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相似文献
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1.
目的 研究干扰整合素转接激酶(ILK)表达对口腔鳞癌细胞迁移和侵袭能力的影响及机制。方法 以口腔鳞癌SCC-25细胞为研究对象,细胞转染小干扰RNA阴性对照(siRNA control)和ILK小干扰RNA(ILK siRNA)分别记为si-NC组和ILK siRNA组,同时以没有转染的SCC-25细胞作为对照组。RT-PCR和Western blot法检测转染效果;噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖;细胞划痕实验检测细胞迁移;Transwell小室检测细胞侵袭;Western blot法检测基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达。结果 si-NC组ILK mRNA水平和蛋白水平、细胞存活率、细胞迁移率、细胞侵袭数目以及细胞中的MMP-9、MMP-2蛋白表达与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。ILK siRNA组ILK mRNA水平和蛋白水平、细胞存活率、细胞迁移率、细胞侵袭数目和细胞中MMP-2、MMP-9蛋白表达水平明显低于对照组和si-NC组(P<0.05)。结论 干扰ILK能够下调口腔鳞癌细胞增殖、迁移及侵袭能力。  相似文献   

2.
目的探讨染色质重构复合体蛋白PBRM1对膀胱癌细胞株EJ、T24细胞生物学功能的影响。方法针对PBRM1 mRNA序列设计合成siRNA,转染膀胱癌细胞,沉默PBRM1基因后进行如下检测:RT-PCR法检测PBRM1 mRNA表达变化及凋亡、迁移相关指标;MTT法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡情况;Western印迹法检测凋亡蛋白Caspase3表达水平;划痕实验及Matrigel实验检测细胞迁移及侵袭能力变化。结果 PBRM1siRNA能有效抑制膀胱癌细胞中PBRM1的表达。PBRM1基因沉默后,与空白对照组相比,细胞增殖能力显著增强,同时细胞凋亡减少,细胞迁移及侵袭能力明显减弱。凋亡及迁移相关基因mRNA水平及蛋白水平也出现相应变化。结论 PBRM1对膀胱癌细胞株EJ、T24生物学功能有重要影响,可抑制细胞增殖,促进细胞凋亡、迁移及侵袭。  相似文献   

3.
目的探讨siRNA沉默Msi1基因表达对人结肠癌SW-480细胞迁移和侵袭能力的影响及其作用机制。方法设计合成特异性Msi1 siRNA序列,转染人结肠癌SW-480细胞;利用Western blotting检测Msi1和MMP-9蛋白的表达;细胞免疫化学检测MMP-9蛋白的表达;划痕实验观察Msi1 siRNA对细胞迁移能力的影响;Transwell实验观察其对细胞侵袭能力的影响。结果 Msi1 siRNA能有效抑制人结肠癌SW-480细胞中Msi1蛋白的表达;并且使其迁移和侵袭能力明显下降,和对照组相比有统计学意义(P<0.05),同时MMP-9在蛋白表达水平明显降低。结论沉默Msi1基因后可以显著抑制人结肠癌SW-480细胞的迁移和侵袭能力,MMP-9基因表达下降可能参与这一过程。  相似文献   

4.
目的探讨YY1基因在肾癌组织中表达及小干扰RNA(siRNA)对人肾癌786-O细胞增殖和侵袭的影响。方法以Real-Time PCR检测转录因子YY1在20对肾癌及癌旁组织中的表达;采用脂质体转染法将siRNA转染入人肾癌786-O细胞中,Real-Time PCR和Western印迹法检测YY1转染效率;MTT和平板克隆形成实验检测细胞增殖变化;流式细胞术检测细胞周期;Transwell及Matrigel检测细胞侵袭能力,Real-Time PCR检测基质金属蛋白酶MMP9及钙黏附蛋白E-cadherin mRNA表达水平。结果与癌旁组织相比,20对癌组织中YY1 mRNA表达量显著增高(P<0.01)。转染人肾癌786-O后,siRNA-YY1组细胞YY1mRNA的表达抑制率达66%(P<0.01),蛋白表达水平也明显低于siRNA-NC组。与NC组相比,siRNA-YY1组细胞增殖能力显著降低(P<0.01),细胞生长被阻滞在G0/G1期,细胞侵袭能力明显减弱(P<0.01)。此外,与NC组相比,MMP9及E-cadherin mRNA水平有显著差异(P<0.01)。结论 YY1在肾癌组织中高表达,靶向沉默YY1可以在体外显著抑制肿瘤细胞的生长和侵袭能力。YY1特异性siRNA作为一种治疗肿瘤的新途径值得进一步研究。  相似文献   

