体外循环前后不同组织细胞因子的差异表达

目的应用基因芯片技术探讨外周血单个核细胞（PBMC）及心房组织细胞因子的差异表达基因,探讨不同组织对体外循环（CPB）的反应。方法CPB开始、CPB结束即刻抽取患者动脉血,密度梯度离心法分离PBMC; 取CPB开始及CPB结束即刻的右房组织。用BD Atlas^TM cDNA Expression Arrays表达谱基因芯片对比CPB前及CPB后二者间细胞因子的差异表达。结果CPB前PBMC及心房间细胞因子基因表达差异明显者有IL-6、IL-13、Wnt5a、促肾上腺皮质激素释放激素Ⅰ型受体、卵泡刺激素受体和盘状结构域受体2。CPB后二者的基因表达谱均发生变化,差异明显者变为IL-6、IL-13、α-干扰素诱导蛋白（IFI616）、钙结合蛋白S100A9（钙颗粒素B）、胎盘生长因子和Wnt5a。结论CPB前PBMC与心房组织的细胞因子基因表达谱不同,CPB刺激后基因表达谱发生变化,但变化不一致,使差异表达基因发生变化。     

转录因子SCL基因在骨髓增生异常综合征和再障的表达

SCL基因是新发现的转录因子，其功能与造血、细胞的生长和分化及白血病的发生密切相关，应用RT/PCR技术检测了骨髓增生异常综合征（MDS）和再生障碍性贫血征（AA）中SCL基因的表述情况。在36例MDS病例中总表达率为27．8％，其中RA、RA－S、CMML、RAEB及RAEB－t亚型中的表达率分别为0％、0％、5．5％、8．3％和13.9％。在38树AA和正常人（25例）中均不表达。结果提示：造血干细胞克隆性恶性病变致白血病转化时SCL基因表达；而在骨髓造血干细胞组织衰竭的良性病变中不表达。     

外周血单个核细胞TLR4基因表达水平与AS、RA病情活动性的关系分析

目的分析外周血单个核细胞TOLL样受体4（TLR4）基因表达与强直性脊柱炎（AS）、类风湿关节炎（RA）病情活动性的相关性。方法选择AS、RA病人各40例,分别为AS组、RA组,另选取30名健康志愿者为对照组。以实时荧光定量逆转录聚合酶链反应检测外周血单核细胞TLR4 mRNA表达水平,并分析其与病情活动性、实验室指标的相关性。结果外周血单个核细胞TLR4 mRNA表达水平AS组>RA组>对照组,差异有统计学意义（P < 0.01）。AS组、RA组中,活动期病人TLR4 mRNA表达水平显著高于稳定期病人（P < 0.01）。Pearson相关性分析显示,AS组病人外周血单个核细胞TLR4 mRNA表达与Bath强直性脊柱炎病情活动指数（BASDAI）评分及血清ESR、CRP、IL-17水平呈正相关关系（P < 0.05~P < 0.01）,与RF水平、HLA-B27阳性率无相关性（P>0.05）;RA组病人外周血单个核细胞TLR4 mRNA表达与28个关节病情活动指数（DSA28）积分及血清ESR、RF、CRP、IL-17水平呈正相关关系（P < 0.05~P < 0.01）。结论AS、RA病人外周血单个核细胞TLR4 mRNA表达明显上调,且与病情活动性及炎性指标具有相关性。     

