实时荧光定量PCR检测白血病患者WT1基因表达及临床意义

目的 研究白血病患者WT1基因的表达水平及与临床预后的关系.方法 建立实时荧光定量PCR检测WT1基因表达技术,并分析65例白血病患者WT1基因的表达水平及与临床预后的关系.结果 建立的实时荧光定量PCR方法的标准曲线相关系数＞0.99.急性髓性白血病(AML)和急性淋巴细胞白血病(ALL)患者WT1基因表达水平较正常对照组均显著升高(P=0.001).慢性髓性白血病(CML)急变期患者WT1基因表达水平显著高于慢性期.WT1表达量与急性白血病发病时外周血白细胞计数、血红蛋白、血小板无明显相关关系.AML和ALL患者中WT1基因高表达患者与低表达病例CR率差异无显著性.急性白血病患者治疗缓解后WT1的表达量较治疗前显著下降(P=0.032).随访显示WT1持续高表达或下降后又上升的患者呈现难治及复发.结论 实时荧光定量PCR技术检测急性白血病患者WT1基因表达量可预测难治复发及用于MRD的检测.     

白血病患者WT1基因的表达及临床意义

目的：检测白血病患者WT1基因的表达水平，并探讨其与临床的关系。方法：应用逆转录－聚合酶链反应（RT－PCR）技术，检测58例初治急性白血病（AL）、20例慢性粒细胞白血病（CM）和10例非血液病患者WT1基因的表达。结果：10例非血液病患者WT1基因的表达均呈阴性。58例AL患者44例检测有WT1基因的表达，阳性率为75．9％，其中急性髓性白血病（AML）阳性率为86．4％，急性淋巴细胞白血病（ALL）为42．9％，两者差异有显著性（P＜0．01）；AML治疗前WT1的表达水平与完全缓解（CR）率无相关（P＞0．05），但倾向于WT1基因低表达者有更高的CT率（低表达组CR率为75．0％，高表达组率为34．8％）。CML慢性期WT1的表达水平极低，随临床分期进展水平增高，高表达者预示急变。结论：AL和CML急变期患者WT1基因过度表达，初治AML治疗前WT1的表达水平与疗效无相关，但低表达组CR为75％，高表达组CR为34．8％。     

WT1基因在白血病患者中的表达及临床意义

目的 :探讨 WT1基因在白血病患者中的表达及其临床意义。方法 :采用逆转录聚合酶链反应 (RT- PCR)方法测定 5 3例急性白血病、15例慢性粒细胞白血病、2 1名正常人的 WT1基因表达。结果 :5 3例急性白血病患者中 4 1例 WT1基因表达阳性 ,阳性率为 77.35 % ,其中急性髓系白血病 (AML )和急性淋巴细胞白血病 (AL L )阳性率分别为 80 .6 %和 72 .0 % ,两组相比差异无统计学意义 (P >0 .0 5 ) ;15例的慢性粒细胞白血病 (CML ) WT1基因表达阳性率为 4 6 .7% ,其中 7例急变期和加速期阳性率为 10 0 % ,8例慢性期阳性率为 0 %。 2 7例急性白血病完全缓解 (CR)患者中 2 2例 (81.5 % ) WT1基因表达转阴 ,4例复发患者 WT1基因表达再次升高。 2 1例正常人的 WT1基因表达阴性 ;RT- PCR检测 WT1基因灵敏度为 10 - 4水平。结论 :1WT1基因在各种类型白血病患者中均有表达 ,在正常人中不表达。 WT1的表达与白血病病程相关 ;2 WT1基因可作为检测MRD的标记性基因。 WT1基因的表达与白血病患者的化疗效果及预后密切相关。     

急性白血病患者Wilms肿瘤基因(WT1)表达及其临床意义

目的 检测急性白血病患者WT1 mRNA转录水平,探讨WT1基因与白血病病程的关系.方法 应用荧光定量PCR(FQ-PCR)方法对57例白血病病人和10例正常健康人的外周血或骨髓标本进行WT1基因的检测.结果 45例初发急性白血病(AL)中35例WT1 mRNA阳性(阳性率77.8%),其中27例初发急性髓细胞白血病(AML)中24例阳性(88.9%),18例初发急性淋巴细胞白血病(ALL)中11例阳性(61.1%).10例正常人没有检测到WT1 mRNA.结论 急性白血病WT1 mRNA呈高表达.在缺乏特异性克隆标志白血病中监测WT1 mRNA是有价值的.     

