应用促性腺激素释放激素拟似剂治疗儿童特发性性早熟的临床研究

目的 :观察促性腺激素释放激素拟似剂 (Gn RH- a)对儿童特发性性早熟各项生长指标的影响。方法 :对 13例特发性性早熟儿童给予 Gn RH- a5 0～ 80 μg/ kg,4周注射一次 ,治疗 6～ 15个月 (平均治疗 9.6个月 )。对比治疗前后身高、骨龄、预测身高及促黄体生成素 (L H)、雌二醇 (E2 )、促卵泡激素 (FSH)等指标变化。结果 :身高由 (137.6 4± 9.35 ) cm增至 (14 8.0± 6 .1) cm(P<0 .0 1)。骨龄由 (11.2 4± 1.5 )岁增至 (12 .15± 0 .87)岁 (P>0 .0 5 )。最高身高预测值从 (14 9.5 3± 4 .6 6 ) cm增至 (15 7.2± 1.98) cm (P<0 .0 1)。L H、FSH较治疗前明显降低 (P<0 .0 5 )。结论 :Gn RH- a可明显抑制第二性征发育 ,使体内 L H、 FSH降至青春前期水平 ,有效改善终身高且无明显副作用     

促性腺素释放激素拟似剂对大鼠生长的影响及机制

目的　观察抗早熟药物-促性腺素释放激素拟似剂(GnRHa)对大鼠身长增长的影响,并探讨药物作用的机制。方法　选择正常青春启动期雌性SD大鼠60只(4 周龄),随机分为 GnRHa注射组和空白对照组,每周观测身长、体重,观察阴门开启情况;用逆转录和荧光定量 PCR的方法,从 mRNA转录水平分析各组动物下丘脑 GH IGF轴相关激素及其受体表达水平的变化。结果　(1) 空白组大鼠阴门至 6 周龄全部开启,而 GnRHa组至 10 周龄全部开启;GnRHa组青春期生长速度较空白组减慢,但两组成年期身长无显著差异;(2) 用药期间,两组均未影响下丘脑 GH IGF轴中促生长激素释放激素及其受体(GHRH、GHRHR)的 mRNA转录水平,但 GnRHa 组生长抑素(SRIH) mRNA转录水平增高;生长激素(GH)及其受体(GHR)、胰岛素样生长因子1(IGF-1)及其受体(IGF-1R)mRNA转录水平降低。结论　(1) GnRHa可延缓大鼠性成熟发育,同时减慢大鼠青春期生长速度,但对成年期身长无影响;(2) 其作用主要通过影响下丘脑 GH IGF轴中SRIH、GH、GHR、IGF-1和 IGF-1R而实现。     

女性青春期和围绝经期促性腺激素释放激素分泌特征

女性性周期是受中枢神经系统调节的、极为复杂的下丘脑-垂体-性腺（HPG）内分泌系统控制的过程。下丘脑-垂体-性腺轴既能通过自上而下的直接控制,下丘脑促性腺激素释放激素控制垂体促性腺激素释放,垂体促性腺激素又控制卵巢激素分泌,同时又通过各种反馈和负反馈形式来互相促进和互相制约,维持其正常生理功能。     

恐惧应激对大鼠小肠促性腺激素释放激素受体的影响

目的：观察恐惧应激状态下SD大鼠小肠黏膜促性腺激素释放激素（GnRH）受体的分布和表达变化。方法：建立SD大鼠恐惧应激模型,分别取急性应激组（2~12 h）、慢性应激组（1 d~4周）和相应对照组的小肠。用免疫组化和Western blot法检测GnRH受体在各实验组大鼠小肠中的分布和表达变化。结果：免疫组化显示：急性应激组、慢性应激组和相应对照组的小肠黏膜层均呈GnRH受体免疫反应阳性,无明显差异。阳性反应物质定位于细胞膜和细胞质,细胞核呈阴性。Western blot结果表明：在急性应激状态下,GnRH受体表达有增多的趋势,但与相应对照组相比无显著性差异（P〉0.05）;慢性应激组与其相应对照组相比,GnRH受体表达明显增加（P〈0.05）。整个慢性应激过程中,GnRH受体表达增多持续1~4 d。1~3周时,GnRH受体表达降低,3~4周时又有所回升,并接近慢性应激相应对照组。结论：随着恐惧应激时间的延长,GnRH受体在小肠中表达增加。提示GnRH在恐惧应激中,对消化功能的影响具有潜在的生理调节功能。     