sICAM-1和Th1／Th2型细胞因子在类风湿关节炎发病中的作用

目的探讨类风湿关节炎（RA）患者外周血血清中人可溶性细胞间黏附分子1（sICAM-1）的浓度和Th1／Th2极性偏移的关系以及与临床的相关性。方法用ELISA法检测32例RA患者和25例正常人外周血血清中sICAM-1、Th1细胞分泌的细胞因子IFN-γ和Th2细胞分泌的细胞因子IL—10的浓度,以IFN-γ／IL-10比值直接反映Th1／Th2极性偏移状态,并作差异性比较,进一步分析sICAM-1与Th1／Th2极性偏移及疾病活动度的相关性。结果（1）RA活动期组血清sICAM-1和IFN-γ浓度水平显著高于RA稳定期组和正常对照组,而IL-10的水平则显著低于RA稳定期组和正常对照组,差异均具有统计学意义（P〈0．05）;（2）RA稳定期组和正常对照组血清中sICAM-1、IFN-γ及IL-10的浓度水平无显著差异性（P〉0．05）;（3）RA活动期组sICAM-1浓度水平与IFN-γ、IL-10浓度水平及INF-γ／IL-10比值之间存在明显的相关性（rl=0．815,r2=0．739,r3=0．681）;（4）RA活动期组血清中sICAM-1浓度水平与DAS28呈明显正相关（相关系数r=0．833,P〈0．01）。结论RA患者外周血血清中存在着高水平的sICAM-1,Th1/Th2细胞因子的表达水平存在明显失衡,并发现其分泌模式是朝着r11｜11细胞偏移,表现为Th1型细胞因子处于相对优势,由此证实RA患者血清中sICAM-1的异常升高与Th1／Th2细胞因子的表达失衡存在一定的相关性,共同参与了RA的发病。     

基因芯片研究糖尿病肾病大鼠肾皮质基因表达

目的：研究正常与糖尿病肾病大鼠肾脏的基因表达谱,大规模分析糖尿病时基因表达水平的变化。方法：（1）实验大鼠分为两组,一组为正常对照组,另一组为糖尿病组;（2）从肾皮质中抽提mRNA,经反转录分别用Cy3,Cy5荧光标记,获得两组动物来源的cDNA探针;（3）cDNA探针与Biodoor基因表达谱芯片杂交,结果由扫描仪扫描并用软件进行分析统计。结果（1）18．4％的基因表达谱发生明显的变化,其中12条基因在糖尿病时表达量明显下降,而323条基因在糖尿 时表达量明显上升;（2）已报道基因占了差异表达基因总数的18．8％左右,大多数已报道基因在糖尿病时的表达模式与其他作者的报道类似。结论：利用基因芯片技术结合实验动物模型能大规模,高通是地研究糖尿病的基因表达谱,初步筛选出选出疾病相关基因,对进一步阐明疾病在基因水平上的发病机制有十分重要的作用。     

类风湿关节炎病人血清Th1/Th2细胞因子的水平及临床意义

目的：探讨类风湿关节炎（rheumatoid arthritis，RA）病人Th1／Th2平衡状态及血清中细胞因子的变化与RA发病机制及疾病发生发展的的关系。方法：采用酶联免疫吸附测定（ELISA）检测RA病人和正常人血清中Th1型细胞因子IFN-γ、Th2型细胞因子IL-4的水平变化。结果：（1）RA病人血清中IFN-γ水平明显升高，IL-4水平明显下降，与对照组比较差异具有统计学意义（P〈0．05）；（2）活动期RA病人血清中IFN-γ、IL-4水平变化与缓解期RA病人比较差异具有统计学意义（P〈0．05）；（3）缓解期与活动期RA病人比较，各临床参数均有明显改善。站论：在RA血清中Th1／Th2细胞分泌的细胞因子存在明显失衡，分泌模式朝Th1偏移，Th1／Th2平衡可能与RA的发病机制及疾病的发生发展密切相关。     

应用cDNA微阵列技术检测子宫内膜癌组织中基因表达图谱的变化

目的：通过研究正常子宫内膜和子宫内膜癌组织基因表达的变化,来探讨子宫内膜癌发的生机制,方法：应用cDNA微阵列技术（含588基因）,对30例子宫内膜癌患者的癌组织及同一患者的正常子宫内膜组织进行分析,由两种组织中分别提取总RNA后,制备探针,与cDNA微阵列膜进行杂交,杂交结果经计算机软件分析,采用免疫组织化学的方法对结果进行鉴定,结果：（1）与细胞死亡和增殖有关的基因－IRP,Wnt5-5A及癌胚抗原前体在癌组织中表达的明显增高;（2）与细胞粘附,浸润有关的基因－聚集蛋白降糖核蛋白前体在癌组织中的表达明显增高,（3）与浸润有关的调节因子基因－CD147,TIMP－2基因在癌组织中的表达异常增高,结论：用cDNA微阵列可同时检测两种不同组织中多个基因的差异表达,CD147可能与子宫内膜癌的发生与浸润有关。     

