不同浓度的尼可地尔对心肌细胞膜KATP通道的影响

本实验在急性分离的豚鼠心肌细胞上,用膜片钳技术单通道记录的内面向外记录模式研究了不同浓度的尼可地尔对细胞膜ＫＡＴＰ通道的影响。结果证实：０．１ｍＭ的该药物不能激活ＫＡＴＰ通道,而１ｍＭ的药物可明显激活细胞膜ＫＡＴＰ通道。其电导为９２．７ｐｓ,通道的开放时间常数τ０２和开放概率较对照组（加入０．５ｍＭ ＡＴＰ）明显增加,并诱发通道出现二级开放。表明尼可地尔对心肌细胞膜ＫＡＴＰ通道呈剂量依赖性激活。     

短暂缺氧对心肌细胞K_(ATP)通道的影响

:【目的】探讨KATP通道在心肌缺血预适应 (IP)中的作用。【方法】用膜片钳单通道记录技术的细胞贴附式研究急性短暂缺氧复氧对新鲜分离的豚鼠心肌细胞细胞膜KATP通道影响。【结果】短暂缺氧 10min可明显引起细胞膜KATP通道的开放 ,缺氧诱导的KATP通道的开放以簇状开放为主。复氧 2min及用 2mmol/LATP可抑制通道开放 ,其电导值为 89 7pS。缺氧使通道开放概率 (Po)明显增加 ,并可诱发通道出现二级开放。【结论】短暂缺氧可以激活心肌细胞膜KATP通道的开放 ,说明心肌细胞膜KATP通道参与了IP的保护作用。     

马桑内酯对锥体神经元ATP敏感钾通道的作用

目的　研究致痫剂马桑内酯 (CL)对大鼠海马锥体神经细胞膜 ATP敏感钾通道 (KATP)的影响及KATP在癫痫发病中的作用。方法　用膜片钳单通道电流记录和组织培养技术对锥体神经元 ATP敏感钾通道进行研究。结果　对称性高钾溶液条件下 ,KATP的翻转电位接近 0 m V,通道可被 TEA阻断 ;0 .5 mol/ L的 ATP可抑制通道活动 ;30μmol/ L的二磷酸核苷 (DNP)可使通道开放增多 ;其电流 -电压曲线可被直线拟合 ,通道电导值为78.2 3± 12 .0 4 p S。 CL可明显激活 KATP,优降糖能抑制激活的通道。结论　在 CL诱导的癫痫发作中 ,ATP敏感钾通道开放的作用是降低动作电位频率、保护神经元 ,可能起一种负反馈调节作用     

KATP通道开放剂对心血管系统作用的研究进展

KATP通道开放剂是一类能作用于细胞膜ATP敏感K 通道（KATP通道），使KATP通道开放，引起K 外流的制剂。近年来研究发现，KATPw通道开放剂具有扩张血管平滑肌，保护缺血心肌和使心肌细胞膜电位超极化等作用。因此，此类药物可能被用来治疗高血压病、冠心病和某些心律失常，是一类有一定发展潜力的新的心血管系统药物。1KATP通道开放剂的化学结构具有KATP通道开放作用的同一类药物，根据具体药物的不同，可归属于不同的化学门类。虽然临床上使用的两种血管扩张剂长压定（Minoxidil）和二氯嗪（Diazoxide）是通过开放KATP通道，…     

线粒体KATP通道开放剂尼可地尔在大鼠心肌缺血后适应中的作用

目的探讨心肌线粒体KATP通道开放剂尼可地尔药物后适应对减轻大鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的作用。方法建立大鼠体外细胞水平缺氧复氧模型,设立实验分为3组。对照组(n=6):细胞缺氧30、60 min后,复氧10 min。尼可地尔组(n=6):细胞缺氧30、60 min后,立即加入浓度100μmol/L的尼可地尔,复氧10min。5-羟基葵酸盐加尼可地尔组(n=6):细胞缺氧前即刻加入500μmol/L 5-羟基葵酸盐,随后步骤同尼可地尔组。复氧10 min后观察细胞台盼蓝染色情况。计算每组中每个标本被台盼蓝染色的细胞数占整个被计数的细胞数的百分比,即为死亡细胞百分比。结果在对照组中,缺氧30、60 min,死亡细胞百分比为(29±2)%及(40±4)%,在尼可地尔组发现在复氧即刻给予尼可地尔,可以明显减少细胞的死亡百分数,缺氧30、60 min死亡细胞数分别为(17±2)%及(28±3)%,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01)。而加入5-羟基葵酸盐则可以取消尼可地尔这种对心肌的保护作用,缺氧30、60 min死亡细胞数分别为(30±3)%及(42±4)%。结论尼可地尔是通过开放线粒体KATP通道模拟缺血后适应来减轻心肌细胞缺氧/复氧损伤的。     