斑马鱼促性腺激素释放激素基因的克隆与表达

目的克隆斑马鱼促性腺激素释放激素（GnRH）基因,构建重组质粒pQE30－GnRH并获得表达蛋白。方珐从斑马鱼脑组织提取总RNA,应用RT～PCR方法获得斑马鱼GnRHcD—NA。将该cDNA插入质粒pQE30中,并使其在大肠杆菌RB791中表达。经IPTG诱导后SDS—PAGE电泳检测蛋白的表达情况。结果斑马鱼GnRHcDNA长为207bp,编码的GnRH前体为69个氨基酸残基。与鲤鱼、鲫鱼、拟鲤、黑头软口鲦等淡水鲤科鱼类的氨基酸序列同源性比较,分别为74．4％,69．8％,73．3％和73．3％。电泳结果显示一新的分子量约为14．4kDa的特异蛋白带。结论本研究所克隆的斑马鱼GnRH基因属于GnRH－Ⅱ。构建斑马鱼GnRH原核表达质粒不仅获得大量的GnRH蛋白,还可对该蛋白做进一步分离纯化以及生物活性方面的研究。     

促性腺激素释放激素对大鼠胰腺细胞内cAMP含量的影响

目的:通过观察GnRH类似物(GnRHR激动剂和拮抗剂)对大鼠胰腺细胞内cAMP含量的影响,了解cAMP在GnRHR介导的信号转导通路中的作用.方法:以不同浓度GnRH类似物对原代培养的大鼠胰腺细胞进行刺激,借助放免法测定观察在体外条件下GnRH类似物对大鼠胰腺细胞内cAMP含量的影响.结果:在量效实验中,各浓度GnRHR激动剂均能使细胞内cAMP含量增加,其中10<'-8>～10<'-5>mol/L中4个浓度组最为明显,与对照组相比有非常显著差异(P<0.01).应用GnRHR拮抗剂(10<'-6>mol/L)后明显抑制了激动剂组增高cAMP含量的作用,其cAMP水平与对照组比较没有显著差异(P>0.05).在时效实验中,应用10<'-7>mol/L Gn-RHR激动剂刺激细胞,从10 min起细胞内cAMP含量即开始增多,到1 h达到峰值,以后逐渐下降,8 h后恢复到原水平.结论:由以上结果推测cAMP可能是GnRHR介导的信号转导通路中的信号分子之一.     

乙醇对大鼠下丘脑促性腺激素释放激素神经元功能的影响

目的 研究乙醇对雄性大鼠下丘脑促性腺激素释放激素神经元(GnRH neurons)合成和释放激素功能的影响.方法 健康Wistar雄性大鼠40只,随机分为4组:对照组、低浓度乙醇组、中浓度乙醇组和高浓度乙醇组.在灌服不同浓度的乙醇后2h,采用酶法检测血中乙醇浓度(blood alcohol concentration,BAC);免疫组织化学法观察下丘脑促性腺激素释放激素(Gonadotropin-releasing hormone,GnRH)神经元密度和染色反应的变化.结果 与对照组相比,随着灌胃乙醇浓度的升高,各实验组大鼠BAC值逐渐升高,并且均已达到乙醇中毒的标准(500～1000mg/L);高浓度乙醇组大鼠下丘脑内GnRH阳性神经元密度和染色强度较对照组明显减小(P<0.01),中、低浓度乙醇组下丘脑内GnRH阳性神经元密度和染色强度较对照组变化不显著(P>0.05).结论 急性乙醇中毒雄性大鼠,下丘脑神经递质GnRH神经元合成和分泌功能受抑,这可能与乙醇对生殖行为的抑制有关.     

