氧化砷诱导人肝癌细胞凋亡相关基因的实验研究

目的：探讨氧化砷（As2O3)对人肝癌细胞诱导凋亡作用的分子机制。方法：以As2O3作用于体外培养的人肝癌细胞株HepG2，通过免疫组化技术对bcl-2,bax,p53,Fas及c-myc五种基因编码蛋白的表达进行检测。结果：经As2O3作用的人肝癌细胞bcl-2基因编码蛋白表达减少，bax,Fas基因编码蛋白表达增加，p53,c-myc基因编码蛋白表达改变不明显，结论：As2O3诱导肝癌细胞凋亡分子机制可能是下调bcl-2基因编码蛋白表达，增强box,Fax基因编码蛋白表达。     

苦参碱对HepG2细胞代谢水平和基因水平的影响

目的：观察苦参碱抑制HepG2细胞增殖时，代谢水平和基因水平的变化，以揭示苦参碱抑制HepG2细胞增殖的机制，方法：0-1.5g/L苦参碱作用HepG2细胞3d，免疫组化检测AFP、PCNA,wp53,Rb,N-ras,c-myc蛋白的表达，原位杂交法检测wp53,c-myc mRNA的表达，真彩色图像定量分析检测结果，Microsoft-Excel软件统计学处理结果，放免法检测cAMP,cGMP量的改变；亲和层析法分离肝癌GGT（HSGGT）并检测HSGGT和GGT酶活性。结果：苦参碱处理HepG2细胞后，与细胞代谢相关的指标发生变化；cAMP升高，cAMP/cGMP比值升高，AFP、PCNA、cGNP、GCT、HSGGT量均降低，与基因相关的指标发生变化；抑癌基因wp53,Rb表达增强，癌基因c-myc表达减弱，N－ras表达变化不明显，结论：一定浓度苦参碱处理HepG2细胞后，在代谢水平和基因水平上均抑制了HepG2的恶性增殖，表明苦参碱通过调节抑制癌基因和癌基因的表达，影响癌细胞的代谢从而抑制其增殖。     

姜黄素诱导肿瘤细胞凋亡的实验研究

目的:探讨姜黄素诱导HepG2细胞凋亡的作用机制。方法:应用形态学方法、AnnexinV荧光染色和流式细胞仪(FCM)检测HepG2细胞凋亡的发生,应用RT-PCR检测凋亡相关基因P53、bcl-2和Fas的变化。结果:姜黄素对HepG2细胞的生长有明显的抑制作用,并诱导肿瘤细胞发生凋亡。凋亡细胞表现为细胞固缩,核染色质碎裂;流式细胞仪检测凋亡率为11.7%,细胞停在G1和G2期。AnnexinV标记的方法检测凋亡时发现,坏死与凋亡共存。在姜黄素诱导HepG2细胞凋亡过程中,凋亡相关基因Fas转录水平比用药前增强。结论:凋亡为姜黄素抑癌的机制之一,姜黄素诱导HepG2细胞凋亡可能与P53、bcl-2和Fas基因表达有关。     

视黄酸依赖Fas/RARα融合基因诱导MCF-7细胞凋亡的分子机制研究

目的探讨视黄酸协同融合基因Fas/RARα诱导MCF-7细胞凋亡效应及其分子机制.方法以流式细胞仪、DNA梯形带检测MCF-7细胞凋亡效应,经RT-PCR和蛋白免疫印迹等方法观测视黄酸处理后caspase-8、bcl-2及bax基因表达变化.结果一定剂量视黄酸可诱导转染Fas/RARα融合基因的MCF-7细胞凋亡,caspase-8和bax基因表达上调,而bcl-2基因表达下降.结论视黄酸及其依赖的融合基因表达可联合诱导MCF-7细胞凋亡,caspases和bcl-2家族成员表达变化可能是其作用的主要分子机制.     

紫杉醇对人甲状腺未分化癌细胞体外作用的实验研究

目的观察紫杉醇对人甲状腺未分化癌DRO细胞增殖、细胞凋亡以及血管内皮生长因子(VEGF)、bcl-2和bax基因表达的影响。方法MTT法检测紫杉醇对DRO细胞增殖的抑制效应;流式细胞术检测经紫杉醇6.25μg/L作用24、487、2 h后细胞周期和凋亡率的变化;RT-PCR方法观察经紫杉醇6.25μg/L作用48 h后细胞内VEGF、bcl-2和bax基因的表达情况。结果紫杉醇能够抑制DRO细胞生长,72 h的IC50为10μg/L;可将细胞阻滞于G2/M期并诱导其凋亡,6.25μg/L紫杉醇作用48 h后凋亡达高峰,凋亡率为32.76%±1.54%;细胞内VEGF的表达低于对照组;凋亡抑制基因bcl-2在细胞凋亡过程中表达没有显著性变化,而促凋亡基因bax呈高表达。结论紫杉醇明显抑制DRO细胞生长,并诱导细胞凋亡,且能下调VEGF的表达,bax基因在紫杉醇诱导的DRO细胞凋亡中可能起着重要的调控作用。     

