,并具有剂量和时间依赖性。     

肿瘤细胞中血管内皮生长因子表达调控的研究进展

血管内皮生长因子(VEGF)是重要的促血管生成因子,可由巨噬细胞、基质细胞和视网膜内皮细胞分泌,也可由肿瘤细胞分泌,其主要功能在于促进血管内皮细胞的分裂和增长,诱导新生血管形成。VEGF过表达与多种肿瘤的进展及预后不良密切相关。近年来研究发现,缺氧、生长因子和细胞因子、癌基因和抑癌基因以及激素等因素均参与肿瘤细胞VEGF的表达调控。     

大鼠骨髓间充质干细胞向内皮细胞分化潜能的研究

目的体外研究大鼠骨髓间充质干细胞(rMSCs)分化为血管内皮细胞的潜能。方法采用密度梯度离心法分离rMSCs,体外扩增并进行鉴定。在内皮细胞生长培养基(EGM-2)中以血管内皮细胞生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)定向诱导rMSCs向血管内皮细胞分化,观察细胞形态学变化。采用免疫细胞化学法和Dil荧光标记法,分别检测诱导后rMSCs的内皮细胞表型表达及对乙酰化低密度脂蛋白(Ac-LDL)的摄取能力。结果形态学观察显示,诱导后的rMSCs可见类似内皮细胞样改变,并表达血管内皮细胞特异的表面标志vWF和CD31,但仅少数细胞具有摄取Dil-Ac-LDL的能力。结论VEGF和bFGF在体外能够诱导rMSCs出现内皮细胞表型,但尚不完全具备成熟内皮细胞的功能特性。rMSCs具有向血管内皮细胞分化的潜能。     

大鼠骨髓间充质干细胞向内皮细胞分化潜能的研究

目的 体外研究大鼠骨髓间充质干细胞(rMSCs)分化为血管内皮细胞的潜能.方法 采用密度梯度离心法分离rMSCs,体外扩增并进行鉴定.在内皮细胞生长培养基(EGM-2)中以血管内皮细胞生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)定向诱导rMSCs向血管内皮细胞分化,观察细胞形态学变化.采用免疫细胞化学法和Dil荧光标记法,分别检测诱导后rMSCs的内皮细胞表型表达及对乙酰化低密度脂蛋白(Ac-LDL)的摄取能力.结果 形态学观察显示,诱导后的rMSCs可见类似内皮细胞样改变,并表达血管内皮细胞特异的表面标志vWF和CD31,但仅少数细胞具有摄取Dil-Ac-LDL的能力.结论 VEGF和bFGF在体外能够诱导rMSCs出现内皮细胞表型,但尚不完全具备成熟内皮细胞的功能特性.rMSCs具有向血管内皮细胞分化的潜能.     

贫血患者骨髓MVD与血清VEGF水平的研究

血管内皮生长因子(VEGF)是主要作用于血管内皮细胞的生长因子,具有促进内皮细胞增殖、移行,增加微血管通透性,诱导血管生成等多种功能。缺氧和癌基因活化是诱导VEGF分泌的主要因素[1],贫血患者机体的缺氧状态诱导血清VEGF分泌的程度如何,其骨髓血管新生的状态如何,至今未见有报     

Roles of cyclooxygenase-2 in microvascular endothelial cell proliferation induced by basic fibroblast growth factor

Background The level of basic fibroblast growth factor （bFGF） increases rapidly after cerebral ischemia. However, the molecular mechanisms for the effects of bFGF on cerebral microvascular endothelial cells （cMVECs） have not yet been fully elucidated. In this study, a murine cMVEC line, bEnd.3, was employed to study the effects of bFGF on cyclooxygenase （COX） expression and its downstream effects in cMVECs. Methods After treatment with bFGF, RT-PCR and Western blotting analyses were carried out to evaluate the changes in COX-2 mRNA and protein expression, respectively. MTT assays were performed to measure cell proliferation. The prostaglandin E2 （PGE2） and vascular endothelial growth factor （VEGF） concentrations in the culture medium were measured by enzyme-linked immunosorbent assay （ELISA）. Results COX-2 mRNA and protein expressions in bEnd.3 cells were induced by bFGF in time- and dose-dependent manners. The bFGF-induced COX-2 upregulation led to enhanced PGE2 production by bEnd.3 cells, and this effect was abolished by the selective COX-2 inhibitor NS-398. bFGF also increased VEGF production by bEnd.3 cells, and this effect was blocked by NS-398 and the EP1/2 （PGE2 receptors） antagonist AH6809. Furthermore, exogenous PGE2 increased VEGF production in bend.3 cells, and AH6809 blocked this effect. Conclusion bFGF increases VEGF production in an autocrine manner by increasing COX-2-generated PGE2 in cMVECs and subsequently stimulates MVEC proliferation and angiogenesis.     

