Epac1与神经性疼痛的研究进展

鸟嘌呤核苷酸转化因子交换蛋白1(Epac1)是一种新型的环腺苷酸传感器,调节细胞的几个关键过程,如Ca~(2+)调控、肌肉收缩、细胞分泌、离子通道传递、学习与记忆、细胞的生长和分化、凋亡和炎症。Epac1在神经性疼痛的进展中发挥关键作用,Epac1激活有助于神经性疼痛引起的异常性疼痛的进展,具体信号转导机制尚不清楚,可能与激活蛋白激酶C、丝裂原活化蛋白激酶以及Ca~(2+)内流有关。Epac1在神经疼痛的研究仅限于动物实验和细胞实验,未来有望在人体进行试验研究,使其成为治疗神经性疼痛的新靶点。     

Epac信号分子与哮喘关系研究进展

支气管哮喘是临床常见的气道慢性炎症性疾病,以气道高反应性、慢性气道炎症和气道重塑为病理生理特征,其发病机制目前尚未完全阐明。环磷酸腺苷(cAMP)是体内重要的第二信使,参与调控机体新陈代谢、细胞钙信号传导、细胞生长与分化、凋亡等多种病理生理过程。长期以来,蛋白激酶A (PKA)被认为是介导cAMP生物学效应的唯一下游信号分子。但新近发现的新型cAMP靶分子——cAMP直接激活的交换蛋白(Epac)的发现打破了这一说法。大量研究证实,Epac可单独或协同PKA介导cAMP的多种生物学效应。本文就Epac在支气管哮喘发病中的作用及其可能机制作一综述,为寻找哮喘治疗新靶点奠定基础。     

cAMP/Epac信号通路在ARDS中的作用研究进展

急性呼吸窘迫综合征(acute respiratory distress syndrome, ARDS)是一种常见且凶险的临床综合征。炎性反应介导的肺泡上皮细胞和肺血管内皮细胞损伤在ARDS的发病机制中处于核心地位。环磷酸腺苷(cyclic adenosine monophosphate,cAMP)是作用最广泛的第二信使,调控着一系列不同的病理生理过程。近年来研究发现环磷酸腺苷活化交换蛋白(exchange protein directly activated by cAMP,Epac)作为一种新兴的cAMP下游分子,参与多种效应因子和关键信号转导过程,cAMP/Epac信号通路参与炎性反应、血管内皮和肺上皮屏障功能、凝血功能、肺成纤维细胞分化等调控过程,这些作用可能与ARDS的防治有所关联。本文针对cAMP/Epac信号通路在ARDS中的作用做一综述。     

cAMP/Epac/Rap1信号通路调控NG2细胞分泌IL-1β、TNF-α、BDNF及酸枣仁皂苷A的作用研究

目的 研究环磷酸腺苷(cAMP)/环磷酸腺苷结合蛋白(Epac)/Ras相关蛋白1(Rap1)信号通路是否参与调控NG2细胞分泌白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、脑源性神经营养因子(BDNF)及酸枣仁皂苷A(JuA)的作用。方法 体外培养NG2细胞，分为对照组、百日咳毒素(PTX)组、非环状核苷酸Epac拮抗剂(ESI-09)组、酸枣仁皂苷A(JuA)组、艾司唑仑(阳性药)组。采用CCK-8法检测不同浓度JuA对NG2细胞存活率的影响，RT-PCR法和Western blot法检测各组细胞IL-1β、TNF-α、BDNF、cAMP、Epac、Rap1 mRNA及蛋白的表达情况。结果 与对照组比较，PTX组降低IL-1β和TNF-α mRNA和蛋白的表达(P<0.01),增加BDNF和cAMP mRNA和蛋白的表达(P<0.01);ESI-09组增加IL-1β和TNF-α mRNA和蛋白的表达(P<0.05),降低BDNF、Epac和Rap1 mRNA和蛋白的表达(P<0.01);JuA组、阳性药组均增加IL-1β、TNF-α、BDN...     

