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1.
目的:探讨Rho/Rho激酶(ROCK)抑制剂盐酸法舒地尔体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)向神经元样细胞分化的可行性.方法:全骨髓培养法分离培养大鼠骨髓MSCs,用200μmol/L盐酸法舒地尔诱导分化.倒置显微镜观察诱导不同时间细胞的形态学变化;AO-EB染色法鉴定诱导后细胞存活率;免疫荧光法鉴定诱导后神经元特异性烯醇化酶(NSE)、神经丝蛋白(NF200)与胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达,判断其分化情况.结果:盐酸法舒地尔诱导30、60、90、120及180 min后细胞存活率分别为(96.7±2.2)%、(95.3±1.9)%、(93.8±1.8)%、(92.5±2.1)%及(90.1±1.3)%,其中以盐酸法舒地尔诱导120 min后,形态变化最为理想.盐酸法舒地尔诱导60、90、120及180min后,NSE阳性表达率分别为(66.5±1.9)%、(88.1±3.2)%、(93.6±1.9)%和(93.5±5.4)%,NF200阳性表达翠分别为(70.1±2.9)%、(89.5 ±1.3)%、(98.1±1.6)%和(98.3±1.9)%,而GFAP阳性表达率均小于5%.结论:盐酸法舒地尔可在体外快速、高效地诱导大鼠MSCs向神经元样细胞分化.  相似文献   

2.
杨军  董为伟  贾延劼 《重庆医学》2003,32(11):1502-1504
目的 研究核因子-κB(NF-κB)在体外诱导骨髓基质细胞分化为神经元样细胞的作用。方法 在无血清条件下,以2-巯基乙醇(2-ME)作为主要诱导剂,诱导成年大鼠骨髓基质细胞分化为神经元样细胞;同时以无血清培养基为对照组。采用免疫细胞化学染色检测神经细胞标记蛋白表达和NF-κB亚基P65核移位情况;蛋白质印迹(Western Blot)检测细胞中IκBα表达变化。结果 2-ME诱导后细胞形成较典型的神经元形态,同时表达多种神经元标记蛋白。对照组无类似情况,但是出现P65由胞浆向胞核移位,IκBα表达水平显著降低;2-ME诱导后P65信号主要仍在胞浆中表达,细胞内IκBα降低程度较少。结论 2-ME可以抑制NF-κB的活化,在骨髓基质细胞诱导分化为神经元样细胞过程中可能起到一定的作用。  相似文献   

3.
目的 探讨Notch信号通路在大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)向神经细胞分化中与RhoA/Rho激酶信号的协同作用.方法 实验分为无血清培养基对照组和盐酸法舒地尔组.采用盐酸法舒地尔诱导大鼠MSCs分化为神经细胞.RT-PCR检测Hes1的表达变化;免疫细胞化学法检测神经元特异性烯醇化酶(NSE)、神经微丝蛋白亚单位(NF-M)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达变化.结果 ①盐酸法舒地尔组MSCs的Hes1 mRNA转录下降(P<0.05).②盐酸法舒地尔可以诱导MSCs向神经细胞分化,NSE、NF-M的阳性表达率显著高于无血清培养基组(P<0.05).结论 盐酸法舒地尔在诱导大鼠MSCs向神经细胞分化过程中,可能存在Notch信号通路与RhoA/Rho激酶通路信号的协同作用,共同促进MSCs向神经细胞分化. Abstract: Objective To investigate the cross-talk between notch and Rho/Rho GTPase signaling on rat bone marrow mesenchymal stem cells differentiating into neurons. Methods The experiments were divided into serum-free medium control group and fasudil hydrochloride group. Fasudil hydrochloride induces MSCs differentiating into neurons. The expression of Hes1 mRNA was detected by RT-PCR. The expression of neuron-specific enolae(NSE), neurofilament M (NF-M) and glial fibrillary acidic protein (GFAP)was detected by immunocytochemical method. Results ①The Hes1 mRNA expressed by MSCs of fasudil hydrochloride group was significantly decreased(P<0.05).②Fasudil hydrochloride can induce MSCs differentiating into neurons and there was higher expression of neuron-specific enolae(NSE) and neurofilament-M (NF-M) than the serum-free medium control group(P<0.05).Conclusions There may be cross-talk between notch signaling and RhoA/Rho GTPase signaling on differentiation of rat bone marrow stromal cell into neurons induced by fasudil hydrochloride and they jointly promoted the differentiation of MSCs into neurons.  相似文献   