类风湿性关节炎与强直性脊柱炎免疫相关基因的差异表达

类风湿性关节炎（rheumatoid arthritis，RA）与强直性脊柱炎（ankylosing spondylitis，AS）是两个最普遍的炎性关节病，发病率分别为0．5％～1．0％和0．1％～1．1％。基因变异是RA易感性的一个重要因素，其遗传率估计达60％，其中30％归结于HLA基因，而AS的遗传率估计超过90％，其中20％～50％归结于HLA-B27基因，比RA具有更强的家族遗传倾向。本文将主要探讨RA和AS免疫相关基因的差异表达。     

黑色素瘤抗原—1基因在胃癌组织中的表达

目的：检测黑色素瘤抗原－1（MAGE－1）基因在胃癌组织中的表达，为应用MAGE－1基因产物对胃癌病人进行特异性抗肿瘤免疫治疗提供理论依据。方法：用逆转录－聚合酶链反应（RT－PCR）检测30例胃癌组织及相应癌旁组织中MAGE－1基因的表达，并对1例RT－PCR阳性扩增产物进行DNA序列测定。结果：30例胃癌组织标本中有14例（46．7％）表达MAGE－1基因，而相应的癌旁组织均不表达MAGE－1，两组比较差异有显著性（P＝0．001）；DNA序列测定证实1例RT－PCR扩增产物中的目的基因片段为MAGE－1cDNA序列。结论：MAGE－1基因在胃癌组织中有较高表达，这使得以该基因编码蛋白作为疫苗用于胃癌的免疫治疗成为可能。     

类风湿关节炎超敏C反应蛋白检测的临床意义

目的探讨类风湿关节炎（RA）患者超敏C反应蛋白（hs—CRP）检测的临床意义。方法选择2009年4月～2010年6月我院收治的RA患者80例,其中40例活动期,40例非活动期。比较两组患者以及50例正常对照组的hs-CRP和血沉（ESR）。结果RA活动期患者的hs-CRP、ESR明显高于正常对照组（P〈0．01）,且RA患者活动期的hs-CRP、ESR明显高于非活动期组（P〈0．01）。结论hs—CRP能够反映RA患者的病情,与疾病活动性密切相关。     

2种方法检测抗角质蛋白抗体对类风湿性关节炎诊断价值比较

目的比较免疫金银染色法和免疫荧光法检测抗角质蛋白抗体（anti-keratin antibody,AKA）对类风湿性关节炎（rheumatoid arthritis,RA）的诊断价值。方法收集临床上确诊为RA患者血清样本50份,同时收集系统性红斑狼疮（systemic lupus erythematosus,SLE）患者、强直性脊柱炎患者、健康者血清样本各20份作为对照,采用免疫金银染色法和间接免疫荧光法检测AKA,比较分析对RA诊断的敏感性、特异性、正确率、阳性预测值、阴性预测值等指标。结果免疫金银法和免疫荧光法检测AKA阳性率：RA组分别为72%和52%,SLE组分别为0和0,强直性脊柱炎组分别为0和10,健康组分别为0和0。2种方法检测AKA对RA诊断的特异性均很高,无统计学差异。而免疫金银染色法检测AKA对RA诊断的敏感性、正确率及Youden指数均较免疫荧光法高,且差异有统计学意义（P〈0.05）。结论免疫金银法检测AKA诊断RA具有高度的敏感性和特异性,临床检测采用免疫金银法检测AKA对RA的辅助诊断更有价值。     