5.
目的 构建人核糖核酸酶抑制因子(ribonuclease inhibitor,RI)真核表达载体,检测其对B16细胞侵袭和转移能力的影响.方法 提取人7703细胞中的总RNA,RT-PCR特异性扩增RI编码区序列,利用基因重组技术将其克隆到载体pIRES2-EGFP中,稳定转染B16细胞以后,经G418筛选出阳性克隆.根据转染质粒不同分别命名为B16细胞组(未转染组)、空质粒对照组(pIRES2 -EGFP组)和实验组(pIRES2-EGFP-RI组).RT-PCR检测B16细胞中RI mRNA水平的表达,并通过Western blot和细胞免疫化学检测RI蛋白水平的表达;HE染色观察细胞形态的改变,黏附实验、划痕实验和Transwell法检测细胞黏附、迁移和侵袭能力的变化;Western blot检测MMP-2、MMP-9和nm23-H1以及E-cadherin的表达;建立C57BL/6小鼠肺转移模型,观察肺上肿瘤转移灶的变化.结果 酶切和测序结果证明重组质粒构建成功,实验组细胞RI的mRNA和蛋白的表达较B16细胞组和空质粒对照组显著升高(P<0.05);HE染色结果显示,细胞铺展良好,核质比减小;转染pIRES2-EGFP-RI质粒的实验组细胞的黏附、迁移及侵袭能力明显降低(P<0.05);与两对照组相比,实验组细胞MMP-2和MMP-9的表达水平明显降低,nm23-H1和E-cadherin的表达水平明显升高(P<0.05);动物实验结果显示与对照组相比,实验组的肺转移灶明显减少.结论 成功构建的RI真核表达质粒能升高RI基因及蛋白水平的表达,显著抑制了B16细胞的转移和侵袭能力.  相似文献   

6.
目的 探讨人端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse enzyme,hTERT)促进胃癌细胞侵袭的分子机制.方法 构建稳定过表达hTERT的细胞株SGC-7901-hTERT,采用Western blot检测叉头盒蛋白(forkhead box M1,FOXM1)的表达,qRT-PCR和Western blot检测FOXM1下游侵袭相关基因基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的mRNA和蛋白表达;构建FOXM1的shRNA干扰质粒,在SGC-7901-hTERT细胞中转染该质粒,Transwell法检测细胞侵袭能力,qRT-PCR和Western blot检测MMP-2、MMP-9的mRNA和蛋白表达;构建FOXM1启动子活性报告质粒,在SGC-7901-hTERT细胞中用双荧光素酶报告实验检测FOXM1启动子活性,qRT-PCR检测FOXM1 mRNA表达;构建稳定过表达FOXM1的细胞株SGC-7901-HA-FOXM1,并在此细胞中转染hTERT过表达质粒,免疫共沉淀(co-immunoprecipitation,Co-IP)检测FOXM1乙酰化水平变化,免疫荧光实验检测hTERT与FOXM1的细胞定位.结果 与对照组比较,过表达hTERT促进FOXM1及其下游分子MMP-2、MMP-9的蛋白表达,同时也促进肿瘤细胞侵袭(P<0.01),但不影响FOXM1的启动子活性及mRNA表达;与过表达hTERT组比较,干扰FOXM1可抑制MMP-2、MMP-9的mRNA和蛋白表达,同时也抑制肿瘤细胞侵袭(P<0.01);hTERT与FOXM1存在细胞共定位,且过表达hTERT可上调FOXM1乙酰化水平.结论 hTERT通过上调FOXM1乙酰化促进胃癌细胞侵袭.  相似文献   

