维甲酸诱导人肺腺细胞基因表达和分化作用的研究

应用１０＾－５ｍｏｌ／Ｌ全反式维甲酸诱导人肺腺癌细胞ＧＬＣ－８２，观察到：（１）细胞体外生长速度减慢、堆叠性长消失、泡浆内出现空泡、细胞逐渐衰老和死亡。（２）双层软琼脂中细胞集落形成受到明显抑制；（３）细胞ＤＮＡ合成能力降低；（４）细胞周期出现向Ｇ１／Ｇ０期移行的特征动力学改变；（５）细胞分化和凋亡的效应器因子－谷氨酰胺转移酶基因早期被激活并持续表达。研究结果表明，ＲＡ通过激活人肺腺癌细胞ＧＬＣ－     

维甲酸诱导人肺腺癌细胞基因表达和分化作用的研究

应用１０－５ｍｏｌ／Ｌ全反式维甲酸（ＲＡ）诱导人肺腺癌细胞系ＧＬＣ－８２，观察到：①细胞体外生长速度减慢、堆叠性生长消失、胞浆内出现空泡、细胞逐渐衰老和死亡；②双层软琼脂中细胞集落形成受到明显抑制；③细胞ＤＮＡ合成能力降低；④细胞周期出现向Ｇ１／Ｇ０期移行的特征性动力学改变；⑤细胞分化和凋亡的效应器因子－谷氨酰胺转移酶（ＴＧａｓｅ）基因早期即被激活并持续表达。研究结果表明，ＲＡ通过激活人肺腺癌细胞ＧＬＣ－８２分化相关基因表达进而启动细胞分化。     

Line 10肝癌细胞产生的肿瘤生长因子对人肝上皮癌细胞体外增殖的影响

目的：检测近交２系豚鼠肝癌细胞ｌｉｎｅ１０分泌的生长因子ＴｕＧＦ（ｓ）对人肝上皮癌细胞（ＢＥＬ－７４０２）生长的影响。方法：集落形成测定法检测ＴｕＧＦ（ｓ）对ＢＥＬ－７４０２细胞在软琼脂培养基内生长的影响。ＭＴＴ法测定ＴｕＧＦ（ｓ）对ＢＥＬ－７４０２细胞在液体培养基内增殖的影响。结果：软琼脂培养基内培养时ＴｕＧＦ（ｓ）对ＢＥＬ－７４０２细胞无集落形成促进或抑制作用；单层培养的条件下，ＴｕＧＦ（ｓ）对ＢＥＬ－７４０２细胞在１×１０５个／ｍｌ接种细胞浓度下，具有促进细胞生长的作用；而在１×１０４个／ｍｌ细胞浓度下，则为抑制细胞生长的作用。结论：ＴｕＧＦ（ｓ）对ＢＥＬ－７４０２细胞体外增殖的影响依实验条件的不同具有复杂的生物学调节作用     

PB230体外抗肿瘤活性的研究

目的：研究ＰＢ２３０对人胃癌细胞（ＭＧＣ８０－３）、人红白血病细胞（Ｋ５６２）和人乳腺癌细胞（ＭＣＦ－７）的生物抑制作用,探讨其抗癌作用机制,方法：采用ＭＴＴ法检测不同浓度ＰＢ２３０对体外培养的ＭＧＣ８０－３细胞系、Ｋ５６２细胞系和ＭＣＦ－７细胞系的生长抑制作用,结果：ＰＢ２３０明显抑制ＭＧＣ８０－３、Ｋ５６２和ＭＣＦ－３三种细胞系的生长,其ＩＣ５０值分别为２&;#215;１０＾－６－１&;#215;１０＾－５ｍｏｌ／Ｌ之间,２&;#215;１０＾－６ｍｏｌ／Ｌ和１&;#215;１０＾－５ｍｏｌ／Ｌ,结论：ＰＢ２３０能直接抑制肿瘤细胞生长。     