类风湿关节炎患者外周血单个核细胞组蛋白H3赖氨酸4三甲基化水平的研究

目的 研究类风湿关节炎(RA)患者外周血单个核细胞（PBMCs）组蛋白H3赖氨酸4（H3K4）三甲基化(Me3)水平。方法 梯度密度离心法分离8例RA患者和8例健康者的PBMCs,采用染色质免疫共沉淀联合芯片技术（ChIP-chip）在全基因组范围内对RA患者及健康者的PBMCs组蛋白H3K4me3进行高通量的筛选。染色质免疫共沉淀-实时定量聚合酶联反应（ChIP-qPCR）验证芯片结果。定量反转录聚合酶联反应（qRT-PCR）检测H3K4me3显著差异基因的mRNA表达水平。结果 RA患者与健康对照相比较,鉴定出364个基因存在H3K4me3显著差异,其中有66个基因显示有H3K4me3 程度增高, 298个基因有H3K4me3 程度降低;ChIP-qPCR验证结果与CpG岛芯片结果一致。结论 RA患者与健康者之间的PBMCs存在组蛋白H3K4me3显著改变。ChIP-chip技术有利于进一步揭示RA分子机制,发现新的治疗靶点。     

强直性脊柱炎患者外周血单核及T淋巴细胞CD147的表达及意义

目的 观察强直性脊柱炎(AS)患者外周血单核及T淋巴细胞中CD147的表达情况,初步探讨CD147在AS发病及疾病活动中的意义.方法 入组AS患者、类风湿关节炎(RA)患者及健康对照者(HC)各30例,以流式细胞术分析比较各组间外周血单核及T淋巴细胞CD147表达的差异,并经逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测比较其外周血单个核细胞(PBMC)CD147 mRNA表达的差异;进而将AS患者单核及T淋巴细胞CD147表达水平与常用的疾病活动性指标行相关分析.结果 AS、RA及HC组外周血单核细胞CD147的平均荧光强度(MF1)分别为213.5±37.8、228.7±49.7及163.6±44.8,T淋巴细胞CD147的MFI则分别为36.8±10.1、40.2±10.5及28.3±10.6,AS组单核及T淋巴细胞CD147的表达水平均略低于RA患者,但差异均无统计学意义(均P＞0.05),而AS与RA组单核及T淋巴细胞CD147的表达水平均高于HC组,差异均有统计学意义(均P＜0.05);AS与RA组PBMC中CD147 mRNA表达水平均高于HC组(P＜0.05),而AS与RA组间差异无统计学意义(P＞0.05);AS患者单核及T淋巴细胞CD147 MFI与其ESR及CRP均存在正相关(P＜0.05).结论 AS患者单核及T淋巴细胞中CD147的表达较正常升高,其水平与患者ESR及CRP存在正相关,提示CD147可能是AS患者疾病发生发展的重要影响因素.     

人胃癌细胞MKN-28母亚两系转移相关基因的筛选

目的采用基因芯片技术比较筛选前后的人胃癌细胞母系MKN-28和亚系MKN-28S之间的基因表达谱,利用生物信息学方法筛选出与胃癌侵袭和转移相关的差异基因。方法用肿瘤转移基因芯片筛选出人胃癌细胞MKN-28母亚两系的转移相关基因,对部分有差异表达的基因用RT-PCR和Western blot进行分析鉴定。结果用肿瘤转移基因芯片筛选出两系的差异表达基因共20个,其中上调基因13个,下调基因7个。选择其中有代表意义的2个基因利用RT-PCR和Western blot进行验证,证实所选基因在筛选前后瘤细胞中均有差异表达,与基因芯片的表达情况一致,说明基因芯片结果可信度较高。结论基因芯片技术是筛选胃癌转移相关基因的有效方法;多基因参与了胃癌的侵袭和转移的过程,包括一些基因如Flt-4、SRC等基因和其它相关基因的改变。     

