三维三步MTT法肿瘤药敏试验与芬丹明B法的比较

目的 :比较自创的三维三步MTT法 (3D3S MTT法 )与MTT法及芬丹明B法 (SRB法 )在肿瘤药敏试验中的价值。方法 :选用Hep G2、T 2 4和SKOV3三种细胞系和丝列霉素及阿霉素两种抗癌药 ,观察暴露于两种药物 3d后再培养不同时间 ,用上述三种方法测定的药敏结果。MTT法与SRB法计算肿瘤生长抑制率 (%TGI)的公式均是 :%TGI =[1 At Ac]× 1 0 0 % ;根据自建的表达MTT代谢的数学模型 ,3D3S MTT法计算 %TGI的公式是 :%TGI =1 { [lnAmax ln(Amax At) ] [lnAmax ln(Amax Ac) ] } 1 b × 1 0 0 %。结果 :三种方法测定的药物剂量 反应曲线均呈S型。MTT法测定的 %TGI要比SRB法和 3D3S MTT法测定的结果低 ,而MTT法测定的IC50 平均为SRB法和 3D3S MTT法测定结果的 3～ 5倍。而 3D3S MTT法测定的 %TGI及IC50 与SRB法测定的结果相近似。结论 :3D3S MTT法克服了MTT法测定肿瘤药敏所存在的 3～ 5倍的低估问题 ,与SRB法相比结果可靠 ,是切实可行的细胞定量分析方法     

MTT法进行活菌计数的方法学探讨

目的 :建立一种快速、稳定、灵敏并可反映细菌活性的细菌计数方法。方法 :以大肠杆菌为研究对象 ,探讨MTT法用于细菌计数的可行性及反应时间、测量细菌数量的范围、MTT的用量、是否加入溶解剂等实验条件。结果 :细菌数在 3.8× 10 7～ 1.2× 10 9 ml范围内测出的OD值与细菌浓度呈良好的正相关 ,反应时间为 2 0分钟 ,MTT10 μl、2 0 μl均可 ,2 0 μl效果更佳。可不用溶解剂。 结论 :MTT比色分析法可用于检测活菌数量     

仪器法和手工法对低血小板计数的对比分析

目的分析仪器法和手工法检测低值血小板的差异性。方法利用KX-21血细胞分析仪和显微镜计数同时测定血小板低于90×109/L的标本,经统计学处理,对两种方法的测定结果进行比较。结果血小板计数为(60-90)×109/L的标本,两法测定无显著性差异(P>0.05);血小板计数低于60×109/L时,两法测定有显著性差异(P<0.01)。结论对血小板减少的患者,应用显微镜计数血小板比仪器法计数更准确、直观、可靠。     

WST-1细胞增殖试剂在抗肿瘤药物筛选中的应用

目的采用W ST-1试剂评价姜黄素(curcum in,CU)和吲哚-3-甲醇(indole-3-carbinol,I3C)两种植物天然生物活性物质在体外抑制人鼻咽癌细胞株(CNE1)增殖的效果。方法体外培养人鼻咽癌细胞至对数生长期,分别加入CU和I3C,CU的终浓度分别为1.7×10-3、8.5×10-3、42.5×10-3g/m l,I3C的终浓度分别为3.0×10-3、15.0×10-3、45.0×10-3g/m l。继续培养48h后每组各取6孔加入一定量的W ST-1试剂,然后测定OD570值,计算细胞相对增殖度RGR1,每组再各取6孔,加入5g/L结晶紫罗兰染色3m in后,加入10g/L十二烷基磺酸钠,测定OD588值。结果W ST-1法能以OD值变化反映天然活性成份对肿瘤细胞的抑制程度,与国家标准所规定的仲裁法结果相关性较好。结论W ST-1法是一种可以应用于细胞毒性试验和药物抗肿瘤作用筛选和评价的方法。     