反义寡脱氧核苷酸对人肝癌裸鼠模型生长及转移的影响

目的 观察反义Ｈ－ｒａｓ寡脱氧核苷酸（ＯＤＮ）对高表达蛋白ｐ２１Ｈ- ｒａｓ的人肝癌高转移裸鼠模型ＬＣＩ－Ｄ２０细胞生长、凋亡及转移潜能的影响。方法原代培养ＬＣＩ－Ｄ２０细胞，经１０μｍｏｌ／Ｌ浓度反义ＯＤＮ处理后，以１．５×１０细胞数分别接种于１４只裸鼠皮下缝制皮囊内：６只接种反义Ｈ－ｒａｓＯＤＮ处理细胞，４只接种Ｈ－ｒａｓ非特异性反义ＯＤＮ处理细胞，余４只接种未作处理的对照细胞。结果反义Ｈ－ｒａｓ对ＬＣＩ－Ｄ２０细胞增殖具有显著抑制作用（ｔ＝３１．５２９，Ｐ＜０．０１），反义ＯＤＮ处理细胞，Ｓ期比率（３６．０±１．４）显著低于对照组（５８．５±０．９，ｔ＝１３．５１９，Ｐ＜０．０１），而Ｇ１／Ｇ０期比率（５６．７％±１．１％）高于对照组（３７．４±０．７，ｔ＝１４．８０２，Ｐ＜０．０１）；反义Ｈ－ｒａｓＯＤＮ处理细胞的凋亡发生率（３４．０％±４．５％）显著高于对照组（２．５％±１．２％，ｔ＝１３．４３４，Ｐ＜０．０１）；反义Ｈ－ｒａｓ处理对ＬＣＩ－Ｄ２０细胞在接种动物体内的生长具有显著延迟抑制作用（ｔ＝３．５０９，ｔ＝３．４５２，Ｐ＜０．０１）；接种动物的肺转移率，反义Ｈ－ｒａｓＯＤＮ处理组显著低于对照组。     

胃泌素及其受体拮抗剂对结肠癌HT29细胞生长的调节

目的：探讨胃泌素类似物五肽胃泌素（ＰＧ）及胃泌素受体拮抗剂丙谷胺（ＰＧＬ）对体外培养的人结肠癌细胞株ＨＴ２９生长的影响。方法：采用ＭＴＴ法检测细胞增殖情况用流式细胞术（ＦＣＭ）分析细胞周期变化。结果：高浓度的ＰＧ（１０－５～１０－７Ｍ）能明显促进ＨＴ２９细胞的增殖（Ｐ＜００５），低浓度的ＰＧ（１０－８～１０－１０Ｍ）对ＨＴ２９细胞无明显促增殖作用（Ｐ＞００５）。ＰＧＬ能抑制ＰＧ对ＨＴ２９细胞的刺激作用，并对ＨＴ２９细胞的增殖有直接抑制作用（Ｐ＜００５）。细胞周期分析显示ＰＧ能缩短细胞Ｇ３／Ｇ１期，ＰＧＬ则延长细胞Ｇ０／Ｇ１期（Ｐ＜００５）。结论：胃泌素对体外培养的ＨＴ２９细胞的生长具有调节作用，胃泌素受体拮抗剂可能在结肠癌的治疗中发挥重要作用。     

激素与生长因子在调节成骨样细胞增殖中的作用

细胞的增殖分化受多种激素和生长因子的正负调控，内环境对其也有深刻和影响。在成骨样细胞的研究中药得下列结果：１对细胞增殖的影响：ＩＧＦ－１（１－＾８ｍｏｌ／Ｌ）或ＥＧＦ（１０ｎｇ／ｍＬ）可促进细胞生长，＾３ＨＴｄＲ参入及Ｓ期细胞的百分率，ＴＮＦａ（１０－＾８ｍｏｌ／Ｌ）则可下调Ｓ期细胞以及Ｃ－ｍｙｃ，Ｃ－ｋｉ－ｒａｓ的基因表达。２对爱体数量及Ｋ＾＋通道的影响：ＰＨＴ（１０－＾８ｍｏｌ／Ｌ）可上调ＥＧ     

