快速老化小鼠耳蜗传出神经的增龄性变化

目的 研究快速老化小鼠耳蜗传出神经的增龄性变化.方法 选择1、3、5、7、9月龄的快速老化小鼠亚系1(SAMP 1)作为实验组,而同龄抗快速老化小鼠亚系1(SAMR 1)作为SAMP系的正常对照组,观察其耳蜗传出神经末梢的增龄性变化.结果 第7、9月龄SAMP 1小鼠耳蜗传出神经纤维及末梢较同龄SAMR 1小鼠明显缺失(P<0.05),并伴有传出神经纤维突触结构损伤.结论 SAMP 1小鼠随月龄增长耳蜗传出神经出现增龄性损伤.     

快速老化小鼠的听功能和耳蜗毛细胞的增龄性变化

目的:研究快速老化小鼠听觉功能和耳蜗毛细胞的增龄性变化。方法:选1,3,5,7,9月龄的快速老化小鼠亚系1(Senescence accelerated mouse/prone1,SAMP1)作为实验组,而同龄抗快速老化亚系1(Senescence accelerated mouse/resistance1,SAMR1)作为SAMP系的正常对照组。分别观察其听觉脑干反应阈值以及耳蜗毛细胞损失情况等方面的增龄性变化。结果:听功能改变:第7,9月龄SAMP1小鼠的脑干反应阈值较同龄SAMR1小鼠明显增高(P<0.05);耳蜗形态学改变:耳蜗铺片、毛细胞计数显示第7,9月龄SAMP1小鼠外毛细胞较同龄SAMR1小鼠明显缺失(P<0.05)。结论:SAMP1小鼠随月龄增长耳蜗外毛细胞缺失、听功能减退,7,9月龄SAMP1小鼠出现明显的衰老特征,表现出听功能明显低下,可作为老年聋动物模型用于耳聋的相关研究。     

快速老化小鼠海马组织中IL-18的增龄性变化

目的:探讨老化小鼠海马组织中IL-18表达变化特点.方法:本研究选3、9月龄的快速老化小鼠亚系8(Senescence accelerated mouse/prone 8,SAMP 8)作为实验组,而同龄抗快速老化亚系1(Senescence accelcrated mouse/resistance 1,SAMR 1)作为SAMP系的正常对照组.用RT-PCR方法检测各组动物海马组织中IL-18的表达,ELISA方法检测各组动物海马组织中IL-18蛋白表达.结果:3、9月龄SAMR 1海马组织中仅有少量IL-18 mRNA及IL-18蛋白表达.9月龄SAMP 8海马组织中IL-18 mRNA的表达均较SAMR 1对照组显著增高(P＜0.05);IL-18蛋白的表达类似于IL-18mRNA的改变.结论:老化小鼠海马病理性损伤与海马组织IL-18的异常表达有关.     

快速老化小鼠耳蜗组织MeCP2的增龄性变化

目的 探讨快速老化小鼠听觉功能、以及耳蜗组织中甲基化结合蛋白-2(methyl-CpG-binding protein 2,MeCP2)的增龄性变化.方法 本研究选3、5、7、9月龄的快速老化小鼠亚系1(Senescence acceler-ated mouse/prone 1,SAMP 1)作为实验组.而同龄抗快速老化亚系1(Senescence accelerated mouse/resistance 1,SAMK 1)作为SAMP 1的正常对照组.应用听觉诱发反应仪检测其听觉脑干反应阈值;应用RT-PCR和Western印迹杂炙对耳蜗组织中MeCP2 mRNA和蛋白的表达水平进行半定量分析.结果 第7、9月龄SAMP 1脑干反应阅值较同龄SAMR 1明显增高(P<0.05);MeCP2 mKNA和蛋白在不同月龄快速老化小鼠耳蜗组织中均有表达,第7、9月龄SAMP 1小鼠耳蜗组织中的MeCP2 mRNA和蛋白较同龄SAMR 1小鼠明显降低(P<0.05).结论 MeCP2 mKNA和蛋白的表达水平随着快速老化小鼠听觉功能增龄性减退而降低,说明MeCP2可能与维持耳蜗的功能状态有关.     

