人血中CD3^＋CD16^—及CD3^—CD16^＋细胞在异种肾移植间接体内模型…

目的:探讨人血中CD3+CD16及CD3-CD16+细胞在异种肾移植(猪/人)间接体内模型中的变化.方法:利用模拟人体生理条件的体外灌注系统,将人新鲜血灌注离体猪肾22只(实验组),人肾8只(对照组).经免疫荧光双标记,用流式细胞仪检测灌注前及灌注后不同时间内,人血中CD3+CD16-及CD3 CD16+细胞的变化.结果:最初经由猪肾灌注出来的人血中CD3+CD16细胞、CD3-CD16+细胞与灌注前相比,分别由(67.8±3.4)%降至(32.4±4.1)%和(17.3±1.8)%降至(6.9±1.2)%.随着灌注时间的延长,两种细胞减少的趋势逐渐减弱;而经由人肾灌注的人血与灌注前相比,两种细胞无明显变化.结论:人血中T细胞、NK细胞可能通过与猪肾血管内皮细胞的粘附,参与了异种肾移植的排斥反应.     

人血中CD3+CD16-及CD3-CD16+细胞在异种肾移植间接体内模型中的变化

目的:探讨人血中CD3+CD16及CD3-CD16+细胞在异种肾移植(猪/人)间接体内模型中的变化.方法:利用模拟人体生理条件的体外灌注系统,将人新鲜血灌注离体猪肾22只(实验组),人肾8只(对照组).经免疫荧光双标记,用流式细胞仪检测灌注前及灌注后不同时间内,人血中CD3+CD16-及CD3 CD16+细胞的变化.结果:最初经由猪肾灌注出来的人血中CD3+CD16细胞、CD3-CD16+细胞与灌注前相比,分别由(67.8±3.4)%降至(32.4±4.1)%和(17.3±1.8)%降至(6.9±1.2)%.随着灌注时间的延长,两种细胞减少的趋势逐渐减弱;而经由人肾灌注的人血与灌注前相比,两种细胞无明显变化.结论:人血中T细胞、NK细胞可能通过与猪肾血管内皮细胞的粘附,参与了异种肾移植的排斥反应.     

猪肾脏异种移植的研究进展Research progress in pig kidney xenotransplantation

猪肾脏异种移植是解决临床供体器官短缺的潜在可行方法，但是猪肾脏异种移植的临床应用面临诸多挑战，包括异种移植免疫排斥、凝血/补体调节功能异常、肾脏生理兼容性与生长速度差异和跨种属病毒感染风险等。近年来，基因编辑技术的进步提高了制备多基因编辑猪的效率，促进了异种移植的发展。敲除α-gal的基因和导入人凝血/补体调节蛋白等基因可使猪肾到非人灵长类动物体内异种移植存活时间明显延长。包括CD154和CD40信号阻断的免疫抑制方案的应用对异种肾脏移植效果十分关键；而SMPDL3b与抗CD20利妥昔单抗的应用有助于缓解猪肾到狒狒移植的蛋白尿症状。抗生素、供体筛选和基因敲除技术相结合亦有望规避异种肾脏移植中的感染风险。在基因编辑猪的构建方面仍然有未知靶点，异种肾脏生理功能变化的机制仍需探讨。现对近年来猪肾脏异种移植相关研究进展进行归纳，展望异种肾脏移植的发展趋势，为异种肾脏移植的深入研究提供参考。     

急性脑缺血大鼠模型血瘀证舌象表现的评价方法及其与血液流变学的关系

目的：用舌体组织血氧饱和度评价急性脑缺血大鼠血瘀证舌象表现，并探讨其与血流变异常的相关性，进一步验证急性脑缺血大鼠模型的血瘀证特征。方法：28只SD大鼠随机分为假手术对照组和模型组，用线栓法制备大鼠大脑中动脉阻塞缺血再灌注模型。缺血2h再灌注24h后观察大鼠舌体组织血氧饱和度、神经功能缺损以及血液流变学等指标。结果：与假手术对照组比较，脑缺血模型组大鼠舌体组织血氧饱和度和红细胞变形指数显著降低；全血和血浆黏度以及纤维蛋白原含量升高；凝血酶时间缩短。红细胞变形指数与舌体组织血氧饱和度呈正相关。结论：局灶性脑缺血大鼠模型急性期存在血瘀表现；舌组织血氧饱和度可以作为评价血瘀证动物模型舌象的客观指标。     

