反义C—myc寡核苷酸对人肝癌细胞SMMC—7721的生长抑制

针对Ｃ－ｍｙｃｍＲＮＡ第二外显子起始妈ＡＵＧ及下游４个密码子设计合成了反义、正义及锚配寡核苷酸（ＯＤＮｓ）、并对合成的ＯＤＮｓ进行 硫代磷酸化修饰。在人肝癌细胞ＳＭＭＣ－７７２１培养体系中，对反义寡核苷酸（ＡＳＯＤＮ）抑制细胞增殖的作用进行了研究。发现（１）与正义和错配ＯＤＮｓ相比较，反义Ｃ－ｍｙｃＯＤＮ有明显抑制人肝癌细胞ＳＭＭＣ－７７２１生长的作用；（２）该生长抑制作用随ＡＳＯＤＮ剂量增加而增     

大鼠肝Ito细胞的体外培养及肝素对其抑制作用的观察

用胶原酶，ＰｒｏｎａｓｅＥ灌流消化肝脏及Ｎｙｃｏｄｅｎｚ等密度离心成功地分离正常大鼠肝Ｉｔｏ细胞（ＮＩｔｏ）及肝纤维化大鼠Ｉｔｏ细胞（ＣＩｔｏ），并培养传代。刚分离的细胞在紫外线照射下可见很快消退的自发荧光；胞质内有大量脂滴，随培养时间延长，胞质内脂滴减少，微丝增加，内质网扩张、增多；结蛋白（Ｄｍ）免疫组化染色阳性。上述结果证实，分离细胞为Ｉｔｏ细胞。经观察，ＣＩｔｏ比ＮＩｔｏ生长快，体积大，表达α－平滑肌肌动蛋白（α－ＳＭＡ），Ⅰ及Ⅳ型前胶原能力强。肝素在体外不但抑制Ｉｔｏ细胞的生长，而且抑制其表达α－ＳＭＡ，Ⅰ及Ⅳ型前胶原。     

间充质干细胞在组织工程中的研究进展

种子细胞一直是组织工程研究的核心问题之一 ,理想的种子细胞应该具有容易获得、容易体外培养增殖、长期传代不改变生物学特征、抗原性小、组织修复能力强等特性。近年来 ,发现骨髓间充质干细胞 (Ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｓｔｅｍｃｅｌｌｓ ,ＭＳＣｓ)基本具备上述条件 ,成为骨、软骨等组织工程中非常有应用前景的种子细胞 ,现将其最新研究进展综述如下。1　ＭＳＣｓ的生物学特性　　上个世纪 70年代中期发现在骨髓标本中有小部分贴壁生长的细胞在培养过程中能够分化形成类似骨或软骨的集落 ,后来证明这种细胞可以分化为成骨细胞、软骨细胞…     

基质金属蛋白酶与肾脏疾病

基质金属蛋白酶 (ｍａｔｒｉｘｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅｓ,ＭＭＰｓ)是一组重要的锌依赖蛋白酶。它主要参与细胞外基质的降解和转运。细胞外基质 (ｘｘｔｒａｃｅｌｌｕａｒｍａｔｒｉｘ ,ＥＣＭ)主要成分包括胶原、糖蛋白、葡萄糖、氨基糖苷等四大类。ＥＣＭ不仅是细胞的支架组织 ,而且影响细胞的生长、粘附、迁移、增殖、分化和修复[1 ] 。大量实验证实 ,ＭＭＰｓ在ＥＣＭ降解和转运 (ｔｕｒｎｏｖｅｒ)及组织重塑 (ｒｅｍｏｄｅｌ)过程中发挥着重要作用。现就ＭＭＰｓ的特点及近几年有关于ＭＭＰｓ在肾脏疾病发生、发展中的作…     