一氧化氮诱导肝癌细胞凋亡过程bcl-2和bax mRNA表达水平的变化

目的 探讨在一氧化氮(NO)诱导肝癌细胞凋亡过程bcl-2和bax mRNA表达水平的动态变化。方法 用NO供体硝普钠(SNP)诱导SMMC-7721和HepG2肝癌细胞株凋亡，RT-PCR的方法检测bcl-2、ba xmRNA表达水平，并采用凝胶分析系统进行半定量分析。结果 1．0mmol/L可降低SMMC-7721和HepG2细胞bcL2、bax mRNA的表达水平，提高bax/bc1-2 mRNA的比值并呈时间依赖性。HepG2细胞bcl-2和bax mRNA降低的幅度较SMMC-7721细胞小(P＜0．05)，开始变化的时间也较SMMC-7721细胞迟。结论 NO诱导肝癌细胞株的凋亡，可能与其bcl-2、bax mRNA表达水平变化导致bax/bc1-2 mRNA比值上升有关。     

青藤碱诱导肝癌细胞凋亡的实验研究

目的:探讨青藤碱诱导HepG2细胞凋亡的作用及其分子机制.方法:应用形态学方法、AnnexinV荧光染色和流式细胞仪(FCM)检测HepG2细胞凋亡的发生,定量检测Apo2.7及凋亡相关基因bcl-2和Fas的表达.结果:青藤碱对HepG2细胞的生长有明显的抑制作用,并诱导肿瘤细胞发生凋亡.凋亡细胞表现为细胞固缩,核染色质碎裂;细胞停在G1和G2期.AnnexinV标记的方法检测凋亡时发现,坏死与凋亡共存.与未用药细胞相比,用药后肝癌细胞的Apo2.7表达升高,凋亡相关基因Fas、bcl-2转录水平比用药前增强.结论:凋亡为青藤碱抑癌的机制之一,青藤碱诱导HepG2细胞凋亡可能与bcl-2和Fas基因表达,改善线粒体功能有关.     

蓬子菜黄酮类化合物对人肝癌HepG2细胞增殖及凋亡的机制研究

目的 探讨蓬子菜黄酮类化合物香叶木素-7-O-β-D-木糖-(1→6)-β-D-葡萄糖苷（DXG）对人肝癌细胞株HepG2增殖的抑制作用及其诱导HepG2细胞凋亡的机制。方法 台盼蓝染色法检测DXG对HepG2细胞生长的影响;MTT法检测DXG对细胞增殖的抑制作用;吖啶橙/溴乙（AO-EB）荧光染色法观察DXG对HepG2细胞凋亡的形态学影响;琼脂糖凝胶电泳观察凋亡细胞的DNA图谱变化;反转录聚合酶链式反应（RT-PCR）检测凋亡相关基因bcl-2及bax的表达。结果 台盼蓝染色和MTT检测显示,DXG 50、100、200 μg/mL能明显抑制HepG2细胞增殖,与对照组相比差异显著（P＜0.05）。AO-EB染色可见DXG诱导HepG2细胞凋亡并发生形态学改变,且随DXG的质量浓度升高,凋亡细胞的比例显著增加。琼脂糖凝胶电泳显示,HepG2细胞经DXG 100、200 μg/mL处理48 h后,可见DNA“梯形”碎片条带。RT-PCR实验表明,DXG下调细胞凋亡的抑制基因bcl-2 mRNA表达,促使凋亡基因bax mRNA表达增强。结论 DXG具有显著抑制人肝癌细胞HepG2增殖、诱导其凋亡的作用,其作用机制与调控bax/bcl-2的表达有关。     

奥沙利铂诱导人肝癌细胞株HepG2凋亡及其机制探讨

目的 :研究奥沙利铂对人肝癌细胞株HepG2生长抑制及诱导凋亡的作用并探讨其诱导凋亡的作用机制。方法 :应用MTT法检测奥沙利铂对HepG2细胞生长的抑制作用 ;电镜观察细胞的形态改变 ;流式细胞仪分析细胞周期的分布和凋亡的情况 ;免疫组织化学法检测突变型p5 3,Bcl- 2 ,Bax ,Fas等凋亡相关基因蛋白的表达。结果 :奥沙利铂对HepG2有明显的抑制作用 ,细胞阻滞于S期和G2 /M期 ,G0 /G1期细胞减少 ,作用 72h出现凋亡峰 ,电镜可以找到凋亡小体 ,免疫组织化学表明Bax表达增强 ,突变型 p5 3、Bcl- 2表达减弱 ,Fas表达无差异。 结论 :奥沙利铂具有抑制肝癌细胞株HepG2增殖及诱导凋亡作用 ,其机制与促凋亡相关基因表达增强和抗凋亡相关基因表达减弱有关。     

