大黄素诱导白血病K562细胞凋亡的实验研究

目的:探讨大黄素对人白血病K562细胞的增殖抑制与诱导凋亡作用.方法:采用MTT法检测大黄素对K562细胞的增殖抑制作用;通过Wight-Giemsa染色(W-G染色),在普通光镜下观察细胞的形态学变化;运用Annexin V/PI双标记法检测大黄素对K562细胞的凋亡效应;采用流式细胞技术检测细胞周期变化与凋亡情况;通过比色法检测Caspase-3、8、9的相对活性,分析大黄素诱导K562细胞凋亡的信号途径.结果:大黄素能显著抑制K562细胞的增殖,作用24、48、72 h后的半数抑制率浓度分别为80、50、40 μmol/L;处理组细胞在普通光镜下可见典型的凋亡形态学改变;Annexin V/PI双标记法检测到K562细胞在大黄索的诱导下出现早期凋亡并呈剂量依赖性(P<0.01);流式细胞仪结果分析发现,处理组的K562细胞被阻滞于G0/G1期,与对照组相比,凋亡率明显升高并呈现剂量依赖性(P<0.01);大黄素可触发caspase-3、8、9的活性增高(P<0.01).结论:大黄素能有效地抑制K562细胞的增殖并诱导其凋亡,其机制和Caspase信号途径的活化有关.     

4-邻氨基酚-4'去甲表鬼臼酯(ODE)在K562肿瘤细胞凋亡中的作用

目的:研究不同浓度4-邻氨基酚-4'去甲表鬼臼酯(ODE)对肿瘤细胞生长的影响,探讨ODE诱导肿瘤细胞凋亡的机制.方法:采用MTT法测定ODE对K562细胞生长的抑制作用,透射电镜观察细胞超微结构,免疫细胞化学方法检测K562细胞中 Bcl-2/Bax 比率变化.结果:不同浓度ODE对K562细胞生长有抑制作用,随ODE浓度的增加及作用时间的延长细胞生长抑制率增高(P<0.05).透射电镜观察可见凋亡细胞发生.凋亡细胞中Bcl-2灰度较正常细胞染色的灰度低,Bax在凋亡细胞中的灰度较正常细胞高.结论:ODE能够显著抑制K562细胞的生长,其抑制作用随浓度的增加及时间的延长而增强,通过形态学可观察到凋亡细胞的产生,其诱导凋亡可能是通过改变凋亡基因而发挥作用的.     

氨茶碱对K562细胞增殖与凋亡的影响

目的 为探讨磷酸二酯酶抑制剂在慢性粒细胞白血病细胞系增殖与凋亡中的作用,研究了非选择性磷酸二酯酶抑制剂氨茶碱对K562细胞系的影响.方法 采用MTT检测观察细胞增殖变化,膜联蛋白V染色观察细胞凋亡率.结果 MTT显示氨茶碱对K562细胞系增殖呈浓度依赖性抑制作用,膜联蛋白V染色显示氨茶碱诱导细胞凋亡率增加.结论 氨茶碱可诱导K562细胞凋亡.     

奥沙利铂对人肝癌HepG2细胞周期、凋亡及侵袭能力的影响

目的 研究奥沙利铂对人肝癌细胞株HepG2细胞的增殖、周期与凋亡及侵袭力的影响.方法 应用MTT法检测奥沙利铂对HepG2细胞生长的抑制作用;流式细胞仪分析细胞周期的分布和凋亡的情况;Transwell侵袭实验检测细胞的侵袭力变化.结果 奥沙利铂对HepG2生长有明显的抑制作用,使细胞周期阻滞于s期(P＜0.01),细胞凋亡率增加(P＜0.05);奥沙利铂作用后癌细胞的侵袭力明显减弱(P＜0.01).结论 奥沙利铂能明显抑制肝癌细胞增殖及侵袭能力,诱导癌细胞凋亡.     

