大鼠局灶性脑缺血对大脑皮层Bax,Bcl-2基因表达的影响

目的为探讨局灶性脑缺血对大鼠大脑皮质神经细胞Bax,Bcl-2基因表达的影响,方法采用免疫组织化学ABC法,检测了局灶性脑缺血后6h大鼠大脑皮质Bax,Bcl-2的表达.结果正常组及假手术组,Bax,Bcl-2的免疫阳性物主要分布于锥体细胞层,胞浆染色.缺血6h后,神经元Bax,Bcl-2的平均灰度分别为73.1±6.6和107.7±9.1,分别较对照组84.7±4.4和91.3±5.5减少和增加(P<0.05).表明缺血后Bax含量增加, Bcl-2含量减少.提示缺血致大脑皮质神经元凋亡可能与Bax,Bcl-2表达变化有关.     

当归对大鼠局灶性缺血脑组织细胞凋亡的作用

目的 :应用大鼠局灶性脑缺血模型观察当归对脑缺血损伤的治疗作用及其机制。方法 :TTC染色计算脑缺血梗塞灶体积。原位末端标记法观察细胞凋亡并计算凋亡率和凋亡指数。免疫组化观察凋亡相关蛋白Bcl 2及Bax蛋白表达的变化。结果 :①与单纯缺血再灌组相比 ,当归治疗组TTC染色显示当归治疗组脑缺血梗塞区体积缩小 (P <0 .0 5 ) ,凋亡率和凋亡指数较单纯缺血再灌组有明显下降 (P <0 .0 1 ) ,Bcl 2蛋白表达与单纯缺血再灌组无差异 (P >0 .0 5 ) ,而Bax蛋白表达显著减少 (P <0 .0 1 )。②缺血 2h再灌 4 8h组较缺血 2h再灌 2 4h组 ,凋亡细胞明显减少 (P <0 .0 1 )。结论 :①当归能抑制Bax蛋白的表达 ,减少脑缺血区细胞凋亡的发生 ,这是当归治疗大鼠局灶性脑缺血损伤的可能机制之一。②缺血 2h再灌 4 8h ,脑缺血神经细胞迟发性损伤已开始减轻     

胰岛素样生长因子-1对大鼠局灶性脑缺血再灌注后神经细胞凋亡及Bcl-2,Bax蛋白表达的影响

目的研究胰岛素样生长因子-1(IGF-1)对大鼠局灶性脑缺血再灌注后神经细胞凋亡及Bcl-2,Bax蛋白表达的影响,探讨IGF-1对脑缺血再灌注损伤的保护作用机制.方法制作大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型.30只Wistar雄性大鼠被随机分为假手术组、缺血组及IGF-1治疗组.于缺血10min后经尾静脉给予IGF-1 10μg,应用TTC染色观察梗死灶体积,应用免疫组化染色和TUNEL法检测Bcl-2,Bax蛋白表达及神经凋亡细胞.结果与缺血组比较,IGF-1治疗组梗死体积明显减少(P＜0.01),凋亡细胞数明显减少(P＜0.01),Bcl-2蛋白表达明显升高(P＜0.01),Bax蛋白表达明显降低(P＜0.01).结论IGF-1通过增加Bcl-2蛋白表达,减少Bax蛋白表达,减少神经细胞凋亡,对脑缺血再灌注损伤起保护作用.     