Piezo2蛋白的生物信息学分析及其在肠道中的表达

目的 对Piezo2性质、结构和功能进行预测分析,并检测其在肠道的表达.方法 利用Protparam程序预测人Pi-ezo2蛋白基本理化性质;TMHMM Serve 2.0预测跨膜结构域;ProtComp Version 9.0分析亚细胞定位;用SOPMA程序预测其二级结构;SWISS-MODEL服务器生成其三维模型.免疫组织化学染色确定Piezo2在肠道组织的表达位置,以实时定量荧光PCR检测Piezo2在不同肠段的表达量及与Epac1表达的相关性.结果 Piezo2蛋白分子式为C14539 H22436 N3662 O4087 S130,相对分子质量为318.092×103,等电点pI=5.82.Piezo2蛋白存在35个跨膜结构域,并有多个蛋白修饰位点.免疫组织化学染色发现Piezo2蛋白表达于肠道上皮与神经节,其在结肠表达水平较回肠丰富(P＜0.01),其中结肠Piezo2与Epac1在mRNA水平表达呈正相关(r2=0.65,P＜0.01).结论 Piezo2在结肠表达丰富,可能通过Epac1通路参与肠道机械力感知与调控.     

腺苷A3受体对浅筋膜成纤维细胞cAMP/Epac信号通路及炎症因子表达的影响

目的 探讨沉默腺苷A3受体对浅筋膜成纤维细胞cAMP/Epac信号通路及炎症因子表达的影响。方法 选取SD大鼠浅筋膜组织,通过组织块培养法提取成纤维细胞,细胞免疫荧光实验检测Vimentin、CD45、FⅧ、AKA表达,腺苷预处理细胞并分为Control组、10 nmol/L组、100 nmol/L组、10 μmol/L组和100 μmol/L组,均培养48 h。腺苷siRNA干扰实验将细胞分为对照组、腺苷组、A3R干扰组、空载组。对照组不予任何处理,腺苷组用10 μmol/L腺苷培养48 h,其余两组用2 μL Lipofectamine 2000转染A3R siRNA,在培养箱孵育6 h后换上维持液继续培养48 h。Western blotting检测细胞腺苷A3受体蛋白的表达,实时荧光定量聚合酶链反应检测cAMP、Epac mRNA表达,Western blotting检测cAMP、Epac蛋白表达,酶联免疫吸附试验检测白细胞介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平,免疫荧光检测细胞间黏附分子-1表达。结果 Control组、10 nmol/L组、100 nmol/L组、10 μmol/L组和100 μmol/L组A3R蛋白相对表达量比较,差异有统计学意义（P <0.05）,腺苷预处理可剂量依赖性地上调A3R蛋白表达。对照组、腺苷组、A3R干扰组、空载组A3R蛋白相对表达量比较,差异有统计学意义（P <0.05）,腺苷siRNA干扰可下调A3R蛋白表达,而空载组并无明显影响。A3R干扰组cAMP、Epac mRNA相对表达量高于对照组（P <0.05）。A3R干扰组cAMP、Epac蛋白相对表达量高于对照组（P <0.05）。A3R干扰组IL-6、TNF-α相对表达量高于对照组（P <0.05）。结论 在浅筋膜成纤维细胞中,腺苷A3受体通过下调cAMP/Epac信号通路减少炎症因子的表达。     

中药心康对AngII所致平滑肌细胞凋亡的影响

目的探讨血管紧张素I在不同浓度和不同作用时间下对血管平滑肌细胞凋亡及凋亡调控基因表达的作用及心康对其影响.方法采用流式细胞技术测定在血管紧张素II不同浓度和不同作用时间下血管平滑肌细胞凋亡率及凋亡调控基因Fas、Bcl-2表达的变化和应用心康后对其影响.结果血管紧张素II对血管平滑肌细胞凋亡和凋亡调控基因表达有较明显的诱导作用;心康可抑制AngII作用,对细胞凋亡有一定的影响,同时可影响凋亡调控基因的表达.结论血管紧张素I具有一定促进血管平滑肌细胞凋亡作用和调节凋亡调控基因表达的作用,尤其在大剂量作用较明显;心康可明显抑制AngI对血管平滑肌细胞的作用.     