酪氨酸羟化酶免疫反应神经元在金黄地鼠视网膜的定位和分布

应用免疫组化ＡＢＣ法研究了金黄地鼠视网膜酪氨酸羟化酶免疫反应（ＴＨ－ⅠＲ）神经元的定位和分布。结果表明８４．６％的ＴＨ－ⅠＲ神经元是无长突细胞或网间细胞；１５．４％是移位无长突细胞或视网膜节细胞（ＲＧＣ）。ＴＨ－ⅠＲ细胞突起主要分布在内网层（ＩＰＬ）的第１亚层。ＴＨ－ⅠＲ神经元分布于视网膜中央区和周围区，其密度为（２２．４±１．５）个／ｍｍ２。颞上区密度最高，为（２９．１±３．２）个／ｍｍ２。ＴＨ－ⅠＲ无长突细胞多为星形。在节细胞层（ＧＣＬ）的ＴＨ－ⅠＲ细胞均为中小型神经元，胞体直径约为７～１６μｍ，它们的突起分支在ＩＰＬ的第１亚层。荧光素逆行标记结合间接免疫荧光组化的双标研究，表明金黄地鼠视网膜的ＧＣＬ内，部分ＴＨ－ⅠＲ神经元是ＲＧＣ。ＴＨ－ⅠＲＲＧＣ数目约为（５５±７）个，约占ＧＣＬ的ＴＨ－ⅠＲ神经元的４５％。     

瑞香狼毒水提物抗肿瘤作用

瑞香狼毒水提物（ＳｃＬ）抑制小鼠移植肿瘤Ｓ－１８０生长，５－２０ｇ／ｋｇ（相当生药）ｉｐ１０ｄ，抑制率为１６．２％～４７．８％。ＳｃＬ对体外培养的Ｓ－１８０细胞生长、集落形成和ＭＴＴ甲化合物生成有显著抑制作用，并和剂量呈正相关。０．２５～１６ｇ／Ｌ处理细胞２４ｈ，细胞生长抑制率为５．１％～８９．４％，ＭＴＴ甲化合物生成抑制率为２．４％～７６．９％；处理细胞１２ｈ，Ｓ－１８０细胞软琼脂集落形成减少１．５％～６３．１％。本文结果提示瑞香狼毒的抗肿瘤作用与其直接细胞毒作用有关。     

杜仲愈伤组织培养及其超低温保存

采用单因子比较、正交设计和均匀设计法，分别考察影响杜仲（ＥｕｃｏｍｍｉａｕｌｍｏｉｄｅｓＯｌｉｖ．）愈伤组织诱导、生长及其超低温保存的因素。研究结果表明：愈伤组织诱导的最适培养基为Ｂ５＋６－ＢＡ１ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ０．５ｍｇ／Ｌ；愈伤组织生长较佳的培养基是ＭＳ＋６－ＢＡ０．５ｍｇ／Ｌ＋２．４－Ｄ３ｍｇ／Ｌ。超低温保存的最佳材料是２周龄的愈伤组织；较好的冷冻保护剂是１２．５％Ｇｌｙ＋７．５％ＰＥＧ＋２．５ｇ／ＬＬＨ。     

腺病毒介导RA538基因转移及其诱导肿瘤细胞凋亡的研究

ＲＡ５３８是从维甲酸诱导终末分化的人食管癌细胞系中分离出的一个与分化相关的基因。通过重组体腺病毒将ＲＡ５３８基因成功地转导到人肺腺癌细胞系（ＧＬＣ－８２）中,经Ｘ－ｇａｌ染色证实转导效率达１００％（ＭＯＩ为２５）,转录ＲＡ５３８基因后的ＧＬＣ－８２肿瘤细胞生长受到明显的抑制,抑制率为７７．２％。经流式细胞计数（ＦＣＭ）及ＴＵＮＥＬ检测证实ＲＡ５３８可诱导肿瘤细胞发生凋亡,凋亡率为５９．４％。利用Ｗ     