移植肾脏切除的临床病理分析

目的：这提高肾脏移植术后的长期存活率，对切除的移植肾脏进行临床病理学分析。方法：收集手术切除的无功能移植肾脏标本８５例作为实验组，及其相应的肾肘移植术前活检组织作为对照组；根据临床资料并结合肾脏移植病理分类与分级的Ｂａｎｆｆ标准，研究移植肾的病理学改变。结果：８５例切除的移植肾中，急性排异反应４４例（占５１．８％），慢性排异反应１９例（占１８．８％）。结论：移植肾丢失的主要原因为急性排异反应。     

不同年龄实验大鼠肾脏缺血再灌注的比较研究

①目的探讨不同年龄实验大鼠肾缺血再灌注后氧化和抗氧化状态及其机制。②方法SD大鼠24只，随机按鼠龄分为青年大鼠对照组（YCG）、青年大鼠实验组（VMC）、老年大鼠对照组（ACC）、老年大鼠实验组（AMG），每组均为6只。实验组制作肾缺血再灌注模型。分别用硫代巴比妥酸法测定血清MDA含量，亚硝酸盐法检测血清SOD活性。③结果老年大鼠对照组及老年大鼠实验组血清SOD活性显著低于青年大鼠对照组及青年大鼠实验组（P〈0．01）；老年大鼠实验组血清MDA含量显著高于其对照组（P〈0．01）。④结论老年大鼠肾脏缺血再灌注损伤与活性氧引起的氧化损伤以及抗氧化作用的减弱有关；老年大鼠肾脏氧化和抗氧化能力的随增龄变化，其损伤改变更为明显.     

逆行灌注法对供肾保护作用的实验研究

目的 探讨一种新的供肾摘取时的灌注方法。方法 实验1：将30只兔肾以常规手术方法摘取后，随机分为两组。第1组为逆行灌注组，即灌注时从肾静脉灌入灌注液，从肾动脉流出的方法灌洗肾脏。第2组为传统灌注组，即从肾动脉灌入灌注液，从肾静脉流出的方法灌注肾脏。供肾摘取方法、摘取时灌注压力、供肾的保存方式和保存温度以及两组供肾取材的时间、标本处理方法两组均相同。对两组供肾0、12、24小时后的病理组织在光镜和电镜下进行观察比较。实验2：另取6只羊肾随机分为A、B两组，每组3只。以相同的方法灌洗后，A组以逆行灌注法造影(从静脉到动脉)，B组以动脉灌注方法造影(从动脉到静脉)。血管造影时，造影剂及其温度相同，灌注压力也均为100cmH2O。观察两组肾脏充盈时间、灌注质量及血管影像学差异。结果 实验l：兔肾摘取后立即取材观察，1组和2组的兔肾组织结构在光镜及电镜下观察基本保持正常。保存到24小时，两组兔肾在光镜下可见仍基本保持正常结构。电镜下1组和2组所见也无差别，肾小管上皮细胞线粒体嵴基本正常，核膜清晰可见，染色质分布尚均匀，未见内质网明显改变。肾小球毛细血管内皮窗孔增大，基膜完整，足细胞足突排列整齐，紧靠基膜。实验2：血管造影可见，逆行灌注组肾脏充分充盈所需时间分别为5秒、6秒、7秒。而B组肾脏充分充盈所需时间分别为8秒、12秒、12秒。A组灌注质量明显优于B组。结论 在供肾摘取过程中逆行灌注方法和传统灌注方法一样，能够灌洗供肾，减少供肾缺血性损伤，在组织及形态结构上保护供肾，是一种有效可行的供肾灌注方法。     

