胃癌p16基因缺失与突变的研究

目的：探讨ｐ１６抑癌基因外显子２缺失、突变与胃癌发生发展及组织学类型的关系。方法：采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）、聚合酶链反应一单链构象多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）分析分别检测胃癌中ｐ１６基因外显子２的缺失及突变。结果：５５例胃癌样本中ＰＣＲ扩增,８例无扩增产物,２例产物明显减少,１０例均可能为ｐ１６基因缺失,缺失率为１８．１８％（１０／５５）,其余４５例胃癌、癌旁及正常胃组织均有ＰＣＲ扩增产物出现;但所有胃癌标本ＳＳＣＰ分析均未见异常泳动带,无ｐ１６基因突变。结论：ｐ１６基因外显子２缺失可能与胃癌发生发展有关;而ｐ１６基因突变可能与胃癌发生无关。     

肝细胞癌患者中p53基因的突变研究

为了解肝细胞癌（ＨＣＣ）中ｐ５３基因的突变情况，收集８６例ＨＣＣ手术切除术标本，采用聚合酶链反应－单链构象多态性（ＰＣＲ／ＳＳＣＰ），聚合酶链反应－限制性片段长度多态性（ＰＣＲ／ＲＦＬＰ）和ＤＮＡ序列分析，研究了ｐ５３基因的突变情况，８６例ＨＣＣ中，ｐ５３基因的突变率为３６％，其中，密码子２４９的突变率为３３．７％，１例ＳＳＣＰ和ＲＦＬＰ均提示密码子２４９存在突变者经ＤＮＡ序列分析显示密码子２４９     

肝细胞癌患者中p53基因的突变研究

为了解肝细胞癌（ＨＣＣ）中ｐ５３基因的突变情况，收集８６例ＨＣＣ手术切除标本，采用聚合酶链反应－单链构象多态性（ＰＣＲ／ＳＳＣＰ）、聚合酶链反应－限制性片段长度多态性（ＰＣＲ／ＲＦＬＰ）和ＤＮＡ序列分析，研究了ｐ５３基因的突变情况。８６例ＨＣＣ中，ｐ５３基因的突变率为３６％，其中，密码子２４９的突变率为３３．７％，１例ＳＳＣＰ和ＲＦＬＰ均提示密码子２４９存在突变者经ＤＮＡ序列分析显示密码子２４９的第三个碱基发生了ＡＧＧ／ＡｒｇＡＧＴ／Ｓｅｒ突变。以上结果提示，ＨＣＣ中，ｐ５３基因的突变主要以点突变为主，主要发生在密码子２４９，其突变率、突变谱和突变方式与启东等ＨＣＣ高度流行区相似     

沙眼衣原体基因分型及其应用

本文分别以沙眼衣原体（Ｃｈｌａｍｙｄｉａｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ，Ｃｔ）隐蔽性质粒引物（Ｐｐ）及主要外膜蛋白基因（ｏｍｐ；）引物（Ｐｍ）．用ＰＣＲ扩增Ｃｔ特异性ＤＮＡ，并用单链构象多态性（Ｓｉｎｇｌｅ－ｓｔｒａｎｄｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎｐｏｉｙｍｏｒｐｈ－ｉｓｍ，ＳＳＣＰ）作基因分型。４２６份标本中，９２例质粒ＰＣＲ阳性，用质粒ＰＣＲ阳性标本作ｏｍｐ：ＰＣＲ，６６例为阳性。其中５２例标本经ＳＳＣＰ分析显示７种不同的电泳图谱，１８例与标准株ＴＥ５５电泳图谱相同。其中两份标本分别取羊水及新生儿睑结膜，其ＳＳＣＰ图谱相同，表明两株Ｃｔ核酸序列完全相同。在分子水平上证实了Ｃｔ的垂直传播。临床标本可先采用敏感的质粒ＰＣＲ作初筛。阳性者再作ｏｍｐ１ＰＣＲ进行基因分型。应用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ对Ｃｔ作基因分型，在分子流行病学研究中有重要意义。     

人胃癌组织p53基因异常的筛选及序列测定

人胃癌组织ｐ５３基因异常的筛选及序列测定张青云，吕有勇，李铮，李文梅，崔建涛，邓国仁本项研究应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）和ＤＮＡ单链构象多态性（ＳＳＣＰ）分析，对中国人胃癌手术标本ＤＮＡ的ｐ５３基因异常进行筛选及序列测定，现将结果报道如下。一、材料和方...     