ATP生物发光法与MTT法检测卵巢癌体外化疗敏感性的比较

目的 比较ＡＴＰ法与ＭＴＴ（四唑蓝）法对卵巢癌细胞体外化疗敏感性的预测价值。方法 分别以ＡＴＰ法和ＭＴＴ法检测５种化疗药物对卵巢癌３ＡＯ细胞的抑制作用。结果 （１）ＡＴＰ法与ＭＴＴ法相关性良好。（２）ＡＴＰ法更加灵敏、稳定。ＡＴＰ法在８０个细胞时即可测出发光强度的改变;而ＭＴＴ法细胞 达３００时才能测出ＯＤ值变化。试验所需细胞浓度,ＡＴＰ法与ＭＴＴ法分别为１×１０＾４￣５×１０＾４个／ｍｌ和１×１     

瘦素对结肠癌细胞株HT-29的影响

目的:观察瘦素对结肠癌细胞株HT-29的细胞生长的作用。方法:贴壁培养HT-29细胞,分别给予不同浓度的瘦素(0.5×10-6、5×10-5,1×10-4,2×10-4g/L)。并同时以浓度为1×10-4g/L的表皮生长因子(EGF)作为阳性对照组,通过测定生长曲线、四甲基谷氮唑蓝实验MTT法观察瘦素对HT-29细胞生长的影响。结果:通过生长曲线,发现在相同时间段,瘦素浓度在5×10-6-2×10-4g/L时,呈剂量依赖性促进HT-29细胞增殖。但即使在瘦素促细胞增殖最为明显的2×10-4g/L组中,和阳性对照组EGF比较,其细胞增殖数量仍为低。MTT法结果显示,不同浓度的瘦素作用于HT-29细胞后,在72 h内,呈时间、剂量依赖性促进HT-29细胞生长,其增长率在5.1%-67.9%之间。细胞计数和MTT法均显示瘦素可促进结肠癌细胞HT-29的生长和增殖。提示瘦素作为多功能的细胞因子和结肠癌的发生密切相关。结论:在离体实验中,瘦素具有促结肠癌细胞HT-29生长增殖的作用,且和其浓度、时间相关。     

白莪星注射液诱导Hep-2细胞凋亡的实验研究

目的　观察自拟白莪星注射液诱导癌细胞系Hep - 2细胞凋亡的抑制Hep - 2细胞体外生长的效应 ,为临床应用与新药开发奠定实验基础。方法　将原液稀释为 10倍、10 0倍、10 0 0倍、1× 10 4倍、1× 10 5倍、1× 10 6倍 ,加入Hep - 2细胞培养 ,MTT法检测细胞生长情况 ,TUNEL法标记细胞流式细胞仪测定凋亡率。结果　稀释 10 0倍、10 0 0倍和 1× 10 4倍的白莪星注射液在第 3天和第 5天抑制Hep - 2细胞生长 ;稀释 10 0倍和 10 0 0倍的白莪星注射液可以促进Hep - 2细胞的凋亡 (P<0 0 5 )。结论　白莪星注射液具有明显抑制体外培养喉癌细胞系Hep - 2细胞生长增殖的作用 ,其作用机制可能与白莪星注射液能诱导喉癌细胞系Hep - 2细胞发生显著凋亡的作用有关。     

中药黄芪对成骨细胞体外成骨能力的观察

目的 :观察黄芪水提液对新生大鼠颅骨成骨细胞体系增殖、分化及成骨能力的影响。方法 :取 2 4 h新生大鼠颅骨成骨细胞按细胞密度 1× 1 0 5个 / ml接种 96孔培养板 ,然后将生理盐水 (NS)、黄芪低剂量 (0 .5 g/ ml)、黄芪高剂量 (5 g/ml) ,终稀释成 1∶ 2 0 ,1∶ 4 0 ,1∶ 80分别加入新生大鼠颅骨成骨细胞体系 ,进行细胞增殖 (MTT法 )、AL P活性测定以及矿化结节计数。结果 :黄芪低剂量 (0 .5 g/ ml)在 1∶ 80稀释比 ,MTT法所测吸光度 A值及 AL P活性显著高于 NS对照组 (P<0 .0 1 ) ;黄芪高剂量 (5 g/ ml)在 1∶ 2 0稀释比 ,MTT法所测吸光度 A值及 AL P活性亦显著高于 NS对照组(P<0 .0 1 ) ;矿化结节计数两组均显著高于 NS对照组 (P<0 .0 1 )。结论 :黄芪在体外对成骨细胞的增殖与分化具有一定的双向调节作用     