ATP敏感性钾通道开放剂的脑保护作用研究

细胞上存在两种三磷酸腺苷敏感性钾(KATP)通道,一是位于细胞膜上的ATP敏感的钾通道;二是位于线粒体膜上的ATP敏感的钾通道。KATP通道广泛存在于各种脑区,若给予KATP开放剂则可以使其开放发挥对脑的保护作用。越来越多的研究表明,KATP通道在脑缺氧缺血等病理状态下被激活开放,使大量K+外流,细胞膜超极化,从而使Na+、Ca2+内流减少,避免或减轻钙超载、减少能耗、减轻兴奋性氨基酸及氧自由基释放,保护脑细胞。     

吡那地尔对人肺动脉平滑肌细胞KATP通道mRNA表达的影响

目的:研究经典KATP开放剂吡那地尔对原代培养人肺动脉平滑肌细胞 KATP 通道mRNA表达的影响,以探讨KATP通道在肺动脉高压发生发展中的分子生物学机制.方法:分离人3～4级肺小动脉,原代培养人肺动脉平滑肌细胞.分成ET-1组、ET-1 吡那地尔组及ET-1 吡那地尔 格列本脲组.以Trizol法抽提总RNA,逆转录为cDNA,采用Real-time PCR方法检测各组细胞KATP通道SUR2B和Kir亚单位mRNA表达量.结果:ET-1 组 KATP通道SUR2B mRNA表达量较对照组明显减少,为对照组的0.09±0.01倍(P<0.05,n=3).加用吡那地尔可拮抗ET-1作用,提高SUR2B mRNA表达量,为ET-1组的10.94±1.13倍,为对照组的0.97±0.03倍(P>0.05,n=3).格列本脲可拈抗吡那地尔作用,减少SUR2B mRNA表达量,为ET-1 吡那地尔组的0.10±0.01倍,为对照组的0.07±0.02倍(P<0.05,n=3).各组细胞KATP通道 Kir6.1 mRNA 表达量无统计学差异.结论:KATP 开放剂吡那地尔可增加原代培养人肺动脉平滑肌细胞KATP通道SUR2B mRNA表达量,这可能是其调节肺动脉平滑肌细胞KATP通道表达和功能的机制.     

尼可地尔对大鼠低氧性肺高压的影响

目的:探讨线粒体ATP敏感性钾通道开放剂(mitoKATPCO)尼可地尔(nicorandil)对大鼠低氧性肺动脉高压的影响?方法:将40只大鼠随机分成对照组(C组)?低氧组(H组)?低氧+尼可地尔组(N组)与低氧+尼可地尔+5-羟基葵酸盐组(HD组),后3组置于常压低氧仓内,每周6 d,每天8 h,持续4周后测定各组大鼠平均肺动脉压(mPAP),右心肥厚指数RV/(V+S),HE染色观察肺小动脉血管壁的病理变化并检测增殖相关抗原(PCNA)?结果:慢性缺氧可诱导大鼠mPAP及RV/(LV+S)升高,大鼠肺小血管增厚重构,PCNA表达增加,尼可地尔可显著抑制上述变化,且该效应可被线粒体KATP(mitoKATP)通道特异性阻断剂5-羟基葵酸盐阻断?结论:尼可地尔通过开放mitoKATP通道降低肺动脉压,拮抗右心肥厚,并抑制肺血管增殖重构,治疗低氧性肺高压?     

KATP通道开放剂合用Na+/H+交换阻滞剂对离体大鼠心肌梗死范围的影响

目的:探讨ATP敏感性钾通道(KATP通道)开放剂尼可地尔对离体大鼠缺血后心功能及合用Na /H 交换阻滞剂Cariporide对心肌梗死范围的影响。方法:用Langendorff装置,观察不同浓度尼可地尔对冠状动脉(简称冠脉)灌流量及缺血后心功能的影响。应用离体大鼠双冠脉分别灌流模型研究心肌梗死面积,将左冠脉灌流量减到原灌流量的5%,行1h缺血及2h再灌注。结果:尼可地尔1μmol/L可明显增加冠脉灌流量,20μmol/L时左室收缩压明显下降,在缺血前应用1μmol/L尼可地尔有改善缺血后心功能的作用,对照组经1h缺血及2h再灌注后心肌梗死范围为(47.2±9.0)%,尼可地尔和Cariporide在缺血中应用缩小心肌梗死范围分别为(26.5±7.6)%和(30.7±6.6)%,两者合用时心肌梗死范围为(19.9±5.3)%。结论:尼可地尔有明显扩张冠脉、保护缺血后心功能及缩小心肌梗死范围的作用。联合应用Cariporide可进一步缩小心肌梗死范围。     