胃癌中MTS1基因外显子2突变及缺失的研究

ＭＴＳ１是Ｋａｍｂ在１９９４年发现的一种新的抑癌基因。在很多类型肿瘤中经常出现ＭＴＳ１基因的纯合性缺失或突变。本文利用ＰＣＲ方法研究了ＭＴＳ１基因第２外显子在胃癌中的纯合性缺失情况，２４例标本中发现２例缺失。用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ并结合ＰＣＲ产物直接测序技术分析了２４例原发性胃癌标本中ＭＴＳ１基因第２外显子突变情况，只发现１例突变，此结果提示胃癌中ＭＴＳ１基因突变率较低。     

锰超氧化物歧化酶基因TaqI多态性与精神分裂症有关联吗？

目的 探讨印度人群锰超氧化物歧化酶（ＭｎＳＯＤ／ＳＯＤ２）基因ＴａｑＩ多态性与精神分裂症的相互关系。方法 应用聚合酶链式反应（ＰＣＲ）和限制性片段长度多态性（ＲＦＬＰ）。方法 在６８例精神分裂症患者和６２例健康人群中观察了ＳＯＤ２基因多态性的分布。     

人肝细胞癌中PTEN基因的DNA杂交及突变分析

目的　研究人肝细胞癌中ＰＴＥＮ基因缺失及第５、第８外显子突变。方法　应用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交检测人肝细胞癌中ＰＴＥＮ基因限制性片段长度多态性和纯合性缺失、半合性缺失、片段缺失。应用聚合酶链单链构象多态性（ＰＣＲＳＳＣＰ）检查ＰＴＥＮ基因的第５、第８外显子的突变。结果　Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交结果显示,所有３４例肝细胞癌中ＰＴＥＮ基因未见限制性片段长度多态性或纯合性缺失、半合性缺失、片段缺失。ＰＣＲＳＳＣＰ检测发现,２例肝细胞癌第５外显子ＰＣＲ产物均显示１条额外电泳迁移带,突变率为５．９％（２／３４）。另２例肝细胞癌第８外显子ＰＣＲ产物呈现额外电泳迁移带,突变率为５．９％（２／３４）,合计突变率为１１．８％（４／３４）。结论　所检３４例人肝细胞癌中ＰＴＥＮ基因未见纯合性缺失、半合性缺失、片段缺失,但存在突变。     

25例原发性肝细胞性肝癌中P16基因失活的研究

目的 调查Ｐ１６基因是否与原发性肝细胞性肝癌（ＰＨＣＣ）的发生有关。方法 采用多重ＰＣＲ分析法、单链构象多态性（Ｓｉｎｇｌｅ ｓｔｒａｎｄ ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ,ＳＳＣＰ）分析法及以ＰＣＲ为基础的甲基化分析法对２５例原发性细胞性肝癌（ＰＨＣＣ）标本及其相应的非肿瘤肝细胞标本中Ｐ１６基因的缺失、点突变及甲基化情况进行检测。用免疫组织化学法对３５例（包括前述已作基因检测的     

胃癌组织DPC4基因观察

ＤＰＣ4基因已确定为 1892 1 1上的一个抑癌基因 ,它的失活在胰腺癌的发生、发展中可能起重要作用。胃癌也频繁发生 1892 1 1的缺失 ,为探讨胃癌中ＤＰＣ4基因失活情况 ,本文通过聚合酶链反应 (ＰＣＲ)、单链构象多态性分析 (ＳＳ ＣＰ) ,分别对 60例胃癌组织标本及其癌旁组织标本进行研究。1　资料和方法1.1　标本来源　潍坊市人民医院病理证实的原发性胃癌60例 ,内镜下取癌组织及其癌旁组织标本 ,所有组织标本在液氮中快速冷冻 ,并保存于 - 80℃。1.2　ＤＮＡ的提取　按ＳａｍｂｒｏｏｋＪ[1] 介绍的方法提取大分子ＤＮＡ。ＯＤ2 60 /ＯＤ…     