实时荧光定量PCR检测白血病WT1基因的表达

目的 以实时荧光定量PCR (FQ-PCR)检测WT1mRNA的方法,探讨WT1mRNA在白血病的治疗转归、判断预后及监测微小残留病灶(minimal residual disease, MRD)方面的作用.方法 FQ-PCR扩增K562细胞的WT1基因和β2-MG,将扩增产物10倍梯度稀释制作标准曲线,定量检测64例白血病患者,56例对照者骨髓内WT1水平.结果 (1)A组急性白血病(复发、初治、未缓解)及慢粒加速期和急变期病人,共40例,骨髓WT1表达较高,22.54-168.90拷贝/100ng RNA;(2)B组缓解病人、慢粒慢性期,共24例,WT1 0～4.90拷贝/100ng RNA;(3)C组非白血病患者和正常人骨髓,共56例,WT1表达较低,0～3.20拷贝/100ng RNA.结论 不同状态的白血病患者WT1表达有明显差异.WT1可作为疾病转归、疗效考核和MRD的指标.     

荧光定量RT-PCR检测人组织因子 mRNA

目的　建立检测组织因子 (tissuefactor ,TF)mRNA荧光定量的方法 ,了解组织中TF的表达水平 ,研究TFmRNA的表达与肿瘤的关系。方法　构建克隆载体 pUC TF作为定量模板 ,在GeneAmp 5 70 0型检测仪上定量检测 4 2例不同恶性程度胶质瘤组织标本 ,5例正常脑组织标本和人恶性胶质瘤细胞株U 2 5 1。结果　 4 2例肿瘤组织均有mRNA的表达 ,范围从 3 .6× 10 5～ 8.8× 10 7拷贝 / μgRNA ,均值为 2 .9× 10 6 拷贝 / μgRNA ,且拷贝数与恶性程度成正比 ;5例正常脑组织中 ,1例检测不出 ,其他 4例的强度为 3 .8× 10 3～ 5 .1× 10 4拷贝 / μgRNA ,均值为 6.2× 10 3拷贝 / μgRNA ;胶质瘤细胞株U 2 5 1的强度为 2 .8× 10 6 拷贝 / μgRNA。 结论　成功地建立了荧光定量检测TF基因表达方法 ,检测结果可用绝对拷贝数表示 ,定量准确可靠。TFmRNA荧光定量测定方法的建立为研究TF与胶质瘤等肿瘤恶性程度及转移的关系打下了基础     

WT1基因在白血病患者中的表达及临床意义

目的研究WT1基因在白血病患者中的表达及其临床意义.方法运用RT-PCR方法检测WT1基因在200例白血病患者中的表达.结果急性髓细胞白血病(AML)和急性淋巴细胞白血病(ALL)WT1表达阳性率分别为79.2%(76/96)和57.1%(32/56).慢性粒细胞白血病(CML)慢性期WT1表达均阴性,急变期57.1%(8/14)表达阳性.WT1阳性患者化疗缓解率低于阴性患者(分别为55.7%和85.4%,P<0.05).结论WT1在白血病患者中高表达,可作为临床评估预后、检测微小残留病(MRD)的标志.     

