LPS对培养大鼠肺微血管内皮细胞AQP-1表达的影响

目的通过观察脂多糖(LPS)刺激下对肺微血管内皮细胞水通道蛋白-1(AQP-1)表达的影响,为进一步研究急性肺损伤时肺水异常代谢的机制提供实验依据.方法采用体外培养的大鼠肺微血管内皮细胞,使用浓度为100ng、1、10 μg/ml的LPS与之孵育2、4、6、8 h,应用免疫细胞化学方法以及RT-PCR法检测AQP-1的表达.结果LPS刺激组AQP-1表达显著低于正常对照组(P＜0.01);AQP-1表达下降与LPS刺激浓度有关.结论LPS刺激下AQP-1表达下降,提示AQP-1在急性肺损伤时可能与肺水代谢异常有关.     

水通道蛋白-1、3在脓毒症大鼠肺组织表达的研究

目的研究脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的急性肺损伤(Acute lung injury,ALI)大鼠肺组织中水通道蛋白(aquaporins,AQPs)AQP1、3表达的变化,探讨水通道蛋白1、3表达与急性肺损伤的关系。方法 40只SD大鼠随机分为LPS 2h组、LPS 6h组、LPS 12h组(LPS5mg/kg,用生理盐水稀释至2ml)和对照组(生理盐水2ml),每组10只(给药途径均通过鼠尾静脉)。分别在用药后2h、6h、12h用RT-PCR法检测肺组织AQPsmRNA表达。结果 LPS2h组AQP-1蛋白量表达开始下降,LPS6h组AQP-1蛋白量表达最低,LPS12h组接近正常水平。AQP-3的表达无明显变化。结论 AQP-1参与ALI液体的异常转运,可能与肺水肿的发病机制有关。AQP-3可能不参与ALI肺水肿的形成过程。     

水通道蛋白1、3、4、5在内毒素性急性肺损伤小鼠肺组织中的表达

目的:研究脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的急性肺损伤(ALI)小鼠肺组织中水通道蛋白(AQP)1、3、4、5的表达变化,探讨水通道蛋白1、3、4、5表达与急性肺损伤的关系.方法:40只健康雄性的C57BL/6小鼠随机分为LPS 4 h组、LPS 6 h组、LPS 8 h组、LPS 10 h组(以LPS诱导ALI模型)和对照组,每组8只.采用实时定量PCR测定小鼠AQP-1、AQP-3、AQP-4和AQP-5 mRNA表达,免疫组化和Western印迹法观察AQP-1、AQP-3、AQP-4和AQP-5蛋白表达,同时进行肺湿/千重比值测定以及肺组织病理染色.结果:LPS 4 h、6 h、8 h、10 h组肺湿/干重比值(4.39±0.19、4.58±0.17、4.87±0.21、5.28±0.16)明显高于对照组(3.99±0.25,P＜0.05).LPS灌注后4 h AQP-1蛋白量减少至对照组的(74.1±5.2)%,AQP-5降至对照组的(70.3±7.1)%;LPS灌注后8 h AQP-1蛋白量减少至对照组的(45.2±4.4)%,AQP-5降至对照组的(38.6±8.9)%.AQP-3和AQP-4的表达没有明显变化.结论:AQP-1和AQP-5可能参与ALI液体的异常转运,可能与肺水肿的发病机制有关.AQP-3和AQP-4可能不参与ALI肺水肿的形成过程.     

水通道蛋白-1在急性肺损伤中的表达及意义

[目的]探讨水通道蛋白1(AQP-1)在脂多糖(LPS)所致的急性肺损伤(ALI)中的作用。[方法]根据是否腹腔注射脂多糖(LPS)将实验动物分为脂多糖组(LPS组)及生理盐水对照组(Con组),对比两组动物组织病理学改变、动脉血气、肺湿/干重比及AQP-1表达的差异。[结果]光镜下见LPS组肺组织水肿,大量炎性细胞浸润;LPS组PO2(55.07±17.02)mmHg明显低于Con组(97.35±9.37)mmHg,差异有显著性意义,P<0.05;LPS组肺湿/干重比(4.93±0.16)明显高于Con组(4.11±0.69),差异有显著性意义,P<0.05;免疫组化染色显示:LPS组的AQP-1蛋白表达减弱,荧光实时定量PCR证实LPS组的AQP-1 mRNA表达较对照组明显下降(P<0.01)。[结论]AQP-1参与了急性肺损伤的形成。     

