供者淋巴细胞输注的研究进展

供者淋巴细胞输注(DLI)是治疗异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)后复发的恶性血液病患者的有效方法之一。DLI主要通过移植物抗肿瘤效应(GVT)来诱导和维持缓解。在有些病例,DLI诱导的缓解非常持久,并能治愈一些其他治疗方法无效的患者。作者综述了DLI的细胞成分、剂量、疗效、并发症及应用展望。     

供者淋巴细胞输注对H22肝癌荷瘤小鼠免疫功能及瘤体生长的影响

目的 探讨供者淋巴细胞输注（donor lymphocyte infusion，DLI）及其联合化疗（氟尿嘧啶，5-Fu）对H22肝癌荷瘤小鼠免疫功能及瘤体生长的影响。方法 荷瘤昆明（KM）小鼠随机分4组：荷瘤对照组（A组）、5-Fu组（B组）、DLI组（C组）、联合组（D组）。检测各组小鼠外周血T淋巴细胞亚群和IL-2水平的变化及NK细胞的活性，计算瘤体生长抑制率。结果 C、D两组小鼠外周血CD3^＋、CD4^＋、CD4^＋／CD8^＋、IL-2水平及NK细胞活性明显高于A、B两组（P〈0.05）。B、C、D各组抑瘤率分别为61．3％、34，7％、89．5％。结论 供者淋巴细胞输注与化疗联合使用可以抑制实体瘤的生长，提高H22肝癌荷瘤小鼠的免疫功能，诱导有效的移植物抗肿瘤效应，是一种潜在可行的实体瘤细胞过继免疫治疗方法。     

供者淋巴细胞输注在白血病治疗中的进展

供者淋巴细胞输注(DLI)在白血病治疗中有一定的优越性及特点,主要通过过继性免疫介导移植物抗白血病(GVL)效应达到消灭白血病细胞的作用。DLI应用广泛,治疗前可以辅以放化疗或其他疗。淋巴细胞可自统一供者骨髓采集也可用白细胞分离机制外周血采集。多于移植后白血病复发时输注。主要并发症有GVHD、骨髓再生不良及感染。目的:供者淋巴细胞输注(DLI)是近年来兴起的骨髓移植(BMT)后过继性免疫治疗的重要手段,这种异源性供者淋巴细胞可以介导受者体内一种重要的免疫攻击,即移植物抗白血病(GVL)效应,以消除宿主体内残留的白血病细胞,逆转或预防骨髓移植后白血病复发。意义:DLI作为一种切实可行的免疫治疗措施给造血干细胞移植(SCT)后复发带来了新的希望,是目前对化疗、放疗抵抗的恶性血液病治疗的最有效的办法。     

供者淋巴细胞输注治疗白血病的研究进展

对白血病的治疗，目前较好的选择仍是采用联合化疗取得完全缓解后，以HLA匹配的骨髓进行异基因骨髓移植(Allo—BMT)，这一方案确能延长白血病患者的生存期。然而不少患者最终还是会因微量残留病灶(MRD)导致的复发而死亡。如何有效治疗Allo-BMT后复发的白血病成为临     

造血干细胞移植后供者淋巴细胞输注研究进展

供者淋巴细胞输注（DLI）是有效的过继免疫治疗措施,在造血干细胞移植（HSCT）前输注有利于诱发并清除受者同种异体反应T细胞预防排斥的作用。在HSCT后输注有促进植入和抗白血病复发的作用。特别是在非清髓性-HSCT后行DLI可在低移植相关并发症基础上增强移植物抗白血病（GVL）效应。     