金纳多注射液对局灶性脑缺血再灌注后神经细胞凋亡及相关蛋白的动态影响

目的:研究金纳多注射液对大鼠局灶性脑缺血再灌注后神经细胞凋亡及Bcl-2、Bax蛋白表达的影响.方法:建立大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型.60只Wistar雄性大鼠被随机分为假手术组、缺血组和金纳多治疗组.缺血组和金纳多治疗组分别在脑缺血再灌注后6,12,24,48 h处死,应用免疫组化染色及原位细胞凋亡检测脑组织Bcl-2、Bax蛋白表达及凋亡细胞数.结果:缺血组和金纳多治疗组凋亡细胞数于脑缺血再灌注后24h达高峰,金纳多治疗组各时点凋亡细胞数均明显少于缺血组(P＜0.01).缺血组和金纳多治疗组Bcl-2表达于脑缺血再灌注后12 h达高峰,金纳多治疗组各时点Bcl-2蛋白表达均明显高于缺血组(P＜0.01).缺血组和金纳多治疗组Bax蛋白表达于脑缺血再灌注后24h达高峰,金纳多治疗组各时点Bax蛋白表达均明显低于缺血组(P＜0.01).结论:金纳多注射液可能通过上调Bcl-2蛋白表达,下调Bax蛋白表达,对脑缺血再灌注损伤起保护作用.     

雌激素对去卵巢大鼠局灶性脑缺血神经细胞凋亡及Bcl-2表达的影响

目的:探讨雌激素对大鼠局灶性脑缺血神经细胞凋亡与Bcl-2表达的影响.方法:雌性Wistar大鼠30只均于脑缺血手术前7 d切除双侧卵巢,随机等分为假手术组、手术对照组及雌激素用药组.采用大脑中动脉阻断制成局灶性脑缺血模型.缺血2 h再灌注24 h后断头取脑,应用TUNEL染色及SP免疫组织化学方法观察并测定梗死灶体积、凋亡细胞数及Bcl-2的表达.结果:假手术组未发现脑梗死灶和凋亡细胞及Bcl-2阳性细胞.雌激素用药组较手术对照组脑梗死体积缩小((59.32±8.95)mm3 vs(96.93±11.63)mm3,P＜0.05),凋亡细胞数减少((96±12)个vs(126±9)个,P＜0.05);Bcl-2表达增强(P＜0.05).结论:雌激素通过上调Bcl-2的表达抑制脑细胞凋亡,具有脑保护作用.     

胰岛素样生长因子-1对大鼠局灶性脑缺血再灌注后神经细胞凋亡及bcl-2、Bax蛋白表达的影响

目的 :研究胰岛素样生长因子 - 1 ( IGF- 1 )对大鼠局灶性脑缺血再灌注后神经细胞凋亡及 bcl- 2、Bax蛋白表达的影响 ,探讨 IGF- 1对脑缺血再灌注损伤的保护作用机制。方法 :制作大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型。将 30只 Wistar雄性大鼠随机分为假手术组、缺血组及 IGF- 1治疗组。于缺血 1 0 min后经尾静脉给予 IGF- 1 1 0 μg,应用 TTC染色观察梗死灶体积 ,应用免疫组化染色和 TUNEL法检测 bcl- 2、Bax蛋白表达及神经凋亡细胞。结果 :与缺血组比较 ,IGF- 1治疗组梗死体积明显减少 ( P<0 .0 1 ) ,凋亡细胞数明显减少 ( P<0 .0 1 ) ,bcl- 2蛋白表达明显升高 ( P<0 .0 1 ) ,Bax蛋白表达明显降低 ( P<0 .0 1 )。结论 :IGF- 1通过增加 bcl- 2蛋白表达 ,减少 Bax蛋白表达 ,减少神经细胞凋亡 ,对脑缺血再灌注损伤起保护作用。     

阿司匹林预处理对大鼠局灶性脑缺血Bcl-2、Bax表达的影响

目的 探讨阿司匹林预处理对缺血性脑损伤的保护作用机制.方法 选用健康雄性sD大鼠,随机分为假手术组、缺血对照组和阿司匹林预处理组.以线栓法阻塞大鼠右侧大脑中动脉(middle cerebral artery occlusion,MCAO),制成局灶性脑缺血模型.术后24 h用免疫组化SABC法染色,分别统计大脑皮质每高倍镜视野Bcl-2、Bax呈阳性表达的细胞数.结果 阿司匹林顸处理组每高倍镜视野Bcl-2阳性细胞数为(48.50±10.44),与缺血对照组(19.63±3.52)比较明显增加,差异具有显著性(P<0.01);阿司匹林预处理组每高倍镜视野Bax阳性细胞数为(5.50±1.14),与缺血对照组(27.1±5.08)比较明显减少(P<0.01).结论 阿司匹林预处理对随后的局灶缺血性脑损伤具有保护作用,其保护作用机制可能与提高Bcl-2表迭、抑制Bax表达而减少细胞凋亡有关.     