格列苯脲和尼可地尔对哮喘大鼠BALF中IL-4/IFN-γ表达及气道重塑的作用*

目的：观察钾离子通道开放剂尼可地尔和阻滞剂格列苯脲对哮喘大鼠肺泡盥洗液（BALF）中IL-4/IFN-γ的影响以及对气道重塑的作用。方法：SD雄性大鼠50只,随机分为正常对照组、哮喘模型组、尼可地尔组、地塞米松组和格列苯脲组。采用卵清蛋白（OVA）致敏复制大鼠哮喘模型,模型成功后取相关组织分别进行图像分析测定各组支气管壁各层的厚度、ELISA检测肺泡盥洗液（BALF）中IL-4/IFN-γ表达情况。结果：哮喘模型组和格列苯脲组支气管平滑肌明显增厚（P<0.05）,有典型的气道重塑表现,尼可地尔组和地塞米松组无明显增厚;尼可地尔组和地塞米松组IL-4表达低于哮喘模型组和格列苯脲组,IFN-γ表达高于哮喘模型组和格列苯脲组（P<0.05）。结论：尼可地尔通过开放KATP通道,能够明显改善哮喘大鼠气道炎症和抑制哮喘大鼠气道重塑的形成,其可能机制与IL-4表达降低,同时IFN-γ表达升高有关。     

Effect of temperature on the activation of myocardial KATP channel in guinea pig ventricular myocytes: a pilot study by whole cell patch clamp recording

Background The myocardial ATP sensitive potassium channel (K(ATP) channel) has been known for more than two decades, the properties of this channel have been intensively investigated, especially the myocardial protection effect by opening this channel. Numerous studies, including hypothermic, using K(ATP) agonists to achieve a hyperpolarizing cardioplegic arrest, have shown a better myocardial protection than potassium arrest. However, there is no evidence showing that K(ATP) channel could be opened by its agonists under profound hypothermia. We investigated the effect of temperature on activation of myocardial K(ATP) channel by nicorandil.Methods Isolated ventricular myocytes were obtained by collagenase digestion of the hearts of guinea pigs and stored in KB solution at 4&#730;C. With a steady ground current, the myocytes were perfused with 1 mmol/L nicorandil until a steady IK(ATP) occurred. Then the cells were perfused with 1 mmol/L nicorandil plus 1 &micro;mol/L glybenclamide. Currents signals were recorded on whole cells using patch clamp technique at several temperatures. The temperature of the bath solution around myocytes was monitored and was controlled at 4&#730;C, 10&#730;C, 20&#730;C, 25&#730;C and 35&#730;C respectively. About 10 cells were tested at each temperature, the cells were considered useful only when the outward current could be induced by nicorandil and blocked by glybenclamide. All data were analyzed using Graphpad PRISM 3.0 (Graphpad, San Diego, CA, USA). Nonlinear curve fitting was done in Clampfit (Axon) or Sigmaplot (SPSS). Results At 4&#730;C, 10&#730;C, 20&#730;C, 25&#730;C and 35&#730;C, the time needed to open the myocardial K(ATP) channel was (81.0±0) minutes, (50.5±11.7) minutes, (28.8±2.3) minutes, (9.4±10.2) minutes and (2.3±1.0) minutes respectively (P=0.003). The linear relationship between temperature and time needed to open the channel was y (min) = (4348.790－124.277x)/60, where y (min) is time needed to open K(ATP) channel, x is temperature, correlation coefficient r =－0.942 (P=0.00), regression coefficient b =－124.277 (P=0.00). The current densities among different temperatures were statistically different (P=0.022), the current density was greater after the activation of K(ATP) channel at higher temperatures. The lower the temperature, the fewer cells in which K(ATP) channels could be opened. At 4&#730;C, only one cell in which the K(ATP) channel could be opened, took a quite long time (81 minutes) and the I-V curve was quite untypical.Conclusions K(ATP) channel activated by nicorandil is temperature dependent and the temperature linearly related to time needed to open K(ATP) channel; the lower the temperature, the longer the time needed to open channel and the smaller the current density. At profound hypothermia, it is difficult to activate K(ATP) channels.     