非清髓性移植后供者淋巴细胞输注治疗血液病的疗效观察

[目的] 研究非清髓性造血干细胞移植治疗血液病和供者淋巴细胞输注的疗效及并发症.[方法] 以抗淋巴细胞球蛋白 (anti-T-lymphocyte globulin , ALG)或抗胸腺细胞球蛋白 (anti-themocyte globulin, ATG)为基础,减量化疗的非清髓性预处理方案治疗血液病 6例,包括急性淋巴细胞白血病 1例、多发性骨髓瘤 2例、慢性粒细胞白血病 1例、急性髓细胞白血病 1例、骨髓纤维化 1例, 6例血液病于 28 d～ 30 d进行第 1次供者淋巴细胞输注,每隔 3～ 4周 1次,平均 4.2( 2～ 8)次,逐渐增加输注细胞数量,输注的 T细胞数由 (1.2～ 9.5)× 104/kg逐渐增加至 (0.75～ 2.15)× 108/kg.[结果] 移植早期均形成混合性嵌合体和血液学部分缓解( 1例进步),供者淋巴细胞输注后, 6例血液病中 4例逐渐形成供者型完全嵌合体,并达到血液学完全缓解,骨髓纤维化患者仍然为混合性嵌合体和进步状态,并发急性移植物抗宿主病 2例,慢性移植物抗宿主病 2例,骨髓抑制 2例, 1例死于严重感染.[结论] 以 ATG/ALG为基础的非清髓性造血干细胞移植,可实现异基因造血干细胞的成功植入.通过供者淋巴细胞输注可实现混合性嵌合体向供者完全嵌合体的转变;移植物抗宿主病和骨髓抑制为其主要并发症.     

移植前选择性去除同种异体反应供者淋巴细胞预防移植物抗宿主病的实验研究

目的探讨在移植前选择性去除同种异体反应的供者淋巴细胞预防移植物抗宿主病(GVHD)的效果。方法以(BALB/c×C57BL/6)F1雌性小鼠(H-2d/b)为受鼠,于第0天接受亚致死量的60Coγ射线全身照射(TB I),总剂量为4 Gy,第1天接种P388D1白血病细胞,第2天输注由C57BL/6雄性小鼠(H-2b)为供鼠提供的不相匹配的供者脾淋巴细胞,第6天再次TB I 9 Gy,第7天输注由(BALB/c×C57BL/6)F1雄性小鼠(H-2d/b)提供的骨髓造血干细胞。结果以TB I选择性去除同种异体反应供者淋巴细胞组的小鼠无白血病和GVHD的发生,生存期超过了210 d。对照组的小鼠出现了明显的GVHD、白血病或因出血、感染导致的死亡,生存期短,为20~36 d(P<0.01)。结论在造血干细胞移植前输注不相匹配的供者淋巴细胞诱导移植物抗白血病(GVL)效应,然后再选择性去除同种异体反应的供者淋巴细胞来预防GVHD的发生是可行的。     

HSPgp96与rIL-2治疗小鼠H22肝癌移植瘤的实验研究

目的：研究热休克蛋白gp96(Heat—Shock Protein gp96，HSPgp96)—肽复合物瘤苗与重组人白介素-2(Recombinant Human Interleukin-2，rIL-2)对小鼠H22肝癌移植瘤的治疗效果。方法：从H22肝癌细胞中提取和纯化HSPgp96。建立小鼠H22肝癌移植瘤模型，应用HSPgp96与rIL-2治疗并比较疗效，观察指标：瘤重，光镜、电镜下观察组织结构。结果：经鉴定获得纯化的HSPgp96。HSPgp96 5μg与rIL-2 25ku治疗小鼠H22肝癌有效。结论；该实验方法提纯的HSPgp96与重组人IL-2都能有效抑制小鼠H22肝癌移植瘤的生长。     

T细胞疫苗治疗小鼠H22肝癌的实验观察

目的：探讨T细胞疫苗（Tcell Vaccine，TCV）治疗实验动物肿瘤的效应。方法：建立荷肝癌（H22）小鼠模型。14d后，对实验组和对照组的荷瘤小鼠分别按1、3、10、17d，4次行TCV或生理盐水治疗。观察小鼠的生存情况及病理组织学变化。结果：实验组小鼠十第4次TCV治疗后，肿瘤生长稳定，随后肿瘤出现缓慢缩小，其中7／8的小鼠在实施TCV治疗结束后35d内，皮下肿瘤全部消退。生存天数均〉100d；对照组小鼠皮下肿瘤呈进行性增大，全部小鼠于接种活肿瘤细胞后45d内死亡。病理组织学观察，实验组肿瘤组织大片坏死，癌巢周边炎细胞明显增多；对照组肿瘤组织中瘤细胞增生活跃，周边有少量炎细胞浸润。结论：TCV治疗小鼠H22肝癌能激发宿主抗肿瘤免疫反应，引起肿瘤坏死，消退，值得进一步研究。     