多发性骨髓瘤患者外周血肿瘤前体细胞克隆的研究

目的探索多发性骨髓瘤（ＭＭ）患者循环血液中肿瘤前体细胞克隆及其生物学特征。方法采用细胞培养体系对ＭＭ患者外周血单个核细胞（ＰＢＭＮＣｓ）中可能存在的肿瘤前体细胞克隆进行扩增与促分化,同时用免疫细胞化学染色,形态学观察及扫描电镜技术对其生物学特性进行初步研究。结果１４例无浆细胞污染的ＭＭ患者新鲜ＰＢＭＮＣｓ样本以小淋巴样细胞为主。培养第３天时,可见较多增殖十分活跃成簇生长的免疫母细胞样Ｂ淋巴细胞,占有核细胞的３８％±１４％,胞浆Ｉｇ阴性,浆细胞相关抗原ＣＤ３８阳性,未见形态学典型的浆细胞。培养第６天时,培养物中则以典型的浆细胞团生长为主,占有核细胞的５８％±８％。这些浆细胞高表达ＣＤ３８抗原以及与原患者骨髓瘤细胞一致单克隆性胞浆Ｉｇ。结论ＭＭ患者ＰＢＭＮＣｓ中含有高增殖潜能的肿瘤前体细胞克隆,在合适的生长条件下能迅速增殖和分化为骨髓瘤细胞     

兔骨髓间质干细胞的体外分离、培养及活性鉴定

目的：建立一种体外分离培养自体兔骨髓间质干细胞（ Ｍ ａｒｒｏｗ Ｓｔｒｏｍ ａｌ Ｃｅｌｌｓ， Ｍ Ｓ Ｃｓ）的方法。方法：抽取兔骨髓液３～５ ｍ ｌ，经密度梯度离心得骨髓单个核细胞，以１６×１０４／ｃｍ ２ 细胞浓度培养，１２～１４ ｄ 后得到贴壁生长的单层细胞，随后进入传代培养，每传一代约 ５～７ ｄ。结果：原代培养的、以及传代后培养的细胞均为贴壁生长的、均匀一致的纺锤形细胞。两种细胞经体外特殊环境诱导后均可转化为骨髓网状间质细胞和成骨细胞。结论：该细胞经体外长期培养后仍具有多潜能转化活性，确系骨髓间质干细胞。为该细胞的广泛应用奠定基础。     

BALB／3T3小鼠纤维母细胞的条件液促进培养肥大细胞生长的初步研究

作者对正常和ＳＶ４０感染的小鼠胚纤维母细胞（ＢＡＬＢ／３Ｔ３，ＳＶ３Ｔ３）的条件液（ＣＭ）能促进培养细胞的生长作用进行了研究。ＣＭ的生长活性用细胞增殖试验（ＭＴＴ法）检测对来自小鼠骨髓培养的肥大细胞（ＣＭＣ）的影响，发现来自纤维母细胞ＣＭ支持肥大细胞的增殖，且经病毒感染的ＣＭ可增进生长活性。     

原发性肝癌患者外周血IL—2系统分析

作者对２６例原发性肝癌患者（ＰＨＣ）及３０名正常人外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）培养上清液ＩＬ－２水平、ＩＬ－２Ｒ及ｓＩＬ－２Ｒ表达和血清ｓＩＬ－２Ｒ水平进行检测。发现，患者ＰＢＭＣ的ＩＬ－２水平及ＩＬ－２Ｒ表达明显下降，而血清的ｓＩＬ－２Ｒ水平呈显著升高，但患者ＰＢＭＣ培养上清ｓＩＬ－２Ｒ与正常人相比，差异不显著；而患者与正常人ＰＢＭＣ的ＩＬ－２Ｒ与ｓＩＬ－２Ｒ呈正相关，血清ｓＩＬ－２Ｒ与上清ＩＬ     

反应停对慢性肝炎外周血单个核细腻肿瘤坏死因子α的抑制作用

目的 观察反应停（Ｔｈａｌ）能否抑制慢性肝炎外周血单个核细胞（ＰＢＭＣｓ）肿瘤坏死因子α（ＴＮＦ－α）的产生，明确Ｔｈａｌ对慢性肝炎的治疗作用。方法 用淋巴细胞分离液从１３例慢性肝炎患的外周血中分离ＰＢＭＣｓ，进行体外培养，用酶联免疫吸附法、免疫组化法和半定量斑点杂交法，观察Ｔｈａｌ对ＰＢＭＣｓ ＴＮＦ－α和其它细胞因子的产生和基因表达的影响。结果 发现Ｔｈａｌ可抑ＰＢＭＣｓ ＴＮＦ－α和其它细     