肾脏缺血再灌注后内皮素-1、一氧化氮改变

目的：探讨再灌注后内皮细胞自分泌、旁分泌改变对肾脏血液动力学及肾功能的影响。方法：采用放免及生化方法测定内皮素、一氧化氮及肾功能改变，多谱勒血流计测定肾皮质血流变化。结果：缺血再灌注后肾组织及血液中ET－1水平升高，一氧化氮水平降低，肾皮质ET－1／NO水平与其血流量变化及血肌酐水平显著相关。结论：再灌注后肾血管内皮细胞的自分泌、旁分泌作用参与再灌注后肾脏血液动力学改变，在急性缺血性肾衰的发病机制中有重要作用。     

人参提取液在离体肾脏低温灌注与保存中的作用

目的 :研究人参提取液对离体犬肾低温灌注及保存中缺血再灌注损伤的影响。方法 :以常规的HCA肾保存液为对照组 ,以 HCA肾保存液添加人参提取液为实验组 ,分别对离体犬肾进行低温灌注保存 ,通过光镜、电镜观察肾组织结构变化 ,建立犬肾移植模型 ,检测移植前后生化指标变化 ,综合分析。结果 :实验组保存的犬肾组织超微结构损伤明显轻于对照组。移植肾早期功能指标检测 ,实验组血肌酐值明显低于对照组 ,而内生肌酐清除值明显高于对照组 ,二者差异均有显著意义 ( P<0 .0 5)。结论 :人参用于肾脏低温灌注保存中 ,对缺血再灌注损伤的肾脏有一定保护作用。     

灵芝多糖口服液对大鼠肾缺血再灌注损伤的保护作用

目的 探讨灵芝多糖口服液对肾缺血冉灌注损伤大鼠的保护作用。方法 Wistar大鼠60只随机分为4组①假手术组；②缺血再灌注组；③④灵芝多糖口服液组。③④灌胃灵芝多糖口服液，①②灌胃生理盐水，连续给药7d后，每组均切除右肾，同时①组左肾暴露1h；②③④组用动脉夹夹闭左肾肾蒂1h后，去除动脉夹形成再灌注状态。术闭后取24h和72h尾静脉血，检测超氧化物歧化酶（SOD）活性和丙二醛MDA含量。然后将大鼠处死取肾脏作相应检查。结果 24h口服液组血、肾脏组织中的SOD活性明显升高，MDA含量明显降低，与缺血再灌注组比较有显著性差异，而72h血、肾组织SOD、MDA各组变化均不明显。结论 口服液对肾缺血再灌注损伤大鼠具有保护作用。     

低温灌注对术中猪肾脏细胞的保护作用研究

[目的]探讨低温灌注对术中猪肾脏细胞的保护作用。[方法]实验猪随机分为3组(n=8):假手术对照组、低温灌注组、动脉阻断组。常规病理学观察细胞的形态变化,免疫组化检测Caspase-3蛋白表达和细胞凋亡指数。[结果]阻断后1h,动脉阻断组肾组织可见细胞凋亡、坏死,低温灌注组无细胞坏死;动脉阻断组在0.5h时Caspase-3蛋白表达增强,高于假手术对照组和低温灌注组(P0.05),1h明显高于假手术对照组与低温灌注组(P0.01),而假手术对照组与低温灌注组之间无明显差别(P0.05);阻断后0.5 h和1h,动脉阻断组细胞凋亡指数(AI)显著高于假手术对照组和低温灌注组(P0.01)。[结论]低温灌注能有效保护肾组织。     

