扇贝糖胺聚糖对Ⅰ型单纯疱疹病毒的抑制作用

目的 研究扇贝裙边糖胺聚糖(SS-GAG)不同浓度及不同作用时间对Ⅰ型单纯疱疹病毒(HSV-Ⅰ)的抑制作用.方法 以HSV-Ⅰ SM44株感染非洲绿猴肾细胞(Vero细胞),观察病毒感染后的细胞变性反应(CPE),并检测不同浓度SS-GAG及不同作用时间对HSV-Ⅰ复制的抑制作用.结果 与病毒对照组相比,SS-GAG各浓度组(100、50、25 mg/L)能有效保护经HSV-Ⅰ感染的Vero细胞,使细胞活性增强(F=27.54,P<0.01);并减弱HSV-Ⅰ导致的病变效应,抑制病毒的复制,并且随着药物作用时间的延长,药物抗病毒效应逐渐增加, 最高达88.64%.结论 SS-GAG体外具有明显的抗HSV-1病毒作用.     

真菌提取物JN219抗病毒谱的初步研究

目的：探讨真菌提取物JN219的体外抗病毒谱。方法：采用体外细胞病变法，研究JN219对疱疹病毒科病毒（HCMV、HSV-1、HSV-2）、腺病毒科病毒（Ad3）、副粘病毒科病毒（RSV）、呼肠病毒科病毒（RV SA11）、正粘病毒科病毒（流感甲地方株、流感乙地方株）、小RNA病毒科病毒（COX B1-6）、弹状病毒科病毒（VSV）共15株病毒的抗病毒活性。将JN219与以上病毒作用1h后接种于相应宿主细胞（同时设有病毒对照和细胞对照），当病毒对照病变达到90％以上时终止培养，宿主细胞用1％中性红染色，在450nm处读取吸光度A值，计算细胞存活率、半数中毒浓度（TD₅₀）、半数有效浓度（IC₅₀）和抑毒指数（TI）。并根据TI判断JN219的抗病毒活性，确定其抗病毒谱。结果：JN219对HCMV、RV（SA11）、VSV有抑制作用，其IC50分别为1.42、0.96和1.22μg/ml，TI分别为35.26、52.30、40.82；对HSV-1、HSV-2、RSV、流感病毒甲、流感病毒乙有部分抑制作用；对COX B1-6、腺病毒（Ad3）无作用。结论：JN219抗病毒谱比较广泛。     

木芙蓉叶提取物体外抗RSV作用机制研究

目的:研究木芙蓉叶提取物的体外抗呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial viruses, RSV)作用机制。方法:以利巴韦林为对照药物,检测木芙蓉叶提取物抗RSV的活性。通过观察木芙蓉叶提取物不同给药方式的抗病毒作用,对木芙蓉叶提取物抗RSV的作用机制进行初探。结果:木芙蓉叶提取物能有效抑制RSV引起的细胞病变,具有显著的抗病毒作用,治疗指数(therapeutic index, TI)为86.24。木芙蓉叶提取物对病毒的直接灭活作用,同时具有预防和治疗的作用。结论:木芙蓉叶提取物在体外具有显著的抗RSV作用,且其抗病毒作用发生在病毒穿入细胞后的阶段。     

木芙蓉叶提取物抗病毒作用实验研究

目的:观察木芙蓉叶提取物体内、体外抗病毒的药理作用.方法:通过使用呼吸道合胞病毒(RSV)、甲型流感病毒(Flu A)和副流感病毒(HPIVs)致细胞病变的体外感染模型,以治疗指数(TI)为指标,观察木芙蓉叶提取物体外抗病毒作用;通过使用呼吸道合胞病毒(RSV)感染小鼠模型,以对小鼠病毒感染肺指数的抑制率为体内抗病毒活性指标,观察木芙蓉叶提取物体内抗病毒作用.结果:体外试验表明,木芙蓉叶提取物对呼吸道合胞病毒(RSV)、甲型流感病毒(Flu A)和副流感病毒(HPIVs)这3种病毒均有不同程度的抑制作用;体内试验表明,木芙蓉叶提取物表现出一定的体内抗病毒活性,在一定浓度范围内,抗病毒活性随剂量的增大而增强.结论:木芙蓉叶提取物具有显著的抗病毒药理活性.     