7.
目的研究鼠双微体2 癌基因结合蛋白(MTBP)对人前列腺癌细胞迁移及侵袭能力的影响及其作用机制。方法用 Western blot检测MTBP在22RV1、DU145及Lncap三种不同前列腺癌细胞中的表达水平。采用siRNA及MTBP质粒分别转染 细胞,转染48 h后,用Western blot检测MTBP蛋白的表达量,划痕实验检测细胞的平行迁移能力,Transwell实验检测细胞的垂 直迁移及侵袭能力。用Western blot 检测细胞上皮间质转化(EMT)标志分子E-cadherin蛋白表达量的变化。结果在前列腺癌 细胞中,MTBP在转移性前列腺癌细胞DU145中表达最高,Lncap细胞次之,局限性前列腺癌细胞22RV1中最低,MTBP的表达 水平与前列腺癌细胞的转移侵袭能力呈正相关。siRNA干扰及MTBP质粒转染细胞分别能显著降低或提高前列腺癌细胞中 MTBP的蛋白表达水平。划痕实验结果显示抑制MTBP的表达后,前列腺癌细胞的迁移能力降低,而MTBP过表达能显著促进 前列腺癌细胞的迁移(P<0.01)。Transwell实验发现抑制MTBP的表达可降低前列腺癌细胞的迁移侵袭能力,而MTBP过表达 后,能显著促进前列腺癌细胞的迁移侵袭能力(P<0.01);Western blot 结果显示抑制MTBP的表达可使前列腺癌细胞的Ecadherin 蛋白表达水平升高,而MTBP过表达的前列腺癌细胞中E-cadherin蛋白表达水平降低。结论MTBP可促进前列腺癌 细胞的迁移和侵袭,其作用机制可能与诱导EMT有关。  相似文献   

8.
目的: 探讨结肠癌细胞FBXO22基因表达沉默后对细胞侵袭迁移的影响及其相关分子机制。方法:利用siRNA-Ctrl和siRNA-FBXO22小干扰片段转染结肠癌SW620和HCT116细胞,干扰FBXO22基因表达,Western blot 检测细胞转染效率,Transwell细胞迁移实验分析干扰FBXO22对细胞侵袭迁移的影响,Western blot检测细胞侵袭相关蛋白MMP-2、MMP-9和MDM2水平的变化。结果:转染FBXO22 siRNA后,结肠癌SW620和HCT116细胞FBXO22的表达量明显下降、细胞侵袭转移能力降低,MMP-2和MMP-9蛋白表达水平明显降低,而MDM2蛋白表达水平上调。结论: FBXO22与结肠癌细胞侵袭迁移相关,其机制可能通过调节MMP-2和MMP-9表达而实现。  相似文献   

9.
Zhou Q  Zhou XB  Wang YF  Liang LJ  Peng BG 《中华医学杂志》2011,91(35):2497-2500
目的 应用RNA干扰(RNAi)技术抑制人类肝癌细胞内组织因子(TF)基因表达,从而探讨对其侵袭转移能力的影响。方法 本实验以人类肝癌细胞系HepG2细胞株为实验对象,将携带有针对TF小干扰RNA( siRNA)序列的质粒pGPU6/GFP/Neo-TF siRNA,转染HepG2细胞株,以适当浓度的G418筛选获得阳性克隆,通过RT-PCR和蛋白质印迹法比较转染TF siRNA(+)质粒、转染TF siRNA( -)质粒以及未转染任何质粒的HepG2细胞内源性TF在基因及蛋白质表达水平的差异,进而应用Transwell体外侵袭实验检测三者的侵袭转移能力,探讨TF对肿瘤细胞侵袭转移能力的影响。结果 (1) RT-PCR结果 显示,转染TF siRNA(+)质粒的HepG2细胞其内源性TF表达水平低于转染TF siRNA(-)质粒和未转染质粒的表达水平。(2)蛋白质Western印迹法结果 显示,转染TFsiRNA(+)质粒的HepG2细胞其内源性TF蛋白表达水平低于转染TF siRNA( -)质粒和未转染质粒的表达水平。(3) Transwell体外侵袭实验结果 显示,转染TF siRNA(+)质粒的HepG2穿膜细胞数[(14±10)个]少于转染TF siRNA(-)质粒的HepG2穿膜细胞数[(128±18)个],经t检验比较,两组差异有统计学意义(P<0.05)。这提示应用RNA干扰技术抑制肿瘤细胞TF表达可以使HepG2细胞侵袭转移能力显著下降。结论 TF与肝癌细胞的侵袭转移能力密切相关,应用RNA干扰技术抑制其表达可以明显降低细胞HepG2体外侵袭转移能力。  相似文献   