SDF1/CXCR4轴在细胞移植治疗缺血性疾病中的作用及影响因素

在细胞移植治疗缺血性疾病的过程中,细胞归巢的效率会影响到移植的效果。在动物体内基质细胞衍生因子1/CXC家族趋化因子4(SDF-1/CXCR4)轴是调控细胞归巢的主要因子,可以起到调控移植细胞移动的作用。近些年的研究表明,它可以受到多方面因素的影响,这些影响因素包括某些细胞因子、缺氧及某些药物,在这些影响因素的作用下可以调节移植细胞在动物体内的分布,起到对移植细胞的调控作用。     

肝癌细胞核蛋白对白蛋白增强子／启动子序列的体外转录调控作用

目的：研究肝癌细胞核蛋白调控白蛋白＂持家基因＂转录调控序列对目的基因转录的作用。方法：分别从小鼠肝癌细胞、肝细胞和黑色素瘤细胞中提取核蛋白组分,用于体外启动白蛋白增强子／启动子的转录作用。结果：发现某些肝癌细胞和肝细胞核蛋白组分具有明显的转录作用,而细胞浆蛋白和其他肿瘤核蛋白组分没有转录作用,将同一肝癌细胞某些核蛋白组分合并可使转录活性增强。结论：本研究在基因转录调控水平部分解释了应用白蛋白增强子／启动子调控目的基因于肝癌细胞中特异表达的机理。     

细胞凋亡和肿瘤的关系研究进展

细胞凋亡的过程极为复杂,是调节机体正常发育的重要机制,涉及一系列调控因子。这些调控因子在维持细胞自稳中发挥重要作用。肿瘤的发生,发展与治疗也受到与多凋亡调控蛋白的调控。本文综述了关于细胞凋亡及肿瘤的一些调控机制,望从对凋亡调控蛋白的研究中,进一步阐明凋亡的作用机理,为肿瘤以及其它一些恶性疾病的治疗提供理想的途径。     

瘦素与心肌肥大关系的研究进展

瘦素是肥胖基因编码,主要由脂肪细胞合成和分泌的多肽激素,通过与其受体结合发挥抑制饮食、减少能量摄入、增加能量消耗等生物学作用。心肌细胞肥大是指心肌细胞体积增大直径增宽或长度增加和肌节数量增多。心肌肥大的机制未完全阐明,目前认为各种机械刺激、化学因素作用是导致心肌肥大的主要原因。近年来瘦素与心血管疾病的关系引起广泛关注,瘦素除了有抗肥胖、维持能量平衡作用外,与心肌肥大方面有密切的关系,瘦素可能作为一个内源性物质在心肌肥大中起到重要的作用。该文就瘦素与心肌肥大的关系进行综述。     

小檗碱对压力负荷所致心肌肥厚大鼠的保护作用

目的:通过动物实验探讨小檗碱(Berberine)对压力负荷所致大鼠心肌肥厚模型的保护作用,并探讨其作用机制。方法:通过主动脉缩窄术构建大鼠心肌肥厚模型,将造模成功的16只SD大鼠随机分为模型组及模型+小檗碱组,另外将假结扎主动脉的8只大鼠入组假手术组。术后4周,利用心脏超声测定大鼠的心功能指标;HE、Masson及TUNEL染色等分子生物学方法测定心肌细胞大小、心脏纤维化、心肌细胞凋亡等指标;同时使用RT-q PCR法检测左室心肌组织心房利钠因子(ANP)m RNA的表达;采用Western blot的方法检测内质网应激相关指标Bip/GRP78和CHOP的蛋白表达情况。结果 :与模型组相比,小檗碱可明显改善主动脉缩窄所致的心功能紊乱,显著降低心肌细胞大小(P<0.05)、心脏组织的纤维化程度以及心肌细胞凋亡比率(P<0.05);Western blot结果表明,小檗碱治疗可明显降低长期压力超负荷所致的内质网应激相关指标Bip/GRP78和CHOP的表达的增加(P<0.05)。结论 :小檗碱可显著改善压力超负荷所致的心肌肥厚及心功能紊乱,抑制心肌细胞凋亡,对肥厚型心肌起保护作用,且此种心脏保护性作用可能与其抑制压力负荷所致的内质网应激相关。     