RT-PCR检测WT1基因在白血病患者中的表达及临床意义(摘要)

目的：研究WT1基因在白血病患者中的表达及其临床意义．方法：运用逆转录一聚合酶链反应（RT-PCR）的方法，检测WT1基因在50例白血病患者及8例正常人、3例血液系统非恶性肿瘤患者中的表达．分析WT1基因在白血病患者中的表达规律及其与白血病转归、预后等的关系．结果：RT～PCR检测WT1基因的灵敏性为10^-4．急性非淋巴细胞白血病（ANLL）22例，17例WT1表达阳性（77．3％）；急性淋巴细胞性白血病（ALL）11例，6例WT1表达阳性（54．5％）；急性混合细胞性白血病（AMLL）1例WT1表达阳性；提示FAB分型中各型急性白血病均可呈阳性表达．慢性粒细胞白血病（CML）15例，其中慢性期8例WT1表达均为阴性。     

巢式PCR检测WT1在白血病患者中的表达及其临床意义

应用巢式逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定K562细胞株及75例白血病患者及10名正常人WT1基因的表达.并同时测定mdrl的表达.检测结果为K562细胞株高表达,急性髓性白血病(AML)30例中19例,急性淋巴细胞白血病(ALL)13例中10例,慢性粒细胞白血病(CML)共17例,其中加速及急变期3例,慢性期14例中8例,WT1表达为阳性,10名正常人及7例缓解期患者WT1表达均为阴性;且WT1阳性患者完全缓解率(CR)低于表达阴性者(分别为65%和88%,P<0.05).此结果说明WT1在白血病患者中高表达,可作为检测白血病微小残留病的标记基因,WT1的阳性表达者化疗后CR率低,且其与白血病的病程发展可能有关,WT1与mdrl无明显相关性.     

巢式PCR检测WT1在白血病患者中的表达及其临床意义

应用巢式逆转录－聚合酶链反应（RT－PCR）测定K562细胞株及75例白血病患者及10名正常人WT1基因的表达。并同时测定mdr1的表达。检测结果为K562细胞株高表达,急性髓性白血病（AML）30例中19例,急性淋巴细胞白血病（ALL）13例中10例,慢性粒细胞白血病（CML）共17例,其中加速及急变期3例、慢性期14例中8例,WT1表达为阳性,10例正常人及7例缓解期患者WT1表达均为阴性;且WT1阳性患者完全缓解率（CR）低于表达阴性者（分别为65％和88％,P＜0.05）。此结果说明WT1在白血病患者中高表达,可作为检测白血病微小残留病的标记基因,WT1的阳性表达者化疗后CR率低,且其与白血病的病程发展可能有关,WT1与mdr1无明显相关性。     

ENTPD5在急性白血病骨髓液中的表达

目的观察内质网酶ENTPD5蛋白在急性白血病(AL)骨髓液中的表达,了解其与AL发病的关系。方法选取AL患者111例,其中急性髓系白血病(AML)患者78例(初治组48例,复发组10例,缓解组20例),急性淋巴细胞性白血病(ALL)患者33例(初治组14例,复发组9例,缓解组10例)。将62例初治AL患者分为高危组26例,中危组19例,低危组17例。应用Western blot法检测ENTPD5在AL中的表达量,比较在不同分型AL患者中初治、复发、缓解阶段以及在低危、中危、高危组AL患者中该蛋白表达的差异;同时分析ENTPD5表达与临床指标的相关性。结果ENTPD5的表达水平在AML、ALL患者中初治和复发组均高于缓解组(P<0.05),低危组ENTPD5的表达量明显低于高危组和中危组(P<0.05)。ENTPD5的表达量与初治时外周血白细胞计数、骨髓原始细胞百分比、基因WT1和微小残留病灶均有一定相关性。结论 AL存在ENTPD5的表达异常,该蛋白在AL的发生中可能起重要作用。     

WT1基因水平动态检测对白血病患者异基因骨髓移植后微小残留病监测的意义

目的探讨白血病患者接受异基因骨髓移植(allo BMT)后骨髓中WT1的动态表达水平在监测微小残留病(MRD)中的意义。方法建立实时定量逆转录聚合酶链反应(RT PCR)方法,采用LightCyclerPCR仪检测了15例白血病患者allo BMT前后(111例次)和23例非白血病患者骨髓中WT1及内参GAPDH的表达水平,以WT1N=(WT1拷贝数/GAPDH拷贝数)×104计算WT1表达水平。结果初诊与复发白血病患者骨髓中WT1N的中位表达水平分别为40 18和125 89,明显高于完全缓解组和对照组(分别为4 80和1 47),对照组与完全缓解组之间及初诊与复发组之间差异无统计学意义;动态检测WT1N变化与相应融合基因变化具有很好的相关性, WT1N表达水平再次升高可提前40~180d预示白血病临床复发。结论实时定量RT PCR动态检测WT1在白血病患者allo BMT后骨髓中表达水平,可作为监测残留病的指标,提示复发。     