水飞蓟素对急性肺损伤小鼠肺组织IL－1β、IL－6、趋化因子fractalkine表达的影响

目的:探讨水飞蓟素(silymarin,SIL)对急性肺损伤小鼠肺组织中白细胞介素(interleukin,IL)-1β?IL-6?趋化因子fractalkine表达的影响与意义?方法:利用内毒素(lipopolysaccharide,LPS)气管内滴入制备小鼠急性肺损伤的模型;设立SIL治疗组(S组)?LPS组(L组)?生理盐水对照组(N组),S组在气管内滴入LPS前6?4?2 h以200 mg/kg水飞蓟素灌胃,分别在LPS处理后6?12?24 h取肺组织匀浆,用ELISA法分别测定各组IL-1β?IL-6?fractalkine蛋白水平?结果:在各时间点,S组肺组织中IL-1β?IL-6?fractalkine蛋白表达水平均显著低于L组?结论:SIL能有效抑制小鼠急性肺损伤时肺组织中IL-1β?IL-6?趋化因子fractalkine的表达?     

盐酸戊乙奎醚上调β抑制蛋白-1与M3受体的关系研究

目的 探讨在脂多糖(LPS)致肺微血管内皮损伤中盐酸戊乙奎醚(PHC)上调β抑制蛋白-1(β-arrestin-1)的作用与M3受体的关系.方法 M3 shRNA转染肺微血管内皮细胞和正常肺微血管内皮细胞,分为LPS组(A)、盐酸戊乙奎醚+LPS组(B)、LPS+ M3 shRNA转染组(C)乖盐酸戊乙奎醚+LPS+ M3 shRNA转染组(D),激光共聚焦观察细胞骨架变化,检测细胞上清液中乳酸脱氢酶(LDH)水平,免疫荧光化学法检测血管内皮细胞黏附分子-1(VCAM-1)蛋白表达,Western blot法和实时定量PCR法检测β-arrestin-1表达.结果 与A组、C组比较,B组、D组肌动蛋白骨架排列整齐,LDH水平和VCAM-1蛋白表达降低,β-arrestin-1表达升高;与A组、B组相比较,C组、D组肌动蛋白骨架排列整齐,LDH水平和VCAM-1蛋白表达降低,β-arrestin-1表达无明显改变.结论 沉默M3受体有助于降低脂多糖诱导的肺微血管内皮细胞损伤.但盐酸戊乙奎醚上调β-arrestin-1的作用与M3受体是否存在无必然联系.     

盐酸戊乙奎醚对内毒素刺激的肺微血管内皮细胞的作用及对β-抑制蛋白-2的影响

目的:探讨在内毒素(LPS)作用下盐酸戊乙奎醚(PHCD)对肺微血管内皮细胞的作用及β-抑制蛋白-2(β-arrestin-2)表达的影响。方法:培养人肺微血管内皮细胞,用随机数字表法将其分为4组:正常对照组(C组)、LPS诱导组(L组)、PHCD+LPS组(PL组)及PHCD对照组(P组)。P组和PL组加入终浓度为2μg/ml的PHCD,L组及PL组加入终浓度为0.1μg/ml的LPS,PL组于加入PHCD后60min再加入LPS,C组加入同等体积的培养基。加入LPS 60min后,测细胞LDH水平、VCAM-1、VE-cadherin表达及β-arrestin-2的表达。结果:与C组比较,L组细胞LDH水平、VCAM-1表达升高,VE-cadherin和β-arrestin-2表达降低;与L组比较,PL组细胞LDH水平、VCAM-1表达降低,而VE-cadherin和β-arrestin-2表达增加。结论:盐酸戊乙奎醚预处理,可以通过上调β-arrestin-2的表达,减轻LPS引起的肺微血管内皮细胞损伤。     