食管癌组织中bcl-2、c-myc、iNOS表达及其意义

目的:研究哈萨克族和汉族食管癌组织中bcl-2、c-myc、iNOS表达及其意义。方法:应用免疫组化SP法检测74例食管鳞癌和10例癌旁切端正常食管组织中蛋白的表达及鳞癌细胞的凋亡。结果:(1)bcl-2、c-myc、iNOS蛋白在74例食管鳞癌中的检出率分别为21.62%(16/74)、41.9%(31/74)、56.8%(42/74)。而在切端正常食管组织中bcl-2、c-myc、iNOS阳性检出情况分别为0/10、2/10、1/10。(2)不同民族食管鳞癌组织中的bcl-2、c-myc、iNOS表达未见显著性差异(P>0.05)。(3)bcl-2表达在不同分化程度的食管鳞癌组织中的表达无显著性差异(P>0.05);c-myc、iNOS在不同分化程度的食管鳞癌组织中的表达存在显著性差异,(P<0.05)。(4)bcl-2、c-myc、iNOS在不同年龄组的病例以及淋巴结转移和未转移的病例间的表达未见显著性差异(P>0.05)。结论:(1)食管鳞癌组织中bcl-2、c-myc、iNOS表达在哈萨克族和汉族之间无差异。(2)bcl-2、c-myc、iNOS的表达与食管鳞癌的分化有关。(3)提示bcl-2、c-myc、iNOS的表达有可能用于判定食管癌的恶性程度以及推断临床预后。     

nm23、p53基因突变与膀胱癌生物学特性的关系

检测膀胱癌组织中nm23和p53基因外显子突变情况,寻找有助于准确预测局部肿瘤进展、分型、预后情况的临床参照指标。 方法应用PCR－SSCP检测28例膀胱癌术后存档蜡块组织中nm23及p53基因外显子突变情况,并与膀胱癌的病理及临床指标进行相关性研究。结果nm23及p53基因突变率分别为14.3％及17.99％。nm23及p53基因突变均发生在低分化组及有淋巴结转移病例。nm23和／或p53基因突变与UICC临床分期和淋巴结转移均呈正相关(P     

肾癌差异表达基因克隆的研究

目的 克隆并鉴定肾癌与正常肾之间差异表达的基因。方法 应用抑制性消减杂交技术构建人肾癌组织与正常肾组织差异表达的cDNA消减文库,并从中克隆鉴定出肾癌差异表达的基因。结果 构建成功了高消减效率的人肾癌cDNA消减文库,对其中5个克隆插入的cDNA片段进行测序后经Genbank检索表明,5个片段均为未知新序列,其中GYIZ-RCC18为3个拷贝,提示以上5个cDNA征段可能来自3个新基因。Northern杂交分析显示,GYIZ-RCC18在肾癌组织中有明显表达,而在正常肾组织中无表达,这证明GYIZ-RCC18是肾癌相关的新基因。结论 人肾癌cDNA消减文库的建立为进一步筛选,克隆肾癌特异性表达的新基因奠定了基础。     

