兔骨髓基质细胞与聚DL-乳酸/羟基磷灰石生物相容性的实验研究

目的检测聚DL-乳酸/羟基磷灰石（PDLLA/HA）复合材料的特性,探讨骨髓基质细胞（BMSCs）与PDLLA/HA的生物相容性,为筛选骨组织工程的支架材料提供依据.方法将BMSCs与PDLLA/HA复合体外培养,通过形态学的观察、细胞增殖率及ALP活性的测定,观察PDLLA/HA对培养细胞的影响.结果复合培养时BMSCs能在PDLLA/HA上贴附、繁殖,其生长及功能不受影响.结论 PDLLA/HA具有良好的细胞相容性,能作为骨组织工程种子细胞的支架材料.     

氧化铝/羟基磷灰石修复兔桡骨缺损模型的手术方法学研究

目的通过对运用两种方法建立氧化铝/羟基磷灰石纳米陶瓷骨替代材料修复兔桡骨缺损模型研究,探讨因手术方式、材料的固定模式等因素对实验建模的影响。方法把20只成年中国家兔随机分为A、B两组,采用不同的术式将双侧桡骨制造成10-14mm长的骨缺损模型,分别植入氧化铝/羟基磷灰石纳米陶瓷A、B两型骨替代材料,术后进行一般情况观察和1、2周X线平片检查。结果术式A的建模成功率为60.0%,术式B建模成功率为89.5%,两者有显著性差异(χ2=4.439,P<0.05)。结论术中创伤小,对兔前臂组织结构破坏少的B术式和具有内固定功能B型材料的组合是良好的建模方式。     

氧化铝羟基磷灰石复合陶瓷修复兔桡骨节段性缺损的影像学观察

目的 评价放电等离子烧结技术制备的氧化铝羟基磷灰石复合陶瓷修复兔桡骨节段性缺损的效果.方法 选新西兰白兔15只,制作10mm长的桡骨节段性缺损模型,分为实验组:15个肢体,骨缺损区植入氧化铝羟基磷灰石复合陶瓷人工骨材料;空白对照组:6个肢体,骨缺损区旷置;自体骨对照组:6个肢体,骨缺损区植入自体骨.术后1d,8、16、24周分别进行X线摄片观察,运用ImageTool图像处理软件,进行点像素测定,24周进行扫描电镜观察.结果 实验组:氧化铝羟基磷灰石复合陶瓷人工骨植入兔桡骨缺损区8周即有新生骨形成,24周材料与骨组织连接在一起,缺损区得以修复.空白组:8周时缺损区有少量骨痂,24周时修复缺损区约1/2;自体骨植人组:8周时骨断端完全被骨痂包绕,24周时缺损区骨完全修复.像素测量结果显示三组间骨修复速度差异无统计学意义(P>0.05);重复测量资料的方差分析P=0.007,说明随着时间的延长骨组织密度增加.实验组材料两端修复界面新生骨与皮质骨的X射线摄片像素值进行比较:术后1d,8、16周P<0.05,24周P>0.05.说明术后24周前材料两端界面在不断修复,24周时完全修复.扫描电镜摄片示:实验组兔植入材料被新骨组织环形包绕与骨组织镶嵌,皮质骨与界面骨之间形成骨髓腔;在材料表面凹陷中骨细胞环状排列形成骨单位.结论 证实采用放电等离子烧结技术制备的氧化铝羟基磷灰石复合陶瓷材料能够修复新西兰兔桡骨节段性缺损,具有良好的生物活性和骨传导性.     

胎兔骨髓基质细胞修复骨缺损的实验研究

为了证实体外培养的胎兔骨髓基质细胞可以修复骨缺损,将培养的基质细胞吸附于明胶海绵,植入兔骨缺损处,１、２、４、６、８周作＾９９ｍＴｃ－ＭＤＰ骨显像、Ｘ片、组织切片观察骨痂生长情况。结果显示,平均４周左右实验组骨缺损得到修复,提示胎儿骨髓基质细胞可以作为种子细胞来修复骨缺损。     