血小板计数仪器法与手工法测定样品的评价

目的 :探讨血小板计数仪器法与手工法测定血小板在数量上的影响。方法 :同一份标本放置不同时间分析仪及手工法均测三次结果 ,立即测定 (P>0 .0 5 )镜检法立即测定与 30 min测定结果差异有显著性 (P<0 .0 5 ) ,立即测定与 1h测定结果有非常显著差异 (P<0 .0 1) ,分析仪立即测定与 30 min测定差异无显著性 (P>0 .0 5 ) ,1h测定值均高于前二次。结果 :病人血小板 >5 0× 10 9/ L时 ,两法差异不大 ;<2 0× 10 9/ L时 ,两法偏差较大。结论 :仪器法测定血小板必须在 30 m in内测定完毕。对于较低的血小板值还必须采取手工法测定 ,以保证结果的准确性。     

重组人ndrg2腺病毒对胶质瘤细胞U251抑制作用的研究

目的:研究抑癌候选基因NDRG2在体外对人脑胶质瘤细胞系U251增殖和凋亡的影响。方法:将人脑胶质瘤细胞系U251细胞分成空白对照组,重组人ndrg2腺病毒组和今又生(重组人P53腺病毒)组,重组人ndrg2腺病毒组和今又生组下设1.68×1011、8.4×1010、4.2×1010、2.1×1010、1.05×1010、5.25×109、5.25×108、5.25×107 v.p/ml组,各组分别作用96h后观察细胞形态学改变,甲基噻唑基四唑法(MTT法)绘制细胞生长抑制曲线。结果:重组人ndrg2腺病毒和今又生转染人胶质瘤细胞系U251后,细胞生长受到明显抑制,呈现明显的剂量-效应依赖曲线;重组人ndrg2腺病毒组对U251细胞的抑制率优于今又生组。结论:过表达NDRG2可明显抑制人胶质瘤细胞U251的增殖并导致细胞凋亡。     

流式细胞术快速测定细胞活性

0　引言　细胞周期动力学研究和细胞凋亡的研究是目前生物医学领域的热门课题之一 [1 ] ,流式细胞术 (FCM)检测细胞周期和凋亡是其主要研究手段 [2 ] .FCM对细胞周期的分析方法已很成熟 ,但是我们在分析化学或物理因素对细胞周期的影响时 ,发现在 DNA直方图上出现 DNA含量较低的细胞峰 ,为确定该细胞峰的性质 ,鉴定细胞的活性 ,我们用 FCM法和台盼蓝染色法进行对比实验 ,建立了 FCM同时检测细胞周期和细胞活性的新方法 .1　材料和方法1.1　材料　所用设备包括 :EL ITE ESP型流式细胞仪 (美国Coulter公司 ) ,XD- 10 1型倒置显微…     

体外抗原激活的CD4+T淋巴细胞以TGF-β1非依赖的途径抑制NK细胞的杀伤功能

目的初步探讨体外抗原激活的CD4^＋T淋巴细胞对NK细胞杀伤毒性的影响及其机制。方法免疫磁珠方法获得BALB/c小鼠CD4^＋T淋巴细胞和NK细胞,异种皮肤抗原刺激CD4^＋T淋巴细胞后,与NK细胞共培养,并加入TGF-β1抗体后,分别应用51Cr标记的YAC-1检测24、48、72、96h NK细胞的杀伤毒性。结果异种皮肤抗原激活的CD4^＋T淋巴细胞能够持续抑制NK细胞杀伤毒性,在检测的时相点内,其抑制率分别为：39%、37.5%、26.3%和15.9%,加入TGF-β1抗体后,抑制率无明显变化。结论体外用抗原激活的的CD4^＋T淋巴细胞能够持续显著抑制NK细胞杀伤毒性,而且这种作用是TGF-β1非依赖的。     