4.
目的 研究Sonic Hedgehog(Shh)信号在白藜芦醇诱导大鼠骨髓基质细胞(marrow stromal cells,MSCs)分化为神经元样细胞中的作用.方法 采用全骨髓贴壁法分离培养MSCs.MSCs分为3组,白藜芦醇诱导组:用含白藜芦醇的无血清DMEM/F12诱导MSCs分化;对照组:用无血清DMEM/F12诱导MSCs分化;正常组:不做诱导处理.倒置显微镜下观察细胞形态,免疫荧光法、免疫印迹法检测NSE、MAP-2、GFAP、Smo和Gli1蛋白的表达和移位.结果 白藜芦醇诱导后细胞胞体收缩,伸出长突起,类似神经元.免疫荧光显示正常组及对照组MSCs轻度表达神经元NSE蛋白,白藜芦醇诱导组MSCs NSE、MAP-2阳性,但诱导前后细胞始终未表达胶质细胞GFAP蛋白.免疫荧光显示,MSCs具有初级纤毛,并表达Smo和Gli1.白藜芦醇诱导组Smo从细胞质进入初级纤毛,Glil从细胞质进入细胞核,同时,Smo、Glil蛋白的表达增加(P<0.01).对照组则无明显变化.结论 白藜芦醇能诱导MSCs分化为神经元样细胞;此过程中Shh信号通路被激活,推测Shh信号在MSCs分化过程中可能发挥着重要作用.  相似文献   

5.
大鼠骨髓间充质干细胞在体外向神经元样细胞的分化   总被引:3,自引:4,他引:3  
目的探讨2-ME与BHA对大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)分化为神经元样细胞的作用。方法大鼠股骨中分离MSCs,贴壁法体外扩增、传代。以二巯基乙醇(2-ME)预诱导,再加入2-ME、3-叔丁基-4羟基茴香醚(BHA)诱导。免疫细胞化学染色检测巢蛋白(nestin)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、微管联合蛋白-2(MAP-2)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、乙酰胆碱酯酶(AchE)、1-氨基丁酸(GABA)、酪氨酸羟化酶(TH)的表达,以鉴定分化细胞的表型特征。尿嘧啶脱氧核苷(BrdU)作为细胞分裂标记检测MSCs增殖特性。结果细胞诱导后具有神经细胞的形态,并被BrdU标记,nestin、NSE、MAP-2、AchE、GABA表达阳性,而GFAP、TH表达为阴性。结论2-ME和BHA在体外能够有效的诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞。  相似文献   

6.
目的探讨脐血间充质干细胞(MSCs)向神经样细胞定向诱导分化的条件及方法,以明确其神经分化潜能。方法将人脐血MSCs体外培养扩增、保存后,取第5代的MSCs分别用维甲酸(RA,RA组)、维甲酸联合脑源性神经生长因子(BDNF,RA+BDNF组)诱导方法向神经样细胞诱导,诱导分化期间观察细胞形态变化,同时设对照组,对照组不加任何诱导分化剂,比较3组巢蛋白(nestin)、神经元特异性烯醇化酶(NES)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达差异。结果两种不同诱导方法均能诱导细胞发生典型变化,对照组未发现神经样细胞生长。免疫组化法显示3组诱导后均表达nestin、NSE、GFAP,BDNF+RA组的表达量多于RA组。Real-time RT-PCR显示诱导组及对照组均有NSE mRNA、GFAP mRNA表达,但RA组、RA+BDNF组诱导后表达上调(P〈0.05),且RA+BDNF组较单纯RA组上调明显(P〈0.05)。结论脐血MSCs经两种神经营养因子诱导均可分化为神经样细胞,并表达神经元特异性标志物,其中添加BDNF后较单纯应用RA诱导效果好。  相似文献   

7.
目的检测他莫昔芬对脊髓损伤大鼠核因子kappa B抑制蛋白激酶复合体/核因子kappa B(IKK/NF-κB)通路及细胞凋亡的影响,研究其神经保护机制。方法将51只Sprague-Dawley(SD)大鼠随机分为3组(每组17只):假手术组(仅行椎板切除术)、对照组(脊髓损伤后硬膜下注射2%二甲基亚砜5 m L/kg)和他莫昔芬组[脊髓损伤后硬膜下注射他莫昔芬5 mg/kg(溶于2%二甲基亚砜1 mg/m L)]。改良Allen法(25 g·cm)制作T12节段脊髓损伤模型。术后24 h采用免疫印迹法(Western blot)检测损伤节段脊髓核因子kappa B p65(NF-κB p65)、磷酸化核因子κB抑制因子α(p I-κBα)和活性半胱天冬酶-3(caspase-3)表达水平,应用Gel Pro Analyser 4.0定量灰度值(OD);比色法检测脊髓组织中髓过氧化物酶(MPO)活性。统计方法采用单因素方差分析和Bonferrni检验。结果与假手术组相比,对照组和他莫昔芬组术后24 h炎症相关指标NF-κB p65[(0.31±0.03)比(3.17±0.12)比(1.55±0.07),P〈0.05]、p I-κBα[(0.12±0.01)比(0.98±0.05)比(0.53±0.03),P〈0.05]的表达水平及MPO活性较高[(0.06±0.01)U/mg比(0.64±0.03)U/mg比(0.35±0.02)U/mg,P〈0.05],但他莫昔芬组低于对照组,组间差异有统计学意义(P〈0.05);此外,凋亡相关的活性caspase-3在假手术组表达水平极低,另外两组则明显升高,其中对照组升高更为显著[(0.08±0.01)比(1.03±0.05)比(0.36±0.02),P〈0.05]。结论他莫昔芬能够调控脊髓损伤部位的细胞凋亡,并减轻炎性反应,从而发挥神经保护作用。  相似文献   