丹参对克隆化成骨细胞株MC3T3－E1细胞影响的实验研究

目的：了解丹参对体外培养的成骨细胞生长、分化与代谢的影响．方法：选择克隆化成骨细胞株ＭＣ３Ｔ３－Ｅ１细胞，采用细胞培养方法，观察细胞内ＤＮＡ合成与碱性磷酸酶（ＡＬＰａｓｅ）活性．结果：丹参明显增强ＭＣ３Ｔ３－Ｅ１细胞内ＡＬＰａｓｅ活性，丹参浓度为５．０ｇ／Ｌ时，对ＭＣ３Ｔ３－Ｅｌ细胞内ＡＬＰａｓｅ活性影响最大，比对照组强约１３５％。丹参这种促进作用只限于分化晚期的ＭＣ３Ｔ３－Ｅ１细胞，而对分化早期细胞内的ＡＬＰａｓｅ活性起抑制作用，其次，这种作用还与药物作用时间有关．但是，丹参对各生长分化期的ＭＣ３Ｔ３－Ｅ１细胞内ＤＮＡ合成均无影响。结论：丹参可明显增强体外培养分化晚期ＭＣ３Ｔ３－Ｅ１细胞内的ＡＬＰａｓｅ活性，该作用不是通过促进细胞增殖，而是改善细胞功能而实现的，并且受丹参药物浓度与作用时间的影响，说明丹参可能在正畸牙齿移动中促进新生牙槽骨的形成方面发挥重要作用。     

THE LOCALIZATION OF ADRENOMEDULLIN IN RAT KIDNEY TISSUE AND ITS INHIBITORY EFFECT ON THE GROWTH OF CULTURED RAT MESANGIAL CELLSA

Objective:To observe the localization of adrenomedullin(AM) in rat kidney tissue and its inhibitory effect on the growth of cultured rat mesangial cells (MsC).Methods:A monoclonal antibody against AM developed by our laboratory was used to detect the localization of AM protein in rat kidney tissue by avidin-biotin complex immunohistochemistry.The expressions of AM and its receptor CRLR mRNA on cultured glomerular epithelial cells (GEC)and MsC were investigated by Northern blot assay,and the possible effect of AM secreted by GEC on MsC proliferation was observed using [^3H] thymidine incorporation as an index.Results:A specific monoclonal antibody against AM was successfull developed.AM was immunohistochemically localized mainly in glomeruli (GEC and endothelial cells),some cortical proximal tubules,medullary collecting duct cells,interstitial cells,vascular smooth muscle cells and endothelial cells.Northern blot assay showed the AM mRNA was expressed only on cultured GEC,but not on MsC,however,AM receptor CRLR mRNA was only expressed on MsC.GEC conditioned medium containing AM can inhibit MsC growth and AM receptor blocker CGRP8-37 may partially decreased this inhibitory effect.Conclusion:AM produced by GEC inhibits the proliferation of MsC,which suggests that AM as an important regulator is involved in glomerular normal physiological functions and pathologic processes.     

肾综合征出血热病毒感染人肾小球系膜细胞的电镜观察

进一步探讨肾综合征出血热（ＨＦＲＳ）病毒对肾小球系膜细胞（ＭｓＣ）的作用及其在ＨＦＲＳ肾脏损害发病机理中的作用。用透射电镜观察ＨＦＲＳ病毒ＳＲ－１１株感染的人ＭｓＣ。发现感染细胞多有不同程度的病理改变，胞浆内可见病毒样颗粒及病毒包涵体。ＨＦＲＳ病毒对人ＭｓＣ的直接损害作用可能与ＨＦＲＳ的肾脏损害有关。     