前列腺素E1对急性肺损伤小鼠水通道蛋白1、5基因表达的影响

目的研究急性肺损伤(ALI)小鼠肺组织中水通道蛋白1(AQP1)、水通道蛋白5(AQP5)基因的表达变化,探讨前列腺素E(PGE1)治疗ALI的机制,为临床治疗ALI提供新的选择靶点和方法。方法 32只昆明小鼠随机分成4组(每组8只),即空白对照组(NS组)、造模组(ALI组)、前列腺素E1治疗组(PGE1组)、地塞米松治疗对照组(Dex组),观察6h后测定肺湿干重比值(W/D),并采用HE染色观察炎症变化,RTPCR检测AQP1mRNA、AQP5 mRNA、TNF-αmRNA、IL-1βmRNA的表达变化。结果 ALI组小鼠的肺部炎症反应显著,以中性粒细胞浸润为主,伴明显的肺泡充血、水肿。前列腺素E及地塞米松治疗后,肺组织炎症、充血明显改善,ALI组的W/D的比值与其他3组比较,差异有统计学意义(P均<0.05);与NS组相比,ALI组AQP1mRNA的表达显著降低(P<0.05),而PGE1组、Dex组的AQP1 mRNA的表达显著高于ALI组(P<0.05)。AQP5 mRNA表达的变化与AQP1mRNA的变化相似。与NS组相比,ALI组TNF-αmRNA的表达显著升高(P<0.05),而PGE1组、Dex组的TNF-αmRNA的表达显著低于ALI组(P<0.05)。IL-1βmRNA表达的变化与TNF-αmRNA的变化相似,肺损伤炎症减轻。结论PGE1可通过上调AQP1、AQP5的表达减轻肺损伤时肺水肿。可能是通过抑制炎症因子TNF-α、IL-1β的表达实现的。     

miR-145-5p通过抑制ROCK1的表达减轻脓毒症诱导的急性肺损伤

目的:探讨miR-145-5p在脓毒症诱导的急性肺损伤(ALI)中的调控作用和分子机制.方法:盲肠结扎穿刺法(CLP)建立C57BL/6小鼠脓毒症模型,分为CLP组、CLP+NC agomir组、CLP+miR-145-5p agomir组和假手术组,分离原代小鼠肺微血管内皮细胞(MPVECs),miR-145-5p模拟物或对照模拟物转染到MPVECs.采用双荧光素酶报告基因实验验证ROCK1和miR-145-5p的作用关系.挽救实验中,在LPS处理前24 h将MPVECs与ROCK1过表达载体(或空载体)和miR-145-5p模拟物共转染.检测caspase-3的转录活性、细胞凋亡率、miR-145-5p、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)和ROCK1的表达水平.结果:与假手术组相比,CLP组小鼠肺损伤程度,IL-1β、IL-6水平及caspase-3活性和细胞凋亡率均显著增加(P<0.05);MPVECs细胞中,与未处理的细胞相比,LPS刺激可显著诱导炎症细胞因子的分泌和细胞凋亡(P<0.05).脓毒症小鼠中过表达miR-145-5p可减轻脓毒症诱导的肺损伤、细胞凋亡和炎症反应.在LPS处理的MPVECs细胞中,miR-145-5p也表现出抗凋亡和抗炎作用.ROCK1的上调逆转了miR-145-5p抑制caspase-3活性、抗凋亡和抗炎作用.结论:miR-145-5p通过下调ROCK1的表达,减轻了脓毒症诱导的急性肺损伤,有望作为脓毒症诱导的急性肺损伤治疗的潜在靶点.     

硫喷妥钠对内毒素诱导的小鼠肺组织NF-κB表达及TNF-α、IL-1β释放的影响

目的　研究硫喷妥钠对内毒素(LPS)诱导的小鼠肺组织核转录因子(NF κB)表达及肿瘤坏死因子α(TNF α)、白细胞介素1β(IL 1β)的影响。方法　雄性昆明小鼠24只,随机分为4 组:对照组(C组)、LPS组(L组)、硫喷妥钠处理组(L+T组)、单纯硫喷妥钠处理组(T组)。注射LPS或生理盐水3 h后放血处死动物,免疫蛋白印迹法检测肺组织NF κB p65的表达;酶联免疫吸附法检测肺组织炎性细胞因子TNF α、IL 1β水平的变化。结果　L组小鼠肺组织中NF κB p65 表达和TNF α、IL 1β水平与C组相比均显著增高(P<0.05),经硫喷妥钠处理后,此作用得到部分逆转(P<0.05)。结论　硫喷妥钠能抑制内毒素诱导的小鼠肺组织NF κB表达增加以及TNF α、IL 1β水平上升。     