10.
目的 探索MTA1基因与宫颈癌细胞HeLa侵袭迁移能力的关系.方法 以脂质体LipofectamineTM2000介导的方法将含有MTA1全长基因的质粒pEGFP-C1/MTA1转染HeLa细胞,应用Western blotting检测转染效果,细胞黏附实验检测细胞黏附能力,细胞划痕实验检测细胞迁移能力的变化,Transwell小室侵袭实验检测细胞侵袭能力的变化.结果 MTA1质粒转染的宫颈癌HeLa细胞中,MTA1蛋白的表达、黏附能力、迁移及侵袭能力均明显高于转染空载体组及未转染组(P<0.05).结论 MTA1基因与宫颈癌细胞的侵袭迁移能力有关,MTA1基因可能成为宫颈癌治疗的一个新的靶点.  相似文献   

11.
目的 研究核糖核酸酶抑制因子(RI)与整合素连接激酶(ILK)相互作用对膀胱癌上皮- 间质转 化(EMT)与转移的影响。方法 构建过表达RI 或ILK 的膀胱癌EJ 细胞系,免疫荧光检测RI 与ILK 在EJ 细胞 中的表达及共定位,倒置相差显微镜下观察细胞形态,Western blot 检测细胞中RI、ILK 及EMT 标志物的表达, 复制膀胱癌裸鼠移植瘤模型,免疫组织化学分析瘤组织中RI、ILK 及EMT 标志物的表达,HE 染色观察裸鼠肺 转移。结果 EJ 细胞中RI 与ILK 存在共定位的现象,RI 与ILK 存在相互作用。Western blot 结果显示,EJ-RI 组E- 钙黏蛋白(E-cadherin)表达高于EJ 组(P <0.05),EJ-ILK 组基质金属蛋白酶2(MMP2)、基质金属蛋白 酶9(MMP9)、N- 钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、扭转蛋白(Twist)、核转录因子(Snail) 与重组人S100 钙结合蛋白A4(S100A4)表达高于EJ 组(P <0.05)。过表达RI 抑制膀胱癌体内外EMT 及移 植瘤自发性肺转移,而过表达ILK 促进EMT 发生及膀胱癌转移。结论 RI 与ILK 相互作用调节膀胱癌EMT 与 转移。  相似文献   

12.
目的:观察子宫内膜癌患者癌组织中整合素连接激酶(ILK)的表达水平,通过体外细胞实验探讨其对子宫内膜癌细胞迁移和侵袭能力的影响,并阐明其作用机制。方法:采用免疫组织化学SP法检测29例子宫内膜癌患者癌组织和癌旁组织细胞中ILK阳性表达率。分别将ILK siRNA和siRNA control转染至子宫内膜癌HEC-1B细胞作为干扰组和空载组,以不作处理的细胞作为对照组;采用Western blotting法检测HEC-1B细胞中ILK、蛋白激酶B(Akt)、磷酸化Akt(p-Akt)、糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)和磷酸化GSK-3β(p-GSK-3β)蛋白表达水平,细胞划痕实验检测细胞迁移距离,Transwell小室法检测侵袭细胞数。结果:29例子宫内膜癌患者癌组织中ILK阳性表达率为79.3%,癌旁组织中ILK阳性表达率为10.3%,子宫内膜癌组织中ILK阳性表达率明显高于癌旁组织(P<0.05)。与对照组和空载组比较,干扰组HEC-1B细胞中ILK、p-Akt和p-GSK-3β蛋白表达水平明显降低(P<0.05),Akt和GSK-3β蛋白表达水平差异无统计学意义(P>0.05);细胞划痕实验,与对照组和空载组比较,干扰组HEC-1B细胞迁移距离明显缩短(P<0.05),侵袭细胞数明显减少(P<0.05)。结论:ILK在子宫内膜癌组织中呈高水平表达,干扰ILK表达能够降低子宫内膜癌细胞的迁移和侵袭能力,其作用机制可能与其抑制Akt和GSK-3β蛋白磷酸化有关。  相似文献   

