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相似文献
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1.
目的:探讨中药肺岩宁方含药血清对肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor—α,TNF—α)诱导的人肺癌细胞系A549核转录因子KB(nuclearfactor—κB,NF—κB)基因表达的影响。方法:制备肺岩宁方含药血清,以肺癌细胞系A549为靶细胞,确定肺岩宁方含药血清用药浓度。将A549细胞分为对照血清组、TNFα组、肺岩宁方含药血清组和综合治疗组。观察用药前后A549细胞大体形态变化;四唑单钠盐法测定肺岩宁方含药血清对细胞增殖的影响;蛋白印迹法检测肺岩宁方含药血清对TNF-α诱导的细胞核NF-κ及抑制性核转录因子(inhibitorxBa,IκBα)表达的影响;将人NF-κB重组质粒用脂质体转染法导入A549细胞24h后,用肺岩宁方含药血清治疗24h,采用双荧光素酶报告基因系统测定肺岩宁方含药血清对TNF—α诱导的细胞核NF-κBp65转录活性的影响。结果:与对照血清比较.15%和20%肺岩宁方含药血清对A549细胞具有明显的增殖抑制作用(P〈0.05,P〈0.01)。1μg/L TNF—α能够明显提高NF—κB基因的表达,与肺岩宁方含药血清共同作用后,能够显著抑制它的表达(P〈0.01),而细胞内IκBα的表达差异无统计学意义(P〈0.05);肺岩宁方含药血清能够显著降低A549细胞经NF—κB重组质粒转染后的转录活性(P〈0.01)。结论:肺岩宁方含药血清可抑制人肺癌细胞系增殖,可能是通过对TNF-α诱导的NF-κB基因活性的抑制作用实现的。。  相似文献   

2.
目的:探讨中药肺岩宁方含药血清对人肺癌细胞系A549细胞增殖及肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor—α,TNF—α)诱导的A549细胞分泌自细胞介素6(interleukin-6,IL-6)和IL-8的影响。 方法:肺岩宁方含药血清培养A549细胞24、48和72h后,采用四唑单钠盐法检测肺岩宁方含药血清对A549细胞增殖的影响;肺岩宁方含药血清培养A549细胞48h后,酶联免疫吸附测定法检测肺岩宁方含药血清对TNF—α诱导的IL-6和IL-8分泌的影响,逆转录聚合酶链式反应检测IL-6和IL-8 mRNA表达水平的变化。 结果:肺岩宁方含药血清对A549细胞增殖具有明显的抑制作用。1μg/LTNF—α可明显提高A549细胞上清液中IL-6和IL-8的分泌水平,肺岩宁方含药血清与TNF-α共同作用后,可抑制IL-6和IL-8的分泌(P〈0.01)及IL-6、IL-8mRNA的表达(P〈0.01)。 结论:肺岩宁方含药血清对TNFα诱导A549细胞分泌IL-6和IL-8具有明显的抑制作用,这为其临床治疗肺癌提供了一定的实验依据。  相似文献   

3.
目的:探讨中药肺岩宁方含药血清对肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α, TNF-α)诱导的人肺癌细胞系A549诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase, iNOS)和环氧合酶2(cyclooxygenase-2, COX-2)表达的影响。 方法:制备肺岩宁方含药血清,以肺癌细胞系A549为靶细胞,实时聚合酶链反应法及蛋白质免疫印迹法检测肺岩宁方含药血清对TNF-α诱导的iNOS及COX-2表达的影响;二氨基乙酰乙酸荧光素检测NO产物;人iNOS重组质粒用脂质体转染法导入A549细胞24 h后,肺岩宁方含药血清治疗24 h,采用双荧光素酶报告基因系统测定肺岩宁方含药血清对TNF-α诱导的细胞核iNOS转录活性的影响。 结果:与对照血清比较,TNF-α明显提高iNOS和COX-2的表达,与肺岩宁方含药血清共同作用后,显著抑制二者的表达(P<0.01, P〈0.01);肺岩宁方含药血清显著降低了A549细胞经iNOS重组质粒转染后的转录活性(P<0.01, P〈0.01)及NO产物的产生。 结论:肺岩宁方含药血清抑制肺癌细胞的部分机制可能是抑制iNOS和COX-2基因的活性。  相似文献   