基于网络药理学探讨独活-羌活-细辛治疗膝骨关节炎的作用机制*

目的 基于网络药理学的方法分析和预测独活-羌活-细辛治疗膝骨关节炎可能的作用机制。方法 利用TCMSP数据库获取独活、羌活、细辛的活性成分及靶点,与CTD、NCBI等数据库获取的膝骨关节炎疾病基因靶点映射,构建药物-活性成分-疾病靶点网络。进行MCODE聚类分析,通过Omicshare云平台和DAVID数据库GO、KEGG通路富集分析。结果 从3味药中共筛选出了36个活性成分及205个靶点,主要有山柰酚、 β-谷甾醇、芝麻脂素、异紫花前胡苷等关键成分,AKT1、ESR1、JUN、CASP3等为关键靶点,核心基因有NOS3、ESR1、COX1、NR1I2,关键的生物进程和通路有类固醇激素反应性、活性氧代谢过程、AGE-RAGE通路和TNF通路。结论 独活-羌活-细辛可能通过多成分、多靶点网络来治疗膝骨关节炎。     

信号通路分子、乳头状甲状腺癌基因、锌指转录因子在不同宫颈疾病中的表达

目的：研究信号通路分子（SHH）、乳头状甲状腺癌基因（PTC1）、锌指转录因子（GLI1）在宫颈上皮内瘤变CIN1、CIN2、CIN3中的表达,探讨SHH、PTC1、GLI1在宫颈癌发生发展中的作用。方法：应用免疫组织化学方法将150例患有宫颈疾病的患者分为正常宫颈上皮组、CIN1组、CIN2组、CIN3组及宫颈癌组,每组各30例。对以上5组进行PTC1、GLI1、SHH检测。结果：SHH主要表达于腺体细胞的胞浆内,在各组的阳性表达率分别为：正常宫颈上皮组13.3%、CIN1组40.0%、CIN2组63.3%、CIN3组83.3%及宫颈癌组93.3%,且强阳性率随阳性率增高而明显增高。PTC1、GLI1在胞质及胞膜上阳性染色多呈弥漫状分布。PTC1在各组的阳性表达率分别为：正常宫颈上皮组23.3%、CIN1组40.0%、CIN2组43.3%、CIN3组63.3%及宫颈癌组73.3%。GLI1在各组的阳性表达率分别为：正常宫颈上皮组10.0%、CIN1组16.7%、CIN2组26.7%、CIN3组50.0%及宫颈癌组56.7%。结论：SHH、PTC1、GLI1介导着多种死亡受体诱导的细胞凋亡信号传导通路,与宫颈癌的癌前病变过程密切相关。     

不同种植方法下红托竹荪产量与综合评价*

目的 在昭通小草坝通过比较贵州织金和福建古田红托竹荪菌种，使用同菌种，不同的种植方法和原料对红托竹荪的产量数值进行比较。方法 将荫棚分为22块试验地，其中1～10号及21号试验地为福建古田红托竹荪菌种，11～20号及22号试验地为贵州织金红托竹荪菌种，分别对不同的试验地采用不同的种植方法和原料。结果 贵州织金竹荪菌种产量占比为63%，福建古田竹荪菌种产量占比为37%。相同气候和菌种条件下，贵州织金种植方法产量占比为25.83%，菌棒覆土产量占比7.77%。贵州织金红托竹荪菌种在贵州织金种植方法下产量占比为29.20%，菌棒覆土产量占比为7.96%。结论 基于小草坝气候条件下，采用贵州织金红托竹荪菌种，使用贵州织金种植方法下产量最佳，收益最大。     