自噬在青蒿琥酯诱导胰腺癌Panc-1细胞死亡过程中作用的初步研究

目的:探索性地研究一种非凋亡性死亡方式-自噬是否为青蒿琥酯(ART)诱导胰腺癌细胞死亡的途径,为青蒿琥酯治疗胰腺癌提供实验依据,为探寻治疗胰腺癌的新策略提供思路.方法:经丫啶橙(AO)染色、荧光显微镜及流式细胞仪检测细胞内自噬溶酶体;并应用自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)观察抑制自噬对ART介导的Panc-1细胞存活率及细胞周期的影响.结果:经丫啶橙染色后提示阴性对照组和ART处理组细胞均存在自噬,两者无明显差异(P＞0.05);流式细胞仪检测显示ART作用于胰腺癌Panc-1细胞并没有诱导细胞内自噬溶酶体明显增加,应用自噬特异性抑制剂3-MA预处理后,荧光显微镜显示抑制自噬对细胞的生长状态无明显影响,台盼蓝排斥实验表明,抑制自噬对ART介导的Panc-1细胞存活率无明显影响;流式细胞仪检测结果显示抑制自噬对ART介导的Panc-1细胞G2/M期阻滞无明显影响(P＞0.05).结论:ART诱导胰腺癌Panc-1细胞死亡的过程中存在自噬,但自噬并非ART诱导产生,也不是引起胰腺癌细胞死亡的方式.     

鱼胆汁毒素致肾小管上皮细胞死亡方式的试验研究

目的观察草鱼胆汁及鲤醇硫酸酯钠致人肾近曲小管上皮细胞（HK-2）的死亡方式。方法根据文献报道方法从草鱼胆汁中提取鲤醇硫酸酯钠,通过体外培养HK-2细胞系,应用MTT法评价草鱼胆汁和鲤醇硫酸酯钠对HK-2细胞增殖抑制作用,应用流式细胞术检测草鱼胆汁和鲤醇硫酸酯钠所致的HK-2细胞的主要死亡方式。结果 HK-2细胞存活率随着草鱼胆汁和鲤醇硫酸酯钠浓度的增加和时间的延长而降低,且草鱼胆汁和鲤醇硫酸酯钠对HK-2细胞的影响无明显差异;HK-2细胞染毒24h后,细胞凋亡和胀亡均明显增多,2、4μl/mL草鱼胆汁和66.7、133.4μg/mL鲤醇硫酸酯钠导致细胞凋亡样坏死明显增多,而8μl/mL草鱼胆汁和533.6μg/mL鲤醇硫酸酯钠导致细胞胀亡样坏死明显增多。结论中、小剂量的草鱼胆汁毒素主要导致HK-2细胞呈现凋亡样坏死,大剂量的草鱼胆汁毒素主要导致HK-2细胞呈现胀亡样坏死;鲤醇硫酸酯钠是草鱼胆汁毒素的主要毒性成分。     

凋亡的分子生物学途径和肿瘤细胞凋亡

研究肿瘤的发生、发展已成为当前医学的热门课题。肿瘤的发生常常是由于肿瘤细胞凋亡失控造成肿瘤组织的无限增长 ,在肿瘤细胞凋亡的过程中线粒体 (ｍｉｔｏ ｃｈｏｎｄｒｉａｍｔ)起着非常重要的作用 ,线粒体是哺乳动物细胞中唯一含有自身的遗传物质的效应器 ,同时它又是各种损伤因子作用的敏感部位。因此细胞中线粒体损伤导致其中的遗传物质即线粒体ＤＮＡ的释放事件可能时有发生。已经证实[1] ,癌细胞核基因组中存在线粒体ＤＮＡ的同源序列 ,在生理状态下 ,任何细胞的线粒体ＤＮＡ游离片段都可能具有潜在的转化活性 ,因而从理论上可以推…     

