Alport综合征iPSCs差异性表达新小核糖核苷酸的分析

目的 构建Alport综合征(AS)与正常对照者(NC)诱导多能干细胞(iPSCs)新核糖核苷酸(novel microRNA)差异性表达谱,分析其靶基因功能。方法 采用前期工作成功从尿肾状杆细胞诱导成的iPSCs,运用高通量测序平台获得AS与NC的差异性表达谱,使用靶基因预测软件TargetScan进行靶基因预测,靶基因与参考基因比较后,在候选靶基因找到显著富集的GO条目及KEGG通路。结果 在AS与NC中发现49个有意义的差异性表达novel microRNAs,其中33个表达上调,16个表达下调。在GO靶基因富集分析中,靶基因主要富集于生物调节、生物新陈代谢、细胞组成、细胞信号传导、酶催化反应、分子转运等过程。在KEGG通路分析中,靶基因主要参与代谢通路、嘌呤代谢、癌症转录调节等过程。结论 来源于AS与NC的iPSCs存在较大的差异性表达novel microRNA,其靶基因在分子功能、细胞组成、生物过程起着重要作用。这些差异性表达的novel mciroRNAs与靶基因可能是AS发病机制的潜在位点。     

高通量测序筛查特发性膜性肾病患者外周血细胞microRNA的差异性表达

目的 :寻找特发性膜性肾病(idiopathic membranous nephropathy,IMN)患者外周血单个核细胞小核糖核苷酸(micro RNA)的差异性表达以及发生碱基突变的难易度。方法:运用高通量测序技术分别对IMN患者和健康对照者(NC)的micro RNA进行测序,构建IMN与NC组之间micro RNA差异性表达谱。并对两组的micro RNA进行碱基编辑分析,寻找发生了碱基突变的micro RNA,比较IMN与NC组micro RNA碱基突变的难易程度。结果:通过构建表达谱,找到了has-mi R-208b、has-mi R-195-3p、has-mi R-23b-5p、has-mi R-95、has-mi R-503、has-mi R-449a、has-mi R-486-3p与has-mi R-27 8个micro RNAs最具有差异性表达。2组共同表达的41个micro RNA中,IMN比NC更容易发生碱基编辑而引起碱基突变。结论:IMN患者与健康对照者的micro RNA存在着差异性表达,差异性表达的micro RNA特异性很高,可以作为深入研究IMN发病机制的靶点。IMN患者相比健康对照者更容易发生micro RNA碱基编辑引起碱基突变,这些发生碱基突变的micro RNA可能用于解释IMN的病因基础。     

基于诱导多潜能干细胞Alport综合征的蛋白质组学研究

目的筛选并鉴定Alport综合征(AS)患者与健康对照者(NC)差异性表达蛋白质,寻找AS的生物标记物。方法收集AS组与NC组的尿液,从尿液中分离尿肾脏管细胞,将尿肾脏管细胞诱导分化成多潜能干细胞(i PSCs)。运用i TRAQ技术找出两组之间差异性表达蛋白质。采用Western blot检测差异蛋白质。结果共鉴定出12 600条特有肽段序列,对应3 470种非冗余蛋白质。在两组样本中发现383种蛋白质具有差异性表达,其中差异2倍以上的蛋白质有35种,包括18种上调蛋白质和17种下调蛋白质。Western blot检测KRT14、TUBA1A、PAPSS1、UTF1、SF3B14、MTHFD2等6种差异蛋白质在各组中的表达结果与i TRAQ检测结果一致。结论筛选得到与AS发病相关的差异蛋白质,可以作为AS早期诊断和治疗的生物标记物。     