海藻酸钙/纳米羟基磷灰石/胶原复合材料修复兔桡骨缺损

目的 探讨海藻酸钙/纳米羟基磷灰石/胶原复合材料植入动物体内的成骨能力.方法 用18只3月龄健康新西兰大白兔制备兔桡骨中段15 mm骨缺损模型.将每只兔子的左右前肢按随机数字表法分为实验组和对照组.在实验组兔桡骨缺损部位植入海藻酸钙/纳米羟基磷灰石/胶原复合材料,对照组为空白对照,骨缺损部位不植入任何材料.分别于术后4、8、12周采用X线和组织学方法检测缺损部位的成骨情况.结果 18只模型兔均进入结果分析.X线结果显示,4周时实验组桡骨缺损区可见明显的骨生成影像,呈云雾状分布,随时间的延长骨量增多,至12周时,植入体已与缺损处断端骨性愈合,皮质骨连续性较好.对照组12周时显示骨断端骨质硬化,骨缺损区尚未修复.组织学结果表明,4周时实验材料内部可见骨形成细胞集中,随时间的延长骨量增多,并相互连接成片,到12周时,材料内骨小梁成熟,网孔间新生骨小梁相互连接成板状.结论 海藻酸钙/纳米羟基磷灰石/胶原复合材料具有良好的成骨能力.     

SD大鼠骨髓基质细胞与多孔羟基磷灰石陶瓷支架体外粘附的实验研究

目的研究诱导培养的SD大鼠骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)在多孔羟基磷灰石陶瓷支架材料上的粘附和生长。方法SD大鼠骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)经矿化诱导培养、扩增后与多孔羟基磷灰石陶瓷支架体外复合培养,扫描电镜观察BMSCs在支架表面的贴附形态;同时以不同浓度细胞悬液接种多孔羟基磷灰石陶瓷支架材料,检测适宜的接种浓度及单位体积支架材料最多可粘附BMSCs数量。结果BMSCs在支架表面贴附良好,当接种浓度为2×106/ml时,单位体积的多孔羟基磷灰石陶瓷支架材料最多可粘附BMSCs数量为3.1×107cell/cm3。结论SD大鼠BMSCs在体外经矿化诱导培养可表达成骨细胞表型,诱导培养后的细胞与新型多孔羟基磷灰石陶瓷支架材料上具有良好的亲和能力。     

胎兔骨髓基质细胞修复骨缺损的实验研究

为了证实体外培养的胎免骨髓基质细胞可以修复骨缺损,将培养的基质细胞吸附于明胶海绵,植入兔骨缺损处,1、2、4、6、8周作99mTc-MDP骨显像、x片、组织切片观察骨痂生长情况。结果显示,平均4周左右实验组骨缺损得到修复,提示胎儿骨髓基质细胞可以作为种子细胞来修复骨缺损。     

PRP复合纳米羟基磷灰石对兔牙槽骨缺损的修复作用

目的 研究富血小板血浆(PRP)复合纳米羟基磷灰石(nano-HA)对兔牙槽骨缺损的修复作用.方法 健康新西兰大白兔20只,采用自身对照方法,在每只动物两组下颌骨体部分别作牙槽骨缺损区,左组为实验组,填充PRP与nano-HA复合物;右组为对照组,填充nano-HA.分别于术后2、4、8、12周处死,通过X线片、组织学染色观察兔两组牙槽骨愈合情况,并进行计算机图像分析,测量其新生骨面积.结果 术后2、4、8周,实验组新生骨面积高于对照组(P<0.05),在第12周时,实验组与对照组新生骨面积无统计学意义(P>0.05).结论 nano-HA与PRP的复合材料能促进兔牙槽骨缺损的修复,是一种很有前途的牙槽骨移植替代材料.     

自体骨髓基质细胞与异体松质骨基质复合修复兔桡骨缺损的实验研究

目的：探讨自体骨髓基质细胞（MSCs）复合异体松质基质复合修复节段性骨缺损的效果。方法：将兔自体骨髓基质细胞于体外分离，培养，增殖，与异体松质骨基质复合，选用大白兔28只，造成桡骨干缺损12mm的动物模型，分别行自体骨髓基质细胞－异体松质骨基质复合物和单纯异体松质骨基质移植，术后3、6、9、12周取材，通过X线、大体和形态学观察，术线摄片进行计算机图像分析，计算骨缺损处的骨痂灰度。结果：自体骨髓基质细胞－异体松质骨基质复合物在骨缺损的愈合过程中其成骨量，成骨速度及时间均优于单纯异体松质骨基质，约在9周使骨缺损基本得到修复，结论：自体骨髓基质细胞－异体松质骨基质复合物经异体松质骨更能有效修复节段性骨缺损。     