EXPRESSION DIFFERENCES OF VASCULAR GROWTH FACTORS IN HUMAN LUNG ADENOCARCINOMA CELL LINE A549 AND CISPLATIN-RESISTANT HUMAN LUNG ADENOCARCINOMA CELL LINE A_(549)~(DDP)

Objective To elucidate the expression differences of vascular growth factors in human lungadenocarcinoma cell line A549 and cisplatin-resistant human lung adenocarcinoma cell line A549DDP . Methods RT-PCR and immunohistochemistry was used to detect the mRNA and protein expressions of vascular endothelial growth factor ( VEGF) and basic fibroblast growth factor ( bFGF) in A549 and A549DDP . Results VEGF and bFGF mRNA were expressed in A549 and in A549DDP VEGF and bFGF mRNA expression levels in A549DDP were significant higher than those in A549 (P< 0 .025 ). VEGF and bFGF protein expressions were all strong positive in A549 and A549DDP. Conclusion There are certain differences between VEGF and bFGF expressions in A549 and A549DDP . Drug-resistance of lung cancer is associated with those above genes over-expressions. Over-expression of vascular growth factors are related to drug resistance of lung cancer.     

羟基红花黄色素A抑制异常增殖血管内皮细胞的机制研究

目的研究羟基红花黄色素A(HSYA)抑制异常增殖血管内皮细胞的作用机理。方法建立人结肠腺癌细胞LS180上清液和人脐静脉内皮细胞ECV304体外共培养模型,通过实时荧光定量PCR检测ECV304细胞中血管内皮生长因子(VEGF)及其受体(KDR)、碱性成纤维细胞生长因子(b FGF)及其受体(b FGFR)、HSPG2、p53、c-myc mRNA水平的表达;ELISA法检测细胞培养上清VEGF、VEGFR(KDR)、b FGF、b FGFR蛋白的表达。结果在共培养细胞模型中,0.66、0.33 mg/L浓度的HSYA对血管生成促进因子VEGF及其受体KDR、b FGF及其受体b FGFR和癌基因c-myc及与细胞增殖相关蛋白多糖HSPG2的mRNA表达具有抑制作用;对抑癌基因p53 mRNA的表达具有促进作用。0.66、0.33 mg/L浓度的HSYA对血管生成促进因子VEGF及其受体KDR、b FGF及其受体b FGFR的蛋白表达具有抑制作用。结论 HSYA抑制新生血管的生成、抑制共培养模型中血管内皮细胞的异常增殖,其可能的作用机理是通过调控VEGF及其受体、b FGF及其受体、HSPG2、c-myc和野生型p53的表达发挥抗肿瘤作用,揭示HSYA可能是潜在的肿瘤血管生成抑制剂。     

五羟色胺促进骨髓基质细胞生长初探

目的:探讨五羟色胺(serotonin,5-HT)对骨髓基质细胞(bone marrow stromal cell,BMSC)体外生长的影响.方法:采用骨髓基质细胞集落培养技术(CFU-F)检测不同浓度5-HT以及5-HT分别与碱性成纤维细胞生长因子(basic-fibroblast growth factor,bFGF),血小板源性生长因子(platelet-derived growth factor,PDGF),血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)对小鼠及人BMSC体外培养的生长促进作用,反转录多聚酶链反应(RT-PCR)检测人BMSC表面5-HT2型受体mRNA表达.结果:5-HT不同浓度(50,100,200,500nM)对小鼠及人BMSC体外培养均有生长促进作用(P＜0.05),显示最大作用浓度为200nM.5-HT可增强bFGF,PDGF和VEGF对BMSC生长促进作用.人BMSC表面有5-HT2A,2B,2C受体mRNA表达.结论:5-HT具有BMSC生长促进作用,并可增强bFGF,PDGF,VEGF促进BMSC的生长,其作用途径可能通过BMSC表面5-HT2型受体,从而促进细胞生长.     