建立BioID-质谱联用技术筛选细胞内的蛋白互作

目的 通过BioID-质谱联用建立一种新的蛋白相互作用的筛选系统;通过免疫共沉淀-Western blot验证YAP1相互作用的蛋白。 方法 构建BirA*-YAP1融合表达质粒;将质粒转染进293T细胞后,在细胞培养液中加入生物素,继续培养24小时后,提取细胞总蛋白。利用YAP1特异抗体,通过Western Blot检测BirA*-YAP1融合蛋白的表达;通过HRP-亲和素,检测细胞内蛋白被生物素标记的水平;通过亲和素磁珠,对细胞内生物素化的蛋白进行亲和纯化,并多次洗涤亲和素磁珠上非特异性结合的蛋白后,对亲和素磁珠纯化的蛋白进行溶解。取40 μg总蛋白进行SDS-PAGE凝胶电泳,通过蛋白银染试剂盒对PAGE凝胶中的蛋白进行染色,确定亲和素磁珠对生物素化蛋白的纯化效果。通过Label-free质谱法对生物素化的蛋白进行鉴定。针对鉴定得到的蛋白,通过Western Blot对生物素化的SMAD3进行验证。通过YAP1的免疫共沉淀,确定SMAD3能与YAP1相互作用。 结果 成功构建BirA*-YAP1融合表达质粒,该质粒在293T细胞中能够高效表达融合蛋白;在生物素存在的情况下,BirA*-YAP1融合蛋白能够利用生物素标记细胞内与BirA*-YAP1融合蛋白相互靠近的蛋白。在细胞裂解后,这些在细胞内被生物素标记的蛋白,能够被偶联亲和素的磁珠纯化,经过多次洗涤,能够富集生物素标记的蛋白。通过质谱鉴定,我们能够获得在细胞内与YAP1在空间上相互靠近的蛋白类型。通过免疫共沉淀-Western Blot技术,我们证明SMAD3能够与YAP1相互作用。 结论 Bio-ID-质谱联用的方法是一种用于蛋白互作筛选的简单、高效的技术,与后续的免疫共沉淀-Western Blot联合使用,可以成为一种新的蛋白互作研究体系。     

长链非编码RNA APTR、HEIH、FAS-ASA1、FAM83H-AS1、DICER1-AS1、PR-lncRNA在肺癌中的表达

  目的  探讨长链非编码RNA（Long non-coding RNA,IncRNA）APTR、HEIH、FAS-ASA1、FAM83H-AS1、DICER1-AS1、PR-lncRNA在肺癌患者中的表达。  方法  收集昆明医科大学第三附属医院肺癌手术患者的癌组织,癌旁正常组织及肺癌淋巴结转移组织,利用TRI z o l提取总 RNA,再用SYBR Green实时荧光定量 PCR检测每种基因的RNA相对表达量。  结果  APTR在淋巴组织中表达升高（P < 0.05）,HEIH在淋巴组织中表达下降（P < 0.05）,FAM83H-AS1和、PR-lncRNA在肺癌组织中表达升高（P < 0.05）。  结论  APTR在淋巴组织中高表达,可能有促进肺癌淋巴结转移的作用;FAM83H-AS1及PR-lncRNA癌组织中表达上调,可能会促进肺癌的发生发展。     

肾上腺大结节样增生一例报道

库欣综合征（CS）中15%～20%是由肾上腺原因引起的,其中约10%的患者具有双侧肾上腺增生。肾上腺性CS中皮质醇分泌有时可受肾上腺异常膜受体（包括抑胃肽受体、精氨酸加压素受体、儿茶酚胺类受体、LH/hCG受体和5-羟色胺受体等）的调节。该文报道了1例促肾上腺皮质激素非依赖性大结节样肾上腺增生引起的CS患者,并通过体内试验证实了肾上腺异常膜受体的存在。     

