关于动脉平滑肌细胞培养的几个问题

平滑肌细胞异常增殖及其从动脉中层向内膜迁移过程是动脉粥样硬化和血管成形术后再狭窄等心血管疾病的重要发病因素。血管平滑肌细胞(ＶＳＭＣ)常用于多种与平滑肌细胞生长增殖有关疾病的发病机理及药物作用机制的研究 ,提高培养成功率 ,增强细胞功能稳定性 ,提高细胞质量是进行ＶＳＭＣ的分子生物学研究的重要条件。作者采用组织贴块法取材于大鼠主动脉中膜进行培养。通过实践和摸索 ,提出几点看法 ,现讨论如下。1　组织块大小边缘密度翻面时间观察时间对原代细胞萌发的影响　　对于贴块法的原代培养来源 ,由于细胞并非直接获得 ,而是从组…     

子宫肌瘤大鼠模型制备方法之比较

目的比较两种子宫肌瘤大鼠模型的制备方法。方法采用单用己烯雌酚肌注（单模法）和己烯雌酚与黄体酮共同肌注（双模法）的方法制备子宫肌瘤大鼠模型。结果两种方法均能制备子宫肌瘤大鼠模型，子宫肌瘤大鼠出现血清性激素水平升高、免疫功能低下及肌细胞高度增生活跃的病理状态，综合评价双模法优于单模法。结论两种方法均能成功制备子宫肌瘤大鼠模型。     

乳鼠心肌细胞酶消化培养和贴块培养法的比较

目的探索经济、简单易行的心肌细胞培养方法。方法选用新生乳大鼠心肌细胞进行0．25％胰酶分离培养和贴块培养两种培养方法。结果用0．25％胰酶消化培养可获得大量的单细胞，但是酶对细胞的损伤比较大，酶消化所受的影响因素比较多，此过程获取单细胞所需的时间比较长；贴块培养法简便易行，得到的细胞结构完整、存活率高，且经济实惠、适合长期研究且需细胞量不多的实验。结论酶分离培养和贴块培养各有优劣势，应根据不同的实验目的选用不同的培养方法。     

不同浓度米非司酮对体外培养子宫肌瘤细胞生长的影响

目的：观察米非司酮对体外培养子宫肌瘤细胞的作用。方法：采用绘制细胞生长曲线和MTT法检测了解不同浓度米非司酮对体外培养子宫肌瘤细胞生长的影响。结果：低浓度米非司酮对子宫肌瘤细胞无抑制作用，当药物浓度达到10—6mol／L时其作用才表现出来，随着浓度的增加，其抑制作用增强。结论：米非司酮对子宫肌瘤细胞的作用具有浓度依赖关系。     

肺泡Ⅱ型细胞培养方法的探讨

目的 :研究不同方法对体外培养肺泡Ⅱ型上皮细胞纯度、活力、产量、存活时间的影响。方法 :不同浓度胰蛋白酶消化法和胰蛋白酶加胶原酶消化法消化、分离组织 ,低密度接种 ,常规浓度含血清培养和无血清培养 ,抗大鼠IgG包被与不包被 ,倒置显微镜观察细胞生长 ,检测细胞活力 ,免疫组织化学方法鉴定细胞纯度和电镜检测鉴定细胞。结果 :两种方法消化、分离组织 ,肺泡Ⅱ型上皮细胞纯度、活力、产量、存活时间经统计学分析无显著性差异。结论 :不同浓度胰蛋白酶消化分离肺组织程序相对简单、低密度接种、无血清培养所得细胞纯度能够满足体外研究肺泡Ⅱ型上皮细胞功能的需要 ,从而简化了体外培养肺泡Ⅱ型上皮细胞的程序。     