雷公藤内酯醇抑制血管内皮细胞生长因子的表达与合成

目的 探讨雷公藤内酯醇对血管内皮细胞生长因子（VEGF）mRNA表达及VEGF合成与分泌的影响,进一步探讨雷公藤内酯醇降低肾小球肾炎患者尿蛋白的作用机制。方法 以人内皮细胞系ECV－304为研究对象,利用逆转录－聚合酶链反应（RT－PCR）、流式细胞仪、酶联免疫吸附法（ELISA）检测不同剂量雷公藤内酯醇对佛波脂（PMA）诱导的内皮细胞VEGF mRNA表达及VEGF合成与分泌的影响,并采用RT－PCR检测雷公藤内酯醇对内皮细胞c-jun/c-fos mRNA表达的影响。结果 雷公藤内酯醇可以抑制PMA诱导的内皮细胞VEGF mRNA表达及VEGF合成与分泌,并呈剂量依赖性。同样,雷公藤内酯醇剂量依赖性抑制PMA诱导的内皮细胞c-jun/c-fos mRNA的表达。结论 雷公藤内酯醇抑制内皮细胞VEGF mRNA表达及VEGF合成与分泌可能是其雷公藤内酯醇降低肾小球肾炎患者尿蛋白的作用机制之一。雷公藤内酯醇可能通过影响转录因子AP－1的形成而影响内皮细胞VEGF的表达与合成。     

丁基苯酞对大鼠局灶缺血脑组织VEGF及bFGF表达的影响

目的研究丁基苯酞(NBP)对大鼠缺血脑组织中血管内皮生长因子(VEGF)和碱性成纤维生长因子(bFGF)表达的影响。方法健康雄性SD大鼠,用大鼠大脑中动脉线栓法(MCAO)建立永久缺血模型。实验分为假手术组、模型对照组和NBP组,每组各20只大鼠。NBP组术后予以NBP灌胃,每天2次,每次25mg/kg;假手术组、模型对照组每天灌胃相应剂量食用植物油。局灶性缺血72h后行神经功能评分(Longa评分),然后断头取脑。TTC染色观察脑梗死体积,免疫组织化学(SP)方法观察梗死周围区、海马区和梗死核心区脑组织VEGF和bFGF蛋白的表达,原位杂交方法(POD法)检测VEGF mRNA和bFGF mRNA的表达。结果NBP组神经功能缺损评分低于模型对照组(P<0.05),NBP组在梗死周围区和海马区VEGF和bFGF蛋白,VEGF mRNA和bFGFmRNA表达均高于模型对照组和假手术组(P<0.05),在梗死核心区差异均无统计学意义(P>0.05)。结论NBP明显改善缺血后大鼠的神经功能,上调大鼠梗死周围区和海马区脑组织VEGF、bFGF蛋白和mRNA的表达,可能通过此机制治疗保护缺血脑组织。     

VEGF、bFGF与Graves病甲状腺组织血管形成的相关性研究

目的：研究血管内皮生长因子（VEGF）、碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）在Graves病（GD）甲状腺组织中的表达及其与血管形成的关系。方法：应用免疫组织化学法检测28例GD甲状腺组织和19例正常甲状腺组织中VEGF、bFGF的表达，抗CD34单克隆抗体显示血管内皮细胞．根据CD34阳性的血管内皮细胞计数测定甲状腺组织内的微血管密度（MVD）。结果：VEGF、bFGF在GD甲状腺组织的表达明显高于在正常甲状腺组织的表达（均P〈0．01），二者的表达与GD甲状腺组织内微血管密度呈正相关（r=0．71，r=0．49，均P〈0．01）；VEGF、bFGF在GD甲状腺组织的表达存在相关性（P〈0．05）。结论：VEGF、bFGF与GD患者甲状腺内血管形成有关。     

血管内皮生长因子拮抗缺氧诱导的血管内皮细胞凋亡及其机制研究

目的研究血管内皮生长因子(VEGF)和缺氧对血管内皮细胞凋亡及凋亡相关基因Bcl-2与Apo-1/FasmRNA表达的影响,探讨VEGF用于预防经皮冠状动脉介入治疗术(PCI)后再狭窄的机制。方法将体外培养的人脐静脉内皮细胞(hUVEC)分成对照组、缺氧处理组、缺氧 VEGF处理组,12h后采用原位末端标记法、流式细胞术观察各组细胞的凋亡发生情况,通过RT-PCR法观察各组细胞中凋亡相关基因Bcl-2与Apo-1/FasmRNA表达的变化。结果与对照组和缺氧 VEGF处理组比较,缺氧处理组凋亡细胞及FasmRNA表达明显增加,Bcl-2mRNA表达明显下降,而VEGF能拮抗上述作用。结论VEGF能拮抗缺氧诱导的内皮细胞凋亡,其抗凋亡的机制可能与上调Bcl-2mRNA表达与下调Apo-1/FasmRNA表达有关。从而为VEGF预防再狭窄进一步提供了理论依据。