骨髓间充质干细胞移植对缺血再灌注大鼠脑神经细胞凋亡及Bcl-2、Bax蛋白表达的影响

目的:探讨骨髓间充质干细胞(MSCs)移植对缺血再灌注大鼠脑组织神经细胞凋亡及Bcl-2、Bax蛋白表达的影响.方法:SD大鼠84只,随机分为假手术组(n=12)、模型组(n=24)、磷酸盐缓冲液(PBS)组(n=24)和MSCs组(n=24).模型组、PBS组和MSCs组采用线栓法建立大鼠大脑中动脉缺血模型,假手术组除不插尼龙线外,其余步骤相同.PBS组和MSCs组分别于建模成功后24 h分别经颈动脉注入等体积的PBS液和已制备好的同种异体MSCs悬液.每组于脑缺血2 h再灌注2 d、4 d、6 d、8 d时行神经功能缺损评分及脑灌注固定取材,采用免疫组化染色及TUNEL检测脑组织Bcl-2、Bax蛋白的表达及凋亡细胞数.结果:假手术组在各时间点神经功能评分为0分,无神经功能缺损,未见细胞凋亡,未见Bcl-2和Bax表达.与模型组和PBS组比较,脑缺血2 h再灌注4 d开始,MSCs组神经细胞凋亡数、Bax蛋白表达和神经功能缺损评分较低,Bcl-2蛋白表达较高,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:骨髓间充质干细胞移植能改善脑损伤大鼠的功能;上调Bcl-2蛋白表达,下调Bax蛋白表达,减少神经细胞凋亡,可能是其主要机制之一.     

Bcl-2和Bax蛋白在大鼠脑缺血预处理脑组织中的表达及意义

目的:探讨Bcl-2和Bax蛋白在大鼠局灶性脑缺血预处理脑组织中的表达及意义.方法:线栓法阻断SD大鼠大脑中动脉建立脑缺血预处理及脑缺血模型.TTC染色法测量脑梗死体积,免疫组织化学检测前脑皮质、基底核Bcl-2和Bax蛋白的表达.结果:与缺血组相比,预处理缺血组脑梗死体积明显减小(P＜0.01),Bcl-2蛋白表达细胞数明显增加(P＜0.01),Bax蛋白表达减少(P＜0.05).结论:缺血预处理诱导Bcl-2蛋白表达增加和Bax蛋白表达下降可能是缺血预处理诱导抗凋亡、产生脑保护机制的原因之一.     

碱性成纤维细胞生长因子对大鼠局灶性缺血再灌注损伤脑组织Caspase-3表达及细胞凋亡的影响

目的 :探讨碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)对大鼠脑缺血再灌注损伤后神经细胞凋亡和Caspase 3表达的影响。方法 :应用线栓法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注模型 ,大脑中动脉阻塞 1h再灌注损伤 2 4h ,用TUNEL法和免疫组化法分别检测假手术组、缺血再灌注组和bFGF治疗组的凋亡细胞数和Caspase 3阳性细胞数。结果 :假手术组偶见凋亡细胞和Caspase 3阳性细胞 ,缺血再灌注组凋亡细胞数和Caspase 3阳性细胞数分别为 2 5 .4 6± 5 .5 7和1 8.6 0± 3.77,bFGF组凋亡细胞数和Caspase 3阳性细胞数分别为 1 6 .72± 5 .6 3和 1 0 .5 4± 2 .0 4。与缺血再灌注组比较 ,bFGF组凋亡细胞数和Caspase 3阳性细胞数显著降低 (P <0 .0 5和P <0 .0 5 )。结论 :Caspase 3表达下降可能是bFGF减少大鼠脑缺血再灌注损伤后细胞凋亡的分子机制之一     