改良消化复合植块法培养新生大鼠雪旺细胞

目的探讨改良的单酶消化法与组织贴块法相结合的培养雪旺细胞(SCs)的方法,并与经典植块法和普通消化复合植块法进行比较。方法取新生3~5 d的SD大鼠双侧坐骨神经和臂丛神经,分别采用经典植块法、普通消化复合植块法、改良消化复合植块法培养SCs。培养7 d后进行细胞消化和传代,在显微镜下计数并计算细胞总量。用S-100免疫荧光染色法检测所获细胞的纯度。结果改良消化复合植块法培养的SCs生长增殖速度最快,可获取(1.85±0.13)×106个细胞;普通消化复合植块法次之,可获取(1.10±0.10)×106个细胞;经典植块法所获SCs的生长增殖速度最慢,可获取(0.77±0.03)×106个细胞,3种方法比较差异均有统计学意义(P<0.01)。S-100免疫荧光染色结果显示,改良消化复合植块法细胞纯度为(95.73±1.51)%,普通消化复合植块法为(84.66±2.68)%,经典植块法为(74.50±4.23)%,3种方法比较差异均有统计学意义(P<0.01)。结论改良消化复合植块法可以在短时间内获得大量高纯度的SCs,为研究周围神经修复再生奠定良好的基础。     

不同方法干预子宫肌瘤临床疗效比较

目的观察采取不同的方法治疗子宫肌瘤的临床疗效,并对不同治疗方法的优、缺点进行分析。方法选择2012年1-12月期间在我院妇科就诊的患者中随机选取60例子宫肌瘤患者作为研究对象,对患者分别给予药物治疗、子宫动脉栓塞术、腹腔镜子宫肌瘤剔除术、经腹子宫肌瘤切除术,并进行分组。观察各组经治疗后的效果,并进行比较分析其优缺点。结果采用三种不同手术方法治疗的患者其临床疗效显著优于药物治疗,三组有效率均为95%以上,而药物治疗组有效率则为72%。结论运用子宫动脉栓塞术、腹腔镜子宫肌瘤剔除术、经腹子宫肌瘤切除术三种手术治疗子宫肌瘤疗效显著,且就对患者而言,明显减少了并发症、治疗费用低、其不适为患者理想的治疗方式。     

Clearview法和细胞培养法检测沙眼衣原体的比较(摘要)

沙眼衣原体(CT)在淋球菌性和非淋球菌性尿道炎或阴道炎中有较高的检出率.由于病原体感染时常无特殊症状,而且常规培养法颇为困难.我们以细胞培养法为标准对照,与Clearview衣原体快速检测试剂法进行了比较,现报告如下.     

两种人鼻咽癌活检组织上皮细胞原代培养方法比较

目的 比较两种人鼻咽癌活检组织上皮细胞原代培养方法,并初步探讨鼻咽癌原代培养细胞的生长特性.方法 收集未经放、化疗的鼻咽痛初诊病人鼻咽部肿瘤活检组织33例,其中17例采用组织块培养法.16例采用组织块预消化培养法,用含2%胎牛血清的Keratinocyte-SFM培养基培养.比较两种方法干贴壁时间、成功率及细胞长出所需平均天数,并通过倒置显微镜、抗人角蛋白单克隆抗体免疫细胞化学染色、生长曲线、生存分析来观察原代培养细胞的特性.结果 组织块培养法成功率为23.5%(4/17),干贴壁时间为4.47±0.48h,细胞长出所需时间为13.75±1.5d;组织块预消化培养法成功率为62.5%(10/16),干贴壁时间为7.88±1.01 h,细胞长出所需时间为8.3±4.55d,差异有统计学意义(P<0.05).组织块培养法,细胞多层重叠排列,结构不清,始终没有继续繁殖生长;组织块预消化培养法,细胞呈梭形,核大居中,多个核仁,抗人角蛋自单克隆抗体免疫细胞化学染色阳性,生存时间均数为62.72d.结论 组织块预消化培养法较组织块法成功率高,细胞长出所需平均天数短,干贴壁时间长;低浓度血清的Keratinocyte-SFM培养基适合鼻咽癌原代上皮细胞体外培养.     

