人类巨细胞病毒感染对人胚肺细胞HOXB1,HOXB5,HOXB6及HOXB9基因表达的影响

目的 :研究人胚肺 (HEL)细胞HOXB1,HOXB5 ,HOXB6及HOXB9基因的表达状态及人类巨细胞病毒(HCMV)感染对上述基因表达的影响。方法 :采用半定量逆转录 -聚合酶链反应 (RT -PCR)技术。结果 :①HEL细胞表达HOXB5和HOXB6 ,但不表达HOXB1和HOXB9;②HCMV感染后 ,HEL细胞HOXB6基因的表达上调 ,且被HCMV诱导表达HOXB9T ,而HOXB5基因的表达无明显改变 ,HOXB1基因仍旧不表达 ;③全反式维甲酸 (ATRA)能上调HCMV感染后HOXB9基因的表达 ,但对HCMV感染晚期HOXB6基因的表达有抑制作用。结论 :HCMV能诱导HOXB6和HOXB9基因表达异常 ,这可能在先天性HCMV感染导致胚胎发育畸形中起重要作用     

人类巨细胞病毒感染对神经胶质瘤细胞HOXB5，HOXB6，HOXB7及HOXB8基因表达的影响

以半定量RT－PCR技术检测经人类巨细胞病毒（HCMV）感染和／或全反式维甲酸（ATRA）处理的神经胶质瘤细胞U251株的HOXB5,HOXB6,HOXB7和HOXB8的相对表达水平,以探讨HCMV致畸的可能机制。结果示,未经处理的U251细胞不表达HOXB5,HOXB6及HOXB8,但表达HOXB7,HCMV感染和／或ATRA处理后,细胞仍不HOXB5及HOXB6,但在第二代时均表达HOXB8,尤以HCMV和ATRA共同处理后更明显,第三代后HOXB8的表达恢复正常,HCMV和／或ATRA处理细胞后,HOXB7的表达在第一代即上调,第二代,第三代其表达稍下降,至第四代时表达又上调,表明HCMV致畸作用可能是通过诱导HOX基因的表达进而调节其它基因的异常表达而实现。     

HCMV感染对HEL细胞HOXB2,HOXB3,HOXB4及HOX8基因表达的影响

目的 :研究人胚肺 (HEL)细胞HOXB2 ,HOXB3,HOXB4及HOXB8基因的表达状态及人类巨细胞病毒(HCMV)感染对HEL细胞HOXB2 ,HOXB3,HOXB4及HOXB8基因表达的影响。方法 :采用半定量逆转录 -聚合酶链反应 (RT -PCR)技术。结果 :HEL细胞表达HOXB2 ,HOXB3,HOXB4及HOXB8;HOXB2基因于HCMV感染后 15h表达增加 ,4 8h达高峰 ,随后回落 ,至 12 0h再达高峰。HEL细胞HOXB3和HOXB4基因的表达在HCMV感染后不同时间无明显变化。HOXB8基因于HCMV感染后 15～ 4 8h表达轻微下调 ,72h回升 ,96h表达增加 ,12 0h达高峰 ;ATRA能轻微上调HCMV感染晚期HEL细胞HOXB8基因的表达 ,但对HCMV感染后HOXB2和HOXB4基因的表达无明显调节作用。结论 :HCMV能诱导HOXB2及HOXB8基因表达异常 ,这可能在先天性HCMV感染导致胚胎发育畸形中起重要作用。     

人类巨细胞病毒感染对神经胶质瘤细胞HOXB5,HOXB6,HOXB7及HOXB8基因表达的影响

以半定量RT -PCR技术检测经人类巨细胞病毒 (HCMV)感染和 /或全反式维甲酸 (ATRA)处理的神经胶质瘤细胞U2 5 1株的HOXB5 ,HOXB6 ,HOXB7和HOXB8的相对表达水平 ,以探讨HCMV致畸的可能机制。结果示 ,未经处理的U2 5 1细胞不表达HOXB5 ,HOXB6及HOXB8,但表达HOXB7;HCMV感染和 /或ATRA处理后 ,细胞仍不表达HOXB5及HOXB6 ,但在第二代时均表达HOXB8,尤以HCMV和ATRA共同处理后更明显 ;第三代后HOXB8的表达恢复正常。HCMV和 /或ATRA处理细胞后 ,HOXB7的表达在第一代即上调 ,第二代、第三代其表达稍下降 ,至第四代时表达又上调。表明HCMV致畸作用可能是通过诱导HOX基因的表达进而调节其它基因的异常表达而实现。     