人α防御素-5多肽体外抗单纯疱疹Ⅱ型病毒作用的研究

目的 探讨人α防御素-5(human α-defensin-5, HD-5)多肽体外抗单纯疱疹Ⅱ型病毒(herpes simplex virus type 2, HSV-2)的作用及其机制.方法 以绿猴肾细胞(Vero)为宿主细胞,采用CCK-8法首先分析10～200 μg/ml浓度范围内HD-5多肽的细胞毒性,再以HSV-2感染Vero细胞,分别于感染前后和感染的同时加入100 μg/ml 的HD-5多肽,72 h后测定细胞保护率,结合细胞病变效应观察,分析HD-5抗HSV-2的作用效果和起效环节,并通过改变培养基中血清的浓度,观察血清对HD-5抗病毒作用的影响.结果 在100 μg/ml 浓度以内,HD-5多肽几乎无细胞毒性,提前或同时加入HD-5多肽可以显著抑制HSV-2病毒引起的细胞病变反应、提高细胞保护率(P<0.01),而在HSV-2感染2 h后加入HD-5多肽对Vero细胞的保护作用不明显(P>0.05);血清浓度会显著影响HD-5多肽的抗HSV-2活性,血清浓度越高,HD-5多肽对细胞的保护率越低.结论 HD-5多肽在体外具有显著的抗HSV-2感染活性,其作用机制主要是通过干扰病毒对细胞的粘附、侵入而发挥作用.     

知母宁的体外抗单纯疱疹病毒Ⅱ型作用

目的 检测知母宁体外抗单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-Ⅱ)作用。方法 以Vero细胞为宿主细胞，阿昔洛韦为阳性对照药物，采用中性红染色法测定不同药物加入方式下知母宁的体外抗HSV-Ⅱ有效率，并检测其抑制病毒作用的时效关系及对病毒感染性的影响。结果 知母宁表现出对HSV-Ⅱ 333的综合抑制作用和抑制病毒吸附后的后续复制增殖作用，其抗病毒有效率(ER％)最高达80％，这两种作用的半数有效浓度(EC50)均约为0．8mg／ml。知母宁浓度≥2．08mg／m1时能显著抑制HSV-Ⅱ，ER％最高达95％。知母宁还有较弱的预防病毒吸附作用。知母宁抗病毒作用的时效关系研究表明，随药物作用时间延长，低浓度药物抗病毒有效率呈减小趋势，在高浓度时(≥2．08mg／ml)其病毒抑制强度基本维持稳定。随药物作用时间延长，知母宁可明显削弱病毒的感染性，知母宁组病毒的-lg TCID50值较病毒对照组的下降值呈增大趋势，其下降百分比维持稳定，约为40％。结论 知母宁体外抗单纯疱疹病毒Ⅱ型效果好，且其抗病毒作用具有多个作用点。     

6-O-取代阿昔洛韦衍生物的合成及其抗病毒活性

目的:通过对阿昔洛韦分子中碱基的结构修饰,设计并合成6-O-取代阿昔洛韦衍生物,并初步测定它们的抗病毒活性.方法:以阿昔洛韦为先导化合物,合成一系列6-O-取代阿昔洛韦衍生物,并以阿昔洛韦为阳性对照对猴肾细胞Vero进行体外抗HSV-Ⅰ和HSV-Ⅱ病毒活性测定.结果:合成了6-O-取代阿昔洛韦衍生物10个,结构均经过元素分析或MS确认.部分目标化合物具有一定的体外抗HSV-Ⅰ和HSV-Ⅱ病毒活性(MIC分别为25、50 ng·L-1),但较阿昔洛韦(MIC为2 ng·L-1)作用弱.结论:所合成的目标化合物虽然可能在体内更易于吸收,但体外初步抗病毒活性实验结果表明作用较弱.     