榄香烯对K562细胞株的体内外抑制作用

目的：探讨榄香烯对慢性粒细胞白血病急变的细胞K562株的体内外作用。方法：不同浓度榄香烯体外作用K562细胞不同时间,CCK-8法检测体外增殖抑制作用,Annexin V/PI双染色法检测细胞凋亡,DAPI染色进行细胞核形态学分析,动物实验观察榄香烯对K562的体内抑制作用。结果：榄香烯对K562细胞生长具有明显的抑制作用,呈量效和时效关系;榄香烯能诱导K562细胞凋亡,呈量效关系;DAPI染色显示榄香烯诱导K562细胞并显示特征性的凋亡细胞核形态;榄香烯明显抑制K562细胞在SCID小鼠体内增殖。结论：榄香烯主要通过诱导细胞凋亡,发挥对K562细胞明显的增殖抑制作用。     

姜黄素对人乳腺癌MCF-7细胞增殖抑制作用及机制研究

目的:探讨姜黄素对人乳腺癌MCF-7细胞增殖抑制、诱导凋亡作用及其分子作用机制。方法:MTT法检测姜黄素对MCF-7细胞的增殖抑制作用;流式细胞术PI单染法检测细胞周期;Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡;RT-PCR法检测凋亡相关基因Bcl-2和Bax的mRNA表达水平。结果:姜黄素对MCF-7细胞生长有明显抑制作用,并呈剂量、时间依赖性;FCM结果显示姜黄素能使MCF-7细胞阻滞在G1/S期;Annexin V/PI双染法验证姜黄素可以诱导细胞凋亡;RT-PCR结果显示Bax mRNA水平明显上调,而Bcl-2的mRNA表达水平降低。结论:姜黄素对人乳腺癌MCF-7细胞增殖具有显著的抑制作用并可诱导细胞凋亡,其作用机制可能与其上调Bax基因表达水平的同时,下调Bcl-2基因表达水平,从而诱导细胞凋亡有关。     

茅苍术提取物诱导HepG2细胞凋亡的研究

目的：探讨茅苍术提取物对体外培育人肝癌细胞株HepG2凋亡的影响。方法：采用MTT法考察茅苍术提取物对HepG2增殖的抑制作用，普通光镜观察、荧光染色法观察细胞形态的改变及细胞凋亡，流氏细胞仪（FCM）观察细胞周期变化和凋亡峰的出现。结果；0．4～1．6mg／mL茅苍术提取物对HepG2增殖产生抑制作用，且呈明显的时-效果、量-效关系（P＜0．05）。光镜观察可见贴壁细胞数量明显减少，细胞碎片和悬浮细胞数目明显增加，荧光染色显示细胞核显著收缩，呈致密浓染。FCM结果表明16mg／mL茅苍术提取物处理细胞24h后使HepG2出现明显的凋亡峰，并将细胞周期阻滞于S期和G2／M期。结论；茅苍术提取物能诱导诱导HepG2细胞凋亡。     

青蒿琥酯诱导人白血病细胞K562凋亡的实验研究

目的观察青蒿琥酯对人白血病细胞株K562抑制增殖和凋亡作用.方法通过MTT显色法观察不同浓度青蒿琥酯对K562的生长抑制作用,通过Annexin V/PI双标记法检测青蒿琥酯对K562细胞的凋亡诱导作用.结果青蒿琥酯在1～8μg/ml浓度范围内能分别明显抑制K562细胞的增殖,并具有时间和浓度的依赖性;在2～8μg/ml浓度范围内青蒿琥酯诱导K562细胞凋亡具有明显的量效关系;4μg/ml浓度组的青蒿琥酯在0～72h内,诱导K562凋亡具有明显的时效关系.结论青蒿琥酯在体外能抑制K562细胞的增殖,可能是通过诱导其发生凋亡而起作用.     

mTOR抑制剂AZD8055的抗肝癌机制探讨

目的 雷帕霉素靶蛋白(mTOR)抑制剂AZD8055抗肝癌活性及其作用机制.方法 分别采用MTT法和流式细胞术测定AZD8055对HepG2肝癌细胞生长和细胞周期的影响;用TUNEL染色检测细胞凋亡;通过免疫印迹法检测信号通路中关键激酶下游靶蛋白磷酸化水平变化.结果 AZD8055对HepG2细胞有明显的生长抑制作用,且随着作用时间的延长,细胞增值率逐渐降低,细胞凋亡率逐渐增加;其生长抑制主要是阻滞G0/G1期.AZD8055下调蛋白激酶B(AKt)和核糖蛋白S6激酶(S6K)的磷酸化水平.结论 AZD8055对人肝癌细胞HepG2的生长具有显著的抑制作用.     