奥沙利铂处理人肝癌细胞株HepG2、QGY后凋亡相关基因蛋白的表达

目的观察抗肿瘤药物奥沙利铂对人肝癌细胞株HepG2、QGY凋亡相关基因蛋白表达的影响,探讨奥沙利铂诱导HepG2、QGY细胞发生凋亡的机制.方法采用人肝癌细胞株HepG2、QGY作为研究对象,免疫细胞化学法检测细胞凋亡相关基因蛋白的表达.结果奥沙利铂作用72h后,免疫细胞化学表明Bax表达增强,突变型P53蛋白(MTP53)、Bcl-2、Myc表达减弱,Fas表达无差异.结论奥沙利铂诱导肝癌细胞凋亡的作用与上调Bax蛋白表达及下调MTP53、Bcl-2、Myc蛋白表达有关,该药可能不是通过Fas途径诱导细胞凋亡.     

低氧性肺动脉高压大鼠肺组织相关凋亡基因表达的研究

目的 探讨bcl-1、bax、Fas、FasL凋亡相关基因在低氧肺动脉高压大鼠肺组织中的表达及其与发病的关系。方法 60只Wistar大鼠随机分为5组：正常对照组；低氧肺动脉高压组；血晶素组；锡原卟啉；低浓度CO组；每组12只。采用组织的原位细胞凋亡、DNA片段检测，免疫组织化学染色，原位杂交等方法进行检测。结果 低浓度CO组和血晶素组肺组织有典型的DNA梯带，bcl-2、bax、Fas、FasL免疫组化显示的表达呈强棕黄色，比低氧组均显著升高，原位杂交可见，低浓度CO组和血晶素组肺内支气管和小血管壁细胞胞浆呈强的紫蓝色，bcl-2基因呈棕黄色，比低氧组降低，原位杂交可见呈紫蓝色，结论 CO可以调节bcl-2、bax、Fas、和FasL凋亡基因的表达，而这些凋亡基因又通过不同途径参与低氧肺动脉高压肺组织的细胞凋亡的调节，并在慢性阻塞性肺疾病的发生与发展中发挥重要作用。     

丹参诱导大鼠肝星状细胞凋亡作用的研究

目的 利用体外培养大鼠传代星状细胞为模型，观察丹参对星状细胞凋亡相关蛋白FasL、Fas、bax和bcl—2表达的调节作用，以进一步阐明丹参诱导星状细胞凋亡的机理。方法 大鼠星状细胞的分离采用胶原酶原位循环灌流法。星状细胞经20g／L丹参作用48h后，用免疫细胞化学法检测FasL、Fas、bax和bcl—2，用Western blot法检测bcl—2表达。结果 免疫细胞化学结果表明：星状细胞经丹参作用后FasL表达明显增强，Fas稍增加，bax明显增强，bcl—2减少；用Western blot法未能检出bcl—2。结论 丹参通过Fas途径及增加bax表达和减少bcl-2诱导肝星状细胞凋亡。     

8-Br-cAMP和槲皮素对Eca-109细胞相关基因的DNA拷贝和基因表达的影响

目的探讨8-Br-cAMP和槲皮素对Eca-109细胞wtp53、c-myc、bcl-2基因的扩增、表达以及VEGF表达的影响.方法将贴壁培养的Eca-109细胞随机分成3组,Br组加8-Br-cAMP至终浓度为2×105 mol/L;Q组加槲皮素至终浓度为43 μmol/L;C组不加任何药物,只加入新培养液培养.3组细胞同时培养48h.以cDNA 阵列技术显示Eca-109细胞凋亡中wtp53、c-myc、bcl-2 DNA拷贝和mRNA的表达,以免疫组化法显示VEGF的表达.结果Br组和Q组与C组相比wtp53 DNA拷贝和mRNA信号较强,c-myc、bcl-2 DNA拷贝和mRNA信号较弱,VEGF表达较弱.结论8-Br-cAMP和槲皮素皆可通过上调wtp53,下调bcl-2、c-myc基因的扩增和表达,下调VEGF的表达,而诱导Eca-109细胞凋亡.     

抗呆Ⅰ号对体外模拟脑缺血再灌注损伤海马神经元凋亡调控基因表达的影响

采用免疫细胞化学法,观察体外模拟脑缺血再灌注损伤对原代培养海马神经元凋亡调控基因bcl-2和bax的表达及抗呆Ⅰ号(由天麻素等中药提取物组成)的影响.结果发现,脑缺血再灌注损伤可引起海马神经元bcl-2表达减少和bax表达增加,抗呆Ⅰ号可上调神经元bcl-2的表达和下调bax的表达,表明抗呆Ⅰ号能通过调节缺血再灌注损伤神经元凋亡调控基因的表达,对缺血再灌注损伤神经细胞起到一定的保护作用.     