13.
目的 探讨应用整合素连接激酶(integrin-linked kinase,ILK)特异siRNA沉默ILK基因的表达对膀胱癌裸鼠移植瘤生长及p-Akt、p-GSK3β表达的影响。方法实验分3组:BIU-87细胞组(正常BIU-87细胞)、BIU-87-NC组(转染阴性对照质粒的BIU-87细胞)、BIU-87 siR...  相似文献   

14.
目的:探讨比卡鲁胺对膀胱尿路上皮癌EJ细胞增殖、迁移和浸润功能的影响及其可能机制。方法:0,25,100μmol/L比卡鲁胺处理EJ细胞,MTT法检测细胞生长曲线;流式细胞PI单染法检测细胞周期;transwell细胞迁移实验法检测细胞迁移能力;transwell细胞侵袭实验法检测细胞侵袭能力;Western blotting检测雄激素受体(AR)、细胞周期蛋白D1、基质金属蛋白酶-2(MMP2)及瞬时受体蛋白家族成员-8蛋白(TRPM8)水平变化。结果:100μmol/L比卡鲁胺处理48 h后,EJ细胞增殖能力明显下降,细胞周期表现为G0/G1阻滞(P<0.05);不同浓度(25,100μmol/L)比卡鲁胺处理48 h后,EJ细胞迁移及浸润能力明显降低,AR、Cyclin D1、MMP2和TRPM8蛋白表达明显降低。结论:比卡鲁胺能抑制膀胱癌EJ细胞增殖、迁移和浸润功能,其机制可能与抑制AR信号通路、降低相关蛋白表达有关。  相似文献   

15.
目的:探讨应用整合素连接激酶(ILK)特异siRNA敲除ILK基因对人DU145细胞系裸鼠原位前列腺癌生长及进展的影响.方法:将合成的ILK特异siRNA转染人DU145细胞系,应用逆转录PCR检测ILK在转录水平的表达情况;使用Western blot方法检测ILK在蛋白水平的表达情况.初步探讨敲除ILK基因后对人DU145细胞的黏附、侵袭性的影响及其对细胞骨架结构的影响.分别将ILK siRNA和对照DU145细胞注入裸鼠皮下,每5天1次,连续4周,检测裸鼠前列腺癌肿瘤的大小、分化程度、凋亡及增殖状态来观察ILK对前列腺癌生长的影响.结果:siRNA显著降低了ILK基因的表达,ILK mRNA及蛋白的表达分别被抑制87%与81%.与对照组相比,实验组DU145黏附力及侵袭力显著下降,实验组细胞骨架结构破坏明显.裸鼠种植DU145细胞后5周,实验组与对照组相比,细胞在裸鼠种植部位形成的肿瘤体积明显减小[(18.1±1.3)mm3vs(157.6±9.7)mm3,P<0.01)],分化程度变好[Gleason评分(5.8±0.2)vs(8.8±0.3),P<0.05],凋亡指数增加[(64.75±5.87)vs(38.57±3.45),P<0.01],增殖指数减小[(42.75±4.76)vs(88.57±7.57),P<0.01].结论:动物实验表明,特异性的抑制ILK能抑制人DU145细胞的黏附及其侵袭能力,破坏DU145细胞骨架的形成,诱导前列腺肿瘤细胞的凋亡及抑制肿瘤细胞的增殖,从而在一定程度上抑制了肿瘤的生长及进展.  相似文献   

