TNF-α对脂肪变性肝细胞SREBP-1c的表达及甘油三酯含量的影响

目的 探讨TNF-α对油酸诱导的脂肪变性肝细胞模型固醇调节元件结合蛋白1c(sterol-regulatory elementbinding protein-1c,SREBP-1c)mRNA的表达及甘油三酯(triglyceride,TG)含量的影响.方法 以正常肝细胞株L02进行细胞培养,用油酸诱导建立肝细胞脂肪变性模型,在对照组及模型组中加入TNF-α与抗TNF-α抗体分组进行培养,采用RT-PCR法检测SREBP-1c及脂肪酸合成酶(fatty acid synthetase,FAS)mRNA的表达;采用油红O染色观察细胞内脂滴的变化,并检测细胞内TG含量.结果 TNF-α作用组SREBP-1c mRNA的表达上调,与对照组相比差异显著(P＜0.01);而使用抗TNF-α抗体作用后表达下调.实验显示,TNF-α作用组较对照组脂变细胞数量增多,细胞内TG含量显著增加(P＜0.01),而使用抗TNF-α抗体作用后TNF-α作用组脂变细胞数量减少,细胞内TG含量显著下降(P＜0.01).结论 TNF-α上调L02肝细胞SREBP-1c mRNA的表达促进细胞内TG的合成,可能参与了肝细胞的脂代谢及脂肪变性的形成.     

辛伐他汀对急性病毒性心肌炎小鼠心肌病变的影响

目的观察辛伐他汀对急性病毒性心肌炎(VMC)小鼠的心肌病变和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达的影响。方法给BALB/c小鼠腹腔接种柯萨奇病毒B组3型(CVB_3)病毒建立急性VMC模型。随机均分为模型对照组、辛伐他汀5mg·kg~(-1)·d~(-1)治疗组(5mg组)、20mg·kg~(-1)·d~(-1)治疗组(20mg组)及40mg·kg~(-1)·d~(-1)治疗组(40mg组)。用药14d后,观察各组小鼠的心肌病理改变和死亡率,采用实时定量聚合酶链反应检测心肌中TNF-αmRNA表达水平,酶联免疫吸附试验检测血清TNF-α水平。结果模型对照组的心脏病变积分、心肌TNF-αmRNA表达和血清TNF-α水平分别为(2.84±0.62)分、0.139±0.029和(147.4±13.3)ng/L,5mg组分别为(2.48±0.55)分、0.124±0.026和(139.0±20.2)ng/L,20mg组分别为(1.56±0.58)分、0.057±0.012和(113.0±11.8)ng/L,40mg组分别为(1.61±0.62)分、0.051±0.012和(101.3±13.8)ng/L,20mg和40mg组均显著低于模型对照组(P值均<0.01),5mg组与模型对照组的差异均无统计学意义(P值均>0.05)。各组间小鼠死亡率的差异均无统计学意义(P值均>0.05)。结论辛伐他汀可减轻急性VMC小鼠心肌炎症和心肌病变程度,其机制部分与减少TNF-α表达有关。     