肾上腺髓质瘤无性繁殖细胞膜上的异常整流钾通道

作者用斑片钳技术,在传代培养的大鼠肾上腺髓质瘤无性繁殖细胞(PC12 cell)膜上记录电压依赖性钾离子通道活动。观察到两种超极化时激活的内向离子流,电导为30～60皮西门(PS)及大于100 pS。电导大的通道活动常呈大的闪动样关闭及簇状猝发。电导30～60 pS的钾通道具有如下特征:①明显的电压依赖性。在膜超极化到阈电位水平(30 mV)时,通道开放。同一电压下,单通道电流幅度基本一致,呈正态分布。不同钳位电压下,随着超极化程度增大,电流幅度渐增大。②平均开放时间和开放概率随超极化程度增大而增大,关闭时间则随之而减小。③I-V曲线上显示翻转电位接近K~ 的平衡电位。④钾通道阻断剂TEA能阻断该通道。     

急性分离大鼠新皮层神经元KATP通道的多电导状态

在１９３例急性分离大鼠皮层神经元内面向外式记录膜片上，记录到２例能为ＡＴＰ和优降糖所阻断的含有亚电导的通道电流。其电流幅度分布直方图符合高斯分布，并能很好地进行二级拟合；主电导水平分别为１９１．８ｐＳ和１９４．５ｐＳ，亚电导水平分别为１５３．２ｐＳ和１１６.１ｐＳ；亚电导成份分别占单位事件总数的３５．０５％和２９.８４％；通道活动呈高电流水平与低电流水平交替开放状态，没有高低电流叠合现象。这些结果表明这种Ｋ_ＡＴＰ通道的多电导开放电流不是两个或多个独立通道的开放所致，而是同一通道的不同亚型状态交互活动（即高电导和低电导状态相互转换）的表现。从而提示神经细胞膜上的Ｋ_ＡＴＰ通道可能受某种或某些膜内外环境的变化影响导致其构象改变，从而引发多种亚型交替活动现象。     

缺氧及谷氨酸对大鼠下丘脑神经元NMDA通道的影响

目的　研究缺氧和N 甲基 D 天门冬氨酸 (N methyl D asparticacid ,NMDA)通道激动剂谷氨酸对大鼠下丘脑神经元NMDA通道开放动力学的影响。方法　运用膜片钳技术的细胞吸附式方法记录NMDA通道的单通道电流。结果　在急性缺氧条件下 ,NMDA通道的开放增大 ,开放时间常数τ1,τ2 分别由 (0 .3 3± 0 .10 )ms ,(4.3 6± 0 .2 6)ms变为 (0 .93± 0 .2 2 )ms ,(7.64± 0 .72 )ms ,关闭时间常数τ1,τ2 分别由 (18.0 3± 3 .5 0 )ms ,(171.5 0± 19.10 )ms变为 (3 .42± 1.0 2 )ms ,(19.3 9± 3 .0 7)ms。平均开放概率由 0 .12± 0 .0 5变为 0 .66± 0 .3 6。谷氨酸浓度增加 ,NMDA通道开放时间常数增大、关闭时间常数减小 ,开放概率增大。结论　缺氧及谷氨酸能提高下丘脑神经元NMDA通道的兴奋性 ,促进NMDA通道开放增加。     

缺血预适应KATP通道的实验研究

目的探讨KATP通道在缺血预适应（ischemic preconditioning，IP）中所起的作用。方法建立在体犬鼠缺血再灌（ischemia／reperfusion，IR）模型，将60只犬鼠随机分为5组：缺血再灌（IR）组，缺血预适应（IP）组，尼可地尔（NIC）组，格列苯脲（GLI）组，5-HD组。分别测定各组的心肌梗死范围，血清CK，LDH浓度，监测各组心电图，应用透射电镜观察其超微结构的变化。结果相对与IR组，IP组明显的减少了心律失常分值和室颤发生率（P〈0．05），而5-HD组，NIC组则有加重心律失常发生的趋势；相对IR组，NIC组可部分模拟IP作用，而5-HD组则完全取消了IP的抗心肌缺血的保护作用。结论KATP通道可能是IP发生的效应器；线粒体KATP通道特异性阻滞剂能阻断KATP通道的抗心肌缺血的作用，推测至少在缺血阶段，线粒体KATP通道在IP中发挥了主要的作用。     

