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相似文献
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1.
目的探讨重组干扰质粒对口腔腺样囊性癌多药抗性细胞株(Acc-3/CDDP)细胞中Bcl-2基因表达的干扰效率。方法按siRNA设计原则设计针对Bcl-2基因的Oligo DNA,体外化学合成Oligo DNA,Oligo DNA退火、连接、转化、筛选克隆,构建针对Bcl-2基因的表达重组RNA干扰质粒(psiB1、psiB2、psiB3),细胞脂质体转染多药抗性Acc-3/CDDP细胞,Real-time RT-PCR的标准曲线、扩增曲线和熔解曲线的数据收集处理,采用荧光定量RT-PCR方法检测重组干扰质粒对多药抗性Acc-3/CDDP细胞中Bcl-2基因表达的干扰效率。结果实时荧光定量RT-PCR方法检测psiB1、psiB2、psiB3质粒脂质体转染后Bcl-2基因的表达情况结果显示:psiB1、psiB3相对于对照组无明显干扰效果,psiB2的干扰程度达66.20%。结论针对Bcl-2基因的表达重组RNA干扰质粒psiB2(CCgggAgATAgTgATgAA)能有效沉默多药抗性Acc-3/CDDP细胞中Bcl-2基因的表达。  相似文献   

2.
目的 运用基因芯片技术研究人参总皂甙(TSPG)作用后K562细胞基因表达谱的变化.方法 200 μg/ml TSPG作用于K562细胞3 d后,提取总RNA,合成cRNA并分别用cy3和cy5标记,与AgilentHuman 1B寡核苷酸基因芯片杂交,研究基因表达谱的变化.结果 TSPG刺激K562细胞后共有362个基因表达发生变化,与对照组K562细胞比较,表达上调的基因有20个,主要有代谢相关基因,信号转导相关基因,细胞受体相关基因等;表达下调的有342个,包括免疫防御相关基因,DNA结合与转录因子,代谢相关基因,细胞周期相关基因等.RT-PCR技术验证了FOSL1、E2F2、CCNE2和ODZ1四个基因表达的变化.结论 TSPG刺激K562细胞后,影响了细胞内一系列基因的表达.这些基因可能与TSPG的抗肿瘤机制有关.  相似文献   

3.
目的:采用细胞毒性化疗药物顺铂(Cisplatin,CDDP)诱导口腔腺样囊性癌Acc-3细胞系,得到耐药表型的细胞亚系Ace-3/CDDP,检测其多药耐药性、探讨与其亲代Ace-3细胞系的耐药相关基冈变化.方法:用浓度递增法建立Ace-3/CDDP耐药细胞系;用MTT法检测Ace-3/CDDP细胞的耐药指数,RT-PCR检测多药耐药基因MDR-1、MRP-1、GST-π和Bcl-2基因的mRNA表达水平.结果:Acc-3/cDDP对CDDP、5-氟尿嘧啶(5-Fu)、长春新碱(VCR)、氨甲喋呤(MTX)和平阳霉素(PYM)的耐药指数(Resistance factor,RF)分别为8.9、1.97、2.83、2.42、1.1;RT-PCR显示:Aec-3/CDDP中MRP-1、GST-π、Bcl-2较Acc-3升高,Acc-3/CDDP中有MDR-1基因表达,而Acc-3中无MDR-l基因表达.结论:MRP-1、GST-π、Bcl-2基因的表达水平在多药耐药口腔腺样囊性癌Aee-3/CDDP细胞中显著升高,这为进一步探讨肿瘤多药耐药的形成机制提供了科学基础.  相似文献   

4.
目的:采用实时荧光定量RT-PCR和cDNA基因芯片2种技术分析食管癌细胞基因表达的特征。方法:应用cDNA基因芯片筛选15例食管癌基因表达谱,用实时荧光定量RT-PCR验证其中16个基因的表达变化。结果:实时荧光定量RT-PCR和cDNA基因芯片技术对16个基因的检测结果一致,不仅变化方向相同,而且表达值非常接近。结论:cDNA基因芯片和实时荧光定量RT-PCR分析基因表达变化都是可信的,基因芯片筛选基因表达谱具有高通量大规模的特点,而实时荧光定量RT-PCR则适合单个基因表达变化的研究,两者互为补充和印证。  相似文献   