PRP/纳米羟基磷灰石对兔牙槽骨缺损的修复作用

目的 研究富血小板血浆（PRP）复合纳米羟基磷灰石（nano-HA）对兔牙槽骨缺损的修复作用。方法 健康新西兰大白兔20只,采用自身对照方法,在每只动物两组下颌骨体部分别作牙槽骨缺损区,左组为实验组,填充PRP与nano-HA复合物;右组为对照组,填充nano-HA。分别于术后2、4、8、12周处死,通过X线片、组织学染色观察兔两组牙槽骨愈合情况,并进行计算机图像分析,测量其新生骨面积。结果 术后2、4、8周,实验组新生骨面积高于对照组（Ρ<0.05）,在第12周时,实验组与对照组新生骨面积无统计学意义（Ρ>0.05）。结论nano-HA与PRP的复合材料能促进兔牙槽骨缺损的修复,是一种很有前途的牙槽骨移植替代材料。     

兔脱钙骨基质材料复合骨髓间充质干细胞的体外培养

目的:制备兔脱钙骨基质材料,研究脱钙骨基质作为软骨组织工程支架材料的可行性。方法:参照Ursit方法制得兔脱钙骨基质材料,扫描电镜观察脱钙骨基质的结构,将兔骨髓基质干细胞与兔脱钙骨基质体外复合培养,第2、4、6、8、10、12天时行MTT法测定及扫描电镜观察。结果:兔脱钙骨基质支架材料外观均呈乳白色,SEM观察脱钙骨基质呈天然的高密度孔隙网架结构,平均孔隙率为(65.86±5.15)%;平均孔径大小为(124.82±42.79)μm;兔脱钙骨基质材料接种于骨髓基质干细胞后可见大量骨髓基质干细胞粘附,随培养时间延长,骨髓基质干细胞增殖明显,MTT法检测显示复合培养8d骨髓基质干细胞增殖达稳定状态。结论:兔脱钙骨基质支架材料具有天然孔隙网架结构,利于细胞的粘附生长,具有良好的生物相容性,是一种较好的软骨组织工程支架材料。     

补肾活血汤结合组织工程软骨修复兔膝关节软骨缺损

目的进一步验证补肾活血汤对骨髓基质干细胞(BMSCs)复合体修复兔关节软骨缺损的影响,评价修复效果。方法取兔骨髓基质干细胞进行密度离心法结合贴壁培养法体外增殖后,复合于改建后的脱细胞真皮基质(acellular dermal ma-trix,ADM)载体上,植入到兔膝关节软骨缺损,并以中药补肾活血汤灌胃为复合组,并设立单纯中药组、单纯干细胞复合体组、空白组为对照组。4、8、12周后分别对修复组织进行形态学观察及组织学检查。进行Wakitani评分,观察其体内修复关节缺损效果。结果术后12周,复合组的缺损由透明软骨样组织充填,软骨及软骨下骨组织基本修复,修复的软骨组织在组织形态学上优于其他各组。结论骨髓基质干细胞复合体能修复家兔膝关节软骨缺损,中药补肾活血汤能促进软骨的修复,且提高了修复质量。     

同种异体骨髓基质细胞移植修复兔膝关节骨软骨缺损

目的 探讨同种异体骨髓基质细胞(BMSCs)作为种子细胞在软骨组织工程中的应用.方法 同种异体BMSCs与丝素蛋白-异体松质骨共培养构建组织工程化骨软骨复合体,移植修复兔膝关节骨软骨缺损,术后2、4、12周取材,行组织学观察及Ⅱ型胶原、Brdu免疫组化染色.结果 BMSCs能在丝素蛋白和松质骨支架上较好的黏附、生长,共培养后成功地构建了组织工程化骨软骨复合体;体内移植后生成透明软骨样组织并修复了骨软骨缺损.结论 同种异体BMSCs可作为软骨组织工程的种子细胞,丝素蛋白-松质骨双相支架负载同种异体BMSCs可用于骨软骨缺损的修复.     