人→猪脾块移植嵌合细胞的体内转归

目的：建立人→猪异种移植物抗宿主反应（GVHD）模型来模拟猪→人异种移植时人免疫系统对猪的攻击。方法：以中国内江猪为实验动物，经环磷酰胺静注行免疫抑制后，腹膜腔内植入人脾块悬液，术前、术后定期采集猪外周血行血常规检查监测猪被免疫抑制程度。行流式细胞术检查监测人细胞在猪外周血中嵌事情况，行细胞介导的淋巴细胞毒试验动态监测人抗猪和猪抗人的细胞毒活性。结果：各试验猪存活良好，给药后4d各猪外周血白细胞总数可降至正常值的15％左右，移植后第2天和第2周左右，人细胞在猪体内可形成两个较明显的嵌合高峰，尽管人抗猪淋巴细胞毒性于术后2周时有明显升高，但在术后1个月内猪抗人淋巴细胞毒性始终明显高于人抗猪淋巴细胞毒性。结论：人→猪脾块移植后，受猪体内的供受细胞呈现一个两元（猪细胞、人细胞）三态（微嵌合、宿主抗移植物反应、移植物抗宿主反应）的动态平衡过程。     

红景天对兔烫伤后多器官功能障碍综合征的治疗作用

目的　研究兔烫伤早期多器官功能障碍综合征(MODS)及红景天的防治作用 ,并分析其作用机制 .方法　制备兔烫伤后早期 MODS模型 .检测假烫 (SB)组、烫伤 (B)组、口服红景天对照 (R)组、烫伤红景天治疗 (BR)组的平均动脉压、中心静脉压、心输出量 ,计算总外周阻力、心指数 ;测定肺泡灌洗液蛋白及血浆总蛋白 ,计算肺通透指数 ;测定动脉血氧分压、氧饱和度 ,测定血中肌酸磷酸激酶、谷丙转氨酶、尿素、肌酐、血小板等反映心、肺、肝、肾、血液功能的一系列指标 .用 Griess法测定血中、肺泡灌洗液中一氧化氮 (NO)含量 .结果　烫伤后 4 8h反映动物心、肝、肾功能的血清学指标肌酸磷酸激酶、谷丙转氨酶、尿素均明显上升 ,与 SB组比 ,分别由 (781± 14 9) ,(46± 2 0 ) ,(5 .91± 0 .97)升高到 (15 5 36 3±6 6 5 78) ,(16 0± 115 ) ,(2 0 .6 7± 13.0 8) ,(P<0 .0 5 ) ,达到多器官功能障碍标准 ,肺功能下降 ,总外周阻力上升 ,动物发生MODS.血中及支气管肺泡灌洗液 NO含量均明显增多 ,与SB组比 ,分别由 (49.80± 2 8.35 ) ,(2 .37± 0 . 4 2 )增加到(76 .12± 2 5 .16 ) ,(4.0 3± 1.34) ,(P<0 .0 5 ) .烫伤红景天治疗组动物的心、肾功能明显改善 ,与 B组比 ,肌酸磷酸激酶 :(75 16 4± 35 0 4 3) ,尿素 :(9.6 9±     

不同灌注液对体外灌流兔肾功能和形态的影响

目的　观察不同灌注液对体外灌流肾脏灌流量的影响 ,为建立体外灌流保存肾脏的技术平台做准备。方法45只健康成年新西兰白兔 ,无菌条件下取其左肾进行灌流 ,根据灌流液的不同 ,分为A(肝素抗凝自体全血 )、B(肝素抗凝自体血 +等量RPMI 164 0培养基 )、C(异体洗涤红细胞 +去纤维蛋白血浆 +等量RPMI 164 0培养基 ) 3组 ,每组 15只 ,3只用于观察最长灌流时间 ,12只用于观察其它指标。以 10 0mmHg灌注压 (酚妥拉明解痉 )灌流 ,测定 0、2 4、48、60h肾重量、肾静脉流出液乳酸脱氢酶 (LDH)活性、尿pH值、尿钠和尿钾的浓度变化 ,及肾组织的光镜及透射电镜病理变化。结果　C组肾脏灌流时间最长 ( >72h) ,肾脏重量增加值最低 (P <0 .0l) ,乳酸脱氢酶活性增加值最低 (P <0 .0l) ,尿pH增加值最低(P <0 .0 5 ) ,尿钠浓度增加幅度和尿钾浓度下降幅度最小 (P <0 .0 5 ) ,光镜及电镜下C组形态学损害最轻。结论　C组灌流液用于肾脏灌流保存 ,能改善肾脏功能 ,延长保存时间     