IFN-α及其联合GMCSF对CML患者骨髓细胞凋亡相关基因表达的影响

目的 :探讨IFN α及IFN α联合GM CSF调节慢性期慢性粒细胞白血病 (CML CP)患者骨髓单个核细胞(MNCs) bcr abl,bcl 2 和 c myc基因表达的影响。方法 :淋巴细胞分离液离心富集 14例CML CP患者骨髓MNCs,经干扰素 α(IFN α)及IFN α联合粒细胞 -巨噬细胞集落刺激因子 (GM CSF)培养 2 4h后 ,采用相对定量逆转录 -聚合酶链反应 (RT PCR)及扩增片段光密度扫描分析bcr abl,bcl 2 ,c myc及β actin 基因表达水平 ,配对t检验统计分析组间差异。结果 :IFN α(2 0 0U·ml-1)及IFN α(2 0 0U·ml-1)联合GM CSF(10ng·ml-1)均显著抑制bcr abl基因表达 ;IFN α部分抑制 c myc及 bcl 2 基因表达 ;GM CSF在IFN α作用的基础上部分促进 bcr abl及 c myc基因表达和显著抑制 bcl 2 基因表达。结论 :IFN α及IFN α联合GM CSF均可抑制抗凋亡基因bcr abl和bcl 2基因表达 ,并调节c myc基因表达水平。通过促进细胞凋亡而抑制恶性克隆增长是IFN α或IFN α联合GM CSF治疗CML的可能作用机制。     

Effect of 1,25(OH)_2D_3 on the growth and apoptosis of breast cancer cell line MCF-7

Ｔｈｅｓｔｅｒｏｉｄｈｏｒｍｏｎｅ 1,2 5 ｄｉｈｙｄｒｏｘｙｖｉｔａｍｉｎＤ3 (1,2 5(ＯＨ) 2 Ｄ3 )ｉｓｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｌｙｔｈｅｍｏｓｔａｃｔｉｖｅｆｏｒｍｏｆｖｉｔａｍｉｎＤ3 ａｎｄｐｌａｙｓａｎｉｍｐｏｒｔａｎｔｒｏｌｅｉｎｔｈｅｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆｃａｌｃｉｕｍａｎｄｂｏｎｅｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ Ｔｈｅｅｆｆｅｃｔｓｏｆ1,2 5(ＯＨ) 2 Ｄ3 ａｒｅｍｅｄｉａｔｅｄｂｙｖｉｔａｍｉｎＤｒｅｃｅｐｔｏｒｓ (ＶＤＲ)ｉｎｔａｒｇｅｔｔｉｓｓｕｅｓ Ｉｎｔｈｅｌａｓｔｄｅｃａｄｅ,ＶＤＲｗａｓｎｏ…     

凋亡相关基因bcl-2基因族在乳腺癌中的预后作用

探讨癌基因ｂｃｌ－２及其基因族成员ｂａｘ、ｂｃｌｘ的表达水平与乳腺癌生物学行为的关系及对乳腺癌预后的意义。方法运用免疫组化方法对９１例乳腺癌石蜡组织切片ｂｃｌ－２、ｂａｘ蛋白表达水平进行检测,运用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹法检测１６例新鲜乳腺癌组织标本ｂｃｌｘｌｍＲＮＡ表达水平。结果９１例乳腺癌病例中,ｂｃｌ２阳性率６５．９％（６０／９１）,ｂａｘ阳性率６４．８％（５９／９１）。ｂｃｌ２、ｂａｘ蛋白表达水平与凋亡指数（ＡＩ）、病理组织学分级、腋淋巴结转移情况、术后局部复发与转移相关,ｂｃｌ２表达与雌激素受体（ＥＲ）水平正相关。ＡＩ与ｂｃｌ２、ｂａｘ蛋白表达水平相关。对影响乳腺癌术后无病生存率的单因素分析结果显示,ｂｃｌ２、ｂａｘ蛋白表达水平具有预后作用;Ｃｏｘ’ｓ模型多因素分析结果,ｂｃｌ２蛋白表达水平是独立的预后指标。１６例乳腺癌新鲜标本中,５０％（８／１６）ｂｃｌｘｌｍＲＮＡ高表达,其表达水平与ｂｃｌ２蛋白表达、腋淋巴结转移相关。结论凋亡相关基因ｂｃｌ２、ｂａｘ、ｂｃｌｘｌ表达失调可导致乳腺癌细胞凋亡调控的紊乱,使腋淋巴结转移程度增加,ｂｃｌ２蛋白表达水平在乳腺癌中有独立的预后价值