蛋白激酶C与糖尿病性及肥厚性心肌病的研究进展

蛋白激酶C作为第二信使在多条信号通路中发挥着重要作用,并与细胞增殖、分化、凋亡、心肌肥大、心室重塑等有着密切联系。其激活将导致多种心肌病,如糖尿病性心肌病、心肌肥厚和心肌纤维化等心血管疾病的发生。本文对蛋白激酶C与上述几种疾病关系的研究进展予以综述。     

心力衰竭中内质网应激相关诱导因子的研究进展

内质网合成及加工蛋白的功能异常可引起未折叠蛋白的聚集,从而引起内质网应激(ERS)和未折叠蛋白反应。适度的ERS使心肌细胞发生代偿性肥大,但过强和持续的ERS可使心肌细胞由代偿转向凋亡,从而致心力衰竭。该文综述了各种ERS诱导因子在心力衰竭发生、发展中的作用,阐明ERS在心力衰竭病理形成过程中发挥着重要的作用,也为心力衰竭的治疗开启了新思路。     

SIRT3: A Potential Target for CHF?

Pathological cardiac hypertrophy is a maladaptive response in a variety of organic heart disease (OHD), which is characterized by mitochondrial dysfunction that results from disturbed energy metabolism. SIRT3, a mitochondria-localized sirtuin, regulates global mitochondrial lysine acetylation and preserves mitochondrial function. However, the mechanisms by which SIRT3 regulates cardiac hypertrophy remains to be further elucidated. In this study, we firstly demonstrated that expression of SIRT3 was decreased in Angiotension II (Ang II)-treated cardiomyocytes and in hearts of Ang II-induced cardiac hypertrophic mice. In addition, SIRT3 overexpression protected myocytes from hypertrophy, whereas SIRT3 silencing exacerbated Ang II-induced cardiomyocyte hypertrophy. In particular, SIRT3-KO mice exhibited significant cardiac hypertrophy. Mechanistically, we identified NMNAT3 (nicotinamide mononucleotide adenylyltransferase 3), the rate-limiting enzyme for mitochondrial NAD biosynthesis, as a new target and binding partner of SIRT3. Specifically, SIRT3 physically interacts with and deacetylates NMNAT3, thereby enhancing the enzyme activity of NMNAT3 and contributing to SIRT3-mediated anti-hypertrophic effects. Moreover, NMNAT3 regulates the activity of SIRT3 via synthesis of mitochondria NAD. Taken together, these findings provide mechanistic insights into the negative regulatory role of SIRT3 in cardiac hypertrophy. Sirtuin 3 (SIRT3), a mitochondrial deacetylase that may play an important role in regulating cardiac function and a potential target for CHF.     

ROLE OF CALCINEURIN IN ANGIOTENSIN II－INDUCED CARDIAC MYOCYTE HYPERTROPHY OF RATS

OBJECTIVE: The present study investigated the role of calcineurin in angiotensin II(AngII) -induced cardiac myocyte hypertrophy of rats. METHOD: The primary cardiac myocytes were cultured under the standard conditions. The calcineurin activity in AngII-treated cardiomyocytes was tested by using PNPP; protein synethsis rate was assessed by 3H-leucine incorporation; atrial natriuretic factor(ANF) mRNA level was determined by Northern blot analysis. Cell viability was estimated by lactate dehydrogenase (LDH) levels in cultured medium and by dyed cell numbers. RESULT: After stimulation of 10, 100 and 1 000 nmol/L of AngIi, calcineurin activities in the cardiomyocytes were increased by 13%, 57% (P < 0.05) and 228% (P < 0.01) respectively, compared with control group. Cyclosporin A(CsA), a specific inhibitor of calcineurin, markedly inhibited the calcineurin activity and decreased the 3H-leucine incorporation in AngII-treated cardiomyocytes in a dose-dependent manner. It was also found that CsA slightly reduced the mRNA level of ANF gene in AngII-stimulated cardiomyocytes. CONCLUSION: During AngII-induced cardiac myocyte hypertrophy, calcineurin signal pathway is activated, and inhibition of the pathway can attenuate AngII-induced cardiac myocyte hypertrophy, which suggests that the calcineurin signal pathway may play an important role in AngII-induced myocardial hypertrophy of rats.     