血红素加氧酶-1基因转染对非协调性异种心脏移植物的影响

目的 观察血红素加氧酶-1(HO-1)基因转染对非协调性异种心脏移植物的影响,并探讨其可能的保护机制.方法 采用颈部袖套血管吻合法联合应用中华眼镜蛇毒因子(CVF)建立稳定的豚鼠-SD大鼠非协调性异种异位心脏移植模型.供体豚鼠和受体SD大鼠各24只,每组各8只随机配对分为Ⅰ组(对照组)、Ⅱ组(空白载体组)和Ⅲ组(HO-...     

人造血干细胞在山羊体内的移植和扩增及分化研究

目的　建立人 /山羊异种造血干细胞 (hematopoieticstemcell,HSC)移植模型 ,在活体水平研究人HSC移植后的扩增和分化。方法　分离人脐血HSC ,然后将其 (1× 10 5)经母羊子宫注射入胎龄为 5 5～ 6 5d的胎山羊体内 ,出生后在不同阶段应用FACS、PCR和PCR southern杂交技术 ,分析人HSC在山羊体内的扩增和分化情况。结果　在 5 0头受试胎羊中 ,39头足月分娩 ,其中 35头山羊呈现人血细胞嵌合 ,人造血细胞在山羊血液中的比率平均达到 1%～ 3% ,并稳定地保持到 10个月以上 ,山羊体内的人造血细胞表达CD34、CD14、CD2 0和血型糖蛋白A(GPA) ,但CD3、CD4、CD7、CD8和CD5 6未见表达或表达很低。结论　人HSC在山羊体内能有效地扩增至 10 0 0～ 10 0 0 0倍 ,并呈现出有限的分化。人 /山羊HSC异种模型为在活体探讨HSC移植、扩增和分化提供了科学资料     

新生猪急性缺氧与缺氧缺血模型的比较

目的：比较急性缺氧与缺氧合并双侧颈动脉结扎对新生猪缺氧缺血性脑损伤（HIBD）模型制备的影响。方法：生后7 d的新生猪24只,分成（1）缺氧组（H）：呼吸机辅助通气吸入低浓度氧,（2）缺氧缺血组（HI）：缺氧同时结扎双侧颈总动脉。两组新生猪分别吸入10%、8%和6%的低浓度氧30 min造成轻度、中度和重度缺氧,检测两组新生猪在不同程度缺氧下生理参数、脑血容量、脑氧灌注的变化。结果：H及HI组新生猪在不同程度缺氧后,两组间血气分析氧饱和度（SaO₂）、血乳酸浓度、血液pH值的差异无统计学意义（P>0.05）;重度缺氧时HI组新生猪的平均动脉压明显低于H组（P<0.05）。H及HI组新生猪在不同程度的缺氧后,脑血流量相对稳定,两组间脑血流改变的差异无统计学意义（P>0.05）;脑氧灌注明显下降,与缺氧前相比差异有统计学意义（P<0.05）,但两组间脑氧灌注改变的差异无统计学意义（P>0.05）。结论：H及HI这两种动物模型,对缺氧后生理参数、脑血容量和脑灌注的影响是基本一致的,呼吸机辅助吸入低浓度氧即可制备HIBD模型,可能不一定需要双侧颈动脉结扎。     