4-邻氨基酚-4'去甲表鬼臼酯(ODE)在K562肿瘤细胞凋亡中的作用

目的研究不同浓度4-邻氨基酚-4'去甲表鬼臼酯(ODE)对肿瘤细胞生长的影响,探讨ODE诱导肿瘤细胞凋亡的机制。方法采用MTT法测定ODE对K562细胞生长的抑制作用,透射电镜观察细胞超微结构,免疫细胞化学方法检测K562细胞中Bcl-2/Bax比率变化。结果 (1)不同浓度ODE对K562细胞生长有抑制作用,随ODE浓度的增加及作用时间的延长细胞生长抑制率增高(P0.05);(2)透射电镜观察可见凋亡细胞发生;(3)凋亡细胞中Bcl-2灰度较正常细胞染色的灰度低,Bax在凋亡细胞中的灰度较正常细胞高。结论 ODE能够显著抑制K562细胞的生长,其抑制作用随浓度的增加及时间的延长而增强,通过形态学可观察到凋亡细胞的产生,其诱导凋亡可能是通过改变凋亡基因而发挥作用的。     

姜黄素诱导肿瘤细胞凋亡的实验研究

目的:探讨姜黄素诱导HepG2细胞凋亡的作用机制。方法:应用形态学方法、AnnexinV荧光染色和流式细胞仪(FCM)检测HepG2细胞凋亡的发生,应用RT-PCR检测凋亡相关基因P53、bcl-2和Fas的变化。结果:姜黄素对HepG2细胞的生长有明显的抑制作用,并诱导肿瘤细胞发生凋亡。凋亡细胞表现为细胞固缩,核染色质碎裂;流式细胞仪检测凋亡率为11.7%,细胞停在G1和G2期。AnnexinV标记的方法检测凋亡时发现,坏死与凋亡共存。在姜黄素诱导HepG2细胞凋亡过程中,凋亡相关基因Fas转录水平比用药前增强。结论:凋亡为姜黄素抑癌的机制之一,姜黄素诱导HepG2细胞凋亡可能与P53、bcl-2和Fas基因表达有关。     

白藜芦醇抑制HepG2细胞生长和对细胞间隙连接通讯的影响

目的研究白藜芦醇对人肝癌细胞HepG2的生长抑制作用以及对细胞间隙连接通讯（GJIC）的影响。方法利用MTT法观察白藜芦醇对HepG2细胞的生长抑制作用。流式细胞仪检测细胞周期的时相分布，使用荧光探针5＇-CFDA／AM标记细胞．采用荧光漂白后重恢复技术（FRAP）和共聚焦显微镜技术观察白藜芦醇对HepG2细胞间隙连接通讯的影响。结果不同浓度的白藜芦醇处理细胞不同时间后，HepG2细胞的生长增殖明显受到抑制，抑制率最高达92．1％，各处理组间比较均有显著性差异（F=18．532，P〈0．05）；细胞周期分析显示，白藜芦醇能诱导HepG2细胞在S期停滞．抑制细胞DNA的合成并可诱导细胞凋亡：另外，白藜芦醇有恢复HepG2细胞间隙连接通讯的功能，且随浓度增加而增加。结论白藜芦醇可抑制HepG2细胞增殖，使细胞停滞于S期，并能诱导细胞凋亡；白藜芦醇还有恢复HepG2细胞间隙连接通讯功能的作用，提示此作用可能是白藜芦醇抑制HepG2细胞增殖和抗肿瘤作用的机制之一。     

白藜芦醇通过影响线粒体膜电位诱导HepG2细胞凋亡

目的 研究白藜芦醇诱导HepG2细胞凋亡的机制，探讨白藜芦醇诱导HepG2细胞凋亡过程中线粒体膜电位的变化。方法采用MTT法测定白藜芦醇对HepG2细胞的生长抑制作用，通过荧光染色及流式细胞术检测细胞凋亡，电子显微镜观察细胞超微结构的变化，用Rhodaminel23和TMRE标记细胞线粒体膜电位（△ψ），并分别通过流式细胞仪和共聚焦激光扫描显微镜检测。结果低浓度白藜芦醇（≤25μmoFL）对HepG2细胞的生长抑制作用不显著，而高浓度白藜芦醇（〉25μmol／L）显著地抑制HepG2细胞的生长，且呈时间和浓度的依赖性（F=18．532，P〈0．05）；流式细胞术分析显示，白藜芦醇能显著诱导HepG2细胞凋亡，且呈浓度依赖性（P〈0．05）；白藜芦醇能降低HepG2细胞线粒体膜电位。结论白藜芦醇抑制HepG2细胞增殖，并诱导细胞凋亡，白藜芦醇使HepG2细胞线粒体膜电位去极化，提示线粒体膜电位去极化在白藜芦醇诱导细胞凋亡的过程中起作用。     