PQS抑制模拟缺血-再灌注心肌细胞FAS的表达

目的探讨西洋参总皂苷(PQS)对缺血再灌注诱导心肌细胞凋亡的FAS mRNA的表达影响。方法利用原代培养的乳鼠心肌细胞模拟缺血模型2h,再恢复正常培养24h;RT-PCR及原位杂交检测PQS处理后FAS mRNA水平。结果 PQS能显著抑制缺血再灌注Fas的表达。结论实验表明PQS能抑制心肌细胞缺血再灌注FAS凋亡基因的表达。     

转录激活因子AP-2β基因的克隆、表达及其抗体的制备

目的：克隆、表达与纯化出AP—2β蛋白质，并用所表达的蛋白质制备出抗AP—2β的抗体。方法：将AP—2β基因插入到表达载体pGEX—4T—1谷胱苷肽—S—转移酶基因下游，所得克隆经测序，以确定其阅读框码的正确性，然后用正确的克隆质粒转化E．coli BL21，用异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导，而后用谷胱苷肤琼脂糖—4B纯化所表达的融合蛋白质。通过凝胶迁移率变动分析实验(EMSA)测得蛋白质的生物学活性，所得蛋白质用于制备抗体。结果：得到一条大约78KD的蛋白质，并且成功的制备了抗体，所得蛋白质和抗体均具有很好的生物学活性。结论：我们成功的表达出转录激活因子AP—2β并制备出抗AP—2β的抗体，为一下步对AP—2β的功能进行研究打下了良好的基础。     

真核表达载体pEGFP-VASP-lC的构建及其在HeLa细胞中的表达

目的:构建真核表达载体pEGFP-VASP-lC并稳定转染人宫颈癌细胞系HeLa细胞,为进一步探讨VASP-lC区介导的VASP的寡聚化在HeLa细胞迁移中的作用奠定基础。方法:用RT-PCR技术从人内皮细胞株ECV304细胞中获得VASP-lC区的cDNA并将其插入表达载体pEGFP-C1中,构建的重组质粒经脂质体介导转染HeLa细胞,Western blot鉴定VASP-lC区在HeLa细胞中的稳定表达。结果:RT-PCR成功地扩增出一条约310bp的片段,经限制性内切酶酶切图谱分析和DNA序列测定证实目的基因已插入重组质粒,荧光显微镜下观察到稳定转染的细胞发出较强绿色荧光,Western blot证明人VASP-lC区能以融合蛋白的形式在HeLa细胞中稳定表达。结论:成功构建了真核表达载体pEGFP-VASP-lC,获得了稳定表达人VASP-lC区基因的HeLa细胞克隆,便于进一步探讨VASP-lC区介导的VASP的寡聚化在HeLa细胞迁移中的作用。     

CXC趋化因子受体4的研究进展

CXC趋化因子受体4(CXCR4)属于G蛋白耦联7次跨膜受体,是CXC趋化因子家族成员基质细胞衍生因子1(SDF-1)/CXCL12的惟一受体,广泛表达在许多细胞表面,与其配体SDF-1构成的SDF-1-CXCR4生物学轴,参与调节许多生物学活性作用,不仅调节胚胎发育、干细胞归巢和组织/器官的损伤修复,而且与很多疾病的发生和发展有关,成为一些疾病治疗的分子靶目标。本文对其研究进展予以综述。     

医疗市场混乱的表现

国家于2001年9月放开医疗市场,随后市场竞争日益加剧,竞争方便了患者就医促进了医疗机构的发展,但虚假医疗广告的误导,使许多患者上当受骗,媒体报道后,打击了不法医疗机构,同时也给患者带来困惑:我们该到哪儿看病?去天津泰达,还是北京阜外?     