肾上腺素对大鼠心室肌细胞钙通道促进作用的单通道分析

目的：观察肾上腺素对大鼠心肌细胞钙通道作用机理。方法：使用斑片钳技术，在培养的Ｗｉｓｔａｒ大鼠心肌细胞上记录Ｔ、Ｌ、Ｂ三型钙通道的单通道电活动。结果：肾上腺素对心肌细胞钙通道Ｌ、Ｂ单通道开放时间延长，开放概率增加，平均关闭时间缩短（Ｐ值均小于０．０１），对流过钙通道的Ｃａ２＋流幅值无影响。肾上腺素对Ｔ型钙通道活动有促进作用趋势，但无显著性差异（Ｐ＞０．０５）。结论：肾上腺素对大鼠心肌细胞的作用和已知钙通道激动剂ＢＡＹ·Ｋ８６４４作用相似，和钙通道阻滞剂异搏定作用相反     

人外周血淋巴细胞膜电压依赖性钾通道特性分析及试分型

目的 :研究人淋巴细胞膜电压依赖性钾〔K(v)〕通道的特性 ,为某些疾病状态下该通道特性变化提供对照。并试观察该通道是否存在不同亚型。方法 :膜片钳全细胞电流记录方法。结果 :在记录到的 39个细胞中 ,K(v)通道的激活电压为 - (40 .3± 2 .5) m V,在重复去极化状态下通道无失活 ,复极过程中通道的关闭时间为 (116 .3± 8.2 ) ms,且通道电流可被 10 mmol/ L的四乙基铵 (TEA)所阻断。结论 :人外周淋巴细胞膜可能仅具有一种〔K(v)〕通道 ,其特性与鼠 n型〔K(v)〕通道基本一致。     

Single voltage-dependent potassium channels in isolated habenula neurons(Preliminary report)

目的：观察和探讨缰核细胞膜上延迟整流钾电流（Ｉｋ）的性质。方法：应用细胞吸附式膜片钳记录技术。结果：去极化阶跃电压激活该通道电导为３０～３５ｐＳ的外向单通道电流；呈电压依赖性；平均开放时间随去极化电位的增长（０ｍＶ～６０ｍＶ）由３．７２±１．５ｍｓ提高到３２．２±５．６ｍｓ。可以认为，通道的开放不依赖于电极内Ｃａ２＋的存在，四乙基胺明显抑制通道的开放。结论：由以上结果判断，此电流为外向延迟整流钾电流（Ｉｋ）。     

ATP sensitive K+ channel may be involved in the protective effects of precon ditioning in isolated guinea pig cardiomyocytes

Objective To develop a cellular model of preconditioning by a brief period of hypoxia in isolated guinea pig cardiomyocytes and to determine whether or not an ATP sensiti ve K(+) (K(ATP)) channel is involved in ischemic precond itioning. Methods Single myocytes were isolated from the ventricle of adult guinea pigs.The expe rimental chamber allowed the cells to be exposed to low O(2)pressure.During h ypoxic preconditioning, the cells were equilibrated with normaxic solution for 1 0 minutes and then exposed to hypoxia for 5 minutes, followed by 10 minutes of re oxygenation.The cells were then subjected to 20-180 minutes of hypoxia and reoxygenation.Ionic currents were studied with the patch clamp technique in w hole-cell and cell-attached configurations. Results A 5-minute hypoxic preconditioning offered a significant protection from cell i n jury in subsequent hypoxia-reoxygenation.After a latency of more than 15 minu tes, hypoxia induced a time-independent outward K(+) current which could be blo cked by 5 μmol/L glibenclamide.At 10 mV, the current increased from 78 ±1 5 pA to 1581±153 pA (P&lt;0.01, n=18).However, the latency to develop K(ATP) channel currents (I(KATP)) was greatly shortened in preconditioned c ells, and the current was increased acceleratively.At 10 mV, the current more than 4 nA was recorded in preconditioning cells.In the single channel record ings, the time interval from the first channel opening to maximum opening was also markedly abbreviated in preconditioned cells.Conclusion Isolated guinea pig cardiomyocytes can be preconditioned with a brief period of hypoxia.This hypoxic preconditioning may modify the K(ATP) channel, and make the channel open more readily during the second hypoxia.