促性腺激素释放激素系统与妇科肿瘤的研究进展

促性腺激素释放激素(GnRH)是下丘脑分泌的十肽激素,是神经内分泌调节系统相互联系的重要信号分子,对生殖调控具有重要意义.GnRH及其受体在多种人类恶性肿瘤组织中有表达,GnRH通过其受体介导调控肿瘤细胞增殖.GnRH及其人工合成的GnRH类似物有明显抗肿瘤细胞增生的作用,它拮抗生长因子促肿瘤细胞有丝分裂、抑制肿瘤细胞增殖的分子机制,可能与生长因子介导的有丝分裂信号传导通路有关联.GnRH通过抑制生长因子受体及其mRNA表达,抑制生长因子受体诱导的酪氨酸激酶活化,激活磷酸酪氨酸蛋白磷酸酶,最终抑制转录因子活性,抑制肿瘤细胞有丝分裂.GnRH对于肿瘤细胞与垂体细胞的作用不同,与GnRHR信号传导机制不同有关,GnRH抗肿瘤细胞增生的作用是GnRHR通过与Gαi偶联进行的.     

促性腺激素释放激素系统与妇科肿瘤的研究进展

促性腺激素释放激素(GnRH)是下丘脑分泌的十肽激素,是神经内分泌调节系统相互联系的重要信号分子,对生殖调控具有重要意义。GnRH及其受体在多种人类恶性肿瘤组织中有表达,GnRH通过其受体介导调控肿瘤细胞增殖。GnRH及其人工合成的GnRH类似物有明显抗肿瘤细胞增生的作用,它拮抗生长因子促肿瘤细胞有丝分裂、抑制肿瘤细胞增殖的分子机制,可能与生长因子介导的有丝分裂信号传导通路有关联。GnRH通过抑制生长因子受体及其mRNA表达,抑制生长因子受体诱导的酪氨酸激酶活化,激活磷酸酪氨酸蛋白磷酸酶,最终抑制转录因子活性,抑制肿瘤细胞有丝分裂。GnRH对于肿瘤细胞与垂体细胞的作用不同,与GnRHR信号传导机制不同有关,GnRH抗肿瘤细胞增生的作用是GnRHR通过与Gαi偶联进行的。     

大鼠垂体促性腺激素细胞内cAMP的改变对LHβ mRNA表达的影响

目的分析大鼠LHβ mRNA表达的促性腺激素释放激素(GnRH)受体后信号转导机制。方法将体外培养的大鼠腺垂体促性腺激素(GTH)细胞用cAMP的兴奋剂FSK或抑制剂SQ22536处理后,再用高频GnRH脉冲刺激,然后用实时荧光定量PCR法测定细胞LHβ mRNA的Ct值,并与空白组比较。结果LHβ mRNA的Ct值随着GTH细胞cAMP含量的增高而显著降低,随着cAMP含量的降低而显著增高。结论cAMP是高频GnRH脉冲刺激所引起的LHβ mRNA表达的受体后的信号转导途径。     

与血管性痴呆大鼠学习记忆力相关的基因表达变化

血管性痴呆（vascular dementia,VD）是由各种脑血管因素（缺血或出血及急慢性缺氧性脑血管病）导致脑组织损害而引起的获得性智能损害综合征,以记忆、认知功能缺损为主,可伴有语言、视空间技能及人格障碍。近年来VD的发病率及病死率逐年上升,在世界范围内已成为继心脏病、癌症之后处第3位的致死性疾病。随着社会的进步和科技的发展,人类的平均寿命提高,人口老龄化已经成为全世界面临的重大社会和医学问题,严重威胁老年人的生命和生存质量,而且中国的VD发病呈逐年上升的趋势。近年来,诸多学者对VD对于记忆能力的影响做了各方面的研究,主要对与VD大鼠记忆力相关的凋亡相关基因、蛋白类、相关因子类等进行综述。     

The role of sexual related Y gene detection in the diagnosis of patients with gonadal dysgenesis

Objective To clarify the role of sexual related Y (SRY) gene detection in the diagnosis of gonadal dysgenesis.Methods Sixteen cases of gonadal dysgenesis were included in this study: 5 with androgen insensitivity syndrome, 1 with 17-α-hydroxylase deficiency, 4 with true herm aphrodite, 2 with 45,X/46,XY gonadal dysgenesis, 1 with 45,X gonadal dysgenesis, 1 with XY pure gonadal dysgenesis, 1 with testicular regression, and 1 XY fema le who gave birth to a normal baby. SRY gene was detected by using polymerase c hain reaction (PCR) in blood and gonad samples and by direct sequencing of the S RY motif. Results Among the 16 cases, 15 were blood SRY positive, among which 13 (86.7%) showed t he presence of testicular tissue, and 2 showed ovaries without testicular tissue . One SRY negative case showed the presence of testicular tissue. In 3 cases, SRY detection in gonadal tissue correlated with pathological findings but not wi th blood karyotype. The correlation between peripheral blood SRY and the pathol ogy of the gonads was 81.25% and the correlation between the presence of periph eral blood Y chromosome and pathology of the gonads was 68.75%. Sequencing of the SRY motif in an XY female who gave birth to a normal baby showed no mutatio n.Conclusions SRY detection is more sensitive and specific than blood karyotype in the predic tion of the presence of testicular tissue. Peripheral blood karyotype does not necessarily reflect gonadal type. There may be testicular related factors other than the SRY gene.     