异源嵌合体小鼠体内肿瘤生长情况及供体淋巴细胞输注的抗肿瘤反应

目的:异基因骨髓移植后 2~3周向嵌合体小鼠体内接种MethA纤维肉瘤,观察肿瘤在异源嵌合体小鼠体内生长情况,研究引发抗肿瘤免疫反应 (GVT)时供体淋巴细胞输注 (DLI)的最佳时机和移植物抗宿主病(GVHD)反应情况。方法:BALB/c(H -2d)和C57BL/6(H -2b)小鼠用137Cs照射 2次 (间歇 4h)共 11Gy, 24h后经尾静脉注射这 2种小鼠的骨髓细胞 1×107, 进行同基因、异基因骨髓移植。照射后 21d,在各组小鼠皮内接种 1×106 个MethA肿瘤细胞,观察MethA肿瘤在同基因、异基因骨髓移植小鼠体内的生长情况。在另一实验中,在骨髓移植后 2周于C57BL/6→BALB/c异源嵌合体的皮内接种 1×106 个MethA肿瘤细胞,分别在接种肿瘤前 6d、当天和后 2d进行DLI,以DLI空白组为对照,观察DLI所诱发的GVT和GVHD。结果: MethA肿瘤能在两种异源嵌合体内生长且生长速度相当;接种在C57BL/6及其同基因骨髓移植体内的MethA肿瘤一过性生长,在 2~3周内被彻底排斥。在向C57BL/6→BALB/c异源嵌合体小鼠DLI的同时或 6d后接种的肿瘤的生长受到明显抑制,多数小鼠伴有明显的GVHD,以上两组各有 2只小鼠死于严重的GVHD;而荷瘤 2d再给予DLI则不能减慢肿瘤生长速度, 12只中有 1只小鼠出现轻微GVHD。结论:MethA肿瘤能在C57BL/6→BALB/c骨髓移植和BALB/c→C57BL     

Treatments of disease relapse after allogeneic stem cell transplantation focusing on donor lymphocyte infusion

Hematopoietic stem cell transplantation （SCT） is a potentially curative treatment for patients with hematologic malignancies, such as acute myeloid leukemia （AML） and myelodysplastic syndromes （MDS）. There has been tremendous progress in the past several decades in allogeneic SCT with better outcomes through improvements in supportive care, expansion of stem cell donor options （HLA-matched unrelated donors （MUD）, haploidentical related donors, and cord blood units （CBUs） etc.）, and introduction of better tolerated reduced intensity conditioning （RIC） regimens.     

Graft-versus-leukemia effects from donor lymphocyte infusion after nonmyeloablative allogeneic bone marrow transplantation in mice

Background Nonmyeloablative allogeneic bone marrow transplantation has been used since the 1990s as a new hematological stem cell transplantation strategy for treating hematological diseases. The purpose of this study was to explore the graft-versus-leukemia (GVL) effects of donor lymphocyte infusions (DLIs) after nonmyeloablative allogeneic bone marrow transplantations, while assessing the declines in treatment-associated morbidity, mortality, and graft-versus-host disease (GVHD).Methods A total of 615 (H-2k) mice were injected with L615 tumor cells and received 500 cGy (60Coγ-ray) irradiation three days later, followed by an allogeneic bone marrow transplantation (allo-BMT). The allo-grafts consisted of 3×10（7） bone marrow cells and 1×10（7） spleen cells from BALB/C (H-2d) donor mice. Two days after the allo-BMT, the recipient mice were given 200 mg/kg of cyclophosphamide. Subsequently, recipient mice were infused with either donor spleen cells ［2×10（7）］ on day 14 or 21, or donor spleen cells ［5×10（7）］ pretreated with hydrocortisone and cyclosporin A (CsA) in vitro on day 14 post-BMT.Results The median survival time of mice that received DLI on day 21 and pretreated DLI on day 14 post-BMT was longer than that of controls and the day 14 DLI group (P&lt;0.01). No evidence of severe GVHD was observed in the day 21 DLI group nor in the day 14 treated DLI group. Mixed chimerism was confirmed in the day 14 DLI group, the day 14 treated DLI group, and the day 21 DLI group on the thirteenth day post-transplantation; full donor chimerism was observed two weeks after DLI.Conclusion Donor lymphocyte infusion after nonmyeloablative bone marrow transplantation may reduce transplantation-associated morbidity and mortality while strengthening graft-versus-leukemia effects.     