颈椎自然牵引法对颈椎弧度异常恢复性治疗的研究

目的探讨颈椎自然牵引法对颈椎弧度异常的恢复性治疗,了解这一全新牵引方法的定义及临床意义。同时介绍了颈椎自然牵引法所使用的医疗器械-颈椎自然牵引颈具的结构、使用方法、注意事项。方法使用颈椎自然牵引法和颈椎机械牵引法对颈椎弧度-3度至0度的100例患者随机分为二组进行牵引治疗。结果颈椎自然牵引法组50例颈椎弧度恢复正常者(曲度在≥350≤450范围内)12例占24%,颈椎弧度明显改善者(弧度在≥200﹤350范围内)34例占68%,颈椎弧度无改变者4例占8%,总有效率92%。颈椎机械牵引法组50例颈椎弧度无改变者43占86%,弧度病变加重7例占14%,总有效率0%。结论颈椎弧度变直或反张经过颈椎自然牵引法的治疗,弧度是可以改善或恢复正常的,颈椎机械性牵引对颈椎弧度异常恢复无治疗意义。证明颈椎自然牵引法对颈椎弧度的改善和恢复是一种非常有效的治疗方法。     

颈椎自然牵引法对颈椎弧度异常恢复性治疗的研究

目的探讨颈椎自然牵引法对颈椎弧度异常的恢复性治疗,了解这一全新牵引方法的定义及临床意义。同时介绍了颈椎自然牵引法所使用的医疗器械-颈椎自然牵引颈具的结构、使用方法、注意事项。方法使用颈椎自然牵引法和颈椎机械牵引法对颈椎弧度-3度至0度的100例患者随机分为二组进行牵引治疗。结果颈椎自然牵引法组50例颈椎弧度恢复正常者(曲度在≥350≤450范围内)12例占24%,颈椎弧度明显改善者(弧度在≥200﹤350范围内)34例占68%,颈椎弧度无改变者4例占8%,总有效率92%。颈椎机械牵引法组50例颈椎弧度无改变者43占86%,弧度病变加重7例占14%,总有效率0%。结论颈椎弧度变直或反张经过颈椎自然牵引法的治疗,弧度是可以改善或恢复正常的,颈椎机械性牵引对颈椎弧度异常恢复无治疗意义。证明颈椎自然牵引法对颈椎弧度的改善和恢复是一种非常有效的治疗方法。     

Gene-viral vectors: a promising way to target tumor cells and express antican cer genes simultaneously

目的：研究一种结合肿瘤基因治疗与美丽治疗优势的新型肿瘤治疗载体系统,即基因-病毒载体系统。方法：利用病毒重组技术将抗癌基因插入肿瘤细胞特异性的增殖病毒基因组中,通过细胞病理作用、荧光显微镜、免疫酶链技术及电镜等技术分别观察病毒的杀伤效应、报告基因绿色荧光蛋白、抗癌基因小鼠白细胞介素12表达量及病毒复制情况。结果：构建了一种新型基因-病毒载体系统,该载体系统腺病毒E1b-55kDa蛋白缺失,保留了腺病毒E1a蛋白。该载体系统具有肿瘤增殖病毒ONYX-015相似功能,即它可在肿瘤细胞内复制及增殖,而在正常细胞内不能复制及增殖,从而特异性杀灭肿瘤细胞。它还具有更大的优势,即该载体系统可携带各种抗癌基因以进一步提高抗肿瘤的疗效。应用该载体系统携带该报告基因绿色荧光蛋白可使绿色荧光蛋白在肿瘤细胞内高效表达,其表达量明显高于传统基因治疗的腺病毒载体系,而在正常细胞内低表达,与传统腺病毒载体系统相似或更低。应用该载体系统携带抗癌基因小鼠白细胞介素12,也产生类似结果,并在电镜中证实该载体系统携带抗癌基因小鼠白细胞介素12可在肿瘤细胞株中复制及增殖。结论：基因-病毒载体是将抗癌基因插入肿瘤增殖病毒基因组,通过肿瘤增殖病毒在肿瘤细胞内特异性复制及增殖,从而数百倍乃至上万倍提高抗癌基因的表达量。它充分利用了肿瘤基因治疗与病毒治疗优势,进一步提高抗肿瘤的疗效,克服了传统基因治疗转染率低、表达量少及靶向性弱等缺点及病毒治疗的杀伤力低的缺点。它将成为肿瘤治疗最有希望的治疗方案之一。