大鼠退变颈椎间盘组织基因表达谱的研究

目的 :研究正常和退变模型大鼠颈椎间盘的基因表达谱 ,分析大鼠颈椎间盘基因表达水平的变化 ,用于指导诊断和治疗。 方法 :建立动静力失衡性大鼠颈椎间盘退变模型 ,从造模后 5个月对照组和模型组大鼠颈椎间盘中抽提 m RNA ,经逆转录分别用 cy3、cy5荧光标记 ,获得两组动物椎间盘 c DNA的探针 ,再与 5 12 c DNA基因表达谱芯片杂交 ,结果由激光扫描仪扫描并用软件进行图像分析、标准化处理、ratio值分析、聚类分析。结果 :共筛选出 18条表达有差异的基因 ,11条基因表达量明显下降 (ratio<0 .4 ) ,其中细胞信号转导类有 4条 ;7条基因表达量明显上升 (ratio>2 .5 )。这些基因在颈椎间盘退变的表达模式与其他的报道类似。 结论 :退变大鼠椎间盘基因表达的调节发生变化 ,细胞内外的信号转导参与了椎间盘退变过程     

大鼠反流性食管炎和Barrett食管基因表达谱的比较

目的:研究Barrett食管(BE)和反流性食管炎(RE)组织基因表达谱的差异. 方法: 建立胃十二指肠混合食管反流SD大鼠动物模型,用含有4096条双点大鼠cDNA芯片分别比较BE,RE和正常食管上皮(NC) mRNA表达情况. 结果: 芯片杂交差异表达在3倍以上的基因,RE和NC杂交芯片232项,其中表达上调的基因90条,表达下调的基因142条;BE和NC杂交芯片448项,其中表达上调的基因312条,表达下调的基因136条;相对于RE,BE表达上调的基因214条,表达下调的基因86条. 结论: BE和RE在基因表达水平上存在差异.     

Human vascular endothelial growth factor cDNA cloning and expression in osteoblasts

Vascularendothelialgrowth factor(VEGF) ,al-so known as vascular permeability factor,is one ofthe mostimportant angiogenic factor in vivo.Recentresearch have indicated that gene transfer of nakedDNA encoding for VEGF in vivo was a potentialtreatment for myocardial and hindlimb ischemia[1,2 ] .Formation of new capillaries,a critical component oftissue growth and repair,is a recognized process inthe development,formation and remodeling of bone.To make use of VEGF gene therapy on bone diseas…     

人血管内皮细胞生长因子165基因真核表达载体的构建及其在大肠杆菌的表达

目的　获得人血管内皮生长因子 (hVEGF165)cDNA ,构建真核表达载体 ,并研究其在大肠杆菌中的表达情况。方法　采用PCR方法 ,从HL6 0细胞中扩增出hVEGF165cDNA ,将其克隆至 pcDNA3 真核表达载体上 ,构建成为 pCD hVEGF165重组质粒。将重组质粒转染感受态的大肠杆菌BL2 1(DE3)中进行表达 ,用Westernblot检测表达产物。结果　经酶切鉴定及基因测序证实hVEGF165cDNA基因克隆成功 ,并建立了高效表达的 pCD hVEGF165重组质粒。Westernblot检测表明 ,组建了具有高效表达hVEGF165的大肠杆菌菌株。结论　成功地克隆和表达出了hVEGF165基因 ,为进一步建立VEGF转基因动物模型 ,研究其在视网膜新生血管性疾病中的应用奠定了基础     