虎仗提取物白藜芦醇诱导胃癌细胞HGC27凋亡

目的 :观察虎仗提取物白藜芦醇对胃癌细胞HGC2 7细胞周期和增殖的影响及凋亡诱导作用 .方法 :采用MTT法和软琼脂集落形成实验观察白藜芦醇对细胞增殖的影响 ,Annxin V&PI染色及流式细胞仪检测观察白藜芦醇对细胞周期的影响及诱导凋亡的作用 .结果 :MTT实验发现白藜芦醇作用HGC2 7细胞 2 4h后 ,细胞存活率显著下降 (P <0 .0 1)并呈剂量依赖性 ,软琼脂集落形成实验发现HGC2 7细胞在0 .5mmol/L白藜芦醇作用下无细胞集落的形成 ,Annxin V&PI染色及流式细胞仪检测发现白藜芦醇可引起HGC2 7阻滞于G1期 ,并可诱导HGC2 7发生凋亡 (8.39% ) .结论 :白藜芦醇可抑制胃癌细胞HGC2 7增殖并可诱导细胞发生凋亡 .     

白藜芦醇对宫颈鳞癌原代细胞增殖及荷瘤小鼠成瘤的影响

目的研究白藜芦醇对宫颈鳞癌的抗肿瘤功能。方法分离宫颈鳞癌原代细胞,予以系列浓度的白藜芦醇干预;MTr法检测细胞生长情况,明确最适药物浓度;FCM检测细胞周期阻滞情况。构建宫颈鳞癌荷瘤小鼠,予以白藜芦醇灌胃,检测小鼠生长情况及成瘤情况,免疫组化方法检测肿瘤组织中P53和Bcl-2表达情况。结果白藜芦醇可以抑制宫颈鳞癌原代细胞增殖,使肿瘤原代细胞生长周期阻滞于G1／S期。白藜芦醇可以减缓荷瘤小鼠的体重下降,小鼠的精神状况较好,瘤体生长速度减缓,同期瘤体体积减小。白藜芦醇可以促进瘤体组织的P53表达而抑制Bcl-2表达。结论白藜芦醇可以有效抑制宫颈鳞癌肿瘤细胞的增殖,促进肿瘤细胞凋亡,抑制瘤体的生长。白藜芦醇具有一定的抗宫颈鳞癌的特性。     

白藜芦醇对小鼠肝癌细胞H_(22)的抑制作用

目的 :研究白藜芦醇对体外培养的小鼠肝癌细胞 H2 2 生长的影响。方法 :应用MTT法、流式细胞仪来分析白藜芦醇对 H2 2 细胞生长的影响及细胞周期的变化。结果 :白藜芦醇对 H2 2 细胞的增殖具有抑制作用 ,IC5 0为 6.1 2 mg/L ,流式细胞术证实 ,白藜芦醇能引起 H2 2 细胞 S期阻滞。结论 :白藜芦醇通过改变 H2 2 细胞的细胞周期分布来抑制其生长。     

白头翁皂苷B4体外抑制人肝癌细胞HepG2增殖并诱导其凋亡

目的筛查中药白头翁抗肝癌有效成分,探索其抗癌机制。方法分离白头翁皂苷成分,以人肝癌细胞HepG2为作用靶细胞,MTT法测定其对细胞增殖的抑制,流式细胞术检测细胞周期阻滞,DNA片断化方法检测细胞凋亡情况,检测半胱氨酸蛋白酶3酶活性,从信号通路的角度探寻其诱导凋亡的机制。结果白头翁药材含量较高的成分白头翁皂苷B4对HepG2具有显著的抑制作用,最大抑制率达到71.5%;通过细胞周期分布分析,发现最多有83.2%的细胞被阻滞在G2期;用流式细胞仪研究其凋亡情况发现,在40 mg/mL药物浓度作用下,细胞凋亡与孵育时间呈现依赖关系,随着时间从0到48 h,初期凋亡比例从接近于零最高增长到14.3%,并且发生了DNA片段化;进一步研究发现,白头翁皂苷B4处理后的HepG2细胞半胱氨酸蛋白酶3活性显著升高。结论白头翁皂苷B4调控肝癌细胞周期,阻滞G2/M期更替,诱导细胞凋亡,是肝癌治疗的潜在候选分子,奠定了白头翁药材用于肝癌治疗的理论基础。     