nm23/NDPK基因、整合蛋白、Ⅳ型胶原酶及尿激酶的表达与鼠肺癌转移的关系

观察肺癌ｎｍ２３／ＮＤＰＫ、整合蛋白、Ⅳ型胶原酶、尿激酶（ｕＰＡ）的表达与肺癌转移的相关性。方法以ＡＢＣ免疫组织化学染色，对不同转移力（由低到高依次为ＰＬＡ－８０１Ｃ、Ａｎｉｐ９７３、ＰＬＡ－８０１Ｄ及ＰＬＡ－８０１ＤＬ）４株人肺癌裸鼠移植瘤及８７例人肺癌临床标本作上述４种分子表达的观察，并在裸鼠体内观察整合蛋白β１抗体及其配体ＲＧＤ多肽对移植瘤生长及转移的影响。结果（１）人肺癌移植瘤与临床标本均呈ｎｍ２３／ＮＤＰＫ高表达，且与淋巴结转移无显著相关。（２）４株移植瘤总体上呈β１亚族整合蛋白低表达，且与淋巴结转移无显著相关。β１抗体及ＲＧＤ多肽对ＰＬＡ－８０１ＤＬ移植瘤的转移无明显影响。（３）人肺癌移植瘤及临床标本中Ⅳ型胶原酶的表达与其转移力呈显著正相关。（４）Ａ－ｎｉｐ９７３及ＰＬＡ－８０１ＤｕＰＡ阳性，而ＰＬＡ－８０１ＤＬ及ＰＬＡ－８０１Ｃ则ｕＰＡ阴性。结论肺癌中Ⅳ型胶原酶的表达与其转移力呈显著正相关；ｎｍ２３呈高表达，整合蛋白呈低表达，ｕＰＡ在不同瘤株的表达不一，但均与其转移无显著相关。     

pshRNA-DNMT1介导的胃癌AGS细胞凋亡的体内外研究

目的构建沉默DNMT1基因的重组体pshRNA-DNMT1,研究其体内外对胃癌AGS细胞增殖凋亡的影响.方法设计短发夹RNA（shRNA）的寡核苷酸片断,克隆到载体pTZU6＋1中,构建重组体pshRNA-DNMT1,转染胃癌细胞株AGS,用Western 印迹检测DNMT1蛋白质水平变化,用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法评估mRNA水平,四甲基偶氮唑盐比色法（MTT法）动态监测活细胞数,电镜和原位末端标记技术（TUNEL）观察其体外的促凋亡作用.构建裸鼠胃癌模型,经pshRNA-DNMT1处理后观察瘤体大小,绘制生长曲线;用苏木素伊红（HE）染色法、电镜和TUNEL检测细胞凋亡,用增殖细胞核抗原（PCNA）法评价细胞的增殖能力.结果成功构建重组质粒pshRNA-DNMT1后,进行序列分析得到确证.pshRNA-DNMT1转染AGS细胞后24 h出现DNMT1蛋白质表达量减少,抑制率为28.24%,48 h为68.54%,72 h为81.47%,重组质粒pshRNA-DNMT1对胃癌AGS细胞中DNMT1基因的转录有着明显抑制作用,转染后24 h抑制率为21.63%,48 h为52.97%,72 h为72.06%.转染后24、48和72 h细胞数存活率为PBS组的79.49%、51.63%和39.16%.pshRNA-DNMT1能抑制肿瘤生长,呈一定的时间和剂量依赖性.结论重组质粒pshRNA-DNMT1能特异有效地抑制胃癌细胞株AGS内DNMT1基因的表达.在胃癌细胞株AGS的体内外实验中均能抑制细胞增殖,促进细胞凋亡.     

Cyr61、CTGF、NOV、WISP-1基因在肾癌中的表达

目的〓〖HTK〗探讨肾癌组织CCN蛋白中Cyr61、CTGF、NOV和WISP-1 基因的蛋白表达水平及意义。〖HTW〗方法〓〖HTK〗采用Western blot半定量方法检测31例肾癌组织和18例癌旁正常肾组织中Cyr61、CTGF、NOV、WISP-1基因的蛋白表达。 〖HTW〗结果〓〖HTK〗Cyr61、CTGF、NOV、WISP-1蛋白在肾癌组织中的表达水平均低于癌旁正常组织(P<0.05)，其中乳头状肾癌的NOV和WISP-1 表达水平高于透明细胞癌(P<0.05)，G1级肿瘤NOV表达水平高于G2，3肿瘤(P<0.05)。 〖HTW〗结论〓〖HTK〗Cyr61、CTGF、NOV和WISP-1在肾癌中低表达， CCN基因在肾癌的发生和发展中可能起抑制作用。     