快速老化小鼠SAMP8海马组织中基因表达谱的研究

目的观察快速老化小鼠P8（SAMP8）与同龄正常老化小鼠R1（SAMR1）海马组织中基因表达谱的差异。方法选用1、4、6、8、12月龄的SAMP8小鼠，用SAMR1作为对照组，每组各9只，快速处死后取海马组织提取总RNA, 用纯化后的总RNA合成cDNA并标记荧光染料，与32k小鼠寡核苷酸微阵列芯片杂交，用共聚焦扫描仪LuxScanTM 10KA及LuxScan 3.0软件进行图像采集与数据处理，用SAM软件分析差异表达的基因，用MAS系统对差异基因进行通路（pathway）分析。结果正常老化小鼠SAMR1各月龄间表达谱差异无显著性，快速老化小鼠SAMP8各月龄间差异显著，两种品系小鼠的比较结果显示1月龄、12月龄基因表达差异最为显著，6月龄无显著差异。Pathway分析结果显示MAPK信号通路的基因表达差异最为显著。结论SAMP8小鼠与SAMR1小鼠海马的基因表达存在明显的差异，以MAPK信号通路的基因表达差异最为显著。     

MTH2和MTH3蛋白在快速老化模型鼠SAMP8胸腺中增龄性表达的比较研究

目的 检测抗核酸氧化酶蛋白MTH2和MTH3在快速老化小鼠SAMP8胸腺中的表达,探讨其与SAMP8增龄性变化的相关性.方法 选用1、4、8、12月龄的SAMP8小鼠及同龄的抗快速老化小鼠R1(SAMR1)作为实验对象.采用免疫印迹法检测胸腺中MTH2和MTH3蛋白的表达.结果 免疫印迹结果显示,在SAM鼠胸腺中MTH3蛋白的表达量均显著高于MTH2.定量结果显示,1、4、8、12月龄的SAMP8胸腺中MTH3表达的灰度值(grey level)分别为0.546、0.322、0.207、0.164,显著低于同龄SAMR1(P＜0.05),而MTH2在SAMP8和SAMR1胸腺中的表达却没有显著性差异(P＞0.05).与同组1月龄小鼠相比,MTH3在4、8、12月龄的SAMP8鼠胸腺中的表达量分别下降41％、62％、70％;在SAMR1鼠中分别下降19％、43％、67％,差异有统计学意义(P＜0.05).而MTH2在SAMP8和SAMR1胸腺中的表达也存在相同的增龄性下降的变化趋势(P＜0.05).结论 MTH2和MTH3蛋白在SAMP8和SAMR1小鼠胸腺中的表达量均呈增龄性下降,提示MTH2和MTH3蛋白表达量的减少在SAM鼠胸腺的衰老过程中具有重要意义,其中MTH3蛋白表达量的减少可能与SAMP8小鼠胸腺的快速衰老密切相关.     

神经生长因子在小鼠耳蜗中的表达分布及年龄相关性变化

目的探讨神经生长因子(NGF)在小鼠耳蜗中的表达分布与年龄的相关性变化。方法选取5、7月龄的快速老化小鼠亚系8(SAMP8)作为实验组,而同龄抗快速老化小鼠亚系1(SAMR1)作为对照组。分别观察其耳蜗中NGF免疫组化染色及增龄性变化情况。结果在小鼠耳蜗中,NGF在螺旋神经节细胞、内外毛细胞、听神经纤维及血管纹中均有表达,且螺旋神经节细胞及内外毛细胞为主要表达部位。耳蜗螺旋神经节细胞及内外毛细胞NGF免疫组化染色平均光密度值:NGF蛋白在不同月龄快速老化小鼠耳蜗组织中螺旋神经节细胞及毛细胞均有表达,第5、7月龄SAMP8小鼠耳蜗螺旋神经节细胞及毛细胞中的NGF蛋白表达较同龄SAMR1小鼠明显降低(P<0.05)。结论 NGF蛋白在小鼠耳蜗中有表达并且表达水平随着小鼠年龄增长而降低,说明NGF蛋白可能与维持耳蜗的功能状态有关。     

