SB203580防治大鼠高氧肺损伤的作用与机制

目的:探讨p38丝裂素活化蛋白激酶(p38MAPK)特异性抑制剂SB203580对新生大鼠高氧肺损伤产生保护作用的机制. 方法:160只新生大鼠随机分为空气对照组、高氧肺损伤组、高氧肺损伤 SB203580组和高氧肺损伤 生理盐水组,建立模型. 作用12, 24, 72 h和1 wk后,分别处死大鼠. 取大鼠72 h的左肺以Western Blot法检测p38MAPK的表达情况,取大鼠4个时相点的右肺以ELISA法检测IL-8和TGF-β1的含量. 结果:72 h时, 高氧肺损伤组和高氧肺损伤 生理盐水组p38MAPK呈阳性表达;在这两个组中,肺组织IL-8 和TGF-β1浓度随时间延长呈持续上升趋势,在各时相点均高于空气对照组和高氧肺损伤 SB203580组(P＜0.01). 结论:SB203580能够通过阻断p38MAPK表达,进而抑制IL-8和TGF-β1表达来减轻新生大鼠高氧肺损伤.     

高氧致慢性肺疾病新生大鼠肺组织肾素-血管紧张素系统和TGF-1β的动态变化及卡托普利的干预机制

目的 观察高氧致慢性肺疾病(CLD)新生大鼠肺组织血管紧张素转换酶(ACE)、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、转化生长因子β1(TGF-β1)的动态变化及卡托普利的保护机制.方法 足月新生Wistar大鼠240只,随机分为4组,每组60只.模型组、盐水对照组及卡托普利治疗组将足月新生Wistar大鼠(连同母鼠)置于氧舱内持续吸入高浓度氧(FiO2:0.9)21 d造成高氧肺损伤模型,空气对照组吸入空气;卡托普利治疗组于生后7 d起经胃管灌服卡托普利30 mg·kg-1·d-1,盐水对照组每天经胃管灌服等量生理盐水.每组分别于实验开始后的第1,3,7,14,21 d随机各选取6只麻醉后处死.采用酶联免疫吸附法测定肺组织TGF-β1的含量,用日产7170全自动生化分析仪测定ACE活性,用放免法测定Ang II的含量.采用RT-PCR检测肺组织ACE、AngⅡ、TGF-β1 mRNA表达的动态变化并同时观察肺组织形态学变化.结果 4组肺组织ACE、AngⅡ和TGF-β1的含量及mRNA表达在实验后1,3.7 d差异无统计学意义(P>0.05);模型组、盐水对照组14 d明显升高,21 d达高峰,与空气对照组比较差异显著(P<0.05或0.01);卡托普利治疗组14和21 d与模型组、盐水对照组比较明显降低(P<0.05或0.01),但仍高于空气对照组(P<0.05).模型组、盐水对照组实验后1d肺组织形态学同空气对照组,14 d出现肺组织纤维化改变,21 d出现严重纤维化.卡托普利治疗组肺组织纤维化病变明显减轻.结论 高氧致CLD新生大鼠肺组织ACE、AngⅡ、TGF-β1含量及mRNA表达在高氧后14和21 d明显增高,同时肺组织出现纤维化改变,应用卡托普利干预后上述指标明显低于模型组及盐水对照组,肺纤维化病变明显减轻,表明卡托普利对高氧肺损伤具有一定的保护作用.     

γ-干扰素对新生大鼠高氧肺纤维化的影响

目的研究γ-干扰素(IFN-γ)对新生大鼠高氧肺损伤的影响,以观察转化生长因子transforming growth factor-β(TGF-β)在新生大鼠高氧肺纤维化中的作用.方法新生大鼠随机分为:Ⅰ组-高氧对照组,Ⅱ组-高氧 IFN-γ组,Ⅲ组-空气对照组.检测暴露7d、14d、21d及28d时各组的肺组织病理学变化,肺组织TGF-β免疫组织化学染色.结果 7d时高氧对照组表现为明显的急性炎症,肺泡间隔轻度增宽,TGF-β表达强阳性;28d时出现明显的纤维化改变;高氧 IFN-γ组与空气对照组的肺组织病理改变类似,TGF-β表达弱阳性,无明显纤维增生反应.结论 IFN-γ减轻高氧诱导的纤维增生及肺泡发育与结构异常,TGF-β在高氧诱导的肺纤维化损伤过程中可能起了重要作用.     