肾小球上皮细胞分泌肾上腺髓质素抑制系膜细胞增殖

目的 探讨肾上腺髓质素（AM）及其受体CRLR在培养的大鼠肾小球上皮细胞（GEC）和系膜细胞（MsC)的表达,以及AM对MsC生长的影响。方法 采用RT－PCR法分别制备AM及CRLR探针,Northern blot法检测其在GEC和MsC的表达,[^3H]胸腺嘧啶掺入法测定MsC增殖情况。结果 AM仅表达于GEC,不表达于MsC,而其受体CRLR的表达则相反。含有A,的GEC培养上清可抑制MsC生长,而CRLR阻断剂CGRP8－37可部分消除此抑制作用。结论 GEC可通过合成和分泌AM抑制MsC增殖,提示AM作为一种重要的旁分泌因子,以保持肾小球微环境稳定,并参与肾小球的炎症过程。     

转染Smad7基因的大鼠肾系膜细胞uPA及PAI-1表达的改变

目的通过对大鼠肾小球系膜细胞(mesangial cell，MsC)转染Smad7基因，观察转染阳性细胞克隆uPA及PAI-1表达的改变，以进一步阐明Smad7阻断组织纤维化过程的作用机制。方法经脂质体介导将含有Smad7重组表达质粒转染大鼠MsC，用G418筛选及PT-PCR、Western blot法鉴定；又分别采用RT-PCR与Western blot法，检测转染阳性细胞克隆uPA及PAI-1表达改变。结果成功建立高表达Smad7的阳性MsC克隆(S-22、S-26)，并证实其uPA mRNA及蛋白表达明显增加，而PAI-1 mRNA及其蛋白的表达显著下降。结论Smad7可能通过增强组织内uPA酶的生成和减少PAI-1的合成而减轻组织纤维化进展。     

Study on the signalling pathway of inhibitory effect of adreno-medullin on the growth of cultured glomerular mesangial cells

A6dr0e0n0o,medu ollriingi n(aAllDyM),is aola stemdall p efrpotimde of h RumMaMnpheochromocytomas in1993,is potently hypotensive andnatriuretic.1,2Some recent studies established thatADM exerted its action by interaction with its receptorproteins complex which consists of a calcitonin receptor-like receptor(CRLR),receptor activity modifyingproteins(RAMPs)and a receptor component protein.3We have also demonstrated that CRLR and RAMPs wereexpressed on cultured rat glomerular mesangial c…     

转染Smad 7基因的大鼠肾小球系膜细胞对Ⅰ、Ⅲ型胶原表达的改变

 [摘要] 目的 探讨Smad 7基因对大鼠肾小球系膜细胞（MsC）Ⅰ、Ⅲ型胶原（ColⅠ、Col Ⅲ）表达的影响,为试图运用Smad 7对肾纤维化进行基因治疗提供实验依据。方法 经脂质体介导将含有Smad 7重组表达质粒转染大鼠MsC，用G418筛选及Northern blot、Western blot法鉴定；又分别采用RT-PCR和Western blot法，检测转染阳性MsC克隆ColⅠ、Col Ⅲ表达改变。结果 成功建立稳定高表达Smad 7的阳性MsC克隆（S-22与S-26），并证实两阳性MsC克隆ColⅠ及Col Ⅲ mRNA及蛋白的表达均被明显抑制, 其中S-22克隆ColⅠ及Col Ⅲ mRNA表达分别降低47 %和56 ％，其蛋白表达分别降低65 %和54 ％。结论 Smad 7可能通过抑制组织内ColⅠ及Col Ⅲ的生成而起到减轻肾纤维化进展的作用。     