4.
目的 研究在缺氧条件下A549 细胞对人脐静脉内皮细胞( HUVEC) 迁移及微血管形成的影响。方法 A549 细胞在常氧组( 21% O2 ) 、缺氧组( 2% O2 ) 、无氧组( 0% O2 ) 中培养24 h 后, 通过倒置相差显微镜观察细胞形态、MTT 法检测细胞增殖、免疫细胞化学技术检测细胞内低氧诱导因子1α( HIF-1α) 蛋白量以确定缺氧模型建立是否成功。随后取常氧组、缺氧组的A549 细胞上清液、HUVEC 细胞培养液干预HUVEC, 用细胞划痕实验、微丝绿色荧光染色方法观察各组HUVEC 的迁移情况及伪足形成, 体外HUVEC 三维培养技术观察血管形成情况。结果 与常氧组比较, 缺氧组A549细胞的生长状态好, 增殖明显; 无氧组A549 细胞生长状态差, 细胞数量减少; 缺氧组及无氧组A549细胞均有HIF-1α表达, 且缺氧组表达更加明显。与细胞培养液干预组比较, 缺氧上清液干预组和常氧上清液干预组A549 细胞的HUVEC 均有不同程度的迁移、伪足结构形成及血管管腔样结构形成,且前者较后者明显。结论 缺氧环境下A549 细胞生长状态良好, 增殖明显, 而无氧环境下则不利于A549 细胞的生长。缺氧环境下A549 细胞能促进HUVEC 的迁移、伪足形成及血管形成。  相似文献   

5.
王志新  徐飞  谢启超 《四川医学》2006,27(11):1116-1117
目的 检测非小细胞肺癌患者基质溶解素(matrilysin,MMP-7)的表达,探讨重组基质溶解素(rMMP-7)和脂质体-MMP-7反义寡核苷酸(antisense oligonucleotde of matrilysin by liposome transfection,LIPO-MAON)对肺腺癌A549细胞和人脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)增殖的影响。方法 ①免疫组化法检测NSCLC患者癌组织MMP-7表达;②MMT法和半定量RT-PCR法检测rMMP-7和LIPO-MOAN作用下A549和HUVEC的增殖及MMP-7-mRNA表达。结果 57例肺癌组织47例MMP-7表达为阳性,阳性表达率为82.5%,与正常对照组相比P〈0.01。rMMP-7能促进肺腺癌A549细胞的增殖,LIPO-MAON对AM9细胞增殖则有明显抑制作用。对HUVEC增殖,仅高浓度的rMMP-7(0.75、1.0μg/ml)有促进作用,而LIPO—MAON对其增殖无抑制作用。RT-PCR结果表明,HUVEC不表达MMP-7-mRNA;rMMP-7能增加A549细胞MMP-7-mRNA的表达,LIPO-MAON可降低其表达(P〈0.05)。结论 非小细胞肺癌患者MMP-7表达阳性率为82.5%,MMP-7反义寡核苷酸能抑制肺腺癌细胞的增殖及MMP-7-mRNA表达,对正常血管内皮细胞增殖无抑制作用。MMP-7能促进肺腺癌细胞增殖。  相似文献   