WT1基因在急性白血病患者骨髓细胞中的表达及其临床意义

目的研究WT1基因在急性白血病（AL）患者骨髓细胞中的表达及其临床意义。方法采用实时定量RT-PCR方法动态检测92例初治AL患者WT1基因的表达。结果初治AML各亚型中M5基因表达阳性率最高,为91.7%,其WT1基因中位表达水平最高,达1308.6,显著高于其他亚型,差异有统计学意义（P〈0.05）;初治ALL各亚型（L1,L2,L3）之间WT1基因表达阳性率及中位表达水平差异无统计学意义（P〉0.05）;AL患者中,WT1基因表达阳性组CR率显著低于阴性组,阳性组缓解后半年内复发率显著高于阴性组,差异均有统计学意义（均P〈0.05）;初治组、复发组及未缓解组AL患者骨髓细胞WT1基因中位表达水平明显高于完全缓解组和对照组,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论WT1基因在AL患者骨髓细胞中表达水平可作为临床评估疾病的发生发展、判断预后及检测微小残留病（MRD）的指标。     

WT1基因在急性髓细胞白血病患者中的表达及其意义

目的探讨WT1基因在急性髓细胞白血病(AML)患者中的表达及其与临床治疗和预后的关系.方法采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)的方法,检测59例AML患者WT1基因的表达.结果 AML患者WT1基因的表达阳性率初发者(73.2%)与复发患者(75.0%)无差异,但均高于缓解患者(10.0%).WT1基因表达阳性患者的首次化疗缓解率(45%)低于WT1基因表达阴性患者(78%);首次化疗缓解率WT1基因相对表达量≥1的患者(22.2%)低于表达量＜1的患者(57.1%).结论 WT1基因可能是AML患者的癌基因,与疾病的预后有一定关系,动态监测WTl基因的表达有助于临床判断预后和疗效.     

外周血微小残留白血病细胞的定量检测及临床应用

目的: 探讨定量检测急性白血病患者外周血微小残留白血病细胞的临床价值。方法: 采用极限稀释定量PCR法对25例初诊急性白血病患者及1个疗程化疗后外周血标本进行Fms样酪氨酸激酶3（FLT3）基因表达进行检测，并定量计算体内残留的白血病细胞数，10例门诊健康体检者为对照组。结果: ①25例初诊急性白血病患者外周血标本FLT3基因表达阳性率为80.0%（20/25），其中急性髓细胞白血病（AML）88.2%（15/17），急性淋巴细胞白血病（ALL）62.5%（5/8）。②20例FLT3基因表达阳性的白血病初诊患者外周血DNA含量为（2.36±1.25）×10⁸ μg•L^-1，外周血含有的白血病细胞数为（18.66±8.79）×10⁶•μL^-1。经过1个疗程化疗后，1例未缓解者，外周血DNA含量为1.69×10⁷μg•L^-1，残留的白血病细胞数为1.01×10⁶•μL^-1；3例部分缓解者，外周血DNA含量为（0.57±0.24）×10⁶ μg•L^-1，残留的白血病细胞数为（1.82±0.19）×10³•μL^-1；16例完全缓解者，其中FLT3基因表达阴性9例，FLT3检测阳性7例，其外周血DNA含量为（0.16±0.06）×10⁶ μg•L^-1，残留的白血病细胞数为（1.86±1.31）×10²•μL^-1。健康对照组FLT3基因表达均为阴性。结论: 定期、定量检测急性白血病患者治疗后体内残留的白血病细胞数，有助于临床观察白血病治疗效果及时调整治疗方案。     