延肾口服液对人肾小球系膜细胞增殖及分泌FN、LN、Ⅳ-C的影响

【目的】观察中药复方制剂延肾口服液（YSH）对培养的人肾小球系膜细胞（huMsC）增殖及分泌细胞外基质（ECM）的影响,探讨其防治肾小球硬化的作用机制。【方法】采用四甲基偶氮唑盐法（MTT）比色法和双抗夹心ELISA法,检测灌服延肾大鼠不同浓度药物血清对培养的人肾小球系膜细胞的增殖及分泌纤维连接蛋白（FN）、层连蛋白（LN）和Ⅳ型胶原（Ⅳ-c）的影响。【结果】5％-20％YSH大鼠血清对原代培养的人肾小球系膜细胞增殖及产生FN、LN、Ⅳ-c有明显的抑制作用（P〈O．05或P〈0．01）,其抑制程度与药物浓度有-定的量效关系。【结论】延肾制剂对培养的人肾小球系膜细胞增殖及产生FN、LN、Ⅳ-C的抑制作用,是其防治肾小球硬化发生发展的重要作用机制之-。     

高糖浓度对人肾小球系膜细胞的作用

目的 模拟相血糖控制不佳出现的糖浓度波动,研究波动性细胞外高糖浓度（ＦＥＨＧ）对肾小球系膜细胞（ＭｓＣ）增殖及其纤维连接蛋白合成的影响。方法 利用四甲基偶氮唑蓝（ＭＴＴ）比色法和竞争抑制ＥＬＩＳＡ法动态观察不同葡萄糖浓度及波动性高糖浓度对ＭｓＣ增殖和ＦＮ合成的作用。结果 高糖浓度抑制ＭｓＣ增殖,此抑制作用和糖浓度成正相关,同时刺激ＭｓＣ的ＦＮ合成增加;     

醛糖还原酶(AR)基因对大鼠肾系膜细胞的转染及AR抑制剂对其增殖的影响

目的观察醛糖还原酶(AR)基因转染及AR抑制剂(ARI)对体外培养大鼠肾系膜细胞(MsC)增殖的影响。方法应用Westernblot检测转基因MsC及PDGF作用MsC后AR的表达。四唑蓝比色法(MTT法)检测细胞增殖,流式细胞术分析细胞周期,对比大鼠正常MsC和转基因MsC的生长情况,并观察ARI———Sorbinil和Zopolrestat对血小板源性生长因子(PDGF)和小牛血清(NBS)促细胞增殖作用的影响。结果①Westernblot鉴定转基因MsCAR表达较正常MsC明显增高;②转染组较正常组生长速度快;③PDGF作用MsC后可上调AR的表达;④PDGF和10%NBS均可显著刺激两组细胞的增殖,ARI可部分抑制PDGF对正常组和转染组的促增殖作用,对10%NBS,ARI可部分抑制其对转染组的促增殖作用,而对正常组无显著影响,抑制作用呈剂量依赖性。结论AR可能参与了MsC在病理状况下的过度增殖过程。     

醛糖还原酶抑制剂影响PDGF-BB促系膜细胞增殖作用的机制研究

目的探讨醛糖还原酶抑制剂（ARI）影响血小板源性生长因子-BB（PDGF-BB）促体外培养大鼠系膜细胞（MsC）增殖作用的机制。方法用四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法检测细胞增殖,流式细胞术分析细胞周期,对比PDGF-BB刺激MsC生长速度与MAPK3条信号通路（ERK、JNK及p38）抑制剂及PI3K信号通路抑制剂对PDGF促MsC增殖作用的影响。用半定量RT-PCR检测醛糖还原酶抑制剂（ARI）对MsC合成内源性PDGF-B链的影响。蛋白印迹法观察ARI对PDGF引起的信号通路磷酸化的影响。结果（1）ERK抑制剂U0126、JNK抑制剂SP600125及PI3K抑制剂LY294002能明显抑制PDGF对MsC的促增殖作用（P〈0.05）,而p38抑制剂SB203580不能抑制PDGF的促MsC增殖作用;（2）ARI在转录水平对MsC合成内源性PDGF-B链没有明显影响。（3）PDGF刺激MsC后引起ERK、JNK及PI3K/Akt信号通路的磷酸化,而ARI仅能抑制JNK及PI3K/Akt两条信号通路的磷酸化（P〈0.05）,对ERK信号通路的磷酸化没有明显影响。结论ARI部分抑制PDGF促MsC增殖作用可能与其影响JNK和PI3K/Akt信号通路活化有关。