5.
将SRSV/3T3细胞DNA转染NIH/3T3细胞,转染后17d,实验组出现18个集落,对照组出现4个集落。将实验组集落细胞接种于3只BALB/C裸鼠皮下,全部长成纤维肉瘤。将SRSV/3T3细胞DNA用EcoRI和BamHI酶切电泳,分别应用5种癌基因(v-myc、KJ-ras、v-src、v-sis和e-fos)作Southern印迹和分子杂交。发现SRSV/3T3细胞DNA的BamHI酶切片段与c-fos探针杂交后,在2.2~3.0 kb处出现阳性杂交带。应用c-fos单抗检测转化细胞,细胞核内呈阳性反应。表明SRSV/3T3细胞DNA含有fos样转化基因,在转化细胞内有此基因的过度表达。  相似文献   

6.
目的 应用基因芯片技术分析肺移植后闭塞性细支气管炎(OB)形成前期移植气道的基因表达谱.方法 首先建立小鼠异位气道移植OB模型,BALB/c小鼠气道异位移植到C57BL/6小鼠(同种异体移植组)或(同系移植组)背部皮下.分别在术后5、15和25d取出移植气道检测形态学改变,并利用CSME-80鼠cDNA芯片检测15 d时两组移植物内基因表达差异,分析具有统计学意义的基因表达和OB发病的关系.结果 OB前期存在大量基因表达变化,在2个通道均为有效的杂交信号中,上调表达的有422个,主要涉与细胞生存相关的基因类型.结论 肺移植后OB是多因素参与的不平衡过程.大量基因与细胞生存相关,免疫性因素相对较少,提示可能的肺移植OB治疗策略的转变.  相似文献   

7.
目的 对比观察雄激素依赖前列腺癌细胞(LNCaP)与雄激素非依赖前列腺癌细胞(LNCaP-AI)中microRNA的表达差异,探讨前列腺癌激素依赖向非依赖转化的转录后调控机制.方法 利用Agilent基因芯片检测LNCaP及LNCaPAI细胞microRNA的表达,用RT-PCR方法对其中6个microRNA进行验证,并对差异表达的microRNA所调控靶基因功能进行生物信息学分析.结果 基因芯片检测发现:与LNCaP相比,LNCaP-AI细胞有27个microRNA表达降低,11个microRNA表达升高.对其中6个microRNA进行RT-PCR验证,结果与基因芯片结果一致.通过检索http://www.mirbase.org/针对microRNA调控的靶基因,并参考已知的与雄激素非依赖相关基因的功能,发现LNCaP细胞转化为激素非依赖的LNCaP-AI细胞过程中,差异表达的microRNA主要调控表皮生长因子受体(EGFR)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、Bcl-2及雄激素相关代谢酶.结论 前列腺癌激素非依赖转化过程中存在microRNA的差异表达,可能涉及雄激素受体(AR)旁路信号通路、金属酶、抗凋亡基因及雄激素相关代谢酶基因等.  相似文献   

8.
9.
目的 探讨卵巢癌细胞系SKOV3稳定表达程序性细胞死亡4(PDCD4)基因后基因表达谱的变化.方法 将pDsRed2-N1-PDCD4真核表达载体和pDsRed2-N1空载体分别转染至SKOV3并获得稳定细胞系,应用基因芯片技术分析PDCD4基因转染后基因表达的变化,RT-PCR检测基因的表达以验证芯片结果.结果 PDCD4转染SKOV3后引起大量基因表达的变化,表达明显差异基因共有467个,其中上调255个,下调212个;RT-PCR验证选取的5个基因的表达差异和芯片显示的结果一致.结论 成功筛选出PDCD4基因转染卵巢癌细胞系SKOV3后的差异表达基因,为进一步研究PDCD4的抑癌作用机制提供了实验依据.  相似文献   

10.
[目的]寻找并鉴定在 TPA处理后小鼠成纤维细胞 NIH3T3中表达发生变化的蛋白质,为阐明 TPA在诱导细胞发生生物学变化的作用机制提供线索.[方法] 用 TPA刺激 NIH3T3细胞,分别提取实验组和对照组的 NIH3T3细胞的总蛋白质,通过聚丙烯酰胺凝胶双向电泳,硝酸银染色后用软件分析寻找差异表达的蛋白质,并对差异蛋白质进行质谱鉴定.[结果] 软件分析显示 TPA处理后的 NIH3T3细胞中有明显的差异表达蛋白质,质谱鉴定表明 TPA处理后,表达上调的蛋白质有线粒体基质蛋白 P1前体、微管蛋白 beta-5链; TPA处理后明显表达下调的蛋白质有 galectin-1、 N-myc下游调节基因 1蛋白.[结论] TPA刺激 NIH3T3细胞后可以下调生长抑制基因的表达,同时上调与细胞增生相关基因的表达.因此,促癌剂 TPA可能对 NIH3T3细胞有促进增生的作用.  相似文献   