Insulin/FoxO1/Pdx1/MafA基因在宫内发育迟缓大鼠胰腺发育中的表达

目的:探讨宫内发育迟缓(intrauterine growth retardation,IUGR)大鼠在胚胎期和新生后Insulin/FoxO1/Pdx1/MafA基因的表达?方法:清洁级SD大鼠,雌雄鼠1∶3合笼交配,孕鼠按受孕顺序随机分为2组(IUGR组和对照组)?IUGR组自妊娠第1天至分娩给予正常对照组饲料进食量的半量;对照组妊娠全程任意摄取饲料;应用显微分离及提取技术取大鼠胚胎发育第14.5天?第19.5天及新生大鼠胰腺组织;采用HE染色,光镜观察胰腺不同发育时期形态学变化;使用RT-PCR技术检测胚胎发育第14.5天,第19.5天及新生大鼠胰腺Insulin/FoxO1/Pdx1/MafA基因的表达情况?结果:①与对照组大鼠相比,IUGR组胰腺在发育各期均有形态学上的改变,表现为组织松散,结构不清晰,胰岛数量及面积减少;②Insulin/FoxO1/Pdx1/MafA基因全程均有表达;③Insulin?MafA基因随胎龄的增长表达量增多,与对照组相比,IUGR组Insulin基因表达无明显差异(P > 0.05),而MafA基因表达较之减少(P < 0.05);④FoxO1?Pdx1基因均在胚胎早期表达较多,随胎龄的增长表达量下降,且与对照组相比,IUGR组Pdx1基因表达无明显差异(P > 0.05),FoxO1表达较对照组减少(P < 0.05)?结论:宫内发育迟缓对胰腺发育相关基因Insulin/FoxO1/Pdx1/MafA的表达有影响?     

胰岛素样生长因子Ⅰ在骨赘发生过程中的基因表达

目的 研究胰岛素样生长因子I在骨关节炎骨赘软骨发生过程中的基因表达特点。方法25例接受全膝关节置换术的原发性骨关节炎骨赘标本为研究对象,3例正常成人股骨髁软骨标本作对照。制备石蜡切片,行HE和甲苯胺蓝染色及I型胶原、Ⅱ型胶原（IIa和IIb）、X型胶原分子的免疫组化染色。根据骨赘中主要组织的细胞形态学和各种胶原分子等的表达特点,共获得5种主要不同类型（I～V）的骨赘组织,然后分别进行胰岛素样生长因子I的免疫组化和原位杂交染色。结果定量分析后进行单因素方差分析。结果免疫组化和原位杂交方法均显示胰岛素样生长因子I主要在I和Ⅱ类骨赘表达明显高于Ⅳ和V类骨赘（14．6±3．8VS7．7±3．5;14．6±3．8VS6．0±1．9;14．2±4．6VS5．4±2．1;14．2±4．6VS2．2±1．5;P〈0．05）。I和Ⅱ类骨赘以及Ⅳ和V类骨赘之间差异无统计学意义。结论胰岛素样生长因子I-mRNA主要在骨赘形成的早期明显表达;其对骨关节炎骨赘的发生可能起着始动作用。     

Gene Expression Profile of Pulmonary Tissues in Different Phases of Lung Ischemia-reperfusion Injury in Rats

In order to provide us new clues to induce some endogenous protective molecular mechanisms, the changes in gene expression profile induced by ischemia-reperfusion in pulmonary tissues of rats were investigated and the dynamic mechanism of pulmonary ischemia-reperfusion injury was elucidated. Thirty male Wistar rats were randomly divided into 6 groups： 5 ischemia-reperfusion （I/R） groups （I/R 0-h, I/R 1-h, I/R 3-h, I/R 6-h, I/R 24-h） and control group （n=5 in each）. An in situ ischemia-reperfusion lung injury rat model was established by occluded hilus of lung. The RatRef-12 Expression Beadchip （22 226 gene probes per array） was used to analyze the pattern of gene expression in all groups. The results showed that 648, 340, 711, 1279 and 641 genes were differentially expressed in I/R 0-, 1-, 3-, 6- and 24-h groups respectively. The differentially expressed genes were classified as following 7 functional categories： cytokine, adhesion molecule, growth factor and apoptosis-related factor, oxidation and antioxidation molecule, metabolic enzyme, ion channel and aquaporin, signal transduction molecule. It was suggested that gene chip technology was an effective and quick method for screening differentially expressed genes. Many differentially expressed genes with different functions interacted each other to result in pulmonary ischemia-reperfusion injury.