TNF-α促进HepG2肝细胞脂质积聚及其机制的初步研究

目的探讨肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)是否能够促进肝细胞脂质积聚,并对其机制进行初步探讨。方法将HepG2肝细胞分为空白对照组、单纯TNF-α组(TNF-α2ng/mL或20ng/mL)、软脂酸组(软脂酸0.08mmol/L或0.2mmol/L)及联合组(TNF-α2ng/mL联合软脂酸0.08mmol/L、TNF-α2ng/mL联合软脂酸0.2mmol/L、TNF-α20ng/mL联合软脂酸0.08mmol/L、TNF-α20ng/mL联合软脂酸0.2mmol/L),处理24h,应用化学酶促-比色法定量检测细胞内TG含量。进一步选取TNF-α20ng/mL和软脂酸0.08mmol/L,通过油红O染色观察HepG2细胞内脂质积聚情况;实时荧光定量PCR和Western blot检测HepG2细胞SREBP-1、FAS、ACCα的表达水平。结果①单纯TNF-α组TG含量[TNF-α2ng/mL组(0.344±0.093)μg/μg、TNF-α20ng/mL组(0.329±0.068)μg/μg]分别较空白对照组[(0.192±0.048)μg/μg]显著升高(P<0.05);联合组[TNF-α2ng/mL联合软脂酸0.08mmol/L组(0.451±0.096)μg/μg、TNF-α2ng/mL联合软脂酸0.2mmol/L组(0.821±0.257)μg/μg、TNF-α20ng/mL联合软脂酸0.08mmol/L组(1.032±0.286)μg/μg、TNF-α20ng/mL联合软脂酸0.2mmol/L组(2.134±1.049)μg/μg]分别较软脂酸组[软脂酸0.08mmol/L组(0.247±0.069)μg/μg、软脂酸0.2mmol/L组(0.341±0.031)μg/μg]显著升高(P<0.05);②油红O染色进一步显示,TNF-α促进肝细胞内脂质积聚。③实时荧光定量PCR和Western blot检测结果显示单纯TNF-α组与空白对照组相比,HepG2细胞SREBP-1、FAS、ACCα的表达均增加(P<0.05);联合组与软脂酸组相比,肝细胞内SREBP-1、FAS、ACCα的表达水平明显上调(P<0.05)。结论TNF-α促进HepG2肝细胞内脂质积聚,增加SREBP-1、FAS、ACCα的表达。     

TNF-α对哮喘小鼠肺组织表达TNF-αR、CysLTR1的影响

目的用不同方式及剂量的TNF-α干预哮喘小鼠,研究其肺组织TNF-α受体(TNF-αR)、CysLTs受体1(Cysteinyl leukotriene receptor1,CysLTR1)的表达。方法 48只小鼠分为正常对照组(A组)、哮喘非干预组(B组)、TNF-α低剂量腹腔给药组(C1组),高剂量腹腔给药组(C2组),TNF-α低剂量雾化组(D1组),高剂量雾化组(D2组)。分别采用免疫组化法(IHC)检测TNF-αR,WB检测肺组织中CysLTR1表达情况。结果 (1)IHC测TNF-αR阳性细胞计数分别为:20.1079±1.115、25.832±3.240、38.324±5.102、53.366±5.774、44.037±4.102、55.372±7.536。除C2组和D2组外,其余任意两组间差异均有统计学意义(P0.05);(2)WB检测CysLTR1蛋白相对密度分别为0.797±0.081、1.422±0.97、1.784±0.210、2.448±0.096、2.023±0.058、2.933±0.034,除B组和C1组、C2组和D2组外,其余任意两组间差异均有统计学意义(P0.05)。结论 TNF-α使哮喘小鼠肺组织表达TNF-αR、CysLTR1增多,可能使抗TNF-α治疗受益于哮喘治疗。     

益气养阴祛瘀中药对干燥综合征模型NOD小鼠TLR/IFN/BAFF通路的作用研究

目的观察益气养阴祛瘀中药对干燥综合征(SS)模型NOD小鼠外周血单个核细胞TLR9、IFN-α、BAFFm RNA表达水平的调节作用,探讨其对SS的TLR-IFN-BAFF通路信号表达的影响及其作用机制。方法选择NOD小鼠20只及ICR正常小鼠10只,饲养于无特殊病菌的恒温环境。NOD小鼠随机分为模型组、中药组,各10只,ICR正常小鼠10只,作为对照组。于小鼠9周龄时开始每日定时灌胃益气养阴祛瘀中药1次,持续12周。于实验第12周末时所有小鼠股动脉取血后处死,分离外周血单个核细胞,采用RT-PCR法检测TLR9、IFN-α、BAFF m RNA表达水平。小鼠股动脉取血后处死,摘取小鼠颌下腺,用光镜下观察小鼠颌下腺病理改变。结果对照组、模型组、中药组TLR9 m RNA表达水平分别为(0.15±0.03)、(0.92±0.05)、(0.29±0.06);对照组、模型组、中药组IFN-αm RNA表达水平分别为(0.12±0.03)、(1.48±0.04)、(0.20±0.03);对照组、模型组、中药组BAFF m RNA表达水平分别为(0.23±0.06)、(1.28±0.04)、(0.38±0.06);与正常对照组相比,模型组TLR9、IFN-α、BAFFm RNA均明显升高(P0.01或P0.05),与模型组比较,中药组TLR9、IFN-α、BAFFm RNA均明显下降(P0.05)。结论 NOD小鼠存在血清TLR9、IFN-α、BAFF m RNA水平过度表达。益气养阴祛瘀中药对NOD小鼠TLR/IFN/BAFF通路的过度表达具有抑制作用。     