ROLE OF CALCINEURIN IN ANGIOTENSIN II INDUCED CARDIAC MYOCYTE HYPERTROPHY OF RATS

Objective. The present study investigated the role of calcineurin in angiotensin II(AngII) induced cardiac myocyte hypertrophy of rats. Method. The primary cardiac myocytes were cultured under the standard conditions. The calcineurin activity in AngII treated cardiomyocytes was tested by using PNPP;protein synethsis rate was assessed by 3H leucine incorporation; atrial natriuretic factor(ANF) Mrna level was determined by Northern blot analysis. Cell viability was estimated by lactate dehydrogenase(LDH) levels in cultured medium and by dyed cell numbers. Result. After stimulation of 10,100 and 1 000nmol/L of AngII, calcineurin activities in the cardiomyocytes were increased by 13％ ,57％ (P< 0.05) and 228％ (P< 0.01) respectively, compared with control group. Cyclosporin A(CsA), a specific inhibitor of calcineurin, markedly inhibited the calcineurin activity and decreased the 3H leucine incorporation in AngII treated cardiomyocytes in a dose dependent manner. It was also found that CsA slightly reduced the Mrna level of ANF gene in AngII stimulated cardiomyocytes. Conclusion. During AngII induced cardiac myocyte hypertrophy, calcineurin signal pathway is activated, and inhibition of the pathway can attenuate AngII induced cardiac myocyte hypertrophy, which suggests that the calcineurin signal pathway may play an important role in AngII induced myocardial hypertrophy of rats.     

吴茱萸次碱通过调控表皮生长因子受体活化抑制高血压心肌肥大

探讨抑制表皮生长因子受体(EGFR)活化是否调控中药单体药吴茱萸次碱的抗高血压心肌肥大效应及其机理。以腹主动脉缩窄(AAC)介导的高血压大鼠为研究对象,观察吴茱萸次碱对高血压心肌肥大、心肌炎症反应以及左心室中EGFR和细胞外调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)活性的影响。结果显示,吴茱萸次碱能显著抑制AAC介导的高血压心肌肥大、心肌炎症反应以及EGFR、ERK1/2活化。并且,选择性EGFR抑制剂AG1478能改善AAC介导的高血压心肌肥大和心肌炎症反应,抑制ERK1/2活化。结果提示,吴茱萸次碱通过抑制EGFR活化改善AAC介导的高血压大鼠心肌肥大,其机制与其抑制ERK1/2活化和心肌炎症反应有关。     

表没食子儿茶素没食子酸酯对容积超负荷导致的大鼠心肌肥厚的改善作用

目的 探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(Epigallocathechin-3 Gallate,EGCG)是否可以抑制容积超负荷性心肌肥厚的加重.方法 采用腹腔主动静脉贯通术(aortocaval shunt,ACS)制成大鼠心肌肥厚模型,通过心体重量比率以及心肌截面梗死面积来确定心肌肥厚的程度.结果 ACS 3周后导致的...     

细胞外信号调节激酶1/2在心血管系统疾病中的作用

丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号转导通路是细胞内的重要信息传递系统,细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)作为MAPK家族的重要组成部分,是将信号从细胞表面受体转导至细胞核的关键。ERK1/2磷酸化参与了心肌细胞肥厚、凋亡的过程以及血管平滑肌细胞增殖等多种生物学反应。然而,对于ERK1/2在心血管系统疾病发生、发展过程中所起的作用仍有争议,且未阐明在具体的病理生理过程中其上游激活物及下游作用靶点。