人肺腺癌细胞系GLC-82中p21WAF1和p53基因的过表达

目的 探讨p21^WAF1和p53基因过表达对人肺腺癌细胞生长和细胞凋亡的影响。方法 用带有p21cDNA的真核表达载体pCEP和带有p53的腺病毒表达载体pAdCMV,分别通过基因转染和腺病毒感染,使其在人肺腺癌细胞系(GLC—82)中过表达;通过流式细胞仪、透射电镜和原位末端分析(TUNEL)观察细胞的生长和凋亡情况。结果 p21过表达的细胞系G1期细胞增加,细胞生长抑制,克隆形成率下降,电镜下未见特征性凋亡小体,原位细胞凋亡分析未见凋亡信号;p53腺病毒感染的肿瘤细胞增殖明显抑制并出现死亡,原值细胞凋亡检测到凋亡信号。结论 P21和p53基因的过表达能够抑制人肺腺癌细胞的生长,其中p53能够诱发细胞凋亡,因此这两种基因在肿瘤基因治疗上有着广泛的应用前景。     

介导p53基因转移的重组体腺病毒对人肺癌细胞的抑制作用

ｐ５３基因突变是肿瘤发生中的多发事件,导入野生型ｐ５３基因能抑制肿瘤细胞的生长。通过腺病毒载体介导。将野生型ｐ５３基因转导到人肺腺癌细胞系（ＧＬＣ－８２）中,证实对肺腺癌细胞生长具有明显的抑制作用,换制率达６１％。     

腺病毒介导野生型p53基因对人肺腺癌细胞的抑制效应

目的：p53基因突变是人类肿瘤中常见的遗传学改变。将野生型p53基因导入一些肿瘤细胞中被证明能抑制其细胞增殖，因此做为肺癌基因治疗主要目的基因而备受关注。本研究旨在观察野生型p53基因对人肺腺癌细胞和裸鼠移植瘤的抑制效应，并对其抑癌机制进行分析，为今后肺癌基因治疗的临床试验提供科学依据。方法：采用重组体腺病毒Ad-p53基因转染人肺腺癌细胞系GLC－82；以裸鼠皮下移植瘤治疗试验观察Ad-p53基因的抑瘤效应；用流式细胞计数，DNA片断化及TUNEL分析探讨Ad-p53基因的抑癌机制。结果：导入Ad-p53基因后人肺腺癌GLC－82细胞生长能力显著下降，克隆形成能力受到明显抑制；并显著抑制裸鼠皮下移植瘤的生长；肺癌细胞发生凋亡，并出现明显的G1期阻滞现象。结论：腺病毒介导野生型p53基因（Ad-p53)对人肺腺癌细胞和裸鼠皮下移植瘤均有明显抑制效应，主要通过诱导癌细胞凋亡和参与细胞周期调控实现，进而提示Ad-p53基因有可能在人肺癌基因治疗中发挥重要作用。     

自杀基因CD、TK的共表达对人肺腺细胞的杀伤作用

目的 观察双自杀基因的共表达与单自杀基因单独表达对癌细胞的杀伤作用。方法 分别构建了以CMV为启动子,含单纯疱疹病毒胸苷激酶（HSV－TK）和／或大肠杆菌嘧啶脱氨酶（Ecoli.CD)单、双自杀基因的真核表达载体。在脂质体介导下将基因导入细胞,经G418筛选出稳定表达的克隆。用PCR、半定量RT－PCR检测各组基因的整合及表达。给予前本药物5－氟胞嘧啶（5－flurocytosine,5-Fc)和／或无环岛苷（Ganciclovir,GCV)后,用MTT法测定各围基因组细胞的存活率。结果 单、双自杀基因均在GLC－82细胞中稳定表达,双基因转染组对细胞增殖的杀伤及旁杀伤效应高于单基因组。结论 TK＋CD／5－Fc GCV的双基因共表达体系较CD／6－Fc或TK／GCV单 基因体系对细胞具有更强的杀伤作用。     