人类新基因era基因组织分布的免疫组织化学研究

目的为了研究人era基因这一人类新基因表达产物的组织分布情况.方法根据人era序列设计并合成扩增引物,用PCR法从pUC19-hera质粒中扩增人era基因(h-era)全长cDNA和h-ERAC端的结构域基因,并分别克隆到(His)6融合表达载体pRSET-C和非融合表达载体pDH中,诱导表达(His)6-h-ERA融合蛋白和h-ERAC端结构域蛋白.用h-ERAC端结构域蛋白免疫新西兰白兔,制备兔抗h-ERA抗血清.用Western-b10t对兔抗h-ERA抗血清.进行了鉴定,并成功地制备了兔抗h-ERA血清.利用在大肠杆菌中高表达、纯化的(His)6-h-ERA融合蛋白,对已制备的兔抗人ERA抗血清进行进一步鉴定纯化获得抗h-ERA的特异性多抗;再对4月～5月人胎儿心、肝、肺、脾、肾等脏器和胃、小肠、睾丸、胸腺、胰脏及胆囊进行免疫组织化学染色.结果在人类4月～5个月胎儿心、肝、肺、脾、肾脏等脏器和胃、小肠、睾丸中均有免疫反应阳性产物出现.胰脏、心、肺脏等呈高表达,脾脏、胃、小肠呈中等表达,睾丸、肝脏、肾脏呈低表达,胆囊、胸腺无免疫阳性表达产物出现.结论人ERA在人类正常胎儿不同组织中有表达,但人ERA蛋白在各种组织中分布情况有差异,可能是一种新型功能蛋白.     

722例新生儿气质表达的临床监测

目的：探讨影响新生儿气质的危害因素和进行早期干预指导。方法：通过本院出生的新生儿按新生儿气质临床分型进行临床检测。结果：检测总数722例,温顺型454例,占63％,难弄型58例,占8％,预热缓慢型104例,占14％,混合型106例,占15％。结论：新生儿表达是新生儿与成人交流的一种方式,不同表达形成不同的气质,所可能形成危害新生儿的不利因素和后果进行早期干预,减少新生儿的危害。     

多种抗磷脂抗体在反复流产患者体内的表达

[目的]对照性地研究多种抗磷脂抗体（APA）在反复流产患者体内表达的情况，以探讨其联合检测的临床意义。[方法]不明原因反复流产患者35例为研究组，正常早孕妇女35例为对照组，检测两组中6种APA的阳性率。[结果]研究组阳性率80％，对照组阳性率2．86％（P〈0．001）；研究组6种APA均有阳性出现，共计出现72例次，对照组仅1例抗体阳性；研究组中6种抗体的光密度值均显著高于对照组。[结论]本研究证实了在反复流产患者中抗磷脂酸抗体阳性率最高，可能有助于提高APS的诊断率；对反复流产患者如发现多种APA阳性，应动态监测APA的变化；采用多种APA的联合检测，将提高其检测指标的敏感性和特异性。     

抗胃癌单链抗体免疫毒素的制备及活性检测

目的 对抗胃癌单链抗体免疫毒素基因重组质粒进行表达,进而获得有活性的单链抗体免疫毒素,方法 应用IPTG诱导大肠杆菌表达系统进行单链抗体免疫毒素基因重组质粒的表达。并对产生的不溶性包涵体进行纯化,经变性、复性后,观察其生物学活性。结果 诱导表达了约６６ＫＤ的蛋白,分子量符合预计大小,以包涵体的形式存在于菌体中,经包涵体纯化、变性、复性,使其折叠为正确的空间结构,经验测可与胃癌细胞ＭＧＣ８０３特异结合,并有一定的细胞毒性。结论 获得了可与胃癌细胞系ＭＧＣ８０３特异结合。并有一定的细胞毒性的抗胃癌单链抗体免疫毒素。     

基因串联体的构建策略及其表达模式

为了获取足够的DNA片段或得到基因的表达产物，常需要构建基因串联体，将目的基因按头尾相连随机串联起来，克隆入克隆载体以制备需要的目的基因片段或克隆入表达载体进行高效表达。串联的策略包括定向串联法、PCR扩增串联法、化学拼接法、同尾酶法等，不同方法构建的串联体基因表达模式也有一定差异。