6.
罗格列酮对体外培养人肺癌细胞增殖抑制和凋亡的影响   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的探讨罗格列酮(Rosiglitazone, ROS)对体外培养人肺癌细胞系A549细胞增殖抑制和凋亡的影响.方法体外培养人脐静脉内皮细胞系(HUVEC)、人肺癌细胞系(A549),每种细胞实验组中分别加入不同浓度罗格列酮,对照组加入等量PBS.采用改良MTT比色法分别检测罗格列酮作用HUVEC、A549细胞不同时间后的细胞增殖抑制率;流式细胞仪分析法分别检测HUVEC、A549细胞的细胞周期分布及凋亡率;间接免疫荧光流式细胞仪分析法分别检测HUVEC、A549细胞的细胞内蛋白PPARγ表达.结果罗格列酮对A549细胞的增殖具有抑制作用,呈剂量依赖性和时间依赖性,对HUVEC细胞的增殖抑制作用弱,与A549细胞相比差异有显著性(P〈0.05);罗格列酮作用于A549细胞后细胞周期分布及凋亡率与HUVEC细胞比较,G0/G1期细胞明显增多,且G1期细胞前出现明显的亚G1凋亡峰;罗格列酮作用于A549细胞后,细胞内 PPARγ的表达进行性上调.结论罗格列酮对肺癌细胞系A549的增殖具有明显抑制作用,其抗肿瘤作用机制可能是通过活化PPARγ途径诱导细胞凋亡.  相似文献   

7.
目的通过观察肺康饮口服液对人非小细胞肺癌A549生长及凋亡的影响,探讨其体外的抗肿瘤效应。方法体外培养A549细胞,以不同浓度的肺康饮口服液作用为实验组,并设对照组,CCK8法测细胞增殖抑制效应,透射电镜观察药物对细胞形态学的影响,流式细胞术检测A549细胞中p53和Be1-2蛋白表达情况。结果不同浓度肺康饮口服液作用A549细胞24h增殖抑制明显(P〈0.05),其抑制效应具有剂量依赖的特点,并可诱导A549细胞凋亡,同时上调p53基因表达、下调Bc1-2基因表达(P〈0.05)。结论肺康饮口服液可抑制A549细胞的生长且增殖抑制效应具有剂量依赖性,并可诱导肿瘤细胞凋亡,其抗肿瘤效应可能与细胞凋亡相关基因表达的调控有关。  相似文献   

8.
目的观察芪杉方联合顺铂对肺癌A549细胞PI3K/AKt信号通路的影响。方法 Wisatr雄性大鼠随机分成芪杉方含药血清组、顺铂组、芪杉方含药血清联合顺铂组和空白对照组,每组10只,各组连续灌胃3 d后取血。分别运用MTT法、Annexin V-PE/7-AAD双染法、蛋白质印迹(Western blot)法、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测芪杉方含药血清联合顺铂对A549细胞增殖、细胞凋亡及其相关蛋白和基因表达的影响。结果芪杉方含药血清组、顺铂组、芪杉方含药血清联合顺铂组分别作用于A549细胞时,均表现为抑制细胞增殖作用,其抑制率分别为27.20%(P0.01),28.52%(P0.01)和51.25%(P0.01)。芪杉方含药血清组、顺铂组、芪杉方含药血清联合顺铂组Caspase-3、Caspase-9、m TOR及PI3K蛋白和基因表达量与空白对照组相比,表达量降低(P0.01),且芪杉方含药血清联合顺铂组对A549细胞凋亡相关蛋白表达的影响最显著(P0.01)。结论芪杉方含药血清组、顺铂组、芪杉方含药血清联合顺铂组均能够抑制A549细胞增殖,激活Caspase-3、Caspase-9、AKT、m TOR相关凋亡途径,从而诱导A549细胞凋亡。  相似文献   

9.
目的:探讨环氧化酶(COX)-2抑制剂塞来昔布(celecoxib)对肺癌A549细胞的增殖抑制、COX-2表达和化疗敏感性的影响。方法:用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTY法)检测塞来昔布单药及联合顺铂(DDP)对COX-2高表达的人肺腺癌细胞A549的增殖抑制,流式细胞术分析塞来昔布联合DDP对细胞周期及细胞凋亡的影响,Westernblot法分析不同浓度塞来昔布干预后对A549细胞内COX-2蛋白表达的影响。结果:MTT法检测显示,塞来昔布(0-100μmol/L)对肺腺癌A549细胞的抑制作用呈时间依赖性、剂量依赖性效应。联合用药组与单药组相比差异有显著性(P〈0.001)。流式细胞术分析显示,塞来昔布12.5μmol/L与25μmol/L联合DDP0.5ms/L时,A549细胞明显阻滞于c,o-Gl期,S期细胞比例减少,联合用药组的凋亡率明显高于单药组(P〈0.001)。Westem blot法分析显示,塞来昔布浓度超过50μmol/L时,COX-2蛋白的表达受到了抑制。结论:塞来昔布的抗肿瘤作用机制涉及到COX.2依赖性途径。塞来昔布能增加DDP的化疗敏感性,塞来昔布与DDP联用对人肺腺癌A549细胞有明显协同抗肿瘤效应,该作用可能是通过增强对A549细胞的增殖抑制、诱导凋亡来实现的。  相似文献   