腺病毒介导的反义c-myc选择性诱导肿瘤细胞G1期阻滞和凋亡的研究

目的 构建介导反义ｃ－ｍｙｃ的重组腺病毒,研究其对人肺腺癌细胞的细胞周期,增殖和凋亡的影响。方法 将ｃ－ｍｙｃ基因反向克隆于穿梭质粒载体ｐＡｄＣＭＶ中,通过脂质体与ｐＪＭ１７共转染２９３细胞,经同源重组产生编码反义ｃ－ｍｙｃ的重组腺病毒。体外观察和检测重组腺病毒感染人肺腺癌细胞系ＧＬＣ－８２和ＳＰＣ－Ａ－１以及人胚肺二倍体细胞２ＢＳ后,细胞周期的改变,凋亡的发生和相关基因表达的变化;体内观察对肿瘤     

苏木素复染对免疫组化显色强度定量分析的影响

目的探讨苏木素复染是否影响免疫组化显色反应强度,为免疫组化定量分析的质量控制提供科学依据。方法用免疫组织化学方法检测GLC-82肺腺癌细胞株细胞蜡块中Ki67、Tiam1的表达,检测分为复染组和非复染组;在Nikon显微镜下通过Canon数码像机和Zoom Browser Ex采图软件随机截取样品显色反应细胞图像,用Imagepro Plus图像分析软件,分别测试苏木素复染与不复染时GLC-82细胞Tiam1、Ki67蛋白表达的阳性单位(PU值),每组各测试100个细胞。结果苏木素复染后GLC-82细胞Tiam1的PU值为(36.76±5.12),大于未复染Tiam1的PU值(26.64±5.09,t=9.906,P=0.000),相对偏差为38%。苏木素复染后GLC-82细胞Ki67的PU值为(21.74±4.59),大于未复染Ki67的PU值(14.37±4.65,t=7.985,P=0.000),相对偏差为51%。结论经苏木素复染,Tiam1、Ki67的PU值均明显增大,且核表达抗原Ki67的相对偏差明显大于浆表达抗原Tiam1的相对偏差。因此,对免疫组化结果定量分析时,为保证测试结果的可靠性,不应进行苏木素复染。     

三株抗人肺鳞癌单克隆抗体免疫组化分析

目的对三株抗云南个旧肺鳞癌YTMLC-90杂交瘤细胞S2D1、N2D1、N3C5所分泌的单克隆抗体进行不同组织细胞的免疫组化分析,探讨其特异性.方法用收集的原倍杂交瘤细胞上清常规ABC免疫组化法进行组织细胞学交叉检测,分析三个抗体与临床病理确诊的肺鳞癌组织、肺腺癌组织、肠癌组织、食道癌组织、肾癌组织、肺正常组织石腊切片和肺鳞癌YTMLC-90细胞系、肺腺癌GLC-82细胞系、舌鳞癌Tca-8113细胞系、鼻咽癌KB细胞系、胶质瘤U-251细胞系、膀胱癌T-24、B1u-87细胞系的交叉反应.结果杂交瘤细胞上清液与肺癌组织及肺鳞癌、肺腺癌细胞系YTMLC-90、GLC-82反应呈阳性,阳性率分别为82%、100%;与正常肺组织及肠癌组织、肾癌组织、食道癌组织及体外培养的其它各肿瘤细胞系均呈阴性反应.结论经免疫组化研究,三株单克隆抗体具有肺癌特异性,属于肺癌相关抗原的单克隆抗体.     

cDNA RA538对三种人癌细胞系抑制作用的研究

本室曾报道ＲＡ５３８传染亲本食管癌细胞系ＥＣ８７１２，可命名后者发生终末分化和凋亡。为进一步研究这个ｃＤＮＡ的生物学作用，用ＲＡ５３８０．３ｋｂ的片段与ｎｅｏ基因构建了一个ＰＲＡ５３８－０．３－ｎｅｏ表达质粒，并转入三种不同的人癌细胞素即ＥＣ８７１２、ＨＬ６０和ＧＬＣ（一个来自人肺腺癌的细胞素）。经含Ｇ４１８培养液筛选后，进行了生长速度，＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入率、细胞形态学、在半固体琼脂中克隆形成能力