电针风池穴对颈性高血压模型兔血清肾素-血管紧张素-醛固酮系统指标的影响

目的:探讨电针风池穴对颈性高血压模型兔血清肾素-血管紧张素-醛固酮系统( RAAS)指标影响,明确其作用机理。方法:建立颈性高血压模型,将造模成功的12只家兔按随机数字表法分为模型组和电针组,每组6只,另选取6只健康家兔作为正常组。对电针组实验兔给予电针风池穴治疗,模型组和正常组实验兔仅给予相同时间的固定。检测各组实验兔血清血管紧张素原(AGT)、血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)、醛固酮(ALD)及去甲肾上腺素(NE)水平,检测并计算各组实验兔治疗前后平均动脉血压(MAP),进行统计分析。结果:(1)与正常组实验兔比较,模型组实验兔血清中AGT(126.82±43.95)、ALD(160.07±38.14)及NE(32.34±12.49)含量均明显高于正常组(P＜0.01,P＜0.05,P＜0.05),而模型组实验兔血清Ang II(118.67±45.62)水平与正常组比较无明显差异(P＞0.05);电针组实验兔血清中Ang Ⅱ(91.53±17.53)、AGT(95.12±26.18)、NE(23.89±8.71)及ALD(116.32±36.86)水平与正常组比较均无明显差异(P＞0.05);与模型组实验兔ALD(160.07±38.14)比较,电针组实验兔ALD(116.32±36.86)水平明显低于模型组。(2)治疗前各组实验兔MAP之间均无明显差异(P＞0.05);治疗结束后,与模型组实验兔MAP(91.50±6.86)比较,电针组实验兔MAP(81.40±4.04)出现明显降低(P＜0.05);与治疗前比较,电针组实验兔治疗后MAP(81.40±4.04)较治疗前MAP(89.40±6.19)明显降低(P＜0.05);而正常组、模型组MAP治疗后较治疗前MAP均无明显差异(P＞0.05)。结论:电针风池穴可有效改善颈性高血压模型兔血压,其降压作用可能与调控血清RAAS系统,降低实验兔血清中ALD含量,防止AGT、Ang II及NE过度分泌等存在关联。     

Common polymorphisms in GSTM1, GSTT1, GSTP1, GSTA1 and susceptibility to colorectal cancer in the Central European population

Background

Central Europe presents with the highest incidence of sporadic colorectal cancer (CRC) worldwide. As sporadic CRC represents a typical multifactorial disease, it is characterized by intense interaction of the genetic background with the environment. Glutathione S-transferases could act as attractive susceptibility genes for CRC, as they are directly involved in conjugation between glutathione and chemotherapeutics, environmental pollutants and a wide spectrum of xenobiotics.

Methods

In this study, we investigated associations of polymorphisms in glutathione S-transferases (GSTs) genes, that is GSTA1, GSTT1, GSTM1 and GSTP1, with CRC in a total of 197 cases and 218 controls originating from the Czech Central European population. Polymorphisms were assessed by polymerase chain reaction/restriction fragment length polymorphism-based methods, allele-specific multiplex and allelic discrimination by real-time polymerase chain reaction.

Results

None of investigated polymorphisms showed any associations with CRC, with the exception of GSTP1; where the heterozygote genotype Ile105Val was associated with decreased risk of CRC (P = 0.043).

Conclusions

The frequencies observed in our study are in accordance with those from other European Caucasian populations. Based on our studies, examined variability in GST genes is not a major determinant of CRC susceptibility in the Central European population.     

应用多重PCR技术同时分析GSTM 1,GSTT 1,GSTP 1基因型

[目的]探讨同时分析GSTM1，GSTT1，GSTP1基因分型的简捷、快速且准确的方法，[方法]利用GSTM1，GSTT1基因扩增产物无BsmA Ⅰ酶切位点，GSTP1基因具有BsmA Ⅰ酶切位点的特点，采用多重PCR方法和限制性片段长度多态性技术，同时对GSTM1，GSTT1，GSTP1基因进行分型，并分别与普通PCR技术的分型结果进行比较。[结果]多重PCR技术基因分型结果与普通PCR方法完全一致，300名韩国大学生的血样分型结果示GSTM1基因缺失型占53．3％，GSTT1基因缺失型占54．7％，GSTP1基因型为lie／Ile型占62．0％，Iie／Val型占34．3％，Val／Val型占3．7％，I1e基因出现频率为79．2％，Val为20．8％。[结论]多重PCR技术可用于N时分析GSTM1，GSTT1，GSTP1基因分型。