初发与复发急性B淋巴细胞白血病患儿单核细胞microRNA表达谱分析*

目的 筛选初发和复发急性B淋巴细胞白血病（B-ALL）患儿血液中单核细胞差异表达的microRNA。方法 分离初发和复发B-ALL患儿及正常儿童单核细胞，提取核酸行HiSeq测序。筛选差异表达的microRNA并预测与之相关的候选靶基因和信号通路。结果 初发组/复发组共检出差异表达的microRNA 20个，10个上调，10个下调。其中差异最显著的是has-miR-30a-3p，has-miR-30a-5p，has-miR-30c-2-3p，has-miR-139-5p，has-miR-99b-5p。富集到的候选靶基因功能主要集中在细胞成分和蛋白结合方面，即细胞质、细胞内组分、蛋白结合、细胞内、细胞质部分。结论 复发是儿童急性淋巴细胞白血病（ALL）治疗难题，从microRNA水平研究儿童ALL在初发和复发之间的差异。为ALL的病理机制研究提供数据基础，为诊断、治疗 和预后寻找新的靶点。     

原发性IgA肾病中微小RNA的差异表达研究

目的 借助微小RNA(microRNA,miRNA)芯片研究IgA肾病(IgA nephropathy,IgAN)中miRNA的差异表达. 方法 收集11例IgAN患者肾穿标本作为IgAN组,3例镜下病理检查止常的肾皮质作为对照组.使用Trizol试剂提取每组总RNA,分离miRNA,采用miRNA芯片筛选出差异表达显著的miRNA,荧光实时定量PCR(Real-time PCR)技术验证芯片结果的可靠性.结果 IgAN组中miRNA表达出现显著差异的有66个,其中表达显著上调35个,显著下调31个.挑选has-miR-637、has-miR-492进行Real-time PCR相埘定量检测,结果显示2个miRNA的表达趋势与芯片结果相符,证明了芯片结果的可靠性. 结论 IgAN是一种经典的多因素、多基因病,本实验通过芯片技术表明miRNA在IgAN中出现显著差异表达.     

缺氧诱导GLC-82、A549肺癌细胞的microRNAs差异表达谱分析

目的：对比缺氧环境下不同肺腺癌细胞株表达差异的microRNA,为进一步研究缺氧环境中肺癌细胞microRNA的作用机制提供参考。方法：建立缺氧模型,将培养于缺氧情况中及正常氧浓度下的GLC-82、A549细胞分别提取RNA,通过芯片检测及PCR验证,筛选差异表达的microRNA。利用TargetScanHuman 7.2数据库和cytoscape软件预测差异显著的microRNA分子调控的靶基因及可能参与的信号通路。结果：在缺氧条件下,A549细胞中3个microRNA表达上调,30个microRNA表达下调;而在GLC-82细胞中,2个microRNA表达上调,31个microRNA表达下调。两种细胞相比较,除miR-192-5p变化趋势相反外,其他microRNAs的表达变化趋势相同。通过KOBAS在线网站KEGG及GO预测分析,差异表达microRNA主要参与了肿瘤相关信号通路、胰岛素信号通路、Ras 信号通路以及氧代谢等生物学过程。结论：肺癌细胞株在缺氧环境下和正常氧状态下mircoRNA出现表达差异,并且来源于不同遗传背景的细胞株之间也存在差异。差异表达的microRNA靶基因参与了多种细胞代谢相关通路,具有氧代谢,氧应答相关功能。     

应用微阵列芯片分析结肠癌组织中miRNA差异性表达

目的 分析结肠癌与正常结肠黏膜的微小RNA(miRNA)表达谱差异.方法 收集结肠癌组织和癌旁正常结肠黏膜共12对,抽提、纯化RNA,加入荧光标记后与miRNA寡核甘酸基因芯片(Affymetrix公司)杂交,应用SAM软件进行数据分析,对有显著差异的miRNA进行实时荧光定量PCR验证,采用靶基因分析软件分析miRNA功能.结果 has-miR-182、has-miR-17、has-miR-106a、has-miR-93、has-miR-200c、has-miR-92a、has-let-7a、has-miR-20a等8个miRNA在肿瘤组织中显著上调[中位假基因验出率(FDR)＜5%],has-miR-195、has-miR-143、has-miR-145等3个miRNA显著下调(FDR＜5%).结论 结肠癌与正常结肠黏膜之间存在明显的miRNA差异表达,这些miRNA的差异性表达可能与结肠癌的发病、侵袭、转移相关.     