灵芝中酸性蛋白结合多糖单用或与阿昔洛韦和阿糖腺苷合用的抗疱疹病毒活性

为寻找抗疱疹病毒活性成分,作者以生物活性为指导,从灵芝子实体水溶性物质中分得一棕色酸性蛋白结合多糖(APBP)。抗单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-1)和Ⅱ型(HSV 2)的实验显示,APBP对Vero细胞中的HSV1和HSV-2均具强抗病毒活性,EC_(50)分别为     

鱼腥草-金银花滴眼剂体内外抗病毒作用的药效学研究

[目的]了解鱼腥草和金银花混合提取物制备的滴眼剂(HLD)体内外抗I型单纯疱疹病毒(HSV-1)和Ⅲ型腺病毒(ADV-3)的效果。[方法]建立HSV-1感染Vero细胞和ADV-3感染HeLa细胞的模型,以不同数量宿主细胞出现病变效应(CPE)为观察指标,了解不同浓度HLD体外抗病毒效果。建立HSV-1感染家兔眼结膜炎模型,观察不同浓度HLD体内抗病毒效果,病变眼结膜组织进行常规病理学检查。实验中用市售阿昔洛韦滴眼剂(ACV)为对照。[结果]HLD完全抑制HSV-1和ADV-3对宿主细胞CPE的最低浓度分别为32mg/ml和64mg/ml。经HLD治疗后,HSV-1感染的家兔眼结膜病理性炎症反应明显减弱甚至消失。1g/ml、3g/ml和6g/mlHLD治疗实验性家兔眼结膜炎有效率分别为50.0%、83.3%和100%,其中6g/mlHLD与ACV滴眼剂疗效比较无显著性差异。[结论]HLD具有一定的体外抗病毒作用和较强的体内抗病毒效果,具有开发为一种新型防治病毒性眼结膜炎新药的前景。     

邻苯二甲酸酐修饰卵清蛋白体外抗单纯疱疹病毒Ⅱ型的活性研究

目的研究邻苯二甲酸酐修饰卵清蛋白(3-Hydroxyphthalic anhydride-modified ovalbumin,HP-OVA)体外对抗单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-2)的活性。方法采用化学修饰的方法将3-羟基-邻苯二甲酸酐(HP)修饰卵清蛋白(OVA),合成酸酐修饰蛋白HP-OVA;选用HSV-2333病毒株及非洲绿猴肾细胞(Vero细胞)靶细胞,采用MTT比色法检测HP-OVA的体外抗HSV-2病毒活性及其对Vero细胞的体外细胞毒性;镜检观察HP-OVA对17株阴道收集的乳酸杆菌的抑菌作用。结果酸酐修饰卵清蛋白HP-OVA对HSV-2病毒具有明显抑制作用,其IC50为23.56±8.33μg/ml,且其对病毒作用靶细胞毒性较低,CC50>1mg/ml,对17株阴道乳酸杆菌均无明显抑制作用,MIC>1mg/ml。结论酸酐修饰蛋白HP-OVA体外有较好的抗HSV-2病毒的活性,有望被开发为预防性传播性疾病的候选杀微生物剂。     

纳米雄黄对单纯疱疹病毒Ⅱ型的体外抗病毒活性

目的：探讨纳米雄黄对单纯疱疹病毒II型(herpes simplex virus Type II,HSV-2)的体外抗病毒活性。方法： 以阿昔洛韦作为阳性对照,采用噻唑蓝[3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-H-tetrazolium bromide,MTT]法观察 不同浓度(200.00,150.00,100.00,50.00,25.00,12.50,6.25,3.13,1.54,0.78,0.39和0 mg/L)纳米雄黄对正常非洲 绿源猴肾细胞(Vero细胞)作用48 h的细胞毒性;空斑法测定病毒滴度,建立病毒感染细胞模型,并采用细胞病变观 察和MTT结合的方法对不同浓度(20.00,10.00,5.00,2.50,1.25,0.63,0.31,0.15,0.08,0.04和0 mg/L)纳米雄黄在 预防、治疗及直接灭活病毒3种给药方式下的抗HSV-2活性进行评价。结果：纳米雄黄对正常Vero细胞的半数细胞毒 性浓度为37.15 mg/L,HSV-2病毒滴度为7.30 log PFUs/mL,纳米雄黄在预防、治疗和直接灭活病毒3种给药方式下对 HSV-2感染细胞的半数有效浓度分别为0.13,1.80和0.52 mg/L,对应的治疗指数分别为285.77,20.64和71.44,纳米雄 黄在预防给药下的治疗指数高于其治疗和直接灭活给药。结论：纳米雄黄在3种给药方式下均具有良好的抗HSV-2活 性,且预防给药的疗效较好。     