SAMP8鼠背海马synaptotagminⅣ的年龄效应与分布

目的 探讨突触前囊泡蛋白synaptotagmin(Syt)Ⅳ在SAMP8鼠背海马的年龄相关性改变及其分布状况. 方法 选取三个年龄段SAMP8鼠(青年组4.5月龄22只,中年组9月龄23只,老年组13月龄19只)作为研究对象,制作组织芯片.采用SP免疫组化法检测小鼠背海马Syt Ⅳ的表达.显微成像系统拍摄图像并利用图像分析系统Image-Pro Plus 6.0进行光密度值测定. 结果 4.5月龄SAMP8鼠背海马CA3、CA1和齿状回中Syt Ⅳ的相对含量显著高于13月龄(P<0.05),也高于9月龄鼠(P<0.05);9月龄高于13月龄鼠,但差异无统计学意义(P>0.05).Syt Ⅳ在不同年龄组SAMP8鼠背海马不同亚区中均有表达,且以锥体细胞和颗粒细胞胞膜表达较高. 结论 SAMP8鼠背海马Syt Ⅳ水平随年龄增加而降低.Syt Ⅳ可能是小鼠背海马锥体细胞和颗粒细胞的轴-体或树-体式突触中的主要突触囊泡蛋白.     

“补肾活血”针法对快速老化模型小鼠SAMP8学习记忆能力及海马CA1区NEP表达的影响

目的研究"补肾活血"针法对快速老化模型小鼠SAMP8(Senescence Accelerated Mouse Prone 8,SAMP8)学习记忆能力及海马CA1区中性内肽酶(neprilysin,NEP)表达的影响。方法将6月龄雄性快速老化模型小鼠SAMP8 20只随机分为针刺组和SAMP8对照组,各组10只;另选取10只同龄雄性正常老化小鼠SAMR1(Senescence Accelerated Mouse/resistant 1)为正常对照组。针刺组针刺"百会"、双侧"血海"、"肾俞"以及"膈腧"4周。治疗结束后,采用Morris水迷宫测定"补肾活血"针法对小鼠学习记忆能力的影响,免疫组化方法检测小鼠海马CA1组织中NEP的表达情况。结果针刺组学习记忆能力明显较SAMP8对照组增强(潜伏期缩短、跨平台象限次数增加)(P<0.05);针刺组NEP相对表达量明显较SAMP8对照组增高(P<0.05)。结论"补肾活血"针法可能通过上调NEP表达,促进Aβ降解,改善Aβ相关的认知障碍来防治阿尔茨海默病,这可能是"补肾活血"针法防治阿尔茨海默病作用机制的一部分。     

针刺对阿尔茨海默氏病SAMP8小鼠学习记忆能力及海马区胰岛素受体mRNA表达的影响

目的观察针刺足三里、百会穴对阿尔茨海默氏病(AD)转基因快速老化SAMP8小鼠的学习记忆能力及海马区胰岛素受体(InsR)mRNA表达的影响,并探讨其作用机制。方法用Morris水迷宫进行筛选,将符合AD模型标准的SAMP8小鼠随机分为模型组、针刺治疗组(简称为针刺组),每组10只,并随机选取同源、同龄的10只SAMR1小鼠作为正常对照组。针刺组针刺小鼠足三里、百会穴,留针30 min,每日1次,10 d为1个疗程,疗程之间间隔2 d,连续治疗3个疗程。通过水迷宫隐蔽平台试验、空间探索试验判断小鼠的学习记忆能力,并通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测左侧海马区InsR mRNA的相对表达量。结果隐蔽平台试验中,模型组平均逃避潜伏期(PLL)较正常对照组显著延长,有效区停留时间显著缩短(P<0.05);针刺组PLL较模型组显著缩短,有效区停留时间显著延长(P<0.05);平台停留次数3组间比较差异无统计意义(P>0.05)。空间探索试验中,模型组原平台象限百分比较正常对照组显著降低(P<0.01),跨越次数显著增高(P<0.05);针刺组原平台象限百分比较模型组显著升高(P<0.01),跨越次数显著减少(P<0.05)。模型组左侧海马区InsR mRNA相对表达量较正常对照组显著降低(P<0.05),针刺组较模型组显著升高(P<0.05)。结论针刺足三里、百会穴可通过上调海马区InsR mRNA的表达,从而提高AD SAMP8小鼠的学习记忆能力。     

针刺对痴呆小鼠大脑神经元超微结构的影响

[目的] 研究三焦针法对痴呆小鼠皮质和海马CA1区神经元线粒体结构的影响。[方法] 选取雄性SAMP8小鼠30只(随机分成模型组、非穴组、穴位组)和10只SAMR1小鼠(正常对照组)。持续治疗30日后,采用电子显微镜对小鼠大脑皮质顶叶和海马CA1区进行观察。[结果] R1组皮质顶叶和海马CA1区超微结构正常;SAMP8模型组小鼠神经元部分线粒体肿大、部分变性、部分脂肪化和坏死;SAMP8三焦针刺组线粒体肿大减少,少数线粒体变性,脂肪化和坏死;非经穴针刺组线粒体少数介于两者之间。[结论] 三焦针法能有效改善SAMP8小鼠大脑皮质和海马CA1区神经原线粒体病理性损伤。     