不同种鼠对实验脑型疟发生的影响研究

目的 比较昆明小鼠和C57BL/6小鼠作为种鼠对实验脑型疟模型的影响.方法 分别以伯氏疟原虫ANKA株感染C57BL/6小鼠和昆明小鼠作为传代用种鼠,当种鼠原虫率为5％～15％时接种子代C57BL/6小鼠,观察两组小鼠原虫率、脑型疟发生率以及死亡率.同时,通过脑组织切片和脑部淋巴细胞的流式检测,观察两组发生脑型疟小鼠的脑部微血管中感染疟原虫红细胞和CD8+T细胞的粘附情况,另外,通过感染CD8+T KO小鼠,证实CD8+T细胞在两组小鼠发生脑型疟中的作用.结果 用昆明小鼠作为种鼠的实验组的原虫率和脑型疟发生率均明显高于用C57BL/6小鼠作为种鼠的实验组,发生脑型疟小鼠的脑部组织切片发现,脑部微血管可见明显的感染疟原虫红细胞的粘附和CD8+T淋巴细胞浸润;而用昆明小鼠作为种鼠感染CD8+T细胞缺失的C57BL/6小鼠并不能诱导实验脑型疟的发生.结论 与C57BL/6小鼠相比,昆明小鼠作为种鼠的实验组的脑型疟发病率更高,而且感染疟原虫红细胞和CD8+T细胞在脑部微血管内的粘附也是该脑型疟发生的主要因素,因此,更适合用于实验脑型疟模型的建立及其机制的探讨.     

不同治疗方案对H22肝癌荷瘤小鼠的疗效比较

摘要 目的：比较常用治疗方案对H22肝癌荷瘤小鼠的疗效。方法：采用H22腋下实体瘤昆明种小鼠及小鼠标准化、计量化辨证方法,观察复合化疗方案局部注射、索拉非尼口服,及两者联合应用等对小鼠抑瘤率和证候的影响。结果：所选用3个治疗方案均具有一定的抑瘤作用,综合对气血阴阳证候的影响及胸腺和脾脏重量,以复合化疗方案局部注射联合索拉非尼口服最好。结论：局部介入联合索拉非尼口服方案疗效较好。     

蓖麻毒素温敏型凝胶间质化疗对H22肝癌荷瘤小鼠的影响

目的：探讨蓖麻毒素温敏型凝胶经皮瘤内注射间质化疗治疗小鼠H22肝癌的有效性及可行性。 方法：采用色谱方法纯化蓖麻毒素,高效液相色谱法和蛋白印迹法进行纯度和性质鉴定。建立小鼠皮下移植肝癌模型,分为模型组、空白凝胶组、游离蓖麻毒素组、蓖麻毒素温敏型凝胶组,瘤体内注射相应药物。治疗后第15天,剥离肿瘤称取质量并计算抑瘤率;光学显微镜下观察肿瘤组织坏死情况;透射电子显微镜观察肿瘤组织细胞的超微结构变化及凋亡的形态学改变;分光光度计法检测肿瘤组织半胱氨酸蛋白酶3（caspase-3）活性;取血检测小鼠肝肾功能。 结果：蓖麻毒素温敏型凝胶瘤体内注射间质化疗对小鼠肝肾功能无明显影响;局部给药一次抑瘤率达71.31%;光学显微镜观察结果提示,肿瘤组织大片坏死;透射电子显微镜观察结果显示肿瘤细胞染色质边集、凋亡小体形成等典型的凋亡形态学改变;肿瘤细胞caspase-3活性亦明显升高。 结论：蓖麻毒素温敏型凝胶间质化疗可抑制荷瘤小鼠肿瘤生长,且具有较高的安全性。     

Folfox4 regimen administered through combined hepatic arterial and systemic infusion for treatment of colorectal cancer with unresectable liver metastases

Background  Hepatic arterial infusion chemotherapy for liver metastases is under evaluation because of the high target dose and low general toxicity. To investigate the efficacy and safety of a Folfox4 regimen administered through a combined hepatic arterial and systemic infusion for the first-line treatment of colorectal cancer (CRC) with unresectable liver metastases.