加味二陈汤对ApoE~(-/-)小鼠炎症标志物IL-6和TNF-α的调节作用

目的研究加味二陈汤对Apo E-/-小鼠血清、主动脉壁及瓣膜的IL-6、TNF-α表达的影响。方法40只Apo E-/-小鼠中10只为空白对照组,30只以高脂饲喂养4周构建动脉粥样硬化(As)小鼠模型,均分成模型组、辛伐他汀组、加味二陈汤组,分别用生理盐水、辛伐他汀及加味二陈汤对小鼠灌胃给药,8周后处死小鼠,Elisa法检测血清中IL-6、TNF-α的含量;免疫组化法检测IL-6、TNF-α在主动脉壁及瓣膜的表达。结果辛伐他汀组血清IL-6和TNF-α分别为392.06±37.70 pg/m L、189.1±50.4 pg/m L,与模型组相比表达下降(P<0.05);加味二陈汤组血清IL-6、TNF-α分别为442.41±172.26 pg/m L、47.2±13.3 pg/m L,与模型组相比表达下降(P<0.05),与辛伐他汀组相比,表达下降(P<0.05);免疫组化结果显示加味二陈汤可降低IL-6、TNF-α在主动脉壁内的表达。结论加味二陈汤可降低血清和主动脉壁及瓣膜的IL-6、TNF-α的表达。     

辛伐他汀对老年大鼠心肌细胞白细胞介素-1β和肿瘤坏死因子-α表达的影响

目的 观察辛伐他汀对老年大鼠心肌细胞中炎性因子白细胞介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达的影响。方法 以24月龄大鼠为实验对象,按常规方法分离、剪碎并消化心室肌组织,以含10%胎牛血清的DMEM培养心肌细胞。将培养细胞分为衰老模型对照组、溶剂对照组(DMSO)和辛伐他汀1和10μmol/L组,各组细胞经相应处理后,分别用RTPCR和Western印迹法检测IL-1β和TNF-α的m RNA及蛋白表达水平,并比较其变化。结果 RT-PCR结果显示,与衰老模型组相比,溶剂组IL-1β和TNF-αm RNA表达无明显变化(P>0.05),辛伐他汀1和10μmol/L组IL-1β和TNF-αm RNA表达均明显降低(分别为P<0.05和P<0.01);与溶剂对照组相比,辛伐他汀1和10μmol/L组IL-1β和TNF-αm RNA表达均明显降低(分别为P<0.05和P<0.01);Western印迹法结果显示,与衰老模型组相比,溶剂对照组IL-1β蛋白表达无明显变化,TNF-α蛋白表达明显降低(P<0.01),辛伐他汀1和10μmol/L组IL-1β和TNF-α蛋白表达均明显降低(P<0.01);与溶剂对照组相比,辛伐他汀1和10μmol/L组IL-1β蛋白表达均明显降低(P<0.01),而TNF-α蛋白表达无明显变化(P>0.05)。结论 辛伐他汀可下调衰老大鼠心肌细胞炎性因子IL-1β和TNF-α的基因表达。     

控制饮食联合有氧运动对非酒精性脂肪肝患者TNF-α、SREBP-1c水平的影响

目的探讨有氧运动与饮食控制对非酒精性脂肪肝患者血清TNF-α、SREBP-1c的影响。方法选择非酒精性脂肪肝患者60例为研究对象,根据干预方法不同分为运动组控制饮食组、联合组和对照组。比较干预前后患者TNF-α、SREBP-1c以及相关指标变化。结果联合组干预后腰臀比、TG、LDL/HDL、TNF-α、SREBP-1c、空腹胰岛素以及胰岛素抵抗显著改善（P〈0.05或P〈0.01）。TNF-α与HOMA-IR以及SREBP-1c具有显著正相关关系（P〈0.05）。TNF-α及SREBP-1c与腰臀比、BMI以及TG具有正相关关系（P〈0.05或P〈0.01）。结论有氧运动联合控制饮食能够降低血清TNF-α及SREBP-1c水平。     