表没食子儿茶素没食子酸酯增强低剂量顺铂对小细胞肺癌H446细胞株的细胞毒作用

目的探讨表没食子儿茶素没食子酸酯[(-)-epigallocatechin-3-gallate,EGCG]联合顺铂(Cisplatin,DDP)对小细胞肺癌细胞株H446的细胞毒作用及其机制。方法采用MTT法检测EGCG及DDP影响H446细胞增殖的量效和时效关系。采用流式细胞仪检测不同浓度EGCG、DDP及二者联合作用于H446细胞对细胞周期及凋亡的影响。结果 EGCG和DDP均可抑制H446细胞增殖,该增殖抑制作用呈浓度及时间依赖模式。不同浓度的EGCG(80、160μmol/L)与DDP(1.0μg/ml)联合应用时,可使H446细胞阻滞于G2/M期。EGCG可诱导H446细胞凋亡,并能增强DDP诱导H446细胞凋亡的作用。结论 EGCG能够抑制H446细胞增殖,诱导H446细胞凋亡,增强DDP诱导H446细胞凋亡的作用,其机制可能与G2/M期阻滞有关。     

苦瓜蛋白诱导K562/A02细胞凋亡

目的：观察苦瓜蛋白对K562/A02细胞凋亡受抑逆转作用及其分子机制。方法：CCK-8法测定苦瓜蛋白对耐药细胞K562/A02的IC50值,细胞形态学和AnnexinV/PI双染法检测细胞凋亡,流式细胞法测定P-糖蛋白（P-glycoprotein,P-gp）表达及caspase-3和caspase-8活性。结果：苦瓜蛋白显著抑制K562/A02耐药细胞的增殖;经苦瓜蛋白处理后细胞形态上出现典型的凋亡改变,AnnexinV/PI双染法显示凋亡细胞明显增加;P-gp蛋白表达下降,caspase-3和caspase-8活性显著增强。结论：苦瓜蛋白能诱导K562/A02耐药细胞凋亡,逆转耐药白血病细胞P-gp高表达所介导的细胞凋亡抑制。     

川楝素对K562细胞增殖和凋亡作用的影响

目的：探讨川楝素对人白血病K562细胞增殖和凋亡作用的影响.方法：MTT法检测川楝素对K562细胞和健康成人外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cell,PBMC）的增殖抑制率.瑞氏染色观察川楝素对K562细胞、PBMC形态的影响.透射电镜观察K562细胞超微结构改变.流式细胞术检测细胞凋亡率.琼脂糖凝胶电泳法观察凋亡细胞DNA片段化现象.比色法检测Caspase-3,Caspase-8,Caspase-9活性变化.免疫组化法检测凋亡相关蛋白Bcl-xl,Bax和Fas的表达.结果：川楝素对K562细胞有明显增殖抑制作用,呈时间和浓度依赖性（P〈0.01）,作用72h后IC50值为（52.13±0.82）nmol/L,而对PBMC几乎无影响.普通光镜下分别观察K562细胞和PBMC,K562细胞可见典型的凋亡形态学改变,PBMC形态无明显变化.超微结构显示K562细胞核染色质聚集,固缩,可见凋亡小体;以10,30,50nmol/L川楝素处理细胞72h后,K562细胞早期凋亡率分别为9.66%,26.06%,52.70%（P〈0.01）;琼脂糖凝胶电泳可见典型“梯状”条带;川楝素激活K562细胞Caspase-3,Caspase-8,Caspase-9活性;凋亡相关蛋白Bcl-xl表达降低,Bax,Fas表达增强（P〈0.05）.结论：川楝素对K562细胞与PBMC之间具有选择抑制作用和诱导K562细胞凋亡的作用,可能通过线粒体途径和死亡受体途径双重机制介导.