一株红树林真菌抗单纯疱疹病毒Ⅱ型的研究

目的 对分离自海南红树林真菌菌株PH1018的胞外多糖(Exopolysaccharide,EPS)抗单纯疱疹病毒Ⅱ型(Herpes simplex virus type 2,HSV-2)活性进行研究.方法 收集纯化菌株PH1018产生的EPS,体外采用细胞病变观察EPS的细胞毒性和抗HSV-2作用.为观察EPS对HSV-2体内感染的治疗效果,小鼠颅内注射0.02 ml滴度为100 LD50/0.1 ml-1的HSV-2,24 h后以不同浓度EPS灌胃,持续7d,14d后计算小鼠存活率和存活时间.菌株分类采用形态学观察和ITS序列分析.结果 EPS可抑制HSV-2病毒活性,病毒感染的细胞病变的半抑制浓度(Inhibited concentration,IC50)为313 μg/ml,SI为11.43.EPS 25 mg·kg-1·d-1灌胃后,小鼠存活率为40.0％,存活时间为(9.82±1.87)d,相比模型组实验动物存活时间和存活率均有提高.菌株初步鉴定为杂色曲霉.结论 从海南红树林分离一株杂色曲霉,其产生的EPS具有抗HSV-2活性,值得进一步研究.     

MTT分析法、空斑减数法及CPE观察法评估药物体外抗病毒效果的比较与分析

目的:比较MTT分析法、空斑减数试验及细胞病变效应(CPE)观察3种方法在评估药物体外抗病毒效果分析中的优劣,为选择适宜的药物体外抗病毒效果的检测方法提供实验依据。方法:分别采用 CPE法、MTT分析法和空斑减数试验法评价大黄素于体外抗疱疹病毒 1 型、疱疹病毒 2 型和柯萨奇病毒增殖的效果,比较 3 种检测方法的结果,并分析该方法的实用性与利弊。结果:在抗疱疹病毒增殖的检测中,MTT法与空斑减数法所测结果具有显著性差异,空斑减数法比MTT法更准确,但对抗柯萨奇病毒增殖的检测,MTT法与空斑减数法无明显差异。结论:MTT法与 CPE法结合,可广泛用于对抗病毒药物的筛选,但对于疱疹病毒类非杀细胞病毒,使用空斑减数法较好。     

4-苯乙烯磺酸马来酸酐共聚物抑制HSV-2感染研究

目的:探索4-苯乙烯磺酸马来酸酐共聚物(PSM)对单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-2)感染细胞或小鼠的抑制作用。方法:建立Vero-ICP10细胞系,通过Luciferase检测不同浓度PSM对感染细胞中HSV-2的抑制作用,并通过In cell western技术检测HSV-2 gD蛋白表达,确定不同PSM浓度对HSV-2 gD蛋白表达的抑制作用;建立HSV-2阴道感染小鼠模型,观察PSM对HSV-2经生殖道感染小鼠的抑制作用。结果:Luciferase实验和In cell western实验结果均表明PSM具有抗HSV-2感染细胞的作用;小鼠模型中,5%的PSM能有效防止小鼠感染HSV-2(P<0.001)。结论:PSM在体内和体外模型中均可以抑制HSV-2感染。     

检测痕量单纯疱疹病毒Ⅱ型荧光定量PCR方法的建立

目的 建立一种高敏感度的检测痕量单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-2)DNA的实时荧光定量PCR方法,为针对HSV-2潜伏感染的治疗性疫苗和抗病毒药物疗效提供一个评价方法。方法 依据HSV-2糖蛋白D(gD)基因序列,使用序列比对软件,选取其保守区序列设计引物及TaqMan探针并进行筛选;以gD基因重组质粒pcDNA3-HSV-2 gD作为标准模板,对该检测方法的反应条件进行优化,提高其检测特异性、敏感度和重现性。结果 该检测方法特异性好,检测的最低拷贝数可达到2个拷贝,线性范围为2×10⁰~2×10⁸拷贝/反应,是普通PCR敏感度的10³倍。该检测方法组间和组内变异系数均低于5%,说明该检测方法具有良好稳定性。结论 本研究建立的TaqMan实时荧光定量PCR方法用于检测痕量HSV-2 DNA具有特异、敏感、定量和重现性好的优点。     