人类巨细胞病毒感染对U251细胞HOXB1基因表达的影响

目的：通过研究人神经胶质瘤U251细胞株的HOX基因表达状态及人类巨细胞病毒(HCMV)感染对U251细胞HOXBI基因表达的影响，以探讨HCMV致畸的可能机制。方法：应用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术。结果：U251细胞表达HOXBI基因；HCMV感染后，U251细胞HOXBI基因表达明显上调；ATRA能显著上调HCMV感染后U251细胞HOXBI基因的表达。结论：HCMV感染能诱导U251细胞HOXBI基因表达上调，HCMV有可能通过调控HOXB基因表达异常引起胚胎发育畸形。     

人类巨细胞病毒对人胚肺细胞HOX基因表达的影响

应用半定量RT PCR技术研究人胚肺 (HEL)细胞HOX基因的表达状态及人类巨细胞病毒 (HCMV)感染对HEL细胞HOX基因表达的影响。结果发现 :HEL细胞表达HOXB7基因 ;HCMV感染后 ,其表达上调 ;用全反式维甲酸 (ATRA)处理HEL细胞 ,HCMV对HOXB7基因表达的上调作用更强。提示HCMV可能通过影响HOXB7基因的表达导致胚胎发育畸形。 更多还原     

HCMV感染对人胚肺成纤维细胞MCM2和MCM8表达的影响

目的研究HCMV感染对人胚肺成纤维（HEL）细胞微小染色体维持蛋白2（MCM2）和微小染色体维持蛋白8（MCM8）表达的影响，探讨HCMV感染可能的发病机制。方法用HCMV感染血清饥饿法同步化的HEL细胞。HCMV感染的HEL细胞作为HCMV感染组，同时设非感染组为对照组。于HCMV感染后12、24、48、72和96h收获细胞，提取总RNA，采用半定量逆转录-聚合酶链反应技术（RT-PCR）检测HEL细胞MCM2和MCM8 mRNA的表达水平。结果12、24、48、72、96h时2组细胞MCM2和MCM8 mRNA表达水平差异均有显著性（P均〈0.05），12h和24h时HCMV感染组表达水平低于非感染组，48、72、96h时HCMV感染组表达水平明显高于非感染组。非感染组MCM2、MCM8 mRNA表达水平的高峰出现在感染后24h，而HCMV感染组表达水平的高峰则出现在感染后48h，较之有明显滞后。结论HCMV能诱导HEL细胞MCM2及MCM8 mRNA表达异常．使MCM2及MCM8 mRNA表达水平迟滞，这可能是HCMV感染阻滞宿主细胞周期的发病机制之一。     

HCMV感染对HEL细胞MCM装载因子Cdc6的影响

目的研究人类巨细胞病毒（human cytomegalovirus，HCMV）感染对人胚肺成纤维（human embryonic lung fibroblastic，HEL）细胞的MCM装载因子Cdc6表达的影响，从分子水平上探讨HCMV的发病机制。方法用血清饥饿法同步化HEL，细胞于G0／G1期，用HCMV感染同步化的HEL细胞作为感染组，同时设模拟感染组为对照组。于感染后12、24、48、72和96h收获细胞，提取总的RNA，采用半定量逆转录一聚合酶链反应（RT-PCR）技术检测Cdc6mRNA的表达水平。结果12、24、48、72和96h两组HEL细胞Cdc6mRNA表达水平均有显著性差异（P〈0．05），12、24和48h时感染组较模拟感染组明显增加，72h和96h时模拟感染组较感染组明显升高。感染组在感染后12h时Cdc6mRNA表达水平最高，后逐渐下降，至72h时达最低水平，96h时又稍有回升；模拟感染组在感染12h时Cdc6mRNA表达水平最高，后逐渐下降,至48h时达最低水平，72h时后开始回升，96h时继续回升。结论HCMV诱导Cdc6mRNA过度表达，导致Cdc6的积聚，最终将影响细胞周期的进程。     