陶瓷样异种骨对骨髓基质细胞生长及附着影响的实验研究

目的：探讨陶瓷样异种骨(CXB)与骨髓基质细胞的生物相容性，为CXB复合骨髓移植修复骨缺损提供依据．方法：将理化处理制得的陶瓷样异种骨(CXB)与兔骨髓基质细胞体外复合培养，用倒置相差显微镜及扫描电镜观察CXB对骨髓基质细胞的形态、生长、附着及增殖的影响．结果：CXB对骨髓基质细胞的形态、生长、附着及增殖均无不良影响，显示出良好的生物相容性．结论：CXB具有良好的生物相容性，可望与骨髓复合移植修复骨缺损．     

中药柚皮苷结合兔骨髓间充质干细胞治疗兔膝关节软骨缺损实验研究

目的：研究中药柚皮苷结合兔骨髓间充质干细胞对兔关节软骨缺损修复的影响,评价修复效果。方法：取兔骨髓间充质干细胞进行体外增殖,植入到兔膝关节软骨缺损,并以中药柚皮苷汤灌胃,并设立单纯柚皮苷汤组、单纯骨髓间充质干细胞组、单纯关节缺损组、复合应用组。于第8周后对修复组织进行形态学观察及组织学检查。结果：术后8周,在形态学观察及组织学检查上,单纯柚皮苷汤组、单纯骨髓间充质干细胞组均取得了一定的修复效果,但是复合组的缺损修复优于其他各组,差异有统计学意义。结论：兔骨髓间充质干细胞及口服中药柚皮苷汤均能修复兔膝关节软骨缺损,复合应用能促进软骨的修复,且提高修复质量。     

自固化磷酸钙复合兔自体骨髓基质细胞和bFGF异位成骨的研究

目的：探讨自同化磷酸钙(CPC)复合A体骨髓基质细胞(BMSC)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)异位成骨的可行性及其成骨效应。方法：取兔骨髓，分离骨髓基质细胞，选取松质骨粒型自骨化磷酸钙置于板孔内，A组复合BMSC(3m1)和bFGF(100μg／m1)；B组仅复合BMSC(3m1)；C组仅为CPC；置于培养箱中培养24h后植入兔骶棘肌内。分别于术后3天、4周、8周、12周行双能X线骨密度测定仪测定骨粒密度，光镜组织病理检测及图像分析并以激光共聚焦显微镜进行观察，12周时行扫描电镜观察。结果：术后8周A、B组骨粒的密度明显比C组高，12周时A、B两组也有显著性差异，光镜检测并以激光共聚焦显微镜观察术后8周A、B组有大量成骨样细胞，12周时有大量的板层状骨形成；而C组仍有较多的空泡，仅有少量的骨样组织。术后4周时A、B、C组的成骨面积差异有显著性。术后12周扫描电镜观察到A组的表面空隙内有明显的骨样组织填充，同时有多量的钙颗粒的沉积；B组次之，C组最少。结论：bFGF可促进BMSC的增殖．BMSC能与自固化磷酸钙相容生长，自固化磷酸钙复合BMSC和bFGF可明显诱导新骨的形成。     

大鼠骨髓基质细胞的体外培养及鉴定

目的观察大鼠骨髓基质细胞在体外培养的条件，为诱导骨髓基质分化形成神经干细胞、神经元，以及移植鼠骨髓基质细胞治疗帕金森病大鼠奠定基础。方法取60～90g SD大鼠，体外培养骨髓基质细胞，利用倒置相差显微镜观察原代及不同传代细胞生长形态特点，并应用流式细胞仪鉴定原代及不同传代细胞表型。结果培养的骨髓基质细胞第3代，间充质干细胞的细胞表面标志CD90表达阳性的细胞已占到92．9％。造血干细胞的表面标志CD45表达阳性的细胞已从原代的73．4％降低到2．3％。结论传3代的细胞适合于细胞诱导分化，可作为理想细胞移植治疗的细胞来源。     

骨髓基质细胞体外培养及成骨特性研究

目的 建立兔骨髓基质细胞(BMSC)向成骨细胞转化的体外培养方法，并观察其体外的成骨特性。方法 利用静置贴壁原理进行BMSC的体外培养，汇合后传代，部分细胞改用条件培养液继续培养。对培养的细胞进行形态学观察和组织学检测，并观察条件培养液对BMSC的功能影响。结果 条件培养液组细胞碱性磷酸酶(ALP)染色阳性，细胞重叠生长形成多层结构，伴有散在的矿化结节形成。条件培养液组细胞ALP染色率及活性较完全培养液组高，但增殖率相对降低。结论 培养的BMSC经诱导具有体外成骨能力。地塞米松、β甘油磷酸钠和维生素C可促使BMSC转化为成骨细胞，但抑制BMSC的增殖速度。