藏药甘青乌头生物碱抗单纯疱疹病毒Ⅱ型体内外作用

目的探讨藏药甘青乌头脂溶性生物碱（ALA）和水溶性生物碱（AWA）抗单纯疱疹病毒Ⅱ型（HSV-2）的作用和机制。方法四甲基偶氮唑蓝法测定细胞毒性,细胞病变作用法和蚀斑法测定甘青乌头生物碱体外抗HSV-2活性,以半数有效浓度和治疗指数为评价指标;荧光定量聚合酶链式反应法（FQ-PCR）和蚀斑法考察ALA和AWA体外抗HSV-2作用机制。用HSV-2建立小鼠脑炎模型,对AWA体内抗HSV-2的活性进行评价。结果 ALA和AWA对Vero细胞的半数中毒浓度分别为3.57和7.87mg/mL。ALA和AWA半数有效质量浓度分别为4.99和2.81 mg/mL,治疗指数分别为0.72和2.80。ALA和AWA均能直接灭活HSV-2,能够显著抑制HSV-2的感染性。ALA对吸附到非洲绿猴肾细胞的HSV-2没有抑制作用,能微弱抑制HSV-2大分子的增殖,对HSV-2 DNA的复制没有作用。AWA能够抑制HSV-2吸附,抑制HSV-2大分子的增殖,抑制HSV-2 DNA的合成,抑制倍数达10~2。AWA对小鼠的半数中毒质量浓度为0.28mg/kg。AWA延长了小鼠的平均存活时间,对小鼠的死亡显示出10%的保护率。结论 AWA抗HSV-2的活性大于ALA,ALA主要通过直接灭活HSV-2,AWA通过抑制HSV-2复制循环的各个环节起作用。     

抗病毒药物筛选中两种方法的比较

目的：比较四甲基偶氮唑盐（MTT）法与细胞病变效应（CPE）在筛选抗病毒药物中的异同。方法：在体外用两种方法检测阿昔洛韦（ACV）对细胞毒性作用和抗单纯疱疹病毒1型（HSV-1）的作用。结果：MTT法较CPE法敏感、客观、准确。结论：MTT法是一种快速、敏感、客观和准确的筛选和评价抗病毒药物的方法。     

The anti-HSV-2 effect of alumen: In vitro and in vivo experimental studies

This study investigated the anti-HSV-2 effect of alumen through in vitro and in vivo expe-riments.Viable cell counting was employed to assess the toxicity of alumen on Vero cells.The inhibition rate of HSV-2 was defined as the cytopathic effect(CPE)of the cells infected with the virus.Alumen suppositories of different concentrations were vaginally applied to the guinea pigs which were then infected with HSV-2 via a vaginal route.The clinical symptoms were observed and the local virus titer calculated.The results showed that alumen had an in vitro anti-HSV-2 effect by means of antiviral dup-lication,direct killing of the virus,and antiviral adsorption.Alumen suppositories of different concen-trations could reduce or completely inhibit HSV-2 infection in guinea pigs.It was concluded that alumen had an in vitro anti-HSV-2 effect through multiple approaches and it could suppress in vivo vaginal HSV-2 infection of guinea pig to some extent.     

人参皂苷Rg3体外抗HSV-1活性与免疫调节效应

目的：研究人参皂苷Rg3体外对单纯疱疹病毒1型 (HSV-1)的抑制作用与免疫调节效应。方法：采用结晶紫染色法观察Rg3对HSV-1致细胞病变效应的抑制作用。用MTT比色法检测Rg3对Vero细胞和小鼠脾细胞增殖的影响。以Rg3诱导小鼠脾细胞,用鼠脾T淋巴母细胞增殖分析法测定上清中IL-2活性,细胞病变抑制法测定IFN-γ活性。结果：浓度在1.56～25 m g•L^-1的Rg3对HSV-1致细胞病变效应抑制作用显著高于病毒对照组 (P<0.05);浓度小于25 mg•L^-1的Rg3对传代Vero细胞及小鼠脾细胞的增殖作用与细胞对照组比较差异无显著性 (P>0.05); 3.13~6.25 mg•L^-1的Rg3体外诱生IL-2和IFN-γ分泌水平显著高于对照组( P<0.05)。结论：一定浓度的Rg3具有体外抗HSV-1活性,对传代Vero细胞及小鼠脾细胞无毒性,可显著促进IL-2和IFN-γ分泌,参与免疫调节效应。