肺泡Ⅱ型细胞培养方法的改良及其应用

目的：研究不同方法对体外培养肺泡Ⅱ型上皮细胞纯度、活力、产量、存活时间的影响。方法：采用不同浓度胰蛋白酶消化法和胰蛋白酶加胶原酶消化法消化、分离组织，低密度接种，常规浓度含血清培养和无血清培养，抗大鼠IgG包被与不包被，倒置显微镜观察细胞生长，检测细胞活力，免疫组织化学方法鉴定细胞纯度和电镜检测鉴定细胞。结果：两种方法消化、分离组织，肺泡Ⅱ型上皮细胞纯度、活力、产量、存活时间经统计学分析无显著性差异。结论：不同浓度胰蛋白酶消化分离肺组织程序相对简单、低密度接种、无血清培养所得细胞纯度能够满足体外研究肺泡Ⅱ型上皮细胞功能的需要，从而简化了体外培养肺泡Ⅱ型上皮细胞的程序。     

子宫平滑肌瘤细胞原代培养及鉴定

目的:建立人子宫平滑肌瘤细胞原代培养方法,为子宫肌瘤发病机制及治疗药物筛选的研究提供理想的细胞株系.方法:采用消化法及组织块贴壁2种方法进行子宫平滑肌瘤细胞培养.倒置显微镜下观察原代培养的细胞,并用免疫组化染色对其进行鉴定.结果:2种方法均可获得大量子宫肌瘤细胞,所培养的细胞在倒置显微镜下呈梭形和典型"峰-谷"样生长,α-Actin免疫组化染色呈强阳性.结论:采用该2种方法均可成功进行人子宫平滑肌瘤细胞的原代培养,且培养的人子宫平滑肌细胞生长良好,纯度高,可用于子宫肌瘤发病机制及治疗药物筛选的研究.     

悬浮法与贴壁法提取脂肪组织分泌促成脂因子比较

目的 优化体外获取脂肪组织浸提液的提取方法,比较不同方法提取浸提液的成脂作用。方法 通过贴壁法和悬浮法培养脂肪组织获得浸提液,过滤、冷冻超离心浓缩浸提液,通过BCA试剂盒检测两种方式得到的浸提液分泌因子（secretory factors from adipose tissue explants, SFAE）蛋白总量及蛋白因子得率。等量蛋白成脂诱导第3代（P3）脂肪干细胞,诱导第7~13 d,显微镜下观察及进行油红染色,鉴定成脂情况。结果 贴壁法和悬浮法4次提取浸提液中蛋白含量的差异无统计学意义。但悬浮培养法4次重复实验蛋白因子得率更为稳定,贴壁法每次蛋白因子得率数据相差很大,每克脂肪组织获得分泌蛋白的量最小时为7.3 mg,最大可得到12.4 mg,而悬浮得到的蛋白因子几乎都趋近于8.7 mg。并且贴壁培养法与悬浮培养法相比,获取等量的SFAE需要T75培养瓶更多（10个）,且需手工铺匀,贴壁后才能加入培养基,而悬浮培养法仅需悬浮培养瓶1个,加入脂肪组织后即可进行培养。两种方法得到的浸提液都具有促成脂效果,在等量蛋白诱导下的成脂效果差异无统计学意义。结论 悬浮和贴壁培养法得到的浸提液具有相同的促成脂能力,但是悬浮培养获得的浸提液更加省时省力且蛋白因子得率稳定,为后续研究和鉴定在SFAE中准确找到成脂因子奠定基础。     

改良组织块法分离培养兔成纤维样滑膜细胞

目的通过改良组织块细胞培养法,建立一种简单,可行的兔成纤维样滑膜细胞体外培养方法。方法无菌条件下取正常兔膝关节滑膜组织,剔净后剪成碎块,用灭菌滤纸吸掉组织上附着的水分,碎片接种于培养皿,观察细胞生长状况及形态特征。取第3代对数期细胞,用CCK-8法绘制其生长曲线,并用免疫荧光法检测波形蛋白的表达情况。结果体外培养的兔成纤维样滑膜细胞形态为长梭形纤维样,细胞生长力较旺盛,生长曲线为典型的"S"型,免疫荧光检测显示第3代细胞强表达波形蛋白。结论改良组织块法可以分离培养出兔成纤样维滑膜细胞,方法简便,成功率高,满足实验要求。     