姜黄素对溃疡性结肠炎模型小鼠结肠组织TNF-α、IL-1β、IL-10表达的影响

目的观察姜黄素对溃疡性结肠炎(UC)模型小鼠结肠组织肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)和白细胞介素10(IL-10)表达的影响,探讨其治疗UC的可能作用机制。方法SPF级健康雄性BALB/c小鼠60只,随机分为正常对照组、模型组、姜黄素组、柳氮磺胺吡啶(SASP)组,各15只。采用右旋葡聚糖硫酸钠(DSS)法复制UC小鼠模型,腹腔注射相应药物,连续7天。观察小鼠一般生理状态,疾病活动度指数(DAI)评分。末次给药后处死小鼠,行结肠大体形态损伤指数(CMDI)评分,组织切片染色,光镜下观察结肠组织的病理学变化并评估组织损伤指数(TDI)。ELISA法检测小鼠结肠组织促炎因子TNF-α、IL-1β和抗炎因子IL-10表达水平。结果(1)模型组小鼠大体形态、组织病理均符合溃疡性结肠炎特点。(2)各组DAI评分比较:SASP组[(0.51±0.40)分]、姜黄素组[(0.52±0.36)分]与模型组[(1.38±0.61)分]比较,P0.01。(3)各组CMDI评分比较:SASP组[(2.14±0.92)分]、姜黄素组[(2.19±1.10)分]与模型组[(3.83±1.44)分]比较,P0.01。(4)各组TDI评分比较:SASP组[(5.48±1.01)分]、姜黄素组[(6.48±1.03)分]与模型组[(8.89±0.88)分]比较,P0.01。(5)各组小鼠结肠组织TNF-α、IL-1β及IL-10含量比较:SASP组[(126.75±6.16)pg/m L、(157.51±20.43)pg/m L、(156.33±16.51)pg/m L]、姜黄素组[(254.83±28.29)pg/m L、(236.83±25.21)pg/m L、(136.66±16.49)pg/m L]与模型组[(418.19±41.67)pg/m L、(401.11±35.32)pg/m L、(33.96±6.68)pg/m L]比较,P0.01。结论姜黄素可以显著改善UC小鼠症状、病理形态,上调小鼠结肠组织IL-10表达水平,抑制TNF-α、IL-1β表达水平,达到对UC的抗炎作用。     

硒元素对非酒精性单纯性脂肪肝大鼠PPARα、C/EBPα、SREBP-1c及SREBP-2的影响

目的 探讨硒元素对高脂饮食诱导的单纯性脂肪肝模型大鼠的保护作用及作用机制。 方法 SPF级SD大鼠40只,完全随机分为正常对照组(NC)、模型对照组(HF)、硒元素低剂量(L-Se,0.5mg/kg)组、硒元素高剂量(H-Se,1.0 mg/kg)组,各组大鼠体重差异无统计学意义(P>0.05),观察硒元素对体重、血清TC、TG、HDL-C、LDL-C、ALT、AST含量,肝中TC、TG含量及蛋白脂肪酶(LPL)和肝脂酶(HL)活性的影响。HE和油红O染色观察肝脏组织病理的变化。RT-PCR测定各组大鼠PPARα、C/EBPα、SREBP-1c及SREBP-2 mRNA的表达情况。 结果 应用硒元素(0.5~1.0 mg/kg)干预后,大鼠血清TC、LDL-C、ALT、AST及肝指数水平明显降低,肝总脂酶活性明显升高,RT-PCR结果显示,硒元素各剂量组能显著下调肝脏SREBP-1c及C/EBPαm RNA的表达,上调PPARαm RNA的表达(均P<0.05),但SREBP-2 mRNA表达比较差异无统计学意义。同时可明显减轻大鼠肝肿大,改善肝细胞的脂肪变性,抑制附睾脂肪组织增大。 结论 硒元素可通过纠正血脂紊乱,改善肝功能和肝细胞脂肪变性防治单纯性脂肪肝,其作用机制可能与上调PPARα、下调C/EBPα、SREBP-1c mRNA表达,提高肝总脂酶活性,进而增加TG分解,降低TG合成有关。