大鼠肝卵圆细胞向肝癌细胞分化过程中microRNA的变化

目的利用生物芯片技术分析大鼠肝卵圆细胞分化为肝癌细胞过程中微小RNA(microRNA,miRNA)的表达变化,筛选调控分化的microRNAs,探讨肝癌发生的起源机制。方法用化学致癌剂3’-Me-DAB诱发SD大鼠肝卵圆细胞增生,采用密度梯度离心法分离、纯化肝卵圆细胞,行体外培养使其恶性分化并进行鉴定。提取分化过程中的microRNA进行microRNA基因芯片杂交,获得卵原细胞恶性分化过程中microRNA表达谱。同时利用种植模型及大鼠Y染色体特异性PCR技术,验证卵圆细胞可恶性分化为肝癌细胞。结果①激光扫描共聚焦显微镜显示,肝卵圆细胞胞浆和胞膜表达干细胞标志Thy-1及C-kit;②通过基因微阵列分析,卵原细胞恶性分化过程中有22个miRNA的改变显著,其中19个表达上调,3个表达下调;③卵原细胞种植模型的大鼠肝癌组织具有SRY基因的电泳条带。结论特定microRNA可能对大鼠肝卵圆细胞分化为肝癌细胞过程起到关键作用。     

原发性肝癌术后早期复发密切相关microRNA的筛选及应用

【目的】 利用microRNA芯片技术分析比较两组不同复发倾向肝癌患者的miRNA表达谱,并在更大样品的基础上进行实验验证?【方法】收集10例原发性肝癌组织标本根据术后复发情况分2组:早期复发组与非早期复发组,运用microRNA芯片技术筛选出差异表达显著的microRNAs?结合文献报道,选择mir-144?mir-502-3p作为其他82例肝癌组织标本qReal-time PCR验证的检测指标?并利用生物信息学方法预测其靶基因?【结果】本研究共筛选获得7个差异表达的microRNAs?与非早期复发组相比,在早期复发组中有4个表达上调,3个表达下调?qReal-time PCR验证与microRNA芯片筛选的结果一致?生物信息学方法预测miR-144靶基因可能为Rb1,miR-502-3p靶基因可能为SET?【结论】 microRNA芯片筛选的mir-144?mir-451?mir-486-5p?mir-602?mir-551b?mir-96?mir-502-3p与原发性肝癌术后早期复发密切相关?     

肌肉特异性microRNAs在失神经肌肉萎缩中表达变化的研究

目的 探讨miR-1、miR-133和miR-206等3种肌肉特异性microRNAs在失神经支配所致骨骼肌萎缩中的表达变化情况.方法 采用坐骨神经离断术建立小鼠腓肠肌失神经支配模型,采用失神经前后腓肠肌湿质量、肌纤维横截面积百分比对模型进行评价,应用Northern blot方法检测失神经支配不同时间点肌肉特异性microRNAs的表达变化.结果 成功建立小鼠腓肠肌失神经萎缩模型,在该过程中,随着失神经支配时间的延长,骨骼肌特异性miR-206表达明显上调,miR-1、miR-133表达先快速下调后逐渐回升.结论 随着失神经支配时间的延长,骨骼肌特异性microRNAs表达发生明显变化,骨骼肌特异性microRNAs可能在失神经介导的骨骼肌萎缩中发挥了一定作用.     

颅底沟通性肿瘤术后颅底重建

目的：探讨颅底内外沟通性肿瘤术后颅底修复的方法。方法：回顾性研究31例患者颅内外沟通性肿瘤术后颅底修复方法，前颅底采用帽状腱膜和骨膜瓣，中颅底采用颞肌作为修补材料，对颅底进行水封性修复。结果：31例患者全部进行颅底修补，其中30例无手术修补相关性并发症，1例因切口脑脊液漏、颅内感染导致死亡。结论：颅底修复的理念应贯穿于手术前后，并注意术中细节的处理，用帽状腱膜和骨膜瓣、颞肌作为修补材料，可做到水封性修复。     