11.
目的 检测12-O-十四烷酰佛波醋酸酯-13 (TPA)处理C57 BL/6( B6)小鼠背部皮肤后TCF3表达的变化情况.方法 采用免疫荧光染色、RT-PCR和Western blot等技术,检测TPA和丙酮分别处理7周大小的B6鼠背部皮肤1、2和4周后TCF3的表达情况.结果 与丙酮处理组相比,TPA处理组中B6鼠...  相似文献   

12.
目的:探讨转录因子GATA结合蛋白3(GATA binding protein 3,GATA3)对解整合素金属蛋白酶33(a disintegrin and metalloproteinase 33, ADAM33)基因启动子活性及mRNA表达的影响。方法: 以人正常肺上皮BEAS-2B细胞DNA为模板经PCR扩增得到ADAM33基因启动子区1 953 bp片段。通过双酶切、连接、转化等步骤将该片段克隆至pGL3-Basic载体构建ADAM33启动子重组质粒,并将其转染至人HEK293T、BEAS-2B细胞中;利用双荧光素酶报告基因技术检测HEK293T、BEAS 2B细胞中所构建的质粒启动子活性。将HEK293T、BEAS-2B细胞分为pcDNA-GATA3组和pcDNA3.1对照组,分别转染GATA3过表达质粒和空白对照质粒,用双荧光素酶报告基因技术检测荧光素酶活性;用实时荧光定量PCR检测BEAS-2B细胞中ADAM33 mRNA相对表达水平。结果: 通过PCR、双酶切和测序鉴定,成功构建含ADAM33启动子片段的重组质粒;重组质粒的ADAM33启动子活性较pGL3-Basic对照组明显增高。与pcDNA3.1组相比,HEK293T、BEAS-2B细胞中pcDNA GATA3组ADAM33启动子区荧光素酶活性明显增高(P<0.05或P<0.01);BEAS-2B细胞中pcDNA-GATA3组ADAM33 mRNA相对表达水平明显增高(P<0.01)。结论: 转录因子GATA3上调哮喘易感基因ADAM33启动子活性及mRNA表达。  相似文献   

13.
目的:探讨miR-186对骨髓间充质干细胞(bMSCs)成骨向诱导分化过程中骨桥蛋白(OPN)基因的靶向作用及其对bMSCs成骨分化的影响.方法:分离培养bMSCs,应用骨形成蛋白2成骨向诱导分化并采用碱性磷酸酶染色和Von-kossa染色鉴定;运用生物信息学方法对miR-186和OPN基因的靶向配对关系进行预测,采用荧光素酶报告系统鉴定;脂质体2000转染miR-186模拟物以及干扰OPN基因的siRNA后,Real-time PCR检测miR-186和OPN mRNA的表达,Western blot检测OPN蛋白的表达.结果:光镜下可见bMSCs均匀分布,诱导分化后的细胞碱性磷酸酶染色呈蓝色.生物信息学软件TargetScan和miRanda显示miR-186和OPN基因二者靶向配对良好,荧光素酶报告系统进一步验证发现,miR-186能够抑制OPN mRNA表达.Real-time PCR和Western blot检测结果表明过表达miR-186能够降低OPN mRNA和蛋白的表达.结论:miR-186通过下调bMSCs成骨向诱导分化过程中OPN基因表达进而抑制bMSCs的成骨分化.  相似文献   

14.
胡小东  马信文 《海南医学》2014,(13):1877-1879
目的检测骨关节炎(0A)患者骨桥蛋白(0PN)的表达,探讨Wnt/β-catenin信号通路对OPN的表达调控作用。方法分离OA患者(骨关节炎组12例)的软骨细胞,并取非OA患者软骨细胞作为正常对照(8例),荧光定量PCR检测OPN基因的表达;基因转染双链siRNA干扰β-catenin基因的表达;Western blot实验检测β-catenin和OPN蛋白的表达改变。结果骨关节炎组和正常对照组软骨细胞OPN的mRNA表达量分别为(0.642±0.155)和(0.226±0.077),两组比较差异有统计学意义(t=6.74,P〈0.01)。特异性靶向双链siRNA可以下调伊catenin的表达,Western blot检测显示下调β-catenin蛋白的表达后软骨细胞OPN蛋白的表达也出现了相应的下调。结论骨关节炎患者中存在骨桥蛋白的表达上调,骨桥蛋白的上调受到Wnt/β-catcnin通路的调控。  相似文献   