16.
目的 观察siRNA表达载体对293T细胞神经生长因子neuritin的抑制作用,为进一步研究neuritin基因的功能及作用机制奠定基础.方法 通过RT-PCR技术筛选neuritin高表达细胞株;利用分子克隆技术,采用两步法构建 PBS/U6-neuritin siRNA(1~3)表达载体,脂质体法转染293T细胞,稳定转染后采用Western-blot技术进行干扰效率的筛选鉴定.结果 293T细胞与L-02细胞的RT-PCR产物为500 bp左右可见特异性条带,选择293T细胞作为实验细胞株,测序结果显示经2次构建后PBS/U6-neuritin siRNA表达载体在338 bp处出现发夹结构,说明构建成功.转染72 h后Western-blot技术检测PBS/U6-neuritin siRNA-(1~3)在不同程度上均可使293T细胞内源性Neuritin蛋白表达下调.结论 PBS/U6-neuritin siRNA(1~3)表达可以有效抑制293T细胞系Neuritin蛋白的表达.  相似文献   

17.
目的:构建针对遗传印记基因PEG10的siRNA真核表达载体,体外观察其对肝癌HepG2细胞凋亡的影响. 方法:设计针对PEG10基因的3个siRNA靶序列,构建真核表达载体siRNA1,siRNA2和siRNA3,脂质体分别转染HepG2细胞后实时定量PCR,检测其对HepG2细胞PEG10基因表达的影响,MTT法、流式细胞仪和激光共聚焦检测转染siRNA后的HepG2细胞的生长活性及凋亡. 结果:成功构建了针对PEG10基因的3个特异性siRNA表达载体. 它们不同程度地抑制了HepG2细胞PEG10基因的表达,以siRNA2抑制效率最高,可达93.99%. HepG2细胞的生长也明显受到抑制(P<0.05),大量HepG2细胞凋亡,siRNA2凋亡率最高,为66.91%. 结论:靶向PEG10基因的siRNA表达载体可抑制肝癌HepG2细胞的生长,诱导细胞凋亡,该作用与降低PEG10基因的表达有关.  相似文献   

18.
PTTG靶向siRNA表达载体构建及其沉默效率评价   总被引:2,自引:1,他引:1  
目的:构建针对人脑胶质瘤细胞系U251的高效率沉默垂体瘤转化基因(PTTG)的小分子干扰RNA(siRNA)表达载体。 方法:合成特异性干扰PTTG 的siRNA片段,并与pGenesil2 载体连接,构建PTTG干扰载体(pGenesil2-PTTG siRNA)。利用脂质体将其转染U251细胞,分为正常细胞对照组、HK阴性对照组和3个siRNA干扰组(pGenesil2-PTTG siRNA1、pGenesil2-PTTG siRNA2和pGenesil2-PTTG siRNA3),应用半定量逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法和流式细胞术对转染后U251细胞中PTTG 的mRNA和蛋白表达水平进行分析。 结果:酶切证实PTTG-siRNA表达载体构建成功,插入片段测序结果与合成的siRNA结果一致;转染pGenesil2-PTTG siRNA后,3个干扰组的U251 细胞中PTTG基因和蛋白表达水平均较正常对照组显著降低(P<0.01)。 结论:成功构建了能高效率沉默PTTG 的RNAi表达载体;pGenesil2-PTTG siRNA高效地抑制了胶质瘤U251细胞中PTTG基因的表达。  相似文献   

19.
周芨  邓世山  严达忠  刘海 《重庆医学》2016,(12):1616-1619
目的:通过小干扰RNAs(siRNA)干扰泛素特异性蛋白酶7(USP7)在喉癌细胞中的表达,来探讨 USP7对喉癌细胞生物学特性的影响。方法自行设计并使用高效siRNA在喉癌HEP2细胞株特异性干扰USP7表达,然后利用CCK‐8法、Tr‐answell小室迁移实验和流式细胞术观察USP7干扰后对喉癌细胞增殖、迁移能力和凋亡的影响。结果自行设计的siRNA可高效抑制喉癌 HEP2细胞USP7 mRNA及蛋白表达,显著抑制喉癌细胞的增殖、迁移能力,促进喉癌细胞的凋亡。结论 siRNA‐USP7可以显著抑制喉癌细胞增殖和迁移能力,并促进凋亡,提示USP7可能是晚期喉癌治疗的一个重要靶标。  相似文献   

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