酸碱平衡紊乱

1术语概念 1）酸（acid） （1）挥发性酸（carbon dioxide,CO2） 葡萄糖和脂肪代谢的最终产物,即CO2。CO2本身无酸性,但在水化成H2CO3且离解出H＋时有酸性,CO2经肺排出,称为挥发性酸。 （2）非挥发性酸（titrable acid,TA（可滴定酸））     

纯钛和钴铬合金铸造基托在口腔修复中的应用

目的 比较纯钛铸造基托和钴铬合金铸造基托在口腔修复中的临床疗效,探讨纯钛铸造基托义齿的临床应用价值.方法 采用纯钛及钴铬合金铸造基托分别修复上颌肯氏Ⅰ类或Ⅱ类缺失患者各32例(纯钛组及钴铬合金组),检测并比较两组患者备牙前及戴牙后1、3个月义齿承托区黏膜面可培养细菌总量、可培养细菌分布情况以及义齿承托区黏膜的炎症情况.结果 (1)钴铬合金组戴牙后3个月义齿承托区可培养细菌总量均显著多于各牙前及戴牙后1个月(均P<0.01),而且戴牙后3个月钴铬合金组义齿承托区可培养细菌总量显著对于纯钛组(P<0.01).(2)纯钛组戴牙后3个月及钴铬合金组戴牙后1个月和3个月,黏膜链球菌、乳酸杆菌、放线菌及白色念珠菌均较备牙前显著增多(均P<0.01),奈瑟菌显著减少(P<0.01);在戴牙后1个月和3个月两个时点,纯钛组链球菌、放线菌、乳酸杆菌、白色念珠菌、奈瑟菌均较钴铬合金组显著减少(均P<0.01).(3)钴铬合金组戴牙后1个月发生黏膜义齿性口炎2例(+),戴牙后3个月发生6例(+)、2例(++):而纯钛组仅戴牙后3个月2例发生黏膜义齿性口炎(+),两组患者黏膜义齿性口炎发生率差异显著(P<0.01),尤其在戴牙后3个月钴铬合金组较严重黏膜义齿性口炎的发生率显著高于纯钛组(P<0.01).结论 纯钛具有良好的机械性能和生物学性能,不会影响口腔微生物的的生长及定植,可以防止微生态失调导致新的并发症出现,是一种较为理想的口腔缺损金属修复体.     

Tumors of the skull base

Recognition of the many benign and malignant tumors that occur in the skull base is now simple, given three-dimensional CT scanning and MRI with enhancement. Recent developments in surgical technique have allowed these tumors to be approached, but only in the past two to three years has radical surgery been possible.     

颅底肿瘤的手术治疗

生长在前、中、后和侧颅底的肿瘤统称为颅底肿瘤.近来有学者将位于颅底中线部位的肿瘤称为中央颅底肿瘤,它们可以纵跨前、中、后颅底,手术暴露更为困难.与颅内肿瘤相比,在病理性质上,颅底肿瘤以良性者居多,其治疗也就更多的依赖于手术切除.然而,由于颅底区域位置深在,解剖结构复杂、神经血管密集,颅底肿瘤的手术一直是对神经外科医生的挑战.作为临床医生,治疗患者的目标应该要分层考虑:首先是控制肿瘤,阻止其威胁患者生命;其次,在得到延长患者生存时间的同时还要提高/保持患者的生存质量,即功能保护在颅底肿瘤患者的治疗过程中同样非常重要.因此,对需要外科手术治疗的颅底肿瘤患者,治疗决策、手术入路选择和手术技巧是获得良好治疗效果的重要因素.     