15.
Objective To construct a eukaryotic expression system with pcDNA3-PfCSP/Hela for the Circ umsporozoite protein (CSP) gene of Plasmodium falciparum (P.falciparum), t o observe the immune responses in BALB/c mice induced by the expressed proteins .Methods The recombinant plasmid pcDNA3-PfCSP was transformed into the Hela cell line. The expressed protein was isolated and analyzed by using SDS-PAGE and used for immunization of BALB/c mice by subcutaneous, intravenous, and intraperitone al adminstration.Enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA), Dot-ELISA, Wester n blot, T lymphocyte proliferation test, natural killer cell(NKC) activity assay , and CD4(+) and CD8(+) T cell detection were used for observation of humoral an d cellular immune responses.Results Immune sera strongly reacted with the expressed protein, antibody titer was up to 1∶6400 as detected by ELISA.Western blot analysis revealed a specific b and at 38.3 Kda.When the spleen cells of normal and immunized BALB/c mice we re specifically stimulated with expressed protein, the optical densities were 0 .12±0.03 and 0.34±0.04, respectively.The latter were significantly highe r than the former (P&lt;0.01).We used the MTT colorimetric assay to measure NKC activity of mice spleen.The results showed that the NKC activity of immuni zed BALB/c mice was remarkably higher than that of the controls (P&lt;0.05). CD4(+) and CD8(+) T cells were detected by using monoclonal antibody immunofluor escence methods.The results showed that the percentage of CD4(+) and CD8(+) T cells of immunized group were significantly higher than that of control group ( P&lt;0.05).Conclusions The humoral and cell-mediated immune responses and elevated NKC activity to pr oducts made with a eukaryotic expression system could be specifically detected i n BALB/c mice.These findings indicate that the expressed protein could enhance the immune function in mice.  相似文献   

16.
Immune responses to the expressed products of the CSP antigen gene of Plasmondium falciparum south in China isolate FCC1/HN in Hela cell@Yu XB @Liu YW @Luo SH  相似文献   

17.
王斌  刘瑶  邹飞 《中国医药导报》2013,10(16):4-6,9
目的探讨瞬时受体电位阳离子通道1(TRPCI)是否参与缺氧诱导的胶质瘤细胞血管内皮生长因子(VEGF)表达。方法通过RT-PCR和钙图检测技术观察U87细胞上表达的TRPC亚型;采用RNAi技术、real-timeRT-PCR、免疫印迹和ELISA方法,在基因和外分泌蛋白水平观察TRPCI对缺氧U87细胞VEGF表达的影响。结果U87胶质瘤细胞表达TRPCI,TRPC3,TRPC4和TRPC5亚型。TRPC通道激动剂OAG增加了胞内Ca^2+浓度,而TRPC通道阻断剂2-APB可抑制激动剂诱导的胞内Ca^2+浓度增加。化学合成的siRNA-1,siRNA-2和siRNA-3分别减少TRPCI mRNA到64%,39%和36%(P〈0.01);分别减少TRPCI蛋白到48%。29%和33%(P〈0.01)。siRNA-2和siRNA-3显著抑制了缺氧诱导的VEGF基因上调(P〈0.01)。同时缺氧U87细胞VEGF蛋白的分泌亦受到抑制(P〈0.01)。结论U87胶质瘤细胞表达功能性的TRPC通道,TRPCI参与缺氧诱导的胶质瘤VEGF表达。  相似文献   

18.
从感染SRS白血病病毒的SRSV/3T3细胞系提取的DNA,在体外感染小鼠NIH/3T3细胞,在第3周出现转化细胞和呈集落性生长的转化灶。将转化细胞接种SW-1近交系新生乳鼠或裸鼠(BALB/c),在局部产生纤维肉瘤。实验结果提示,在SRSV/3T3细胞的DNA中可能含有转化基因片段。  相似文献   

19.
目的 研究白细胞介素2(IL-2)基因对丙型肝炎病毒(HCV)E2基因免疫小鼠后效果的调节作用。方法 构建Ⅱ型HCV E2基因的真核表达载体p3E2,免疫组化法检测其在哺乳动物细胞中的表达情况。用p3E2单独或连同IL-2真核表达质粒一起对BALB/s小鼠进行尾部皮下注射,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测E2抗体的产生情况。结果 E2蛋白在哺乳动物细胞中得到瞬时表达。应用p3E2单独或连同IL  相似文献   

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