10.
目的:研究姜黄素对肺腺癌A549细胞增殖率、凋亡和P13K/Akt/Bcl-2信号通路的影响。方法:采用细胞计数法绘制肺腺癌A549细胞生长曲线,MTF法测定姜黄素对肺腺癌A549细胞抑制率。将不同浓度姜黄素作用于肺腺癌A549细胞24h后,显微镜下观察细胞形态;TUNEL法检测细胞凋亡率;免疫组化法检测P13K/Akt/Bcl-2蛋白表达。结果:姜黄素能够抑制肺腺癌A549细胞增殖,且呈一定剂量和时间依赖性;随着药物浓度上升细胞凋亡率明显增高(P〈0.05);P13K、Akt和Bcl-2蛋白表达明显下降(P〈0.05)。结论:姜黄素对肺腺癌A549细胞增殖具有抑制作用,其作用可能是诱导细胞凋亡及抑制P13K/Akt/Bcl-2信号通路来实现的。  相似文献   

11.
目的:分离、鉴定肺癌干细胞,并探讨肺岩宁方对肺癌干细胞Wnt信号通路的干预作用。方法:分离、鉴定肺癌干细胞;将分离出的SP+肺癌干细胞分为对照组(空白血清+生理盐水)、单纯化疗(空白血清+DDP组)、肺岩宁方组(肺岩宁方含药血清+生理盐水)、综合治疗组(肺岩宁方含药血清+DDP),予体外药物干预后检测β-catenin蛋白表达及SP+肺癌干细胞凋亡情况。结果:分离的SP+、CD24+IGF-1R+、CD133+细胞具有肺癌干细胞特性,分离的β-catenin蛋白完整;综合治疗组诱导SP+干细胞凋亡优于其他组,各组凋亡率分别为综合治疗组79.2%、肺岩宁方组21.3%、DDP组33.7%、对照组0.3%。结论:本课题组已掌握分离、鉴定肺癌干细胞的技术,中药肺岩宁方联合化疗具有一定的诱导肺癌干细胞凋亡的作用。  相似文献   

12.
目的:研究小干扰RNA(siRNA)对血管内皮细胞Akt1基因表达的沉默作用及其对肺癌A549细胞条件培养基促血管内皮细胞迁移的影响。方法:以人脐静脉内皮细胞为靶细胞,设计针对Akt1基因mRNA的siRNA(siAkt1),利用阳离子脂质体介导转染人脐静脉内皮细胞,采用半定量PCR技术(RT-PCR)检测Akt1mRNA的表达,用Western blotting技术检测Akt总蛋白表达。同时用体外"伤口愈合"实验观察细胞迁移。结果:筛选出的siAkt1能显著抑制内皮细胞Akt1mRNA(P<0.01)和Akt总蛋白的表达(P<0.05),A549细胞条件培养基显著促进人脐静脉内皮细胞迁移(P<0.05),但对转染siAkt1的人脐静脉内皮细胞迁移没有促进作用(P>0.05)。结论:特异性siRNA通过有效抑制Akt1基因的表达而抑制A549细胞条件培养基促血管内皮细胞迁移的作用,这为肺癌血管生成干预治疗提供了新的理论基础。  相似文献   