药用植物学野外实习基地的选择

野外实习是中药学专业基础课程药用植物学内容体系中不可或缺的重要一环。为提高和保证药用植物学野外实习质量,遵循地形地貌复杂、植物资源丰富、基础资料充实、交通设施方便等原则,从几个候选地中选择了鼎湖山自然保护区作为新的药用植物学野外实习基地。几年的实践证明,该基地明显促进了药用植物学及相关学科教学、研究工作的发展。选择合适的野外实习基地,是提高药用植物学教学质量的重要保障。     

颅底手术中的三叉-心反射

目的：探讨颅底手术中出现三叉-心反射（trigemino-cardiac reflex, TCR）的形成机制、临床特征及相关预后。方法： 回顾性分析2009年1月至2015年10月北京大学第一医院神经外科291例颅底手术患者,通过复习相关的手术资料及麻醉记录,找出术中出现TCR的病例（在刺激或操作三叉神经相关区域时,出现与麻醉因素无关的平均动脉压突然下降和心率突然减慢并超过基线值的20%）, 分析其手术方式、临床特征、影响因素及相应预后。结果： 291例颅底手术患者中,9例患者术中共出现TCR 19 次,包括神经鞘瘤4例（听神经瘤3例,三叉神经鞘瘤1例）、脑膜瘤1例、表皮样囊肿1例、海绵窦海绵状血管瘤1例、垂体瘤1例、三叉神经痛1例。TCR诱发方式均与三叉神经主干或其分支受操作、牵拉有关,操作前基线心率为62~119 /min,平均（79.4±14.6） /min,TCR发生时,心率为22~60 /min,平均（44.2±9.6） /min,心率下降比例为29.0%~66.4%,平均下降比例为44.3%。基线平均动脉压为75~103 mmHg,平均（87.5±7.8） mmHg,TCR发生时,平均动脉压为45~67 mmHg,平均为（54.9±6.3） mmHg,血压下降比例为23.4%~47.2%,平均下降比例为37.3%。TCR出现后,停止刺激或操作心率血压自行恢复者8例次,应用阿托品8例次,剂量0.5~1.0 mg,平均0.69 mg,应用盐酸麻黄碱1例次,应用肾上腺素1例次,应用多巴胺1例次,患者血压及心率均很快恢复至基线水平,重复刺激可再次诱发。术后24 h无TCR相关心血管并发症及神经功能障碍。结论： TCR是在颅底手术中由于对三叉神经或其分支操作刺激时出现的一种以心率变慢、血压降低为表现的神经反射,虽然其预后良好,但仍需正确判断、密切观察,必要时需给予处理。     

医院的岗位评价应结合本单位实际量身定做

当前我国公立医院普遍存在运行效率不高的现象,这和多数医院都没有建立起有效的绩效评价与考核体系不无关系,特别是对职能管理部门的评价与考核的缺位或者不科学使得管理效能不高。岗位评价是一项技术性很强、复杂而细致的工作,对于医院能否建立科学有效的绩效考核体系是非常关键的一个基础性工作。科学的岗位评价以及在此基础上建立的绩效评价与考核体系是合理确定薪酬分配的基础。案例中出现的岗位价值与报酬不对等的情况正是岗位评价缺位的重要表现。由于客观条件的限制和主观因素的影响,目前我国公立医院在职能管理部门的岗位管理方面存在以下3个方面的问题：（1）没有对岗位进行评价,或者评价不科学不合理。有的医院根本没有进行过岗位评价,这些岗位的人员待遇是依其自身情况套用不同的标准,比如,有专业技术职称的就按专业技术职称,没有的再找其他方法,其待遇与所从事岗位的价值完全无关,案例中科长比副科长待遇低的情况应该就属于这种情况;也有的医院进行了岗位评价,但评价方法不够科学,评价结果不够合理,不能真正体现岗位的实际价值。（2）重技术轻管理,管理岗位价值被低估。医院是技术密集型的单位,长期以来的思想是“临床重要,技术第一,管理可有可无”,对“管理出效益”的概念不予认同,管理层就算有此共识,但往往迫于临床的压力也不得不压低职能管理,导致管理岗位价值长期被低估,限制了优秀管理人才的选拔与培养。（3）缺少科学的绩效评价与考核体系。由于职能管理部门的工作大多难以量化,考核难度大,目前多数医院都没有对这些部门进行真正意义上的绩效评价与考核,致使职能管理部门的工作做好做坏一个样,做多做少一个样,长此以往就会出现劣币驱逐良币的现象,不利于管理工作的开展和管理人才的培养。