基因表达谱芯片筛选强直性脊柱炎差异表达基因的研究

目的应用表达谱芯片比较人强直性脊柱炎(ankylosing spondylitis,AS)组织与正常骶髂关节组织的基因表达差异,筛选AS疾病相关基因。方法选取本室采集的3例活动期AS标本为实验组,1例骨折标本为对照组。分别提取标本骶髂关节的滑膜组织与椎旁组织的RNA,制备探针后用于表达谱芯片杂交,筛选AS组织差异表达基因,并采用半定量RT-PCR法验证芯片结果。结果与正常组织样本相比,在AS组织中筛选获得差异表达基因237条,表达上调的已知基因91条,表达下调的已知基因78条;对其中20条基因进行半定量RT-PCR检测,结果与表达谱芯片结果一致。结论筛选出与AS相关的多个差异表达基因。     

HHV6和HHV7感染与类风湿性关节炎的相关性

目的 探讨人疱疹病毒6型（HHV6）和7型（HHV7）感染在类风湿性关节炎（RA）病因学中作用。方法 用巢式PCR技术，检测62例类风湿性关节炎病人和138例健康献血员外周血单个核细胞（PBMCs）和血浆中HHV6和HHV7DNA。结果 类风湿性关节炎病人组PBMCs中HHV6和HHV7DNA阳性率与正常对照组比较均无显著性差异（P〉0．05）；部分类风湿性关节炎病人血浆中可检出HHV6和HHV7DNA，而对照组血浆中则为阴性。结论 类风湿性关节炎病人中可能存在HHV6或HHV7的活动性感染，与类风湿性关节炎的发生发展有一定关系。     

类风湿关节炎与sICAM-1相关性的临床研究

目的：通过对类风湿关节炎(RA)患者血清中可溶性细胞间粘附分子-l(sICAM-1)变化规律的观察，探讨sICAM—1在RA发病中的作用，研究sICAM—1与病情活动指标间的关系。方法：采用ELISA法对77例RA，25例强直性脊柱炎(AS)患者血清中sICAM—1及9例RA关节液中sICAM—1水平进行检测。结果：所测静脉血清sICAM—1浓度，RA组显著高于健康人组，RA活动期组显著高于健康人组及稳定期组，RA稳定期组与健康人组无显著差异，RA组与AS组无显著差异；RA患者静脉血清sICAM—1浓度与病情活动指标有相关性；RA患者静脉血清sICAM—1浓度与关节液sICAM—1浓度无显著差异。结论：sICAM—1在RA发病中起重要作用，可用于监测RA活动，观察RA疗效．但sICAM—1对RA诊断无特异性。     

NPEPPS基因在强直性脊柱炎发病机制中的功能基因组学分析

目的：探讨NPEPPS基因的单个核苷酸多态性（SNP）位点对该基因表达及在强直性脊柱炎（AS）发病机制中的调控作用。方法：选取温州医科大学附属第一医院风湿免疫科收治的54例AS患者（AS组）与78例健康对照者（对照组）的外周血单个核细胞（PBMC）,提取DNA和RNA,分别用Illumina平台进行SNP微阵列的基因定型检测和RNA测序。用PLINK提取包含NPEPPS的染色体区域的SNPs,用IMPUTE2进行缺失基因型的补缺,用PLINK计算免疫芯片的基因型。将RNA测序获得的read定位比对到人类基因组,产生每个基因的read计数,根据参考转录组计算不同转录本的表达水平,用DESeq2进行组间比较,并与基因型进行回归分析,对该SNPs和附近1 MB范围内的基因进行eQTL分析。结果：SNP rs9901869位点不管是纯合等位基因还是杂合等位基因,AS组NPEPPS表达与对照组间差异无统计学意义（P＞0.05）;AS组与对照组中不同的转录本的表达水平各不相同,其中TCONS_00206150、TCONS_00206153和TCONS_00206137的表达水平差异有统计学意义（P＜0.05）;AS组与对照组中SNP rs9901869不同基因型所对应的NPEPSS基因及其转录本的表达水平各不相同,其中部分转录本的表达水平差异有统计学意义（P＜0.05）;AS组与对照组中NPEPPS基因及其转录本的表达水平也因SNP rs9901869附近SNP rs180677251基因型的不同而差异有统计学意义（P＜0.05）。结论：NPEPPS基因位点多态性影响了NPEPPS的表达水平,可能与AS发病之间有一定的相关性。