13.
目的:观察肺岩宁方及其拆方对C57小鼠Lewis肺癌肿瘤组织中血管内皮生长因子(vascularendothelial growth factor,VEGF)及其激酶功能区受体(kinase-domain insert containing receptor,KDR)mRNA与蛋白表达的影响。方法:建立C57小鼠Lewis肺癌模型,随机分为模型组、肺岩宁组、益气组、补肾组和抗癌组,每组10只。分别给予相应药物干预,均灌胃21 d,第22天处死。观察肺转移情况,取肿瘤组织,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法和免疫组化SP法分别检测C57小鼠Lewis肺癌中VEGF和KDR mRNA及蛋白表达水平。结果:肺岩宁组与补肾组、抗癌组小鼠的肺转移率明显低于模型组与益气组(P<0.05)。C57小鼠Lewis肺癌组织中表达VEGF和KDR,但肺岩宁组与补肾组、抗癌组小鼠肿瘤组织中VEGF mRNA及蛋白的表达水平均明显低于模型组和益气组(P<0.05),肺岩宁方组和抗癌组小鼠肿瘤组织中KDR mR-NA及蛋白的表达水平均明显低于模型组和益气组(P<0.05)。结论:肺岩宁抑制C57小鼠Lewis肿瘤转移的机制可能与下调VEGF及其受体KDR mRNA和蛋白表达有关。  相似文献   

14.
目的明确氧化低密度脂蛋白(OX-LDL)对血管内皮细胞中巨噬细胞移动抑制因子(MIF)表达的调控作用,检测MIF对血管内皮细胞增殖、迁移的可能调控作用。方法用不同剂量的OX-LDL处理人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs),Western-blot检测MIF蛋白的表达。利用腺病毒介导MIF在HUVECs中的表达,分别通过Trans-well细胞穿膜实验和细胞划痕实验检测MIF对HUVECs迁移的调控作用。分别通过EdU染色、MTr细胞增殖检测和流式细胞术检测细胞周期,分析MIF对HUVECs增殖的影响。用荧光定量PCR检测MIF对HUVECs中MMP2和CXCR4表达的影响。结果Ox-LDL可特异调控HUVECs中MIF的表达。Trans-well细胞穿膜实验和细胞划痕实验表明,利用腺病毒介导MIF高表达可显著抑制I-IUVECs的迁移。EdU染色、M1Tr和细胞周期检测结果显示MIF对HUVECs增殖无明显作用。定量PCR结果显示过表达MIF可显著抑制HUVECs中CXCR4的表达(P〈0.01)。结论MIF通过降低CXCR4表达来抑制血管内皮细胞的迁移,但对血管内皮细胞的增殖没有影响。  相似文献   

15.
摘要:目的以肿瘤坏死因子-a(TNF—a)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)为研究对象,探讨罗仙子(MuscaDo—mestica)抗炎活性部位在体外对HUVEC增殖及Matrigel小管形成的影响。方法将构建的HUVEC细胞分为正常对照组、模型组及罗仙子活性部位处理组,制备罗仙子抗炎活性部位,采用流式细胞术结合ModFitLT软件分析,明确罗仙子抗炎活性部位对HUVEC增殖的影响;采用Matrigel小管形成实验结合ImageProPlus软件分析,明确罗仙子抗炎活性部位对HUVEC血管形成的影响。结果相对模型组,罗仙子抗炎活性部位处理组HUVEC增殖得到显著的抑制,增殖系数降低明显(P〈0.01),同时,该处理组Matrigel小管形成的数量、面积和长度显著减少(P〈0.01)。结论罗仙子抗炎活性部位对TNF—d诱导HUVEC增殖及Matrigel小管形成具有抑制作用。  相似文献   