肝细胞癌变过程中P53的突变和甲胎蛋白的表达

对４例正常人肝、５例肝硬变、５例肝腺瘤样增生（ＡＨ）、１６例肝细胞癌（ＨＣＣ）（Ｅｄｍｏｎｄｓｏｎ分级Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级各４、６、６例）组织中突变型Ｐ５３蛋白（ｍＰ５３）和甲胎蛋白（ＡＦＰ）进行了免疫组化检测。结果发现：正常人肝ｍＰ５３、ＡＦＰ均阴性。５例肝硬变组织中，４例同时显示ｍＰ５３和ＡＦＰ阳性，１例显示二者皆阴性。５例ＡＨ中，４例为ｍＰ５３、ＡＦＰ阳性，１例为二者阴性。在１６例ＨＣＣ中，４例Ⅰ级     

肿瘤特异性抗原MAGE、BAGE、GAGE在子宫内膜癌组织中表达的研究

研究MAGE、BAGE、GAGE基因在子宫内膜癌组织及正常子宫内膜组织中的表达，并探讨其肿瘤特异性抗原作为子宫内膜癌免疫治疗特异性靶位的可能性。方法：采用逆转录－聚合酶联反应（RT PCR）技术，检测35例子宫内膜癌组织和15例正常子宫内膜组织中MAGE 1、MAGE 3、BAGE和GAGE1 2基因的表达情况，以β actin作内参照。结果：35例子宫内膜癌组织中，MAGE 1、MAGE 3、BAGE、GAGE1 2表达阳性率分别为46％（16/35）、49％（17/35）、20％（7/35）和26％（9/35），有77％的标本至少表达其中一种基因。15例正常子宫内膜组织中MAGE 1、MAGE 3、BAGE、GAGE1 2基因表达均为阴性。结论：肿瘤特异性抗原MAGE、BAGE、GAGE基因在子宫内膜癌中有较高的表达，MAGE 1、MAGE 3、BAGE基因的表达与子宫内膜癌的病理分期及分级无相关性，GAGE1 2与子宫内膜癌的分期无关，与分级有关。其可作为子宫内膜癌患者免疫治疗的特异性靶点。     

卵巢癌原癌基因c－erbB－2扩增与预后的关系

提取卵巢癌组织ＤＮＡ，限制性内切酶ＥｃｏＲＩ酶解后，经过凝胶电泳，Ｓｏｕｔｈｅｒｎ转移至硝酸纤维膜，与￣（３２）Ｐ标记的ｃ－ｅｒｂＢ－２探针进行分子杂交，放射自显影。结果显示，２６例上皮性卵巢癌中，８例（３０．８％）出现了该基因的扩增。这８例均为晚期（ＩＩＩ～ＩＶ期）肿瘤病人，其中５例在术后２～４个月内死亡，说明该基因的扩增在晚期卵巢癌中出现，与病人预后不良有关，该基因的激活在卵巢癌的发生过程中亦起一定的作用。     

应用mRNA差异显示技术筛选卵巢癌耐药相关基因

目的 筛选卵巢癌泰素耐药相关基因。方法 采用间歇诱导法建立了卵巢癌泰素耐药细胞株Ｓｋｏｖ３／Ｔａｘｌ－２５;采用ｍＲＮＡ ＤＤ比较Ｓｋｏｖ３／Ｔａｘｏｌ－２５对泰素耐药增加４４倍,同时对顺铂也产生了耐药。比较Ｓｋｏｖ３和Ｓｋｏｖ３／Ｔａｘｏｌ－２５的ｍＲＮＡ,获得２２个差异条带。对其中５个差异条带进行了ＤＮＡ序列测定,有３个与已知的基因高度同源,分别为ｔＰＡ、Ｋｉａａ０３７２和ＬＤＬＣ。２个为未知