8.
目的 应用原子力显微镜观察大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)分化为神经细胞的过程中细胞膜超微结构的变化,并探讨caveolin-1在其分化中的作用.方法 常规方法培养大鼠MSCs,采用RNA干扰技术,把Rn-siRNA-caveolin-1转染进第10代大鼠MSCs.采用RT-PCR法,分别检测转染组和未转染组大鼠MSCs caveolin-1的表达量,进行统计分析.盐酸法舒地尔诱导转染组和未转染组大鼠MSCs为神经元样细胞,并用免疫细胞化学法检测神经元特异性蛋白NSE、NF-M和GFAP的表达变化.用原子力显微镜分别在非接触模式和接触模式下观察MSCs成像及其细胞膜超微结构的变化.结果 ①未转染组MSCs表达caveolin-1,转染组MSCs表达caveolin-l-siRNA显著降低.②诱导前大鼠MSCs不表达神经元特异性蛋白NSE和NF-M.诱导后各组均表达NSE和NF-M.其中,转染组的NSE和NF-M的表达率显著高于未转染组.各组GFAP的表达率均小于5%.③原子力显微镜下观察,未转染组大鼠的MSCs以长梭形为主,细胞突起较多,且多集中于胞体一侧;转染组大鼠MSCs的细胞突起对称分布于胞体两侧.两个组均可见到大小不等的凹陷,环绕在细胞核周边,转染组的凹陷数量明显多于未转染组.结论 原子力显微镜下从细胞膜的水平观察,caveolin-1在大鼠骨髓间质干细胞诱导分化为神经元样细胞的过程中可能起到一定的作用.  相似文献   

9.
目的探讨脑源性神经营养因子(BDNF)体外诱导骨髓间充质干细胞(MSCs)分化成神经元样细胞的作用及其对诱导后的神经元样细胞保护作用,为治疗神经系统疾病提供更优良的细胞。方法体外培养MSCs至第5代后,分别用BDNF、β-巯基乙醇(β-ME)诱导MSCs,诱导后的第1、3和6小时计算两组神经元样细胞数,对各时间点两组神经元样细胞阳性率进行了比较;诱导后行神经细胞标记抗体的免疫细胞化学、RT-PCR及蛋白质印迹鉴定。结果两组诱导剂诱导后的细胞均呈神经元样细胞的形态;BDNF组诱导分化后细胞的存活时间远较β-ME组长;BDNF组在诱导后6h近于诱导高峰,而β-ME在诱导2h即达高峰,但随后神经元样细胞渐死亡。免疫细胞化学结果显示在两组诱导后细胞的巢蛋白(Nestin)、神经细胞特异性烯醇化酶(NSE)、微管相关蛋白-2(MAP-2)、神经丝蛋白(NF)表达均呈阳性,而胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达呈阴性;RT-PCR显示NSE、NFL,MAP-2的mRNA表达阳性,GFAP有较弱的表达;蛋白质印迹可见两组诱导剂诱导的细胞均表达神经元的特异性标记抗体NSE。结论BDNF能单独诱导MSCs分化形成神经元样细胞,而且分化后细胞的存活时间长,有望用于治疗脑缺血、神经变性等疾病。  相似文献   

10.
目的探讨脑源性神经营养因子(BDNF)体外诱导骨髓间充质干细胞(MSCs)分化成神经元样细胞的作用及其对诱导后的神经元样细胞保护作用,为治疗神经系统疾病提供更优良的细胞。方法体外培养MSCs至第5代后,分别用BDNF、β-巯基乙醇(β-ME)诱导MSCs,诱导后的第1、3和6小时计算两组神经元样细胞数,对各时间点两组神经元样细胞阳性率进行了比较;诱导后行神经细胞标记抗体的免疫细胞化学、RT-PCR及蛋白质印迹鉴定。结果两组诱导剂诱导后的细胞均呈神经元样细胞的形态;BDNF组诱导分化后细胞的存活时间远较β-ME组长;BDNF组在诱导后6h近于诱导高峰,而β-ME在诱导2h即达高峰,但随后神经元样细胞渐死亡。免疫细胞化学结果显示在两组诱导后细胞的巢蛋白(Nestin)、神经细胞特异性烯醇化酶(NSE)、微管相关蛋白-2(MAP-2)、神经丝蛋白(NF)表达均呈阳性,而胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达呈阴性;RT-PCR显示NSE、NFL,MAP-2的mRNA表达阳性,GFAP有较弱的表达;蛋白质印迹可见两组诱导剂诱导的细胞均表达神经元的特异性标记抗体NSE。结论BDNF能单独诱导MSCs分化形成神经元样细胞.而且分化后细胞的存活时间长.有望用于治疗脑缺血、神经变性等疾病。  相似文献   

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