16.
目的:观察扶正抑癌方含药血清对结肠癌lovo细胞侵袭转移能力及TGF-β_1和TβRⅡ蛋白表达的影响,以探讨扶正抑癌方降低结肠癌转移的机制。方法:lovo细胞体外培养,制备大鼠不同浓度含药血清后,MTT测定不同浓度含药血清对细胞增殖的影响,以5-Fu作为阳性对照药;通过细胞迁移实验检测细胞运动能力,肿瘤细胞体外侵袭实验检测细胞侵袭能力,SABC免疫组化法检测TGF-β_1和TβRⅡ的蛋白表达。结果:高浓度含药血清24 h对lovo细胞作用有效,与对照组和空白组相比,扶正抑癌方含药血清能显著降低细胞的运动能力和侵袭能力,免疫组化提示扶正抑癌方含药血清能降低lovo细胞TGF-β_1的蛋白表达和提高TβRⅡ的蛋白表达,差异具有统计学意义(P0.01)。结论:扶正抑癌方含药血清能有效抑制lovo细胞的增值和降低其侵袭力和运动能力,初步认为其作用机制与降低lovo细胞TGF-β_1的表达和升高βRⅡ的蛋白表达有一定的相关性。  相似文献   

17.
目的:恶性肿瘤细胞具有异常的细胞周期。前期体内实验证实肺岩宁具有干预细胞周期G,/S检测点信号通路的作用,本研究进一步探讨肺岩宁对S期核小体构象调控因子表达的影响。方法:将60只小鼠随机分成正常组、模型组、顺铂组和肺岩宁组,每组15只。右腋部皮下注射Lewis细胞构建C57BI./6小鼠Lewis肺癌移植瘤模型。观察各组小鼠的瘤质量和抑瘤率,采用流式细胞术检测细胞周期时相分布和增殖指数,实时聚合酶链反应法及蛋白质印迹法检测各组小鼠肺癌移植瘤细胞的核小体构象调控因子H3-K56、Tyl转座基因调节因子109(regulatorofTyltransposition109,Rttl09)、细胞反沉默功能因子1(antisilencingfunction1,Asfl)、腺病毒E2启动子结合转录因子1(E2F1)mRNA和蛋白的表达。结果:肺岩宁组和顺铂组的瘤质量显著低于模型组(P〈0.01),抑瘤率分别为27.92%和42.50%。肺岩宁组癌细胞的增殖指数明显低于模型组和顺铂组,S期分布比例最少(P〈0.01)。肺岩宁组H3-K56、Rttl09、Asfl、E2F1mRNA和蛋白的表达较模型组显著下调(P〈0.05)。结论:肺岩宁可能是通过影响核小体构象调控因子的表达干预异常细胞周期来发挥抗肺癌细胞生长增殖作用。  相似文献   

18.
目的:探讨整合素连接激酶(ILK)基因沉默后及中药肺岩宁方对相关下游靶基因表达的影响。方法:构建载体转染人肺腺癌细胞A549后,随机分为阴性对照病毒感染细胞(NC)组、RNAi靶点病毒感染细胞(KD)组、10%肺岩宁含药血清干预的NC组与KD组、20%肺岩宁含药血清干预的NC组与KD组,以及阳性对照10%DDP干预的KD组,应用Real time-PCR及Western Blot方法检测下游靶基因蛋白激酶B(Akt/PKB)、糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)、转录因子-1(AP-1)、细胞周期蛋白D1(cyclinD1)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、血管内皮生长因子(VEGF)、β-链蛋白(β-catenin)的mRNA及蛋白表达水平。结果:与NC组比较,KD组GSK-3β、VEGF mRNA和蛋白表达显著下调(P0.05,P0.01),cyclinD1、MMP-9 mRNA和蛋白表达显著上调(P0.05,P0.01),Akt表达无变化,AP-1与β-catenin在mRNA水平表达升高(P0.01)、蛋白水平表达则下降;与KD组比较,KD+10%肺岩宁含药血清和KD+10%DDP组具有下调VEGF、cyclinD1、MMP-9和β-catenin蛋白表达、上调GSK-3β蛋白表达,以及下调AP-1、cyclinD1 mRNA表达的作用(P0.01);与KD组相比,KD+20%肺岩宁含药血清具有下调AP-1、cyclinD1和MMP-9蛋白表达的作用。结论:沉默ILK基因后可以明显降低GSK-3β、VEGF的表达,10%的中药肺岩宁方含药血清可能通过下调靶基因AP-1、cyclinD1、MMP-9、VEGF和β-catenin蛋白表达的作用而发挥其抗肿瘤的作用。  相似文献   

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