急性白血病患者基因表达谱变化的初步研究

目的研究急性白血病发病机理,寻找诊断分型、预后判断及治疗等方面的新方法。方法采用基因芯片技术观察了22例初发急性白血病患者12848条基因的表达谱,分析基因表达特征。结果12848条基因中有1163条基因差异表达,其中45条基因与Golub等报道的50条急性淋巴细胞白血病(ALL)、急性髓性白血病(AML)的预测基因一致,并符合ALL、AML的分型标准;在耐药细胞系K562-n／VCR中高表达的7条基因在6例难治性急性白血病患者中也过度表达;进一步分析AML各亚型及ALL的表达谱差异,发现31条基因在AMLM1-M3亚型中的表达与AMLM4-M6亚型及ALL明显不同。结论支持Golub等提出的急性白血病分型标准,临床上成人ALL和AMLM4-M6亚型的预后较AMLM1-M3亚型差,与一系列基因表达的改变有关。原发耐药可能是导致白血病难治的主要原因之一。基因芯片对于急性白血病分型诊断及预后判断具有重要意义。     

Expression of MRP1 gene in acute leukemia

CONTEXT AND OBJECTIVE: Overexpression of the multidrug resistance-associated protein 1 (MRP1) gene has been linked with resistance to chemotherapy in vitro, but little is known about its clinical impact on acute leukemia patients. Our aim was to investigate the possible association between MRP1 gene expression level and clinical outcomes among Iranian leukemia patients. DESIGN AND SETTING: This was an analytical cross-sectional study on patients referred to the Hematology, Oncology and Stem Cell Research Center, Sharyatee Public Hospital, whose diagnosis was acute myelogenous leukemia (AML) or acute lymphoblastic leukemia (ALL). All molecular work was performed at NIGEB (public institution). METHODS: To correlate with prognostic markers and the clinical outcome of acute leukemia, MRP1 gene expression was assessed in 35 AML cases and 17 ALL cases, using the quantitative real-time polymerase chain reaction and comparing this to the chemotherapy response type. RESULTS: Mean expression in AML patients in complete remission (0.032 +/- 0.031) was significantly lower than in relapsed cases (0.422 +/- 0.297). In contrast, no significant difference in MRP1 mRNA level was observed between complete remission and relapsed ALL patients. There was a difference in MRP1 expression between patients with unfavorable and favorable cytogenetic prognosis (0.670 +/- 0.074 and 0.028 +/- 0.013, respectively). MRP1 expression in M5 was significantly higher (p-value = 0.001) than in other subtypes. CONCLUSIONS: The findings suggest that high MRP1 expression was associated with poor clinical outcome and was correlated with the M5 subtype and poor cytogenetic subgroups among AML patients but not among ALL patients.     

囊性纤维化跨膜转导调节因子与急性白血病患者临床特征及预后的关系

  目的  检测细胞囊性纤维化跨膜转导调节因子（CFTR）在急性白血病及其亚型中的表达情况,分析其与急性白血病患者的临床特征及预后的关系。  方法  纳入115例急性白血病患者为实验组,以同期体检健康者为对照组,收集其外周血或骨髓,分离单个核细胞,采用Western blot法检测细胞的CFTR蛋白相对表达量,分析CFTR蛋白表达与急性白血病患者的临床特征及预后的关系。  结果  正常人外周血单个核细胞未检测出CFTR蛋白表达,而一半以上急性白血病包括急性髓系白血病（AML）和急性淋巴细胞白血病（ALL）患者CFTR蛋白表达阳性,而急性早幼粒细胞白血病（M3）患者均未检测到CFTR蛋白阳性表达。在AML患者中,CFTR蛋白表达阳性和阴性患者在外周血白细胞计数（WBC）、外周血原始细胞数、血小板（PLT）和血红蛋白（HGB）等方面差异无统计学意义,也与NPM1、CEBPA、FLT3-ITD、C-Kit等基因突变无相关性,CFTR蛋白阴性患者2疗程完全缓解（CR）率略高于阳性患者,生存期略长于阳性患者,但差异无统计学意义。在ALL患者中,CFTR蛋白与患者的临床特征及预后均无关。  结论  本研究尚未发现CFTR蛋白与急性白血病患者临床特征、治疗反应及预后有相关性。