慢病毒介导TGF-β1 siRNA对高体积分数氧致新生小鼠肺损伤的影响

目的：探讨以慢病毒介导的小分子干扰RNA技术（siRNA）沉默转化生长因子β1（TGF-β1）基因对高体积分数氧致新生小鼠肺损伤的影响.方法：将100只新生昆明小鼠随机分为高氧组、干扰组、阴性干扰组、空气组4组,每组动物25只.分别构建含TGF-β1短发卡RNA（shRNA）及阴性对照序列的PRNAT-u6.2载体,慢病毒包装.于小鼠出生后3d时将两类慢病毒载体以鼻腔吸入法分别导入干扰组和阴性干扰组小鼠肺内.出生后4～14d时将高氧组、干扰组、阴性干扰组小鼠置于含600mL/LO2的氧箱内饲养.空气组仅置空气下饲养.出生后4,7,14,21,28d时分别随机杀取各组5只动物并取左上肺制作石蜡切片,进行组织形态学变化观察,测定放射状肺泡计数（RAC）和肺泡平均截距（MLI）.右肺组织以RT-PCR,Western Blot法分别检测TGF-β1 mRNA和蛋白表达水平.结果：经测序和双酶切鉴定,表达TGF-β1 shRNA的慢病毒载体构建成功;干扰组肺组织TGF-β1 mRNA水平在小鼠出生后4d即明显低于其他3组（P〈0.05）;出生后7,14,21,28d时干扰组TGF-β1 mRNA和蛋白表达水平均低于高氧组和阴性干扰组,但高于空气组（P均〈0.05）.出生后7,14,21,28d干扰组MLI低于高氧组和阴性干扰组而高于空气组（P均〈0.05）.RAC高于高氧组和阴性干扰组而低于空气组,差异均具有统计学意义（P〈0.05）.高氧组与阴性干扰组在各时间点上述各项指标的差异无统计学意义.结论：慢病毒载体介导的TGF-β1小分子干扰RNA对高体积分数氧吸入所致新生小鼠肺损伤具有保护作用.     

rhEPO对高氧肺损伤Akt、GSK-3β表达的影响

目的:研究重组人促红细胞生成素(recombinant human erythropoietin,rhEPO)对新生大鼠高氧肺损伤蛋白激酶B(Akt)、糖原合成酶激酶(GSK-3β)表达的影响。方法:实验采用Wistar新生大鼠120只,随机分为三组:空气对照组、高氧模型组和高氧+rhEPO治疗组,每组各40只。建立高氧模型后,空气组新生大鼠暴露于室内正常的空气中,高氧组及治疗组新生大鼠暴露于氧气浓度≥85%的高氧模型玻璃箱中。于高氧暴露实验的第1天开始,治疗组每天接受rhEPO(800 IU/kg)腹腔注射治疗,取肺组织进行W/D测定,运用Western blotting测定肺组织中Akt和GSK-3β蛋白及它们的磷酸化表达水平。结果:①肺组织W/D比值结果:高氧暴露第1天,各组W/D比值无明显变化;高氧第3天、第7天、第14天时,高氧组与空气组比较,W/D比值增加,且随着高氧时间延长W/D比值增加,治疗组与高氧组比较,W/D比值降低,差异有统计学意义(P<0.05)。②Western Blotting结果:与空气对照组比较,高氧组p-Akt/Akt、GSK-3β、Bcl-2/Bax表达水平明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);与高氧组比较,治疗组中p-Akt/Akt、p-GSK-3β/p-GSK-3β/GSK-3β、Bcl-2/Bax蛋白表达水平显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:rhEPO通过增强Akt、GSK-3β蛋白的表达,抑制肺细胞凋亡,对高氧肺损伤起保护作用。     

转化生长因子-β_1在新生大鼠高浓度氧致肺损伤中的作用研究

目的 观察应用外源性抗转化生长因子-β1(TGF-β1)抗体作用下TGF -β1在新生鼠高浓度氧(高氧,>95%O2)致肺损伤的表达.方法 将足月SD新生大鼠随机分为3组:空气对照组(Ⅰ组),高氧(>95%O2)组(Ⅱ组),高氧(>95%O2)+抗TGF-β1抗体0.4mg/kg组(Ⅲ组).每组20只,观察及检测高氧暴露3、7、14和28d时各组动物肺组织病理改变、TGF-β1免疫组织化学染色.结果 Ⅱ组3和7d时表现为明显的急性炎症改变,肺组织水肿、渗出、出血、肺泡间隔轻度增厚,14d时急性炎症减轻,而肺组织中TGF-β1表达呈强阳性;28d时出现明显的胶原沉积,形成纤维化;Ⅲ组3和7d时仍有轻度炎症反应,14和28d无明显成纤维细胞增生及胶原生成,未形成肺纤维化,Ⅲ组各时相点TGF-β1的表达明显减弱,与Ⅰ组比较差异无统计学意义.结论 新生鼠持续吸入高氧后可导致急、慢性肺损伤.高氧暴露可刺激肺部产生过量的TGF-β1,提示TGF-β1在肺纤维化过程中起重要作用;高氧暴露时给予外源性抗TGF-β1抗体对新生鼠高氧暴露有明显保护作用,可减轻高氧急性肺损伤,能有效阻断高氧肺纤维化损伤的发生、发展,从而减轻肺纤维化损伤.     