针刺对快速老化痴呆模型小白鼠SAMP8认知功能的改善作用

目的探讨针刺对快速老化痴呆模型小白鼠SAMP8认知功能的影响。方法选取SAMP8小鼠分为SAMP8对照组,针刺组,非穴组,并设SAMR1对照组。针刺组采用“益气调血,扶本培元”针法,针刺膻中、中脘、气海及双侧血海、足三里;非穴组取双侧胁下两个固定非经非穴点。应用Morris水迷宫观测各组小鼠空间参考记忆能力的变化,分析针刺对SAMP8小鼠认知功能的影响。结果与SAMR1对照组比较,SAMP8小鼠在隐蔽平台试验中表现出明显的学习记忆障碍,逃避潜伏期显著延长(P<0.05)。针刺组第5天的逃避潜伏期为(48.34±13.01)s,与SAMP8对照组比较显著缩短(P<0.05);反向试验中第3天的逃避潜伏期为(55.03±15.49)s,比SAMP8对照组亦显著缩短(P<0.05);探索试验中针刺组原平台象限的停留时间为(20.19±5.85)s,显著多于SAMP8对照组和非穴组(P<0.05),与SAMR1对照组比较无显著差异。结论针刺可以改善快速老化痴呆模型小白鼠SAMP8的认知功能。     

山茱萸环烯醚萜苷对快速老化小鼠行为学及病理学改变的影响

目的 研究山茱萸环烯醚萜苷(cornel iridoid glycoside,CIG)对快速老化小鼠(senescence-accelerated mouse prone 8,SAMP8)的行为学表现及阿尔茨海默病相关病理学改变的影响。方法 应用8月龄的SAMP8小鼠及正常老化小鼠(senescence accelerated mouse/resistant 1,SAMR1)作为对照小鼠,灌胃给予药物CIG处理。2个月后,应用自主活动仪观察小鼠的自主活动能力,避暗试验检测小鼠的被动回避记忆能力。应用Western blotting法分别检测小鼠脑内淀粉样前体蛋白(amyloid precursor protein,APP)代谢相关蛋白及突触相关蛋白的变化。结果 与对照小鼠相比,SAMP8小鼠的自主活动次数及避暗试验中的步入潜伏期均显著降低,而CIG给药可以显著改善以上行为学表现,增强其自主活动和记忆能力。进一步机制研究发现,CIG可以增加SAMP8小脑内去整合素金属蛋白酶10 (a disintegrin and metalloproteinase 10,ADAM10)和胰岛素降解酶(insulin-degrading enzyme,IDE)的表达,增加可溶性淀粉样前体蛋白α(soluble amyloid procurer protein α,sAPPα)的表达,同时增加了突触相关蛋白synaptophysin、PSD95、GluR1和p-CaMKIIα的表达。结论 CIG可以用于改善老化引起的认知障碍及阿尔茨海默病样的病理改变。     

Neuroprotective Effects of Electroacupuncture Preventive Treatment in Senescence-Accelerated Mouse Prone 8 Mice

Objective: To investigate the preventive treatment effects of electroacupuncture(EA) on cognitive changes and brain damage in senescence-accelerated mouse prone 8(SAMP8) mice. Methods: The 5-month-old male SAMP8 and age-matched homologous normal aging mice(SAMR1) were adopted in this study. EA stimulation at Baihui(GV 20) and Yintang(EX-HN 3) was performed every other day for 12 weeks, 4 weeks as a course. Morris water maze test and Nissl-stained with cresyl violet were used for cognitive impairments evaluation and brain morphometric analysis. Amyloid-β(Aβ) expression in hippocampus and parietal cortex was detected by immunohistochemistry, and apoptosis was observed by TUNEL staining. Results: After 3 courses of EA preventive treatment, the escape latencies of 8-month-old SAMP8 mice in EA group were significantly shortened than those of un-pretreated SAMP8 mice. Compared with SAMR1 mice, extensive neuronal changes were visualized in the CA1 area of hippocampus in SAMP8 mice, while these pathological changes and attenuate cell loss in hippocampal CA1 area of SAMP8 mice markedly reduced after EA preventive treatment. Furthermore, Aβ expression in hippocampus and parietal cortex of SAMP8 mice decreased significantly after EA treatment, and neuronal apoptosis decreased as well. Conclusion: EA preventive treatment at GV 20 and EX-HN 3 might improve cognitive deficits and neuropathological changes in SAMP8 mice, which might be, at least in part, due to the effects of reducing brain neuronal damage, decreasing neuronal apoptosis and inhibiting Aβ-containing aggregates.     