HOXB1基因转染对HL—60细胞视黄酸代谢和α—干扰素表达 …

目的　探讨同源盒基因B1(HOXB1)转染对HL 6 0细胞视黄酸代谢和α 干扰素表达的影响。方法　采用脂质体介导的质粒转染、RT PCR及高效液相色谱 (HPLC)分析等方法进行分析检测。结果　2 .5× 10 -7mol/L全反式视黄酸 (ATRA)能抑制HOXB1转染及非转染HL 6 0细胞的增殖 ,HOXB1的高表达能明显减弱ATRA对HL 6 0细胞的增殖抑制作用 ;HPLC分析显示 ,转染细胞ATRA的代谢减慢 ;ATRA处理能诱导HOXB1转染及未转染HL 6 0细胞IFNα表达 ,加用外源性IFNα能上调ATRA处理HL 6 0细胞IFNα基因表达。结论　HOXB1转染使HL 6 0细胞ATRA代谢受抑 ,ATRA增殖抑制作用减弱 ,外源性IFNα能上调HL 6 0细胞IFNα表达     

体外人巨细胞病毒感染与核转录因子AP-1活化及原癌基因c-jun表达的研究

目的　研究人胚肺成纤维 (HEL)细胞感染人巨细胞病毒 (HCMV)后 ,转录激活蛋白 1(AP 1)活化和原癌基因c junmRNA表达的时序性变化 ,探讨其在HCMV感染中的作用。方法　采用原位杂交法检测c junmRNA的表达 ,凝胶电泳迁移率改变试验 (EMSA)检测AP 1活性。结果　HEL细胞感染HCMV后 15min ,c junmRNA即有阳性表达 ,30～ 6 0min达高峰 (P <0 0 1) ,以后逐渐下降 ,正常对照组HEL细胞无c junmRNA表达。HCMV感染后AP 1亦迅速被活化 ,至 2h达高峰 (P <0 0 1) ,其后有所下降 ,维持于一定水平。结论　HEL细胞感染HCMV后 ,c junmRNA表达迅速增加 ,AP 1活化。提示HCMV可能通过刺激原癌基因过度表达而参与细胞的信号传导 ,以干扰细胞增殖和分化的调控 ;AP 1活化为早期病毒基因有效表达所必需 ,并可启动一系列前炎性细胞因子的基因转录与蛋白合成。     

人类巨细胞病地人胚肺细胞HOX基因表达的影响

应用半定量ＲＴ－ＰＣＲ技术研究人胚肺（ＨＥＬ）细胞ＨＯＸ基因的表达状态及人类巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）对ＨＥＬ细胞ＨＯＸ基因表达的影响。结果发现：ＨＥＬ细胞表达ＨＯＸＢ７基因;ＨＣＭＶ感染后,其表达上调;用全反式维甲酸（ＡＴＲＡ）处理ＨＥＬ细胞,ＨＣＭＶ对ＨＯＸＢ７基因表达的上调作用更强。提示ＨＣＭＶ可能通过影响ＨＯＸＢ７基因的表达导致胚胎发育畸形。     