氧化苦参碱对新生鼠高氧性肺损伤的保护作用及机制探讨

目的观察高氧致慢性肺疾病（CLD）新生大鼠肺组织转化生长因子β1（TGF？β1）、Smad3、Smad7及结缔组织生长因子（CTGF）水平的动态变化,以探讨氧化苦参碱对高氧性肺损伤的保护作用及机制。方法新生Wistar大鼠128只随机分为空气对照组、氧化苦参碱治疗组、盐水对照组和高氧组,每组各32只,高氧组、盐水对照组和氧化苦参碱治疗组的新生Wistar大鼠（连同母鼠）生后即置于氧舱内,持续吸入高浓度氧（FiO2=0.90）21 d,造成高氧性肺损伤模型;空气对照组吸入空气。氧化苦参碱治疗组于生后当日始每日腹腔注射氧化苦参碱（100 mg/kg）,盐水对照组每日腹腔注射等量生理盐水。每组分别于实验开始后第3、7、14、21天随机选取8只麻醉后处死。肺组织采用免疫组化方法检测TGF？β1、Smad3、Smad7及CTGF蛋白的表达并同时观察肺组织形态学变化。结果与空气对照组比较,高氧组、盐水对照组肺组织TGF？β1、Smad3、CTGF蛋白表达在实验后第14天明显升高,第21天达高峰（P〈0.05或P〈0.01）,氧化苦参碱治疗组上述指标与高氧组、盐水对照组比较明显降低（P〈0.05或P〈0.01）,Smad7蛋白表达明显增多（P〈0.01）。高氧组、盐水对照组第14天肺组织间质细胞增多,出现纤维化改变。第21天正常肺泡结构消失,肺组织出现严重的纤维化。氧化苦参碱治疗组肺组织纤维化病变明显减轻。结论氧化苦参碱干预抑制了高氧致CLD新生大鼠肺组织TGF？β1、Smad3、CTGF蛋白表达,增加Smad7蛋白表达,减轻了肺纤维化病变,这可能是氧化苦参碱对高氧性肺损伤具有保护作用的机制之一。     

宫内致敏及生后高氧暴露对新生小鼠TGF-β1及α-SMA表达的影响

目的观察宫内炎性致敏及生后高氧暴露新生小鼠转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)在新生鼠肺组织的表达情况,探讨支气管肺发育不良(Bronchop-ulmonary dysplasia,BPD)发病机制。方法新生小鼠按照随机数字表法分为LPS组+空气组、LPS+高氧组、生理盐水+空气对照组、生理盐水+高氧组,应用HE染色、放射性肺泡计数(RAC)、免疫组织化学、免疫荧光化学和荧光定量PCR技术,讨论生后第1、3、7、10、14天肺组织的病理改变,检测TGF-β1、α-SMA蛋白和基因mRNA表达水平。结果LPS+高氧组和生理盐水+高氧组出现肺发育障碍,肺泡逐渐融合,RAC逐渐降低,与生理盐水+高氧组比较,LPS+高氧组降低明显(P<0.05)。②LPS+高氧组和生理盐水+高氧组第3天后肺组织TGF-β1蛋白表达明显高于LPS组+空气组和生理盐水+空气组(P=0.000),随着暴露时间的延长进行性增高。③LPS+高氧组和生理盐水+高氧组7d后肺组织α-SMA蛋白表达明显高于LPS组+空...     

内毒素所致肺损伤纤维化时转化生长因子-β1/Smad2信号通路的变化

目的 观察内毒素所致肺损伤早期纤维化大鼠转化生长因子-β1(TGF-β1)/Smad2信号通路的变化.方法 24只SD大鼠随机等分为对照组(C组)、内毒素组(LPS组).采用气管内联合腹腔注射内毒素法复制肺损伤早期纤维化模型.实验结束前留取标本测定肺血管通透性(EB值)及肺湿/干重量比(W/D);HE染色观察肺组织病理学改变;Van Gieson染色检测肺组织胶原纤维表达;用免疫组化法和RT-PCR法测定肺组织TGF-β1蛋白及mRNA表达,用免疫印迹法测定肺组织Smad2蛋白的表达.结果 与C组比较,LPS组EB值及W/D值明显升高(P<0.01);LPS组肺组织中胶原纤维及TGF-β1蛋白呈阳性表达,TGF-β1 mRNA和Smad2蛋白表达均较C组明显上调(P<0.01).结论 内毒素所致肺损伤早期纤维化大鼠TGF-β1/Smad2信号被激活,与肺毛细血管通透性、肺损伤纤维化的严重程度密切相关,可能是内毒素所致肺损伤早期纤维化的重要机制之一.