Methods  Twenty-seven CRC patients with unresectable hepatic metastases and no prior chemotherapy were enrolled into the study. They received a Folfox4 regimen; 1st day: HAI of oxaliplatin 85 mg/m² and L-folinic acid 200 mg/m², followed by a bolus hepatic arterial injection of 5-fluorouracil 400 mg/m², then continuous HAI of 5-FU 600 mg/m²; 2nd day: infusion of L-folinic acid 200 mg/m² i.v. followed by an intravenous bolus injection of 5-Fluorouracil 400 mg/m², then continuous infusion of 5-fluorouracil 600 mg/m² i.v. The patients received HAI during the odd cycles, and the intravenous administration of the same Folfox4 regimen during the even cycles.

Results  A total of 236 treatment cycles were given with a median of 10 cycles. The therapy generated the following results after six treatment cycles: complete response (CR) 1/27 (3.7%), partial response (PR) 17/27 (63.0%), stable disease (SD) 6/27 (22.2%), and progress disease (PD) 3/27 (11.1%). Five patients had hepatectomy. The serum levels of both carcinoembryonic antigen (CEA) and CA19-9 were significantly reduced (P<0.05). A median time to progression of 11 months and a median overall survival of 24 months were documented. The major adverse events included grade 1/2 nausea/vomiting, upper abdominal pain, peripheral neuropathy, and neutropenia/ thrombocytopenia.

Conclusions  The Folfox4 regimen administered through combined hepatic arterial and systemic infusions is efficacious and safe for the treatment of CRC with unresectable liver metastases, and it facilitates the control of local lesions.

     

Lewis全细胞肿瘤疫苗防治C57BL/6小鼠Lewis肺癌的实验研究

目的探讨Lewis全细胞肿瘤疫苗对小鼠Lewis肺癌的防治作用。方法用Lewis全肿瘤疫苗免疫C57小鼠4次,其中首次免疫用含弗氏佐剂油剂疫苗,第4次免疫的同时在小鼠右腋下接种Lewis肺癌细胞,定期观察小鼠成瘤情况及小鼠免疫状态变化。用流式细胞术检测疫苗组和对照组小鼠外周血CD4 T细胞,CD8 T细胞及CD19 B细胞百分比,以及CD4/CD8的变化。结果疫苗组与对照组小鼠成瘤率、成瘤时间、肿瘤大小差异均无显著性;疫苗组与对照组相比,其外周血CD4 、CD8 T淋巴细胞亚群的百分比差异无显著性,CD4/CD8比值的差异也无显著性,疫苗组外周血CD19 B淋巴细胞百分比略高于对照组,差异有显著性(P=0.014)。结论用Lewis肿瘤全细胞疫苗不能提高C57BL/6小鼠的T淋巴细胞免疫功能,可以提高其B淋巴细胞免疫,但不能使小鼠获得有效的免疫保护。     

CD8+细胞强化骨髓细胞输注免疫调节效应及机制

目的观察不同脾细胞亚群强化骨髓细胞输注调节特异性免疫状态的效应,并探讨其可能机制。方法C57BL/6小鼠分别输注BACB/C小鼠5×106骨髓细胞、5×106骨髓细胞+5×106脾细胞、5×106骨髓细胞+5×106CD4+细胞和5×106骨髓细胞+5×106CD8+细胞,3月后观察特异性免疫状态和淋巴细胞分化状况。结果CD8+细胞联合输注的受体淋巴细胞反应较弱,IL-2和IFN-γ低表达,IL-4高表达。结论CD8+细胞输注强化了骨髓细胞输注调节特异性免疫状态的效应,包括免疫偏移在内的机制参与了这一过程。