人巨细胞病毒感染对小鼠脑组织同源盒基因表达的影响

目的研究小鼠脑组织同源盒基因（homeobox gene，Hox）的表达状态及人类巨细胞病毒（human cytomegalovims，HCMV）感染对小鼠脑组织Hox基因表达的影响，以探讨HCMV致畸的分子机制。方法昆明系小鼠48只，随机分为实验对照组（16只）和病毒感染组（32只），病毒感染为脑内注射。在感染后7、15、30、60d分别以病理学方法观察病理损伤，以免疫组化方法检查HCMV—LA（1ateantigen），PCR检测小鼠脑组织中HCMV—DNA。在建立HCMV脑部感染的小鼠模型基础上，用RT-PCR测定Hox基因在病毒感染组和实验对照组小鼠脑组织中的表达,并用同位素标记的cDNA探针进行Northern-blot检测相应的表达状况。结果（1）接种HCMVAD169株的小鼠脑组织发生了病理改变，免疫组化和PCR方法在神经细胞内查到了HCMV-LA和DNA；（2）RT-PCR和Northern-blot发现：对照组的小鼠脑组织表达Hox-A9、Hox-A11、Hox-A12和Hox-A13，但不表达Hox-B13；HCMV感染后，小鼠脑组织被诱导表达Hox-B13，与对照组比较差异有统计学意义（P〈0.01），且于感染后的30d达到高峰，而Hox—A9、Hox—A11的表达下调（P〈0.05）；Hox—A10和Hox—A13的表达增强。结论HCMVAD169株可感染小鼠神经系统。HCMV感染可诱导小鼠神经系统发育基因Hox表达改变，这对研究HCMV感染致畸的分子机制提供了有价值的理论依据。     

HOXB2反义寡核苷酸对原代脐静脉内皮细胞生物学特性的影响

目的：探讨同源盒基因B2（HOXB2）反义硫代寡核苷酸对原代脐静脉内皮细胞生物学特性的影响。方法：采用荧光标记观察HOXB2反义寡核苷酸（Asodn）在内皮细胞中的分布;观察不同浓度HOXB2反义寡核苷酸对内皮细胞DNA合成的影响;应用流式细胞仪和RT－PCR观察其对细胞周期及HOXB2表达的影响。结果：经脂质体介导,转染15min胞核有较弱荧光染色,4－8h胞核荧光最强,16h荧光减弱、消散;HOXB2反义寡核苷酸能抑制内皮细胞DNA的合成,表现出浓度依赖效应,能延缓内皮细胞由G1期进入S期;同时HOXB2 mRNA表达水平在24－48h明显下降。结论：HOXB2在内皮细胞增殖中起重要作用,其作用机制与细胞周期有关。     

微粒体Ⅱ相代谢酶基因在小鼠胚胎干细胞定向分化肝细胞中的表达

目的:评价微粒体Ⅱ相代谢酶基因在小鼠胚胎干细胞(embryonic stem cells,ES细胞)定向分化肝细胞中的表达,为进一步探索酶蛋白表达及其催化活性提供依据。方法:ES细胞体外悬滴培养定向分化成肝细胞表型,RT-PCR法检测肝细胞发育依赖性基因AFP、ALB、CYP7a1的表达,免疫细胞化学法确认成熟肝细胞特异性标记物白蛋白(ALB)表达,RT-PCR法检测上述肝细胞中Ⅱ相代谢酶尿苷二磷酸葡萄糖醛酸结合酶系(UGTs)和微粒体谷胱甘肽S-转移酶1(mGST1)基因表达。结果:ES细胞在定向分化至d8时,肝细胞发育依赖性基因AFP和ALB有较高表达,d18时AFP表达甚微而ALB表达显著增加,并伴有成熟肝细胞特异性基因CYP7a1的表达。定向分化呈肝细胞表型时,成熟肝细胞特异性蛋白ALB呈强阳性表达。分化过程中Ⅱ相代谢酶基因UGT1a1、UGT1a9在分化前后均稳定表达;UGT1a6表达呈发育依赖性;UGT2b5未见表达;mGST1在分化前后均有少量表达,但在成熟肝细胞中表达显著增加,与成熟小鼠肝相似。结论:ES细胞体外悬滴培养可定向分化为成熟肝细胞;Ⅱ相代谢酶UGTs、mGST1基因在分化成熟肝细胞表达与小鼠肝细胞相似,可望为Ⅱ相代谢酶代谢深层次研究提供高效模型。