子宫组织ER、PR及PCNA的表达与子宫平滑肌瘤的关系

目的：探讨性激素在子宫平滑肌瘤发病中的作用，为临床治疗平滑肌瘤提供理论基础。方法：应用免疫组化ＳＰ法检测分析了４６例子宫肌瘤、肌层、内膜组织雌激素受体（ＥＲ）、孕激素受体（ＰＲ）、增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）的含量。结果：子宫肌瘤组织中ＥＲ、ＰＲ、ＰＣＮＡ的含量显著高于正常肌组织，ＥＲ、ＰＲ明显低于内膜增生期（Ｐ＜０．０５，Ｐ＜０．００１）。结论：子宫肌瘤的发生与雌、孕激素的水平及其受体的含量有关，ＰＣＮＡ可能与肿瘤的异常生长有关。     

动物细胞培养技术研究的现状与思考

细胞培养是生物医学中一项重要技术,应用较为广泛,目前已渗透到细胞生物学、生物化学、临床检验学等多个领域。文章主要对无脊椎动物和脊椎动物两大领域细胞培养取得的进展及应用作了较为详细的分析,并在此基础上探讨了动物细胞培养存在的问题以及未来的发展方向。为相关领域研究者探讨其他种类细胞系的建立及筛选合适的细胞系培养方法作为理论的参考依据。     

研究生细胞培养技术课教学改革与实践

细胞培养技术已成为医学研究中普遍应用的手段,所以对于医学研究生,在基础学习阶段有必要针对性的开展细胞培养实验课。通过此课程的学习,使研究生基本掌握细胞培养的基本知识和基本操作,为今后的研究打下良好的基础。     

几种消毒剂对蚋卵原代细胞培养效果的比较

目的：探索适宜于蚋卵（胚胎）原代细胞培养的消毒方法。方法：70%乙醇、2.8%NaClO、15%甲酚皂、0.1%HgCl2及1%过氧乙酸5种消毒剂按不同消毒时间相互搭配,结合使用抗生素PBS液对蚋卵进行消毒处理。结果：70%乙醇10 min、1%过氧乙酸15 min、2.8%NaClO5 min 3种消毒剂的相互搭配,结合使用了抗生素PBS液,使得原代细胞培养污染得到有效控制,细胞生长和增殖状态较好。结论：70%乙醇10 min、1%过氧乙酸15 min、2.8%NaClO 5 min联合使用是蚋卵原代细胞培养的一种安全有效的消毒方法。     

血清激素水平和子宫ER、PR含量与子宫肌瘤生长的关系

目的　探讨子宫肌瘤、瘤旁组织及肌层组织雌激素受体 (ER)、孕激素受体 (PR)表达和子宫肌瘤复发的关系。方法　应用免疫组化SP法 ,检测 3 0例子宫肌瘤患者子宫标本肌瘤、瘤旁组织及肌层组织ER、PR的表达 ,同时采用放射免疫法检测外周血中血清雌激素 (E2 )、孕激素 (P)、促卵泡生成素 (FSH )、黄体生成素 (LH)、垂体生乳素 (PRL)及雄激素 (T)水平 ,健康育龄妇女 3 0名作为对照。结果　肌瘤组织ER、PR表达显著高于瘤旁组织及肌层组织 (P <0 .0 1,P <0 .0 5) ,瘤旁组织PR表达显著高于肌层组织 (P <0 .0 5) ;研究组与对照组外周血性激素水平比较无显著性差异 (P >0 .0 5)。结论　外周血E、P在子宫肌瘤的发生、发展中的作用与子宫组织ER、PR强表达有关 ,行子宫肌瘤挖除时应同时切除瘤体周围的肌层组织