当归芍药散对快速老化模型小鼠海马蛋白表达的影响

目的 研究当归芍药散(powder of Chinese Angelica and Peony,DSS)对快速老化模型小鼠(senescence-accel-crated mouse,SAM)海马蛋白表达的影响.方法 选择12月龄SAM的快速老化亚系SAMP8和抗快速老化亚系SAMR1作为研究对象,分为SAMR1组、SAMP8组和SAMP8 DSS组(3.2 g/kg),每组10只,连续给药30 d.应用双向凝胶电泳结合质谱鉴定,观察DSS对SAMP8海马蛋白表达的影响.结果 与SAMR1组比较,SAMP8组海马中有9个蛋白表达下调,13个蛋白表达上调;SAMP8 DSS组与SAMP8组比较,海马中有14个蛋白表达下调,21个蛋白表达上调.经肽质量指纹谱分析及蛋白数据库检索,表达有明显变化的蛋白根据功能可分为5类:线粒体相关蛋白、能量代谢相关蛋白、突触形成相关蛋白、细胞骨架蛋白、其他蛋白.结论 SAMP8和SAMRI海马蛋白表达存在明显差异,DSS可影响快速老化模型小鼠海马蛋白的表达,其作用是多途径多靶点的.     

二苯乙烯苷对SAMP8鼠脑组织氨基酸类神经递质的影响

目的观察二苯乙烯苷(TSG)对快速老化小白鼠/8(SAMP8)脑组织氨基酸类神经递质含量的影响。方法选用6月龄的SAMP8鼠50只,随机分为5组,每组10只:SAMP8对照组,阳性药(石杉碱甲)对照组,TSG低、中、高剂量组,另选用6月龄SAMR1鼠10只作正常对照组。各组分别灌胃相应药物50天后,采用高效液相色谱法检测各组小鼠脑组织氨基酸类神经递质含量。结果与正常对照组SAMR1组比较,SAMP8对照组脑组织谷氨酸(Glu)、谷氨酰胺(Gln)、天冬氨酸(Asp)、γ-氨基丁酸(GABA)含量明显升高,差异有显著性(P<0.05或P<0.01),天冬酰胺(Asn)、甘氨酸(Gly)有升高趋势,但差异无显著性(P>0.05);TSG各剂量组能显著降低SAMP8鼠Glu、Asp含量(P<0.05或P<0.01),但对Gly的降低作用不明显(P>0.05)。部分TSG剂量组对降低Gln、Asn和GABA含量作用明显(P均<0.05)。结论 TSG能显著降低SAMP8鼠脑组织Glu、Asp含量,纠正了SAMP8鼠脑区氨基酸类递质代谢的紊乱状态,使兴奋性和抑制性氨基酸神经递质最终趋向平衡。     

Effects of Acupuncture on Expressions of the Transcription Factors NF-E2,YB-1,LRG47 in the SAMP10 Mice

To explore the mechanism of acupuncture for delaying aging. Methods: Using the senescence accelerated mouse pattern SAMP10 and the normal aging mice SAMR1 as models and applying RT-PCR and digoxin (DIG)-labeled Northern blot technique to observe expressions of NF-E2,YB-1,LRG47 genes in the forebrain,cortex and hippocampus in a 8-month old SAMR1 control group,a 8-month old SAMP10 control group,a 8-month old SAMP10 acupuncture group and a 8-month old SAMP10 non-point stimulation group.Results: In the SAMP 10 control group,the expressions of NF-E2,YB-1 and LRG47 were down-regulated in the forebrain,cortex and hippocampus,and after acupuncture they were up-regulated and tended to normal. Conclusion: The brain aging of the SAMP10 mice is related with abnormal expressions ofNF-E2,YB-1 and LRG47 genes; and acupuncture can regulate the expressions of NF-E2,YB-1 and LRG47 genes,strengthening the functions of erythrocyte series,increasing the proliferation of cells and enhancing the cellular immune function in anti-bacteria,hence delaying aging.