多层螺旋CT灌注评价单侧输尿管梗阻解除后肾功能早期恢复的初步应用

目的:研究单侧输尿管梗阻解除后肾功能早期恢复的规律,分析多层螺旋CT(MSCT)灌注参数在肾积水肾功能可复性评估中的临床应用价值。方法:建立大白兔右侧输尿管部分梗阻肾积水模型。分对照组、梗阻2周组、梗阻4周组及梗阻8周组,后3组在解除梗阻后饲养4周,各组在梗阻解除前、后均行MSCT灌注扫描、彩色多普勒超声显像(CDFI)及单光子正电子发射计算机体层成像(SPECT)测定,后处死试验动物制成普通病理切片。结果:①各梗阻组的总肾小球滤过率(GFR)均明显低于正常对照组,解除梗阻后,各组总GFR与解除梗阻前无显著性差异;②梗阻2周、4周组及8周组右肾GFR均显著低于正常对照组,梗阻解除后,2周组的右肾GFR有所恢复;③梗阻4周组和8周组在梗阻解除后,其肾动脉的舒张末速度(EDV)显著低于正常对照组,梗阻2周组在梗阻解除后,肾动脉EDV与正常对照组无显著性差异;④梗阻2周组在梗阻解除后,其右肾皮质、髓质的血流量(BF)、血容量(BV)值较梗阻解除前明显上升,接近正常对照组水平,而梗阻4周组、8周组在梗阻解除4周后,其右肾BF、BV则未见明显恢复,明显低于正常对照组;⑤随着梗阻时间的延长,患肾病理学改变愈明显。结论:MSCT灌注成像能够提高积水肾脏形态学和血流灌注的信息,其与CDFI相结合有望成为预测肾功能可复性的金标准。     

云南小耳猪胰岛细胞肝内移植对糖尿病猴的治疗作用

目的探讨云南小耳猪胰岛细胞经门静脉肝内异种移植的可行性,观察其对恒河猴糖尿病的治疗作用.方法 STZ诱导法复制恒河猴糖尿病模型,经胃网膜右静脉输注分离纯化的云南小耳猪胰岛细胞,移植在糖尿病猴肝内,移植后使用小剂量无激素免疫抑制方案,监测移植前后胰岛素用量、血糖以及血清C肽水平和肝肾功能的变化,评价猪-猴异种胰岛细胞移植对恒河猴糖尿病的治疗作用.结果 STZ能成功诱导恒河猴糖尿病模型;移植后第3天实验组糖化血红蛋白较术前降低,而对照组糖化血红蛋白一直呈上升状态;实验组外源性胰岛素用量较术前明显减少(P<0.05),对照组胰岛素用量无明显变化;实验组C肽水平较术前升高(P<0.05),对照组C肽一直维持在较低水平;无栓塞、感染、出血,肝肾功能无明显异常改变.结论云南小耳猪-恒河猴异种胰岛细胞移植能够降低糖尿病猴的高血糖状态,改善糖尿病症状,无明显副作用.     

新型组合型肝肾支持系统治疗西藏小型猪急性肾衰模型的实验研究

目的：评估新型组合型肝肾支持系统治疗西藏小型猪肾衰模型的安全性及有效性。方法将5头西藏小型猪采用结扎双侧肾动脉的方法构建肾衰模型,造模后治疗组用新型组合型肝肾支持系统进行治疗（CRRT模式）,对照组造模后不进行治疗,在治疗0、4、8h抽取静脉血进行内毒素、生化检测及需氧菌培养厌氧菌培养,观察造模前后、治疗前后西藏小型猪的各项生化指标的变化;实验过程中每2小时记录仪器的各项压力监测指标。结果两组实验动物肾衰模型均构建成功,治疗组经过新型组合型肝肾支持系统治疗后,一般情况改善;对照组动物一般情况持续恶化。实验动物在实验过程中,心电图未出现明显异常,两组动物在0 h时生命体征差异无统计学意义（P＞0．05）,其余时段治疗组心率和呼吸频率明显低于对照组（P＜0．05）,而血氧饱和度和平均动脉压明显高于对照组（P＜0．05）;造模前两组实验动物的生化指标差异无统计学意义（P＞0．05）;造模后两组动物与造模前相比差异有统计学意义（P＜0．05）;治疗组经肝肾支持系统治疗后,各项生化指标明显下降,与治疗前相比,差异有统计学意义（P＜0．05）;而对照组未出现明显变化。内毒素水平均低于0．5 EU／mL ,动静脉端需氧、厌氧菌培养结果显示未见细菌生长。病理检查见明显的肾小管上皮肿胀、肾小管坏死。结论新型组合型肝肾支持系统用于治疗西藏小型猪肾衰模型是安全、有效的,可进一步尝试用于临床试验。